疱疹病毒感染后HEp-2细胞MDH变化的初步观察

HSV-Ⅰ感染 HEp-2细胞后,胞浆及线粒体苹果酸脱氢酶(MDH)活力的升高分别以12h、44h 以及4h、16h、28h、32h 最明显:HSV-Ⅱ感染后,胞浆及线粒体 MDH 活力的升高分别以24h、48h 及4h、8h、16h、32h 最明显.用各型抗血清及紫外线灭活后,胞浆及线粒体 MDH 活力明显下降.方差分析及 q 检验表明这些变化具有高度显著性.MDH 酶谱分析可看出病毒感染主要与胞浆内分子量(MW)为67000和525000道尔顿(d)和线粒体内 MW36000d 的带有关.并对泪液和脑脊液 MDH 活性测定的临床应用进行了讨论.     

单纯疱疹病毒感染3T3膜脂的变化

利用气相色谱(GC)方法对单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ、HSV-Ⅱ)感染后的3T3细胞与未感染病毒的3T3细胞的膜脂成分进行色谱分析。结果表明,细胞受病毒感染的病变初期和后期存在膜脂成分的构象互变现象。感染 12 h后膜不饱和脂肪酸(C_(18:2、C_(18:1))的含量增多,感染 36 h后情况与上述相反,不饱和脂肪酸均趋于减少,而饱和20碳酸却明显增加。     

黄芪不同提取部分抗Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒的实验研究

本文报道8种黄芪提取部分即AⅠ、AⅢ,AⅣ、AⅦ、AⅧ、AⅨ、AⅩ在VeroE_6细胞中对Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-1和HSV-2)的作用。细胞病变(CPE)抑制试验结果表明,AⅠ、AⅥ和AⅦ对HSV-1有抑制作用,AⅠ和AⅥ对HSV-2有抑制作用。AⅥ在体外不能直接灭活HSV-1,但能抑制已感染细胞的病毒复制。     

单纯疱疹病毒II型感染对生殖道上皮细胞间紧密连接和单核细胞趋化性影响的初步研究

目的探讨人类单纯疱疹病毒II型（HSV-2）感染对生殖道上皮细胞间紧密连接的影响及对单核细胞的趋化作用。方法通过以人子宫内膜腺癌细胞（HEC-1-A）小室培养模型为基础建立生殖道体外单层细胞致密层模型,低剂量HSV-2感染后（MOI=0.1）,检测体外细胞活力;通过检测跨膜电阻判断细胞间紧密连接程度的变化;采用Westernblot、荧光定量PCR法观察细胞紧密连接蛋白ZO-1、E-cadherin和Occuldin的表达情况;通过单核细胞趋化反应实验来检测感染HSV-2的HEC-1-A细胞培养上清液的趋化效应。结果与阴性对照组（Mock组）相比,HSV-2（MOI=0.1）感染使HEC-1-A单层细胞致密层跨膜电阻逐渐降低,且在感染中后期下降明显（P＜0.01）,而细胞活力无显著变化（均＞80%）;随着HSV-2病毒感染,ZO-1蛋白表达水平逐渐降低,在感染60h,该蛋白表达水平最低,而其mRNA表达水平无显著变化（P＞0.05）,E-cadherin和Occuldin均无显著变化（均P＞0.05）;HSV-2感染HEC-1-A后的细胞上清液可诱导单核细胞产生明显的趋化反应（P＜0.01）。结论低剂量HSV-2持续感染可降低HEC-1-A单层细胞致密层跨膜电阻,破坏细胞间紧密连接,很可能与下调ZO-1表达水平相关;感染后的细胞上清液可产生某种特殊的趋化分子介导免疫细胞向感染区域迁移浸润。     

