桑黄液体发酵生产多糖工艺研究

目的 考察不同培养条件对桑黄菌液体发酵生产多糖的影响。方法 通过正交试验设计,对不同培养基种类、起始pH值、发酵温度和摇床转速进行优化,在此工艺基础上,采用5 L发酵罐进行发酵放大试验。结果 采用添加0.3 g/L维生素B1和0.3 g/L维生素B2的PD培养基,起始pH值5,发酵温度28 ℃,摇床转速180 r/min条件下,桑黄菌摇瓶发酵液中胞内多糖和胞外多糖分别为5.80、2.37 g/L;5 L发酵罐发酵液中桑黄胞内多糖和胞外多糖分别为5.85、2.30 g/L。结论 桑黄液体发酵可获得桑黄多糖,本实验结果为桑黄液体发酵工业化生产提供参考。     

紫外可见分光光度法测定不同产地柴胡中多糖含量

[目的]建立一个紫外可见分光光度法,对不同产地柴胡样品中的多糖进行含量测定。[方法]柴胡多糖含量测定采用苯酚-硫酸显色,487nm为检测波长,对提取过程的主要步骤及方法学进行实验,建立其测定方法。[结果]柴胡多糖的的测定方法简便、准确、稳定,线性范围为10.484～75.936μg,(r=0.9986),11个不同产地的柴胡中多糖含量范围在46.299～96.965g/kg生药。[结论]本研究建立的柴胡多糖含量测定方法简便易行、稳定、可靠。     

红花多糖对人PBMC增殖活性及分泌细胞因子的影响

[目的]探讨红花多糖(SPS)对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖作用及PBMC诱生细胞因子的影响。[方法]采集健康成人外周血,常规分离PBMC,体外与不同浓度的SPS共同培养,检测PBMC的增殖活性及白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的水平。[结果]SPS对PBMC增殖有促进作用,以1.25g/L和0.625g/L剂量组增殖活性增加明显(P<0.05);红花多糖(SPS)各组IL-2和IFN-γ水平明显高于对照组(P<0.05),而各组TNF-α的水平无显著性差异。[结论]SPS可促进PBMC的增殖,提高IL-2和IFN-γ水平,增强免疫功能。     

骨质丸Ⅱ中何首乌有效成分的测定

[目的]建立骨质丸Ⅱ中何首乌有效成分2,3,5,4,-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷的测定方法。[方法]采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent;流动相:乙腈-水(17:83);检测波长320nm;柱温40℃;体积流量1.0mL/min。[结果]2,3,5,4,-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷在0.063～0.7875μg线性关系良好(r=0.9999),平均回收率101.37%,RSD为1.76%。[结论]本方法简便、准确、重现性好,适用于骨质丸Ⅱ中2,3,5,4,-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷的测定。     

血红素加氧酶-1的表达对氟尿嘧啶诱导食管癌细胞凋亡的影响

目的 本研究探讨血红素加氧酶-1与氟尿嘧啶诱导食管癌细胞凋亡的关系。 方法 培养ECa109食管鳞癌细胞,实验组分别加入正常培养基,含20μmol/L、80μmol/L锌原卟啉(ZnppIX)的培养基培养12h,后更换为含100μg/ml 5-FU组培养;对照组予正常培养基培养;共培养96h后检测各组细胞凋亡情况。 结果 在凋亡早期细胞中(Annexin V⁺/PI^-),20μmol/L ZnppIX组(25.63%±6.52%)及80μmol/L ZnppIX(22.48%±5.59%)组显著高于5-FU组(12.89%±4.42%,P均<0.05)。在中晚期凋亡细胞(Annexin V⁺/PI⁺)中,20μmol/L ZnppIX组(25.17%±5.53%)显著低于5-FU组(39.89%±6.66%)及80μmol/L ZnppIX组(41.95%±2.92%,P均<0.01)。80μmol/L ZnppIX组caspase-3的活化率显著高于正常细胞(P<0.05)。 结论 ZnppIX抑制HO-1表达后,可以显著增加5-FU诱导的Eca109食管癌细胞凋亡率,caspase-3参与了其诱导细胞凋亡的过程。     

黑曲霉转化牛蒡子水提液中牛蒡子苷的研究

目的 采用黑曲霉Aspergillus niger ZJUT302产生的β-葡萄糖苷酶水解牛蒡子水提液中的牛蒡子苷,提高牛蒡子苷元的量。方法 A. niger ZJUT302在培养基成分为稻草粉50 g/L、麦麸15 g/L、大麦粉15 g/L、(NH₄)₂SO₄ 10 g/L、KH₂PO₄ 0.5 g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L,温度30 ℃,初始pH 5.0,添加0.1%聚乙二醇5000,摇床转速150 r/min的优化反应条件下转化牛蒡子水提液7 d。结果 牛蒡子苷在初始浓度0.06 mmol/L时,转化率可达92.3%。结论 本方法是一种有效的牛蒡子生物炮制技术。     

