临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中超广谱β-内酰胺酶的检测

目的：检测临床分离的临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）菌株的发生率、耐药性、流行性以及酶的基因型别。方法：采用双纸片法、琼脂稀释法、PCR、脉冲场电泳对1999年复旦大学附属华山医院临床分离的559株肺克雷伯菌和427株大肠埃希菌进行检测。结果：肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中产ESBL菌株的发生率分别为51％和23.6％,产ESBL菌株主要分布于ICU和神经外科病房,对大多数的β-内酰胺酶和非β-内酰胺类抗菌药物耐药;PFGE显示,产ESBL菌株（尤其是产ESBL肺炎克雷伯菌株）在ICU病房中存在同一菌株的克隆传播;PCR检测显示TEM型是最为常见的β-内酰胺酶型别,CTX-M型ESBL亦较为普遍。结论：产ESBL菌株在临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中较为普遍,而且为多重耐药菌株,在医院内中存在流行与传播。     

应用仪器法与纸片协同法检测超广谱β-内酰胺酶比较研究

目的:探讨VITEK AMS检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱ESBLs的可靠性,为临床合理选择抗生素提供依据。方法:用VITEK AMS专用药敏卡GNS506进行ESBLs检测,并以头孢曲松、头孢噻肟、头孢他啶和氨曲南为底物,用纸片协同试验作对照。结果:仪器检测57株肺炎克雷伯菌中有29株ESBLs为阳性,阳性检出率为50.88%,与纸片协同法结果一致。检测110株大肠埃希菌中,仪器检出率为40%,纸片协同法除仪器法检出阳性菌株ESBLs阳性也阳性外,对仪器检测的66株阴性菌中,仍有21株为阳性,检出率为59.09%。结论:VITEK AMS检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株,存在一定的局限性,建议根据感染菌株的特点改进ESBLs检测药敏卡,使用敏感的物质作底物,以提高仪器对ESBLs检出的灵敏度。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测及耐药性观察

目的：调查大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况，观察其耐药性，指导用药。方法：应用复合纸片表型确证试验及双纸片协同试验，检测105株大肠埃希菌和47株肺炎克雷伯菌的ESBLs。体外抗生素敏感性试验应用肉汤数量稀释法。结果：大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产ESBLs阳性率为17.1%和31.9％。确证试验检测 阳性率为21.7％，双纸片协同法阳性率为19.1%。产酶菌株对青霉素类、头孢菌素类及氨曲南的耐药率达66.7%-100.0%,明显高于非产酶菌株5.7％-59.8％。阳性菌株对氨基甙类、氟喹诺酮类、磺胺类的交叉耐药率达44.4％-93.3%。对头孢西丁和氨苄西林/舒巴坦的耐药率分别为33.3％-38.9％和61.1％-73.3%。所有受试菌对亚妥培南敏感。头孢噻肟为本地检测ESBLs最适底物。结论：及时、准确地检测ESBLs，合理使用抗菌药物，显得十分迫切和必要。     

超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药性

目的了解超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的耐药性、耐药特点,指导临床用药。方法采用纸片确证法检测65株产ESBLs菌并对其体外抗生素耐药性作初步研究。结果ESBLs总阳性率为37．4％,大肠埃希菌的ESBLs的阳性率为44．1％,肺炎克雷伯菌的ESBLs的阳性率为31．1％。产ESBLs菌株对三代头孢的耐药率明显高于不产酶株。大肠埃希菌对阿米卡星的耐药率较肺炎克雷伯菌低,肺炎克雷伯菌对头孢西丁、头孢吡肟的耐药率较大肠埃希菌低。结论治疗ESBLs菌引起感染,应用亚胺培南、含β-内酶胺酶抑制剂类抗生素及其药敏试验显示敏感的有效药物。     

