实时荧光定量PCR应用技术

实时荧光定量PCR(real- time quantitative PCR)由Higuchi等人在1992年第一次报告,是一种新兴的分子生物学技术,这项技术灵敏、简便、快速、不需使用放射性同位素.它将EB加入PCR反应体系,再通过改装的带有CCD的PCR仪检测样品的荧光强度,这不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法,同时也可以对核酸分子进行精确定量.而且随着PCR技术的不断发展,使得实时荧光定量PCR日益成熟,极大的推动了分子生物学的发展,更是在疾病诊断中发挥了很重要的作用.     

荧光定量PCR技术的原理与应用

荧光定量PCR技术是在普通PCR技术基础上建立起来的一种利用标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.它特异性强、灵敏度高、操作简便、快速高效,在疾病诊断、食品检测、环境监测以及生物学研究等方面具有广泛的应用前景.在阐述荧光定量PCR技术原理的基础上,系统论述了该技术在各方面的应用.     

实时荧光定量PCR技术在实验教学中的应用

设计了"实时荧光定量PCR分析IPTG诱导EGFP基因在大肠杆菌中的异源表达"实验,研究IPTG诱导浓度和温度对EGFP基因表达的影响。结果表明,IPTG浓度为270μmol/L、诱导温度为16℃、诱导时间为18h的条件下,EGFP mRNA的表达量最大。通过该实验的学习,使学生掌握实时荧光定量PCR的相关实验原理、技术以及实时荧光定量PCR仪的使用,培养学生的科研能力和综合素质。     

应用荧光定量PCR对PCV2在不同类型猪群血液中感染情况的调查

应用荧光定量PCR对某规模化养猪场340头份不同类型猪群猪只血液中PCV2感染的情况进行了调查。结果表明,所有被检测的猪群均存在PCV2感染,不同类型猪群的感染率为100%,全场猪的平均感染率为76.8%(261/340)。其中,生长肥育猪群PCV2感染率最高为90%,而种公猪群感染率最低为30%。在病毒荷载量方面,整个猪群的血液中病毒荷载量处于103~104copies/μL之间。     

实时荧光定量PCR技术及实例分析

本文主要介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、类型和特点,并通过实例分析介绍了相对定量分析法的实际操作和数据分析。     

实时荧光定量PCR技术在发育生物学实验

实时荧光定量PCR技术是生命科学研究常用实验技术,发育生物学实验是一门综合性很强的实验课程。为不断完善我院发育生物学实验课程建设,实现培养全面发展人才的教学目标,在本科生发育生物学实验课教学中设计了完整的实时荧光定量PCR实验内容。教学实践结果表明,该实验具有可行性,学生完成情况良好。所设计的实验加深了学生对于基本理论的理解,锻炼了学生的实验技能,激发了学生的学习积极性和创造性,有助于培养学生科学思维以及团队合作精神,获得了良好的教学效果。     

实时荧光定量PCR技术的操作实践

采用Mx3000P型实时荧光定量PCR仪,以SYBR(R) Green I法相对定量技术为例,设计1例检测针对HIV-1 vpr基因的特异性siRNA基因沉默效果的实验.介绍了实时荧光定量PCR技术上机前样本的制备过程、检测程序及相关参数的设置方法等操作流程;结合熔解曲线、扩增曲线进行结果分析;强调了实验整体设计、引物设计与PCR反应体系的优化和内参的恰当选择在实时荧光定量PCR技术中的重要性.     

水样中大肠菌数定量PCR检测实验设计

为不断完善环境微生物学实验课程建设,培养学生的实际样品分析能力,设计了一套检测水样中大肠菌数的实时荧光定量PCR(pdymerase chain reaction)实验。教学实践表明,实验方案切实可行,学生完成情况良好,学生了解并践行了实时荧光定量PCR技术检测环境样品中的大肠菌数的方法,切身体会到新实验技术的简便性与灵敏性,提升了学生的学习兴趣与创新能力。     

FQ-PCR技术在小儿患者巨细胞病毒感染检测中的应用

目的:探讨荧光定量检测在小儿患者巨细胞病毒(HCMV)感染中的诊断价值.方法:对102例小儿患者,取尿液用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测.结果:102例标本中28例阳性,阳性率为27.5%.结论:荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏、特异等优点,在HCMV感染的早期诊断、治疗方案选择以及疗效观察方面具有广泛的应用前景.     

应用实时荧光定量PCR检测子宫内膜癌与癌旁组织中microRNA-93的差异表达状况

为分析microRNA-93在人子宫内膜癌组织和癌旁正常组织中的表达差异状况,初步探讨其在子宫内膜癌中的作用,应用实时荧光定量PCR方法检测32例子宫内膜癌及对照癌旁组织中microRNA-93的表达状况。结果表明,子宫内膜癌组织中microRNA-93的表达量高于癌旁组织（P<0.01）,可见microRNA-93可能作为癌基因参与子宫内膜癌的发生发展过程。     

乳液PCR扩增复杂基因序列的方法建立及普通PCR的比较

该研究分析普通PCR的不足,通过较多实验研究初步建立乳液PCR方法,改善PCR实验技术.采用人工合成的乳酸杆菌质粒为模板,不同成分配比条件下的乳液PCR和普通PCR对质粒序列进行扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,电泳结束后对凝胶进行Gelred染色并用GS-800灰度扫描仪成像.进一步分析乳液PCR和普通PCR扩增产物的特异性以及不同成分配比条件下乳液PCR的扩增质量.通过比较两种PCR方法的扩增结果可得,在相同条件下,乳液PCR扩增特异性高于普通PCR扩增,并确定当水相中加入100 g/L BSA,水油体积比在1∶2.5时,破乳水饱和乙醚体积比为1∶1时,水油相在1700 rpm条件下连续混合5 min时扩增效果最好.     