甘草对液体发酵中槐耳菌丝体生长及多糖影响初探

[目的] 以槐耳菌丝体生物量及多糖为主要指标,探究槐耳-甘草液体共发酵中最佳甘草的添加量和发酵时长。[方法] 采用液体发酵技术,在液体发酵培养基中加入甘草提取液,共发酵获得槐耳-甘草共发酵产物,苯酚-硫酸法及DNS法结合测定多糖含量。[结果] 槐耳-甘草液体共发酵实验中,添加甘草8 g/L、发酵终点设为192 h时,槐耳生物量和胞内多糖产量达到最大值。[结论] 运用槐耳-甘草液体共发酵可以提高槐耳生物量及多糖的含量,为深入研究槐耳-甘草液体共发酵机制提供了理论依据。     

新型糖苷类衍生物降糖作用筛选和研究

目的 针对钠-葡萄糖协同转运蛋白抑制剂（SGLT）靶点,通过尿糖检测方法筛选和评价糖苷类衍生物的降糖作用。方法 SD大鼠分别单次ig给予8个新型糖苷类衍生物30 mg/kg,在不同时段收集大鼠的尿液,己糖激酶法测定葡萄糖的量;尾静脉取血,血糖仪测血糖水平;同时对活性化合物进行大鼠糖耐量实验。结果 新型糖苷类衍生物中N-糖苷类化合物TY702-1N和S-糖苷类化合物TY702-1S对大鼠ig葡萄糖水溶液后的排糖作用较弱,C-糖苷类化合物TY702-4C的排糖作用较强,且显示剂量相关性。结论 就开发和研制作用强、药动学性质好的降糖药物而言,新型糖苷类衍生物TY702-4C是一个具有较好前景的先导化合物。     

3-乙酰基-11-羰基-β-乙酰乳香酸在Caco-2和MDCK细胞模型中的吸收研究

目的 研究乳香提取物中3-乙酰基-11-羰基-β-乙酰乳香酸（AKBA）在Caco-2、MDCK-MDR1和MDCK-Wild细胞模型中的吸收转运机制。方法 利用Caco-2、MDCK-MDR1和MDCK-Wild细胞模型,研究AKBA由细胞层顶端（AP）→基底端（BL）和BL→AP的双向转运过程;采用LC-MS/MS法测定AKBA的量,计算表观渗透系数（P_app）。结果 在Caco-2细胞模型中,50 μmol/L AKBA 由AP→BL、BL→AP的P_app分别为7.9×10^?7、1.5×10^?7 cm/s,在MDCK-MDR1细胞模型中,50 μmol/L AKBA由AP→BL、BL→AP的P_app分别为2.6×10^?7、0.8×10^?7 cm/s,在MDCK-Wild细胞模型中,50μmol/L AKBA由AP→BL、BL→AP的P_app分别为2.4×10^?7、0.6×10^?7 cm/s,3种细胞模型中外排率均小于2。结论 AKBA在肠道中吸收不良,不是P-糖蛋白的底物,推测其通过摄入型主动转运和被动扩散两种机制透过小肠上皮细胞。     

冬凌草多糖RPPSIIa的分离纯化及其性质研究

目的 从冬凌草Rabdosia rubescens中提取分离获得多糖组分RPPSIIa,并分析其结构性质和探讨免疫活性,为冬凌草临床应用与进一步开发利用提供参考。方法 主要采用水提醇沉透析得冬凌草多糖,经分级醇沉,Sephdex G-100凝胶色谱柱纯化得RPPSIIa,应用HPLC、IR、LC、UV等方法对冬凌草多糖进行组成结构分析及理化性质研究,通过MTT比色法观察该组分在体外对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果 冬凌草多糖RPPSIIa为均一组分,其单糖组成为鼠李糖、葡萄糖,二者比为7︰93,RPPSIIa具有典型的多糖吸收峰,其结构中存在α-型糖苷键;RPPSIIa在5～100 μg/mL能有效刺激小鼠脾淋巴细胞增殖,5、50 μg/mL均能有效增强刀豆蛋白A（ConA）诱导的淋巴细胞增殖反应。结论 多糖RPPSIIa是由冬凌草中提取的均一葡聚糖,具有较强的免疫生物活性。     