白血病分化相关基因dif14的原核表达

目的 :构建 pGEX dif14原核表达载体 ,在大肠杆菌中表达dif14蛋白片段以获得其抗原 .方法 :采用N末端融合谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)的 pGEX 4T 1载体 ,根据dif14基因开放读框N端 5 2氨基酸序列设计引物PCR扩增并购建原核表达载体 ,测序证实 .在大肠杆菌DH5α中进行表达 .结果 :测序证实dif14原核表达载体构建正确 ,含 pGEX dif14表达质粒的大肠杆菌经异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导后能够表达约Mr35× 10 3 的融合蛋白 .结论 :成功地构建了原核表达质粒 pGEX dif14 ,并在大肠杆菌得到表达 ,为研究dif14的功能奠定了一定的基础     

广州地区肺炎克雷伯菌产TEM型及SHV型β-内酰胺酶基因表型的研究

目的对广州地区产β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌TEM型和SHV型基因型及其分子流行病学进行研究。方法对57株产β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌进行blaTEM和blaSHV基因扩增,分别采用变性高效液相色谱技术和测序法对扩增产物进行分析,以明确基因类型。结果57株肺炎克雷伯菌均扩增出blaTEM和blaSHV基因。测序结果表明,TEM-116 ESBL32株,占54．2％;SHV型以SHV-12为主,占33．3％,其次为SHV-11和SHV-2a等,还发现5种新的SHV基因亚型。54株菌株同产TEM和SHV型β-内酰胺酶,占94．7％;其中13．0％同产TEM-116和SHV-12ESBL。结论TEM-116和SHV-12分别是广州地区产β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌TEM型及SHV型耐药质粒主要的基因亚型,blawTEM和blaSHV在肺炎克雷伯菌中同产的比例很高,这提示本地区即将或已经面临肺炎克雷伯菌新耐药机制的抵抗和流行,必须加强对产ESBL肺炎克雷伯菌的分子流行病学监测。     

浙江省嘉兴地区多重耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因分子生物学研究

目的：确定浙江省嘉兴地区临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌E3株所产β－内酰胺酶编码基因序列及亚型。方法：肺炎克雷伯菌E3株经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为ESBLs细菌，PCR扩增其β－内酰胺酶编码基因片段，克隆后双脱氧链终止法测定苷酸序列并确定亚型，重组细菌表型鉴定。结果：E3株同时产SHV和TEM型两种β－内酰胺酶，其中SHV基因片段含812个核苷酸，编码266个氨基酸，为SHV－11型β－内酰胺酶；TEM基因片段含973个核苷酸，编码288个氨基酸，为TEM－1型β－内酰胺酶。含TEM－1和SHV－11编码基因的重组细菌经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为阴性。结论：E3株肺炎克雷伯菌同时产生SHV－11和TEM－1两种广谱β－内酰胺酶，广谱β－内酰胺酶的种类和数量可影响ESBLs的表型检测结果。     

CTX-M-15基因在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌头孢他啶耐药株中的检测

[目的]了解CTX-M-15基因与大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢他啶耐药的关系。[方法]筛选ESBLs阳性且对头孢他啶耐药的菌株为实验组,对头孢他啶敏感而对头孢曲松耐药的菌株为对照组。多重PCR方法检测CTX-M-14,CTX-M-15基因。[结果]实验组CTX-M-15基因检出率高达75.9%,单纯CTX-M-15基因为40.6%,同时存在CTX-M15、CTX-M-14基因为35.2%。而对照组检出率分别为:17.7%、5.9%、11.8%。[结论]CTX-M-15基因是大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢他啶耐药的主要机制,建议临床合理使用抗生素,避免引起流行。     