量子点与胶体金之间的荧光共振能量转移用于免疫球蛋白测定的研究

结合量子点与胶体金颗粒优良的光学性能,利用抗体识别技术,基于人IgG修饰的量子点与羊抗人IgG修饰的胶体金之间的荧光共振能量转移效应,建立了一种新型免疫分析方法用于人IgG的检测.这种方法操作简便,实验条件温和,特异性好,安全可靠.     

快速诊断小鹅瘟PCR方法的优化建立

为建立快速诊断小鹅瘟的PCR方法,根据已发表的GPV主要结构蛋白VP3基因序列,经多序列比对和Oligo6．0软件分析设计特异性PCR引物。以微量法提取病鹅肝组织DNA,优化PCR反应引物退火温度、循环次数和鉴定其特异性,并与酚氯仿法和煮沸法进行同步对比研究。结果显示,建立的PCR检测方法能够特异性检测病鹅肝组织中GPV的核酸,其扩增片段大小为343bp,最佳退火温度为58℃,最佳循环次数为35次。微量法提取的病毒核酸PCR检测灵敏度分别是酚氯仿法的50倍和煮沸法的2500倍。该PCR检测方法不与鹅副黏病毒、禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、鸭瘟病毒以及健康鹅肝组织发生交叉反应。本研究建立的GPVPCR检测方法能够快速诊断小鹅瘟。     

双引物PCR检测抗草甘膦豆粕饲料中的转基因成分

在一个PCR反应体系内,同步扩增大豆内参照基因lec和抗草甘膦大豆外源基因盒中的CaMV35s启动子、nos终止子或cp4 epsps基因,建立转基因大豆双引物PCR检测方法.PCR产物用限制性内切酶酶切进一步鉴定.结果表明,用双引物PCR扩增出标准转基因大豆阳性对照、阿根廷大豆、美国RR大豆及豆粕中的lec基因和相应的特异性外源基因;酶切反应确证PCR产物为特定片段大小的目的序列.建立的双引物PCR法适用于抗草甘膦大豆原料和豆粕饲料中转基因成分的简单化、高精度和高灵敏检测.     

具有毒性质粒沙门菌荧光PCR快速检测试剂盒的研发

介绍了用于检测具有毒性质粒沙门菌的2种荧光PCR试剂盒（一种是荧光PCR染料法检测试剂盒,另一种是荧光PCR探针法检测试剂盒）的研制过程,2种试剂盒运用了自行设计的特异性引物和TaqMan探针,能同时特异性地从众多的沙门氏菌和非沙门氏菌中高效、快速、准确地检测出多种具有毒性质粒沙门氏菌,而对于不具有毒性质粒的沙门氏菌和非沙门氏菌均不能检出,可为食品检验和医疗诊断领域提供方便快捷检测具有毒素质粒沙门氏菌的荧光PCR试剂盒．     

基于语料库的现代汉语定量量词的用法及偏误分析研究

在BCC汉语语料库的基础上,寻找现代汉语定量量词"对、双、副"在语法、语义和语用上的异同点,并分析汉语二语习得者在习得这三个量词时的偏误,据此提出相应的教学策略,以期对这三个词的"教"和"学"有所启发。     

作物定量化育种及其研究现状

叙述了作物定量化育种的概念与特点;阐明了作物定量化育种的学科体系;介绍了作物定量化育种的研究现状;展示了作物定量化育种的研究成果。在此基础上,对其研究前景进行了展望,并指出了今后进一步研究的发展方向。     

量化评价的泛滥及其危害

高校量化学术评价的泛滥,表现为数量过多、指标过高、变动太快、挂钩太滥;它混淆了内容与形式、质量与数量的关系,将学术研究导向庸俗的外部动机,使评价权力从同行专家转移到管理者手里,强化了“五唯”倾向,导致教师职业尊严和“双重忠诚”下降。量化学术评价的泛滥是功利主义办学观念和行政化管理方式共同作用的结果。按照《深化新时代教育评价改革总体方案》的要求改进高校教师的学术评价,首先需要解决的是由谁来评的问题。     

定量量词“对”和“双”计量表人NP的用法及其典型情况研究

"对"和"双"是两个可以计量人的定量量词。通过对北京大学CCL语料库现代汉语语料的考察分析发现:由于搭配用法、称量范围、使用频率、音节限制和语用上的差异,"对"在计量表人NP时比"双"更为典型;"对"和"双"二者都注重凸显性别,但"对"比"双"相对凸显数量。     

论定量与定性研究的结合问题及其对我国心理学研究的启示

定性与定量研究是社会科学研究领域中的两大主要范式 ,二者既存在较大的差别 ,但是也互相联系 ,具有结合的可能性。定性与定量研究的结合可以在研究视角、研究设计、具体研究方法等不同层面结合 ,从此发挥两类范式的各自优点 ,组成最适合研究所需的混合研究模式。与国际心理学研究先进水平相比 ,我国心理学研究在定量与定性两方面均存在较大的差距 ,两种研究范式之间又缺乏交流与借鉴 ,这极大地限制了我国心理学研究的进一步整合。因此 ,在当前对定性与定量研究的结合问题进行探讨对于我国心理学的今后发展无疑具有重大的意义与迫切性