3种挥发油对马钱子总碱透皮贴片体外经皮渗透的影响

目的 研究砂仁、草果、白豆蔻挥发油对马钱子总碱贴片中马钱子总碱（主要含马钱子碱和士的宁）体外经皮渗透的影响。方法 以小鼠离体皮肤为实验材料,采用改良Franz扩散池法,以HPLC法测定马钱子总碱贴片中马钱子总碱（马钱子碱和士的宁）的累积渗透量（Q_n）,考察3%、5%、7%、10%砂仁、草果、白豆蔻挥发油对马钱子总碱（马钱子碱和士的宁）的促渗效果。结果 不同质量浓度挥发油中,以5%砂仁挥发油、3%草果挥发油、10%白豆蔻挥发油渗透速率（J_SS）最大,分别为1.039、0.951、0.907 mg/(cm²·h);与不加促渗剂的阴性对照组相比,增渗倍数（ER）分别为1.212、1.230、1.383,其中5%砂仁油的ER大于阳性对照10%氮酮。结论 5%砂仁油、3%草果油、10%白豆蔻油均能明显促进马钱子总碱贴片中马钱子总碱（马钱子碱和士的宁）的透皮吸收。     

姜黄属药用植物的3种同工酶分析

目的 探讨姜黄属Curcuma L. 6种郁金类药用植物的种间及其种内不同居群间的亲缘关系。方法 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）,分析超氧化物歧化酶（SOD）、多酚氧化酶（PPO）、细胞色素氧化酶（COD）的酶带,并采用UPGMA法对数据进行分析。结果 SOD、PPO和COD的酶谱能较好地区分6种郁金类药用植物;PPO和COD还能够对种内不同居群的材料进行区分。结论 同种植物不同居群间亲缘关系的远近与地理来源有关;能够通过聚类分析区分姜黄和川郁金;姜黄属郁金类植物的栽培型和野生型产生了分化。     

氮、磷、钾肥对黄连白绢病菌核形成和萌发的影响

目的 研究氮、磷、钾肥对黄连白绢病菌核的形成和萌发的影响，为黄连栽培过程中防治病害提供新的方法。方法 配制不同浓度的氮、磷、钾肥施加到土壤中，再接种菌丝块、菌核，观察对菌核形成、萌发的影响。结果 尿素、碳酸氢氨对菌核萌发、形成均具有显著的抑制作用，而磷酸二氢钠、氯化钾、硝酸钾对菌核的形成、萌发具有不同程度的促进作用，磷酸二氢钾对菌核的萌发作用不明显，对菌核的形成具有抑制作用。结论 生产中可采取偏施氮肥，少施钾肥、磷肥的措施来控制黄连白绢病菌核的形成及萌发。     

大鼠体内彗星试验方法的建立与应用研究

目的 建立大鼠肝细胞和外周血淋巴细胞的体内彗星试验方法,并应用该方法对遗传毒性阳性物甲磺酸乙酯（EMS）和环磷酰胺（CPA）进行检测。方法 选择SD雄性大鼠为实验动物,分别给予不同剂量EMS和CPA。给药结束后,采集外周血样本和摘取动物左侧肝叶组织样本,铺制成单细胞凝胶玻片。玻片经裂解、解旋、电泳、中和、脱水等步骤后,得到可观察的实验标本。染色标本,并在40×荧光显微镜下观察拍照,使用专业分析软件对单细胞电泳图像进行分析和测定。结果 成功建立了基于大鼠肝细胞和外周血淋巴细胞的体内彗星试验方法。经该方法检测,EMS结果为阳性,CPA结果为阴性,EMS适合作为本方法的阳性对照。结论 成功建立大鼠体内彗星试验方法,并可应用于遗传毒性检测。     

Effect of Radix lsatidis on the Expression of Moesin mRNA Induced by LPS in the Tissues of Mice

To investigate the effect of the anti-endotoxic part of Radix Isatidis on the expression of moesin mRNA in murine tissues induced by lipopolysaccharide （LPS）, the sample solution of F0z2 part from Radix Isatidis was intrapefitoneally administered to experimental mice, and the lipopolysaccharide （LPS） were injected into the tail vein, and then the tissues of liver, kidney and spleen were colleted and cut into slices. The mRNA was detected by moesin mRNA hybridization in situ. The staining results were observed under microscope. It was found that moesin mRNA expression was increased in the tissues of liver, kidndy and spleen in mice treated with LPS, while in the mice pre-treated with F022 part from Radix Isatidis, the LPS-induced moesin mRNA expressions in these tissues were inhibited in a dose-dependant manner. Our study showed that F022 part from Radix Isatidis can inhibit the LPS-induced expression of moesin mRNA in the tissues of liver, kidney and spleen in mice.     