扇贝糖胺聚糖对Ⅰ型单纯疱疹病毒的抑制作用

目的 研究扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)不同浓度及不同作用时间对Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)的抑制作用.方法 以HSV-Ⅰ SM44株感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),观察病毒感染后的细胞变性反应(CPE),并检测不同浓度SS-GAG及不同作用时间对HSV-Ⅰ复制的抑制作用.结果 与病毒对照组相比,SS-GAG各浓度组(100、50、25 mg/L)能有效保护经HSV-Ⅰ感染的Vero细胞,使细胞活性增强(F=27.54,P<0.01);并减弱HSV-Ⅰ导致的病变效应,抑制病毒的复制,并且随着药物作用时间的延长,药物抗病毒效应逐渐增加, 最高达88.64%.结论 SS-GAG体外具有明显的抗HSV-1病毒作用.     

荔枝核黄酮体外抗单纯疱疹病毒的作用

目的:探讨荔枝核黄酮类提取物(FLC)体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的作用。方法:以阿昔洛韦为阳性药物对照,以不同剂量的荔枝核黄酮类提取物分别作用于HSV-1病毒复制周期的各个环节分成3个实验组,以病毒半数感染量(TCID50)、细胞病变效应(CPE)、MTT染色细胞存活率(MTT法)作为评价指标,判断的FLC抗病毒效果。结果:FLC对HEp-2细胞的半数细胞毒浓度(TC50)为239.25 mg/L,FLC对HSV-1病毒有直接杀伤作用和抗HSV-1生物合成作用,其直接杀伤HSV-1的半数有效浓度(IC50)为32.76 mg/L,治疗指数(TI)为7.30,抗HSV-1生物合成作用的半数有效浓度(IC50)为12.72 mg/L,治疗指数(TI)为18.81。结论:荔枝核黄酮类化合物在HEp-2细胞中对单纯疱疹病毒1型有明显抑制作用。     

腺病毒介导的热休克蛋白70表达对神经元氧化应激损伤的保护作用

目的探讨重组腺病毒介导的HSP70表达对过氧化氢（H2O2）诱导的神经元和胶质细胞损伤的保护作用。方法用携带全长HSP70基因的重组腺病毒vAd-HSP70感染体外培养的神经元和胶质细胞,RT-PCR、West-ern blotting检测靶细胞中外源性HSP70的表达。vAd-HSP70感染组、vAd-GFP感染组和未感染组细胞经0.5 mmol/L的H2O2处理后,MTT检测细胞活力,乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒检测细胞培养上清液中LDH活力,透射电镜观察细胞超微结构变化。结果vAd-HSP70感染组的细胞可检测到外源性HSP70基因表达。H2O2处理后,vAd-HSP70感染组细胞活力较其他组明显增强（P〈0.01）,vAd-HSP70感染组、vAd-GFP感染组、未感染组细胞培养上清液中LDH活力分别为（976&#177;106）、（1 332&#177;197）、（1 380&#177;121）,差异有统计学意义（P〈0.01）。电镜结果显示,vAd-HSP70感染组细胞膜较vAd-GFP感染组和未感染组完整清晰,无明显线粒体肿胀及细胞核溶解等不可逆损伤情况。结论腺病毒介导的外源性HSP70表达可保护神经元和胶质细胞抵抗H2O2损伤,具有明确的细胞保护作用。     

大黄素体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型的药效学研究

[目的]探讨大黄素在体外对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)和Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的抑制作用.[方法]采用细胞病变抑制法,观察大黄蒽醌类衍生物(大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、芦荟大黄、大黄酚)对HSV-Ⅰ型和HSV-Ⅱ型病毒感染兔肾细胞的抑制作用.[结果]大黄素在无毒浓度3.75μg/mL时能抑制HSV-Ⅰ致细胞病变;在无毒浓度15.0μg/mL时能抑制HSV-Ⅱ致细胞病变.[结论]大黄素在体外能抑制HSV-Ⅰ、HSV-Ⅱ病毒,而其他大黄蒽醌类衍生物则无抑制作用.     

