人心房利钠肽对机械通气肺损伤大鼠肺组织NF-κB p65的表达及影响

目的 探讨人心房利钠肽（hANP）对大鼠机械通气性肺损伤（VILI）时炎症因子和NF-κB p65表达的影响.方法 采用高气道压机械通气模式制备机械通气性肺损伤模型.雄性SD大鼠30只随机分为空白对照组、机械通气肺损伤组（HV组）和人心房利钠肽组（HV＋ hANP组）.HV＋hANP组于机械通气30 min静脉注射hANP（0.1g/kg· min）,机械通气4小时时处死大鼠,免疫蛋白印迹法测定肺组织NF-κB p65的表达,酶联免疫吸附法测定肺组织TNF-a和IL-1β含量,计算肺组织湿/干重比（W/D）.结果 与TV组相比,HV组、HV＋ hANP组肺组织NF-κB p65表达明显增加,肺组织TNF-a和IL-1β含量明显上升（P＜0.05）,肺组织W/D明显升高（P＜0.05）;与HV组相比,HV＋ hANP组肺组织NF-κB p65表达明显抑制,肺组织TNF-a和IL-1β含量明显降低（P＜0.05）,肺组织W/D降低（P＜0.05）.结论 人心房利钠肽通过抑制肺组织NF-κB p65表达,减轻肺部炎症反应,从而减轻大鼠机械通气所致肺损伤.     

依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围组织 NF-κB p65 蛋白表达的影响

目的 探讨依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围组织NF—κB p65蛋白表达的影响。方法 108只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、脑出血组和依达拉奉治疗组,其中脑出血组和依达拉奉治疗组又分为3h、6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d8个亚组,每组6只。采用大鼠尾动脉自体不凝血50μL注入尾状核区建立脑出血模型。依达拉奉治疗组于模型制作成功后2h开始腹腔内注射3mg／kg依达拉奉。1次,d。免疫组化法检测NF—κB p65蛋白表达变化。结果 与脑出血组相比,依达拉奉治疗组于出血后6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d血肿周围组织NF—κB p65蛋白表达均减少（P〈0．05或P〈0．01）。结论 依达拉奉对脑出血后血肿周围脑组织损伤有保护作用．可能与其抑制NF—κB p65蛋白表达有关。     

NF-κB p50和p65蛋白保守结构域原核表达系统的建立

目的 为了获得具有DNA结合活性的人NF—κB p50和p65蛋白,建立人NF-κB p50和p65蛋白保守结构域的原核表达系统。方法 通过PCR法扩增获得人NF-κB p50和p65蛋白保守结构域的cDNA,后分别将其克隆到原核表达载体pET-22b( )上,转化E．coli BL-21,经诱导表达及包涵体的变性和复性处理,获得可溶性p50和p65,同时用Western—Blot鉴定NF-κB p50和p65蛋白的表达,EMSA实验检测NF-κB p50和p65蛋白的DNA结合活性。结果 构建了pET-22b／p50和pET-22b／p65原核表达质粒;p50、p65蛋白在大肠杆菌中的表达均为包涵体;变性、复性后得到了可溶性p50和p65蛋白,浓度达218μg／ml和158μg／ml;并证实可溶性p50和p65蛋白均具有DNA结合活性。结论 成功建立了pET-22b／p50和pET-22b／p65原核表达系统,获得了具有DNA结合活性的NF-κB p50和p65蛋白。     