PLLA/PMMA共混制备多孔膜

以聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）和左旋聚乳酸（PLLA）为原料,制备了二者的共混膜。利用差示扫描量热仪（DSC）研究了PLLA/PMMA共混膜的相容性,发现该体系为部分互容。在此基础上,利用碱液降解共混膜中的PLLA,从而制备多孔膜。结果发现,聚合物组成的改变对多孔膜的细节结构有明显影响。当PLLA与PMMA质量比为25/75时,主体膜主要由颗粒和纤维结构构成;当PLLA与PMMA质量比为50/50及75/25时,主体膜明显由颗粒状结构形成,其尺寸为60~100 nm。由此可见,利用PLLA/PMMA的共混膜及碱液降解法可方便地制备多孔聚合物膜。     

猪苓多糖通过Toll样受体4对小鼠骨髓来源树突状细胞作用研究

目的 研究猪苓多糖（Polyporus umbellatus polysaccharides,PPS）活化小鼠骨髓来源树突状细胞（bone marrow dendritic cells,BMDC）功能调节的作用机制,进一步阐明PPS的免疫学活性机制。方法 以³H-TdR掺入法、ELISA及流式细胞术检测BMDC表型和功能的各项指标。结果 PPS刺激小鼠BMDC表达CD11c、CD86及白细胞介素-12、-10（IL-12、IL-10）产生,并且具有剂量依赖效应。另外,较阴性对照组,经PPS诱导成熟的BMDC其活化初始T细胞的能力显著提高而吞噬能力显著下降。抗小鼠Toll样受体4（TLR4）单抗可抑制PPS刺激BMDC产生IL-12 p40及阻断荧光标记猪苓多糖（fluorescence-labeled PPS,f-PPS）与BMDC的结合,而抗TLR2及补体受体3（CR3）单抗却无此效应。结论 PPS可经TLR4活化小鼠BMDC发挥免疫调节活性。     

银杏叶总黄酮自微乳化口腔速溶膜的制备及其性质研究

目的 研制银杏叶总黄酮的自微乳化口腔速溶膜,并考察其体外性质。方法 采用溶解度法和伪三元相图法筛选确定银杏叶总黄酮自微乳化给药系统处方;在此基础上,以成膜性和体外崩解时间为指标筛选固体载体,制备能在口腔中迅速自微乳化的固体膜剂。考察其自微乳化性能、崩解时间、体外释放度等体外性质,采用差示扫描量热法和扫描电子显微镜表征药物晶型和膜的表面形态。结果 光子相关光谱法测得本制剂微乳液的平均粒径为（48.1±5.45）nm,与银杏叶总黄酮自微乳化给药系统的微乳粒径无差异;崩解时间为（9.94±0.26）s;体外释放度在5 min时即可达到（70.98±0.31）%,显著快于市售片。结论 银杏叶总黄酮自微乳化口腔速溶膜结合了自微乳化给药系统和口腔速溶膜的双重优点,是具有应用前景的新剂型。     

苍耳子不良反应研究进展

苍耳子是传统的鼻科要药,具有散风除湿、通鼻窍的功效,被认为无毒或有小毒。然而近年来不断有正常剂量或是过量服用苍耳子出现肾脏、肝脏、心脏损伤或是腹痛、恶心、呕吐等不良反应报道,其中肾脏和肝脏损伤引起了大量的关注和研究。从临床报道和动物实验两方面对服用苍耳子出现的以肾脏损伤为主的不良反应进行综述,总结了引起多器官损伤的毒性物质、毒性机制、量毒关系、炮制方法对毒性的影响等,为进一步研究苍耳子安全用药提供依据。     

Observations on therapeutic effects of Huangdan Decoction andTripterygium Wilfordii compound tablet on membranous glomerulonephritis in rats

Summary The model of membranous glomerulonephritis (MGN) in rats was successfully established using self-made cationic bovine serum albumin (C-BSA) and treated with Huangdan Decoction (HDD) andTripterygium Wilfordii Co. tablet (TW). Results indicated that the levels of urinary protein, blood urea nitrogen (BUN) and serum creatinine (Scr) in treated groups (groups A, B and C) were significantly decreased as compared with the control group (group D) (P<0. 01). By light and electron microscope and immunofluorescent technique, the damage to kidney in groups A, B and C was found much milder than that in group D with lesion in group A being slightest. These findings suggest that HDD and TW may alleviate the pathological lesions of MGN, prevent or retard its progression, and have remarkable therapeutic effects on MGN.