不同构型人α防御素-5多肽抗HSV-2感染的实验研究

目的探讨不同构型人α防御素-5(HD-5)多肽对单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-2)感染的抑制作用,分析不同构型HD-5抗HSV-2活性的差异。方法 HSV-2病毒感染体外培养的绿猴肾细胞(Vero细胞),分别给予100μg/mL的HD-5/N、HD-5/Acm和HD-5/A肽处理,72h后观察细胞病变效应(CPE),并通过CCK-8法测定细胞保护率;建立HSV-2感染豚鼠生殖器实验动物模型,按照症状评分方法对不同构型HD-5多肽的体内抗HSV-2病毒感染作用进行分析。结果 HD-5/N与HD-5/Acm均能显著抑制HSV-2感染体外培养的Vero细胞(P<0.01),而HD-5/A的抗病毒作用不明显;阴道内给予HD-5/N多肽12.5μg.kg-1.d-1治疗8d能显著改善HSV-2感染豚鼠的生存状况,提高动物30d存活率(P<0.01),外阴感染症状评分显著降低(P<0.01),而HD-5/Acm治疗效果并不明显。结论天然结构HD-5多肽(HD-5/N)在体外或豚鼠阴道内应用均可发挥显著抗HSV-2感染的作用,二硫键缺失会显著影响HD-5多肽的体内抗病毒效果。     

重组集成干扰素α体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型的药效学研究

目的探讨重组集成干扰素α(IFN-Conα)在体外对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)和Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的抑制作用.方法应用细胞病变抑制法,观察不同浓度的重组集成干扰素α对HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ型病毒感染Vero细胞的抑制作用.结果IFN-Con α对Vero细胞无明显细胞毒作用,其中度毒性浓度(TC50)＞3μg/ml.对HSV-Ⅰ型和HSV-Ⅱ型的50%的抑制浓度(IC50)分别是(1.8×10-4±0.3×10-4)μg/ml和(3.5×10-4±1.5×10-4)μg/ml.其结果显著优于阳性对照药物阿昔洛韦和干扰素α(IFN-α),其IC50阿昔洛韦对HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ分别为(6.4×10-1±0.6×10-1)μg/ml和(19.1±2.42)μg/ml;IFN-α则分别为(1.6×10-2±1.0×10-2)μg/ml和(3.7×10-2±7.04×10-3)μg/ml.结论IFN-Con α抗HSV-Ⅰ型和HSV-Ⅱ型的有效剂量明显低于阳性对照药阿昔洛韦和干扰素α(P＜0.01).     

氯化镉致小鼠胸腺病理及酶组织化学改变

作者用昆明种雄鼠单次腹腔染镉,通过一般组织病理学和酶组织化学方法,观察了镉致胸腺损伤的形态及酶活性改变。结果:亚致死剂量镉(3mg/kg)单次染毒可导致胸腺急性萎缩,其发生机理是氯化镉抑制毛细血管内皮细胞酶活性,从而造成毛细血管损伤,致皮质淋巴细胞缺氧,大片坏死。单次染镉致胸腺急性萎缩后胸腺有较强的再生能力。     

氯化镉致小鼠胸腺病理及酶组织化学改变

The changes in histopathology and enzyme histochemistry of thymus induced by a single intraperitoneal injection of sublethal doses of cadmium chloride into Kunming male mice were examined. The swollen endothelium of capillaries was observed, with an obviously decreased activity of ICDH, LDH and ATPase, which seemed to be due to direct inhibition by cadmium at the 4th hour. The necroses of the cortex thymocytes were found at the 8th hour after injection and reached an extreme at the 16-24th hour, while few necroses of the lymphocytes in the medulla. Beginning 4th to 8th hour after exposure, the activity of enzymes was located in mitochondria of the cortex thymocytes, i.e., SDH, ICDH, CCO and ATPase, was decreased gradually. It suggested that thymic cortex had a marked impairment of blood supply and anoxia. Within 2 days after a single injection the cortex of the gland was mainly populated by epithelial reticular cells except a few lymphocytes. It was noted that there were some bigger cells which were characterized by their large size, basophilic cytoplasma, rough chromatin and high mitotic ability and activity of MDH, LDH, G-6-PD increased in these cells. From above observation the author concluded that the cause of cadmium-induced acute thymic atrophy was lymphocyte necroses within thymic cortex. The mechanism of the cortex thymocytes necrosis was possibly secondary to an anoxia of cortex resulting from capillary damage in the cortex. The ability of thymic regeneration is strong after being damaged. The regenerate cells possessed characteristics of morphology and enzyme histochemistry of immature cells, which probably came from the bone marrow.     