p65结合肽与p65的亲和力检测及其对NF-κB DNA结合活性抑制作用的鉴定

目的检测NF-κB p65亚基结合肽与p65间相互作用的亲和常数,以及其对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.方法借助于生物传感器技术分析NF-κBp65亚基结合肽与p65相互作用的动力学,同时应用竞争性ELISA鉴定结合多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.结果生物传感器技术分析结果表明5条p65结合肽均能与p65发生相互作用,相互作用的亲和常数分别为GST-BPT1:2.67×10-7mol/L、GST-BPT2:9.02×10-6mol/L、GST-BPT3:1.07×10-6mol/L、GST-BPT4:8.03×10-6mol/L、GST-BPT5:9.83×10-7mol/L.竞争性ELISA检测结果表明5条p65结合肽均能在一定程度上抑制NF-κB与其顺式作用元件κB基序的结合,且这种抑制效应随多肽浓度的增加而增强.结论酵母双杂交筛选获得的5条p65结合多肽与p65间确实存在相互作用,且5条结合肽对NF-κBDNA结合活性均有一定的抑制效应,由此提示以这些多肽为先导物设计和开发靶向NF-κB的抗炎多肽药物将成为可能.     

银杏苦内酯B对急性肺损伤小鼠肺组织NF-κB表达的影响

目的 研究银杏苦内酯B(BN52021)对脂多糖(LPS)诱发的急性肺损伤小鼠肺组织中核转录因子κB(NF-κB)蛋白质表达的影响.方法 健康昆明小鼠50只,随机分为2组:LPS组和BN52021预处理组.每组又根据不同的观察时间点(0、1、3、9 h和12 h)随机分为5个业组,每组5只小鼠.通过检测肺湿质量/干质量值(W/D)初步判断肺功能,普通光镜观察HE染色肺组织的病理变化,Western blot检测NF-κB p65在蛋白水平上的表达差异,ELISA法测定肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-10(IL-10)浓度.结果 LPS注射后,LPS组W/D显著升高,提示存在肺水肿;BN52021预处理组在不同时间点的W/D均低于LPS组(P<0.05,P<0.01).LPS注射后1 h即有明显炎症反应的病理变化:两组光镜下均显示肺泡出血及中性粒细胞浸润,但BN52021预处理组明显轻于LPS组.LPS组NF-κB p65呈双峰表达,峰值分别为LPS注射后1 h和9 h;BN52021预处理组NF-κB p65呈单峰表达,峰值出现于9 h,除9 h外,各时间点BN52021预处理组NF-κB 065的表达均低于LPS组(P<0.05).与LPS组相比,BN52021预处理组可以明显降低TNF-α的表达(P<0.05),但2组IL-10峰值无统计学意义.结论 BN52021通过抑制NF-κB的早期活化抑制炎症反应,减轻肺组织损伤.     

肺表面活性物质对哮喘大鼠心房利钠肽的影响

哮喘是一种严重影响人体健康的气道慢性炎症性疾病 ,已证实外源性肺表面活性物质 (Pulmonary Surfactant,PS)可防治哮喘 ,然而其机制如何 ,目前尚不清楚。心房利钠肽(Atrial natriuretic peptide,AN P)不仅具有舒张气道平滑肌作用 ,且与 PS密切相关。本研究拟通过观察 PS对哮喘大鼠ANP的影响 ,从一个侧面探讨 PS防治哮喘的机制。1　材料和方法1.1　动物及分组　将 18只体质量 10 0～ 12 0 g的雄性大鼠(上海计划生育研究所提供 )随机分成正常对照组 (A组 )、哮喘组 (B组 )和 PS组 (C组 ) ,每组 6只。1.2　模型建立　 B、C组每只予…     

急性肺损伤大鼠肺组织NF-κB表达的研究

目的 在脂多糖（LPS）复制的急性肺损伤（ALI）大鼠模型，观察NF—κB改变。探讨NF-κB在ALI发病中的作用。方法 在LPS复制的大鼠ALI模型，观察动脉血气、肺湿／干（W／D）比值、肺组织病理。用RT-PCR法检测肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达，用ELISA法检测TNF-α蛋白变化。并使用Western blot方法观察肺组织NF-κB的改变。结果 在ALI大鼠，动脉血氧分压显著降低（P〈0．05），肺W／D比值均显著高于对照组（P〈0．01），MPO活性均显著高于对照组（P〈0．01），病理显示肺组织受损；肺组织TNF-α mRNA即显著升高（P均〈0．01），与此同时肺组织匀浆和血浆中TNF-α亦显著升高。2h达高峰。致伤后肺组织胞浆中P65蛋白的表达强度均较对照组显著降低（P〈0．01），而胞核中P65蛋白表达强度均较对照组显著升高（P〈0．01）。结论 LPS引起肺组织和血中TNF-α大量释放。肺组织NF-κB由细胞浆向细胞核转移而活化，提示NF-κB参与炎症的调控，在ALI中起重要作用。     