神经元细胞信号传导蛋白质14-3-3ζ编码基因的扩增和克隆

目的 克隆神经元信号传导蛋白质14－3－3ζ编码基因，以研究其在人神经退行性病变中的诊断价值、细胞信号传导过程中的作用及对细胞分裂、细胞凋亡的影响。方法 提取人脑胶质瘤细胞总mRNA，以其为模板逆转录合成cDNA第一链，设计合成引物，用PCR扩增14－3－3ζ基因编码序列，将其插入pGEM-T载体，并用双酶切和以质粒为模板的PCR进行鉴定。结果 RT－PCR扩增出一条约750bp大小的特异性条带，重组质粒的双酶切和以质粒为模板的PCR获得了一条与RT－PCR大小相同的条带。经DNA测序证明所克隆的DNA片段与GenBank收录序列一致。结论 信号传导蛋白质14－3－3ζ重组pGEM-T克隆载体的成功构建，为进一步研究提供了条件。     

CTX-M-14, CTX-M-24 and resistance in Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae clinical isolates

Extended-spectrum β-lactamases (ESBLs) are the main cause of resistance to the third and forth-generation cephalosporins in Enterobacteriaceae which are mediated by plasmids and can hydrolyze oxyiminoaminothiazolyl cephalosporins and mono- bactams.1 Most of ESBLs are mutants of the classical TEM and SHV types, with one or more amino-acid substitution(s) in the active site. β-lactamase inhibitors, such as clavulanic acid, can inhibit their activities. Recently, The cefotaximases (CTX-…     

从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中检出质粒介导的AmpC DHA-1型β内酰胺酶基因

目的 了解产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性和基因型.方法 收集2002年1月-2004年5月间我院呼吸科临床标本中分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共110株,用酶提取物三维试验检测AmpC酶;用等电聚焦电泳、耐药质粒电转化试验、聚合酶链反应(PCR)及测序确定AmpC酶基因型.结果 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中AmpC酶检出率分剐为9.30%和4.48%.药敏试验显示产酶株对头孢西丁全部耐药,对第三代头孢菌素、酶抑制剂、氨曲南、阿米卡星及环丙沙星均有不同程度耐药,对头孢吡肟及亚胺培南较敏感.7株产AmpC酶菌株中有5株通过电转化试验可将头孢西丁耐药性传递给受体菌,经PCR扩增和测序证实为质粒介导DHA-1型AmpC酶.结论 我院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中已经出现产质粒介导AmpC酶菌株,其耐药性能够水平传播,给临床抗感染治疗带来重大威胁.     

MicroScan AutoScan-4系统筛选超广谱β-内酰胺酶的可靠性评价

目的 对MicroScan AutoScan-4（MS-Auto4）系统筛选大肠埃希菌（Eco）和肺炎克雷伯菌（KDn）产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的可靠性评价。方法 在MS-Auto4系统对临床标本分离的150株Eco和65株Kpn进行ESBLs筛选的同时，用纸片扩散法做表型确证试验。结果 150株Eco和65株Kpn中，经确证ESBLs阳性的有40株和21株，系统提示为可疑产为ESBLs的有60株和26株，可筛选出全部ESBLs阳性菌株，灵敏度为100％，特异度为83．8％，假阳性率为16．2％，没有造成漏筛。结论 用MS-Auto4系统对Eco和Kpn进行鉴定及药敏试验的同时，可利用其专家系统对ESBLs进行筛选，有助于临床及早翻订合理的治疗方案。     

肺部感染肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌感染及耐药分析

目的：了解我院肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌肺部感染以及超广β-内酰胺酶（ESBLs）的发生率、流行情况．耐药性，并探讨ESBLs产生的危险因素．方法：收集肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌肺部感染共114例，ESBLs的检测用纸片扩散表型试验确证．结果：大肠埃希菌中产ESBLs菌株为40．0％，肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株为21．6％，总检出率为28．1％，上述产ESBLs菌株得亚胺培南高度敏感（100％），派拉西林／他唑巴坦为62．5％，头孢哌酮／舒巴坦为59．3％．结论：除亚胺培南外，哌拉西林／他唑吧坦和头孢哌酮／舒巴坦也可作为治疗产ESBLs细菌感染的药物，改善营养状况，减少侵入性才，战少激素或制酸刺的应用可能战少ESBLs菌株的出现，降低患者藕死率。     

大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株质粒AmpC基因研究

目的 研究大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株质粒AmpC基因情况和耐药性.方法 应用聚合酶链反应(PCR)法对耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌连续分离株进行AmpC酶DHA和ACT-1基因检测和分析.结果 68株大肠埃希菌中ACT-1基因阳性4株(5.9%),DHA基因全为阴性;44株肺炎克雷伯菌中DHA基因阳性4株(9.1%),ACT-1基因全为阴性.结论 质粒型AmpC酶基因可通过转化、接合等方式转移给其他同种或不同种菌,易于传播,应加强监测.     