呼吸窘迫综合征早期诊断指标初探

为探索呼吸窘迫综合征(ARDS)的早期诊断指标,用油酸复制ARDS动物模型。在注射油酸后不同时间,测定肺灌洗液(BALF)和面清中的乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(ALP)活性。结果发现,BALF中LDH在注射油酸后半小时即增加,达对照组的6.7倍;血清LDH达对照组的2倍;BALF和血清中ALP也有异常变化。实验表明,BALF和血清中LDH升高可作为早期诊断ARDS的指标之一。     

小鼠阴道疱疹感染与Fas蛋白粘膜上皮细胞中的表达

目的　探讨HSV 2小鼠阴道粘膜面感染后的病理变化和诱导粘膜上皮细胞凋亡的表现,以及Fas蛋白的表达与细胞凋亡的相关关系,有助于阐明HSV 2感染后病毒与细胞相互作用的分子机理,为HSV 2病毒 感染疾病的诊断、治疗提供一定的实验和理论依据。方法将HSV 2接种于小鼠阴道,建立HSV 2阴道粘膜面直接感染动物模型,分不同天数处死,取其阴道固定于10%福尔马林。用HE染色、TUNEL染色研究HSV 2小鼠阴 道粘膜面感染后的病理变化和诱导粘膜上皮细胞凋亡的表现,用免疫组化法研究Fas蛋白分子在阴道上皮细胞中 的表达水平,分析与细胞凋亡的相关关系。结果小鼠阴道HSV 2感染后的粘膜上皮细胞病理学改变为:22份标本 中同时伴有细胞坏死、炎症浸润及凋亡细胞阳性表达,标本中可达粘膜上皮的1/4区域。这些形态改变从实验感 染的第1天至第11天均可见到。小鼠阴道感染HSV 2后,Fas蛋白从感染第3天起可见到表达(22/24)。凋亡细 胞指数与Fas阳性细胞指数呈正相关(r=0.9660,P<0.05)。结论HSV 2直接感染小鼠阴道后可同时引起炎症、 细胞溶解性坏死及诱导阴道上皮细胞凋亡。HSV 2感染小鼠阴道后阴道上皮细胞Fas分子呈高表达,与凋亡细胞 指数呈正相关,提示Fas对HSV 2诱导的粘膜细胞凋亡起上调作用;可进一步研究作为阴?     

无辅助病毒HSV-1载体介导LacZ基因在培养皮层神经元中的表达

目的:探讨无辅助单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type-1,HSV-1)载体的包装及其介导LacZ基因在体外培养神经元表达的作用, 解决该载体系统在包装及体外培养神经元应用中的有关问题.方法:将一组含HSV-1基因组的粘粒以限制性内切酶Pac Ⅰ酶切、纯化后,与含LacZ和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)及神经微丝(neurofilament,NF)嵌合启动子的HSV-1质粒DNA在脂质体作用下,共转染2-2细胞;在34 ℃条件下培养72 h,收获病毒颗粒.将含病毒颗粒的上清液,加入BHK细胞培养液中,继续培养24 h后,加X-gal染液作用4 h,观察表达LacZ基因的蓝染细胞.取培养第3天的胚胎大鼠大脑皮层神经元,加入含病毒颗粒的培养液,过夜后更换新鲜培养液,分组继续培养1,7和14 d,进行X-gal染色,光镜下观察.结果:包装形成的病毒颗粒感染BHK细胞,24 h后可见表达LacZ基因的蓝染细胞;感染培养第3天的皮层神经元,继续培养1,7和14 d后均可见蓝染神经元.结论:无辅助病毒包装系统能够使含TH-NF嵌合启动子的HSV-1载体形成有效的病毒颗粒,并且在体外培养神经元中持续稳定地表达外源基因,为在神经系统进行基因转移和基因功能研究提供了有效的工具.     