NF-κB在机械通气和内毒素肺损伤中的作用机制

目的探讨幼兔机械通气、内毒素及机械通气复合内毒素肺损伤时,肺组织核因子-κB(NF-κB)活化及其对TNF-α和IL-8表达的影响.方法60只普通级幼兔随机等分为对照组(NMV)、大潮气量组(LVMV)、内毒素组(ENMV)和复合损伤组(EMV)(n=15),检测各时相肺组织NF-κB活性、IκBα含量、TNF-α和IL-8的基因表达和蛋白含量变化,并观察肺组织病理改变.结果NF-κB活性在NMV较底,ENMV致伤后2 h NF-κB活性达最高,而LVMV通气4 h NF-κB活性达高峰;EMV伤后各时相点NF-κB活性强度显著高于其它两组(P＜0.01).IκBα含量在NMV较高,ENMV致伤后4 hIκBα含量降至最低;出现显著下降的时间早于LVMV;EMV在通气后2、4、6 h的IκBα含量降低程度显著大于其它两组(P＜0.01).TNF-α、IL-8 mRNA和蛋白含量在NMV较低,在ENMV和EMV肺组织伤后TNF-α、IL-8 mRNA和蛋白含量峰值早于LVMV,EMV伤后2、4、6 h TNF-αmRNA表达和蛋白含量显著高于其它两组(P＜0.05,P＜0.01).结论机械通气和内毒素可能通过不同的途径使NF-κB活化,启动致炎细胞因子的转录,导致肺损伤.机械通气和内毒素先后作用于机体对NF-κB的活化可能有相互反应后效应的加强,加重肺损伤.     

NF-κB在机械通气和内毒素肺损伤中的作用机制

目的探讨幼兔机械通气、内毒素及机械通气复合内毒素肺损伤时,肺组织核因子-κB(NF-κB)活化及其对TNF-α和IL-8表达的影响.方法60只普通级幼兔随机等分为对照组(NMV)、大潮气量组(LVMV)、内毒素组(ENMV)和复合损伤组(EMV)(n=15),检测各时相肺组织NF-κB活性、IκBα含量、TNF-α和IL-8的基因表达和蛋白含量变化,并观察肺组织病理改变.结果NF-κB活性在NMV较底,ENMV致伤后2 h NF-κB活性达最高,而LVMV通气4 h NF-κB活性达高峰;EMV伤后各时相点NF-κB活性强度显著高于其它两组(P＜0.01).IκBα含量在NMV较高,ENMV致伤后4 hIκBα含量降至最低;出现显著下降的时间早于LVMV;EMV在通气后2、4、6 h的IκBα含量降低程度显著大于其它两组(P＜0.01).TNF-α、IL-8 mRNA和蛋白含量在NMV较低,在ENMV和EMV肺组织伤后TNF-α、IL-8 mRNA和蛋白含量峰值早于LVMV,EMV伤后2、4、6 h TNF-αmRNA表达和蛋白含量显著高于其它两组(P＜0.05,P＜0.01).结论机械通气和内毒素可能通过不同的途径使NF-κB活化,启动致炎细胞因子的转录,导致肺损伤.机械通气和内毒素先后作用于机体对NF-κB的活化可能有相互反应后效应的加强,加重肺损伤.     