铜陵地区产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的检测及耐药性分析

目的了解本地区医院分离出的产超广谱产β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌菌株的构成比及耐药特征,为临床制定合理的抗感染治疗方案提供参考。方法2003年10月1日至2004年9月30日从本地区五家医院各类临床标本分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌作为受试菌,采用Kirby-Bauer纸片扩散法和ESBLs确认试验进行ESBLs的检测及耐药性测定。结果产ESBLs的大肠埃希菌检出率为31%,肺炎克雷伯菌为31.6%,产ESBLs的大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌株较不产ESBLs的菌株对各种临床常用抗生素耐药性明显增高,并表现出多重耐药。产ESBLs的大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌株对临床常用的头孢呋辛、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢曲松、氨曲南、阿莫西林/克拉维酸、替卡西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦的耐药率均超过70%,对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率在50%左右,对氟喹诺酮类的耐药率在41.7%～72.7%,未发现对亚胺培南的耐药株。结论产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌如此高的检出率应引起临床上高度重视,碳青霉烯类抗生素应该作为治疗产ESBLs菌严重感染的首选药物。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌药敏分析

目的：研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性及不同标本来源和不同病区的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性的差异。方法：应用WHONET5．5对四川省人民医院2011年802株大肠埃希菌和580株肺炎克雷伯菌的药敏结果进行分析。结果：大肠埃希菌耐药率最低的为亚胺培南（0．2％）、厄他培南（1．4％）、头孢替坦（1．8％）,其次为哌拉西林／他唑巴坦（3．0％）、阿米卡星（4．0％）、呋喃妥因（4．5％）。肺炎克雷伯菌耐药率低的抗生素依次为亚胺培南（3．2％）、阿米卡星（3．3％）、头孢替坦（4．9％）、厄他培南（6．8％）、哌拉西林／他唑巴坦（8．0％）。ESBLs检出率大肠埃希菌为61．8％,肺炎克雷伯菌为35．5％。肺炎克雷伯菌在尿液标本中的敏感率较痰液、血液、其他无菌体液低。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌在儿科的敏感率高于内外科及ICU病房。结论：大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌属对碳青霉烯类抗生素、头霉素类和哌拉西林-他唑巴坦仍保持高度敏感性。不同标本来源和不同病区的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌药敏存在差异。临床治疗应根据药敏结果合理选用抗生素。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌外膜蛋白与耐药机制的研究进展

细菌的膜孔蛋白及其形成的孔道是细菌与外界交流的主要途径,也是抗生素透过细菌细胞膜的重要通道。细菌膜孔蛋白合成降低或膜孔蛋白缺失可阻碍抗生素进入细菌,从而引起细菌对抗生素耐药。在细菌的耐药机制研究方面,膜孔蛋白的作用日益受到关注,文章从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌入手,对其膜孔蛋白的特点、构成、合成调控机制及其与细菌耐药的关系进行综述。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌外膜蛋白与耐药机制的研究进展

细菌的膜孔蛋白及其形成的孔道是细菌与外界交流的主要途径,也是抗生素透过细菌细胞膜的重要通道。细菌膜孔蛋白合成降低或膜孔蛋白缺失可阻碍抗生素进入细菌,从而引起细菌对抗生素耐药。在细菌的耐药机制研究方面,膜孔蛋白的作用日益受到关注,文章从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌入手,对其膜孔蛋白的特点、构成、合成调控机制及其与细菌耐药的关系进行综述。