HSV-2感染ECV304的形态学变化

目的观察人脐静脉内皮细胞（ECV304）受到单纯疱疹病毒2型（HSV-2）感染后的连续病变过程及形态学特征。方法采用ECV304传代培养,接种HSV-2后用相差显微镜、组织染色观察贴壁生长细胞的病变全过程。结果接种HSV-2后,ECV304于1d逐渐出现细胞肿胀、变圆、胞浆颗粒增多粗大;2d逐渐出现细胞融合,细胞核着色变浅。结论HSV-2接种后在ECV304出现的形态学变化,造成细胞死亡的主要形式是细胞坏死,未见明显的细胞凋亡现象。     

郎格罕细胞抗单纯疱疹病毒感染作用的实验研究

本实验用接种单纯疱疹病毒方法,诱发豚鼠皮肤及唇粘膜疱疹,动态观察接种区疱疹发生及郎格罕细胞 (LC) 的变化。结果表明接种病毒后2～3天,皮肤或唇粘膜即发生疱疹,前音散在出现,持续3～5天;后者成群发生,持续5一8天。皮肤病灶内 LC 数目明显减少,而唇粘膜接种部位内树枝状、ATPase(+)LC 完全消失。病灶周围皮肤或粘膜 LC 随之向病灶迁移,聚集在形成疱疹的部位。至疱疹消失,LC 数目复原。由此提示,在病毒感染早期,LC 可能具有类似巨噬细胞的功能。     

氧化磷脂对小鼠急性坏死性胰腺炎的治疗作用

目的探讨氧化磷脂(OXPAPC)对小鼠急性坏死型胰腺炎(ANP)的治疗作用及其可能机制.方法48只C57BL/6J小鼠随机被分为ANP模型组和OXPAPC治疗组.ANP模型制备采用腹腔内注射雨蛙肽和脂多糖.OXPAPC治疗组于脂多糖注射前5 min给予OXPAPC(25 mg/kg)腹腔注射.于第1次雨蛙肽注射后第9、12和24小时分批处死小鼠,留取血液分离血清,用于测定淀粉酶和乳酸脱氢酶(LDH)活性;取胰腺组织作HE染色;应用酶组织化学检测胰腺组织中性粒细胞髓过氧化物酶(MPO)活性改变;通过RT-PCR检测炎性介质肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、E-选择素和细胞间黏附分子(ICAM)-1mRNA表达;Western印迹检测c-Jun氨基激酶1(JNK1)及核因子-κ(NF-κB)p65蛋白表达的变化.结果与ANP模型组相比,OXPAPC治疗组血清淀粉酶活性于第9、12小时显著降低(P＜0.05),LDH活性于第24小时明显下降(P＜0.05);病理组织学评分结果显示,OXPAPC治疗组胰腺组织坏死和炎性细胞浸润程度显著减轻,但水肿及出血程度无明显变化;OXPAPC治疗组胰腺组织MPO活性于第9、12及24小时显著降低;炎性介质TNF-α、IL-1 β、E-选择素和ICAM-1 mRNA表达呈不同程度的下调;JNK1及NF-κBp65蛋白表达下调.结论OXPAPC可显著降低实验性ANP的严重程度,其可能途径与阻断内毒素信号通路、抑制中性粒细胞活化、下调炎性介质表达有关.