川芎嗪对高糖致大鼠腹膜间皮细胞MCP-1与NF-κB p65表达的影响

目的 观察川芎嗪对高糖致大鼠腹膜间皮细胞MCP-1与NF-κB p65表达的影响,探讨其在持续性不卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)时腹膜慢性炎症发病机制中的可能作用.方法 60只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分成3组:对照组(n=20):腹腔每天注射生理盐水25 mL;模型组(n=20,HGC组):腹腔每天注射4.25％葡萄糖腹透液25 mL+每周1次腹腔注射红霉素6.25万单位;治疗组(n=20,HGM组):腹腔每天注射4.25％葡萄糖腹透液25 mL+ 2％川芎嗪溶液(40 mg/L)+每周1次腹腔注射红霉素6.25万单位.8周后分别处死各组大鼠,取腹膜组织以SABC免疫组织化学法检测壁腹膜间皮细胞MCP-1、NF-κB p65的表达,并行腹膜组织HE及Masson染色病理学检查.结果 与对照组比较,HGC组和HGM组腹膜间皮细胞MCP-1[(109.69±5.33),(122.46 ±5.00)与NF-κB p65(104.83±2.31),(116.44±5.55)表达上调(P＜0.05)],且HGC组显著高于HGM组(P＜0.05).大鼠腹膜间皮细胞MCP-1与NF-κB p65表达水平成正相关(r=0.81,P＜0.05).HE染色后光镜下HGC组和HGM组可见腹膜间皮细胞由扁平变为圆形、柱形,间皮细胞肥大脱落,间皮下结缔组织明显增厚,可见血管生成以及纤维素样物质沉积,还可见成纤维细胞及单核巨噬细胞浸润,HGC组表现尤为明显.结论 川芎嗪可能拮抗高糖引起的腹膜间皮细胞MCP-1与NF-κBp65表达,从而减轻腹膜慢性炎症,延缓腹膜纤维化的发生.     

核转录因子NF-κB/p65在重症胰腺炎中的作用及其机制

目的通过对NF-κB/p65在重症胰腺炎中的表达进行研究,初步探讨它们在重症胰腺炎中的作用。方法无菌提取重症胰腺炎患者及健康对照组外周血单核细胞,利用Western blot检测p65的磷酸化表达,应用酶联免疫方法检测IL-1的浓度。通过十二指肠乳头逆行注射牛磺胆酸钠构建重症胰腺炎大鼠模型,应用JSH-23进行NF-κB/p65阻断,检测大鼠血清及尿液中淀粉酶及IL-1的浓度,同时对大鼠的存活率进行检测。结果重症胰腺炎患者外周单核细胞p65及磷酸化p65的表达水平明显高于健康对照组(P<0.05),重症胰腺炎患者IL-1的浓度水平达到(127.46±23.45)pg/ml,显著高于健康对照的(25.65±8.25)pg/ml(P<0.05)。造模大鼠NF-κB/p65阻断后,血清及尿液淀粉酶较空白及阴性对照组没有明显变化,但IL-1浓度明显低于空白及阴性对照组(P<0.05),且大鼠的存活率也明显增加(P<0.05)。结论 NF-κB/p65在重症胰腺炎表达明显增强,并且可以调控炎性因子IL-1的表达,从而在疾病的发生及发展过程中发挥重要作用。     

米非司酮对人宫颈癌HeLa细胞生长及其NF-κB p65表达的影响

目的探讨米非司酮（mifepristone,MIF）对人子宫颈癌HeLa细胞增殖及其NF-κB p65蛋白表达水平的影响。方法体外培养人子宫颈癌HeLa细胞,采用MTT法观察不同浓度MIF（5、10、20μmol/L）对HeLa细胞增殖的抑制作用;采用Western blot法检测MIF对HeLa细胞中NF-κB p65蛋白表达水平的影响。结果3个浓度的MIF均能显著抑制HeLa细胞的增殖,呈剂量依赖性;MIF可以使HeLa细胞中NF-κB p65蛋白表达水平下降。结论MIF对宫颈癌HeLa细胞体外生长具有明显的抑制作用,并且下调HeLa细胞NF-κB p65蛋白的表达。     

IKKβ缺失和NF-κB p65缺失对小鼠成骨细胞分化的影响

目的:探讨IKKβ和NF-κB p65缺失对小鼠成骨细胞分化的影响。方法:使用CRISPR/Cas9基因编辑工具分别敲除小鼠前成骨细胞MC3T3-E1中的Ikbkb或Rela基因,获得不表达IKKβ或NF-κB p65蛋白的Ikbkb^-/- MC3T3-E1和Rela^-/- MC3T3-E1细胞。用10 mmol/Lβ-甘油磷酸+50 mg/L抗坏血酸诱导MC3T3-E1、Ikbkb^-/- MC3T3-E1、Rela^-/- MC3T3-E1细胞成骨分化。诱导培养4 d后,qPCR法检测细胞中成骨分化标志性基因Sp7、Alpl、Spp1、Bglap mRNA的表达,Western blot法检测细胞中成骨分化相关蛋白ALPL、FZD9的表达;16 d后,茜素红染色法检测细胞外基质矿化水平。结果:诱导培养后Ikbkb^-/- MC3T3-E1细胞中Sp7、Alpl、Bglap mRNA表达以及ALPL、FZD9蛋白表达高于MC3T3-E1细胞和Rela^-/- M...     

硫化氢对糖尿病大鼠心肌纤维化及NF-κB p65和TNF-α表达的影响

目的探讨气体信号分子硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌纤维化以及TNF-α和NF-κB p65表达的影响。方法将30只雄性成年SD大鼠分为3组:对照组(Control组)、糖尿病大鼠组(STZ组)、硫化氢干预糖尿病大鼠组(STZ+H2S组),每组10只。用腹腔注射链脲佐菌素(STZ,40 mg/kg)建立糖尿病模型;Control组每天腹腔注射生理盐水;STZ+H2S组每天腹腔注射硫氢化钠(H2S供体)溶液(100μmol/kg),8周后处死大鼠,HE染色观察心肌组织病理学变化;Western blot检测Ⅳ型胶原蛋白和NF-κB p65和TNF-α的表达。结果与STZ组相比,H2S干预后的心肌细胞间质纤维化明显改善,而与Control组相比,STZ组的Ⅳ型胶原及TNF-α和NF-κB p65蛋白的表达明显增加(P<0.05);与STZ组相比,STZ+H2S组Ⅳ型胶原及TNF-α和NF-κB p65蛋白的表达则明显减少(P<0.05)。结论 H2S改善糖尿病大鼠心肌纤维化,抑制NF-κB/TNF-α的信号通路是其可能机制之一。     

Wnt2B通过NF-κB/p65调节乳腺癌细胞的凋亡

目的研究Wnt2B对乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡的影响,探讨其在乳腺癌发生发展过程中的重要作用。方法应用免疫组化技术检测40例乳腺癌组织标本中Wnt2B的表达;应用Western blot检测乳腺癌配对细胞系MDA-MB-231和MCF-7中Wnt2B蛋白水平;通过瞬时转染Wnt2B特异的siRNA沉默高表达Wnt2B的MDA-MB-231细胞系后,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡水平;应用Western blot、共聚焦显微镜和凝胶电泳迁移实验(EM-SA)检测下调Wnt2B表达后对NF-κB/p65的表达和活性的影响。结果相对于Wnt2B阴性表达的正常乳腺组织,35例乳腺癌组织的表达呈强阳性并且存在核浆转移现象;在高转移细胞系MDA-MB-231中Wnt2B表达明显高于低转移细胞系MCF-7;针对Wnt2B的siRNA沉默成功下调MDA-MB-231中Wnt2B表达后,细胞凋亡率明显增加并伴随NF-κB/p65的表达下降和活性降低;应用NF-κB/p65特异性的抑制剂PDTC阻断此通路后,Wnt2BsiRNA诱导细胞的凋亡效应被阻断。结论 Wnt2BsiRNA通过NF-κB/p65通路抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231的凋亡而产生抗瘤作用,Wnt2B可能成为乳腺癌有效治疗靶点之一。     

母乳对Caco-2细胞缺氧复氧损伤模型NF-κB p65表达的影响

目的：通过研究母乳对Caco－2细胞缺氧复氧损伤模型NF－κB p65表达的影响,以期探讨母乳对坏死性小肠结肠炎（ necrotizing enterocolitis, NEC）的作用机制。方法实验分为对照组和缺氧复氧损伤模型组,两组各有常规培养液组（MEM）、未加热乳清组（5％BM）和加热乳清组（5％BMb）。造模后向两组分别加入常规培养液、未加热乳清、加热乳清,继续培养6h后分别用RT－PCR检测法和免疫荧光法检测各组细胞中NF－κB p65表达情况。结果 RT－PCR检测结果显示对照组和模型组中,5％乳清和5％加热乳清均能抑制NF－κB p65 mRNA的表达（ P＜0．01）,模型组中5％乳清抑制NF－κB p65 mRNA表达的作用较5％加热乳清更明显（ P＜0．05）;免疫荧光结果显示,缺氧复氧损伤后Caco－2细胞质内的NF－κB p65被激活进入细胞核表达,5％乳清可以抑制NF－κB p65入核表达,并且较加热乳清作用更明显。结论新鲜母乳可通过抑制NF－κB p65的表达防治小肠上皮细胞缺血再灌注损伤,其可能是母乳防治新生儿坏死性小肠结肠炎机制之一。     

长托宁对急性肺损伤家兔肺组织NF-κB活性的影响

目的 探讨长托宁(PHCD)在LPS所致的急性肺损伤家兔中的作用及保护机制. 方法 20只新西兰兔随机分为4组:空白组、模型组、PHCD低剂量组、PHCD高剂量组.其中PHCD低、高剂量组于LPS注入前30 min分别腹腔内注射PHCD 0.2 mg/kg和2 mg/kg,采用HE染色观察各组肺组织形态学的差异、免疫组化和Western blot检测NF- κB激活情况. 结果 HE染色显示模型组肺泡隔明显增厚,有大量炎性细胞浸润,可见较多中性粒细胞,偶见支气管黏膜脱落.PHCD处理后,炎症反应有所减轻,并与给药剂量的增加而降低.免疫组化显示,空白组家兔支气管黏膜上皮和肺间质中仅见少量散在的NF-κB阳性细胞,模型组支气管黏膜、肺间质、肺泡腔及血管内皮细胞中NF-KB阳性细胞明显增多.长托宁处理后NF-κB阳性细胞较模型组有所减少,以高剂量组减少最明显.Western blot显示模型组肺组织细胞核内NF-κB的p65水平显著高于阴性对照组,PHCD处理后p65水平明显下降. 结论 PHCD能有效减轻ALI家兔肺组织中的炎症反应,其机制可能与下调NF-κB活性有关.     

乳腺癌组织血清NF-κB p65表达分析及临床意义

目的检测乳腺癌患者血清和组织NF-κB p65的表达,探讨NF-κB p65血清与组织表达是否一致;血清表达与乳腺癌发生发展的关系。方法采用RT-PCR和Western blotting检测41例乳腺癌及癌旁组织NF-κB p65的表达。ELISA法检测80例乳腺癌、60例正常和良性肿块患者血清NF-κB p65水平。分析血清与组织NF-κB p65表达关系及血清表达与临床病理结果的关系。结果 41例乳腺癌患者组织RT-PCR和Western blotting结果表明NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平均高于癌旁和良性组(P<0.05),高表达率为(87.9%,82.9%);血清NF-κB p65的阳性率为85.4%,血清和组织表达一致性检验发现两者具有统计学意义(Kappa=0.458),表达一致率为73.2%。80例乳腺癌患者血清NF-κB p65表达与病理结果相关性分析表明血清NF-κB p65表达与乳腺癌患者的淋巴结是否转移及Her-2高表达明显相关(P<0.05)。结论血清NF-κB p65浓度可反映乳腺癌患者组织NF-κB p65表达水平,同时可反应乳腺癌患者转移和Her表达情况,为临床诊断乳腺癌提供了新的思路。