应用依赖解旋酶DNA恒温扩增技术检测副溶血性弧菌

以副溶血性弧菌的tlh基因为目的片段设计特异性引物,成功建立了恒温条件下快速检测副溶血性弧菌的依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA)的检测法,进行了特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行了比较。该HDA检测方法最低检测限为19.9ng·mL-1,与普通PCR方法相当。副溶血性弧菌的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,用普通水浴槽即可进行反应。     

PCR-核酸薄膜层析法检测创伤弧菌

采用自行建立和优化的PCR-核酸薄膜层析检测体系,对创伤弧菌(Vibriovulnificus)进行检测。采用创伤弧菌的vvhA基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测创伤弧菌的PCR-核酸薄膜层析检测法,并进行了特异性和灵敏度试验。结果表明,所建立起的检测法灵敏度为3.6×102 cfu·mL-1,比PCR-琼脂糖凝胶电泳检测方法高一个数量级。创伤弧菌的PCR-核酸薄膜层析检测方法具有较高灵敏度和良好特异性,操作简单,检测速度快,同时又保护了操作人员的身体健康,具有广阔的推广前景。     

迟缓爱德华氏菌等温扩增快速检测方法的建立

迟缓爱德华氏菌是一种危害淡水及海水水产动物的致病菌,可感染包括鳗鲡、牙鲆、罗非鱼、鲤鱼等在内的多种水产鱼类,极易给水产养殖业造成严重的经济损失.现有的迟缓爱德华氏菌检测方法须借助实验室条件才能完成,检测过程较为复杂.建立一种简便的、无需依赖实验室条件即可快速检测迟缓爱德华氏菌的方法,对水产养殖业预警和该病菌引发病害的防治具有重要指导意义和实用价值.针对迟缓爱德华氏菌的基因组设计了特异性引物和探针,建立了重组酶聚合酶扩增与侧向流试纸条(RPA-LFS)相结合的检测方法,评价了该方法的特异性和灵敏度,并使用人工模拟样本进行了方法验证.结果显示,RPA-LFS法在37℃孵育20 min即可完成核酸扩增步骤,整体检测时间不超过40 min,与参试的嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌、创伤弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、灿烂弧菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌这8种水产和食品中常见的致病菌不发生交叉反应,对迟缓爱德华氏菌培养物的检测限为单次反应1个菌落形成单位(CFU),在富集培养后,可检出1×101 CFU/g人工污染样本中的迟缓爱德华氏菌.该方法具有良好的特异性和灵敏度,不依赖精密仪器,是一种快速、便捷的迟缓爱德华氏菌检测方法,具有良好的应用前景.     

四环素抗性基因tet(A)荧光RAA检测方法的建立及应用

为了实现快捷、准确检测抗生素抗性基因，提高环境监测与治理能力，建立了一种基于重组酶介导等温核酸扩增技术(recombinase-aided amplification, RAA)的四环素抗性基因tet(A)的快速检测方法.该检测方法以tet(A)基因序列保守区为靶序列，设计其RAA引物，筛选并优化RAA引物探针，建立荧光tet(A)-RAA快速检测方法.结果表明，该tet(A)-RAA法在39℃恒温条件下30 min内即可特异性实现对tet(A)基因片段的有效扩增，与无抗性细菌均无交叉反应.且采用该方法对18个环境样品进行检测，阳性率为100%,与qPCR方法检测结果一致.该四环素抗性基因tet(A)的检测方法灵敏度高、特异性强、反应时间短、操作简便，可用于对抗性基因tet(A)的快速检测，也为开发其他抗生素抗性基因快速检测方法提供了参考.     

PCR法制备地高辛标记探针斑点杂交检测鳗弧菌

以鳗弧菌(Vibrio anguillarum)toxR基因内366~571 bp之间的基因序列为靶序列,采用PCR法制备对鳗弧菌特异性的地高辛标记DNA探针,探针长度为206 bp。选取2株鳗弧菌和8株与鳗弧菌亲缘关系非常接近的常见水产动物致病弧菌,通过斑点杂交法对制备的探针进行特异性检测,结果显示该探针对鳗弧菌杂交阳性,而与弧菌属的其它8株细菌均无交叉反应。这表明该地高辛标记探针具有很强的特异性,它能够很好地对鳗弧菌感染进行检测。     

依赖解旋酶等温核酸扩增方法检测副溶血性弧菌

针对副溶血性弧菌的tlh基因的保守序列设计一对特异性扩增引物,在解旋酶和DNA聚合酶的存在下进行HDA等温扩增(65℃)。结果表明:HDA方法成功检测了副溶血性弧菌,检测限可达到1×10~(~(-1)1)mol·L~(-1)。该方法在没有靶标的情况下,可以实现零背景信号扩增,在加入其它菌的情况下,该方法具有较强的特异性和抗干扰能力。HDA方法无需大型精密仪器,仅用普通水浴锅即可完成检测,适合基层实验室推广使用,具有广阔的应用前景。     

LAMP技术在食品致病菌检测中的研究进展

环介导的恒温扩增(LAMP)是近年来发展起来的一种新的恒温核酸扩增技术,该技术具有特异性强、敏感性高、反应快、设备简单等特点,已被应用于病原菌诊断、食品致病菌检测等领域的研究。本文重点阐述了近年来国内外学者应用LAMP技术在食品致病菌检测中的研究进展。     

一种松材线虫快速检测的新技术

利用新型的等温扩增技术实现了松材线虫的快速检测。研究中通过改进核酸提取方法,只需95℃处理5min就能完成线虫核酸释放。通过在反应开始前加入核酸扩增显色染料,实现了扩增结果的肉眼可视化判定。实验结果表明;整个等温扩增反应过程只需50min,可以检测单条线虫,反应只需恒温进行。因此,该方法为松材线虫的快速检测提供了一种简单、有效的工具。     

变性泡介导的链交换扩增反应对副溶血性弧菌检测的研究

以副溶血性弧菌为研究对象,根据其特异性基因GyrB的保守序列,设计了一对扩增引物,利用SEA反应对该基因进行了特异性扩增。研究结果表明:SEA反应对副溶血性弧菌的检测,检测限可达到0.1fmol、特异性高、抗干扰能力强。     

基于变性泡介导的加速链交换扩增技术在新型冠状病毒核酸检测中的性能分析

运用变性泡介导的加速链交换扩增技术,建立一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测的新方法。收集潍坊市第二人民医院检验科1 492例疑似SARS-CoV-2样本,以荧光定量PCR结果为参考,计算ASEA-SARS-CoV-2核酸检测试剂盒检测新型冠状病毒样本结果的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)。结果表明：ASEA可在30 min内完成核酸扩增,检测限为1 000拷贝·mL^-1。敏感性为96.7%,特异性为99.9%。该方法可在30 min内检测SARS-CoV-2,而之前报道的传统qPCR方法需要数小时。建立了一种基于变性泡介导的加速链交换扩增技术检测新型冠状病毒的新方法。     

条斑紫菜HSP90基因实时荧光定量PCR检测方法的构建

以管家基因18S rRNA为内参,采用SYBR GreenI荧光染料法,构建了条斑紫菜HSP90基因实时荧光定量PCR的检测方法,为条斑紫菜HSP90和18S rRNA基因筛选出定量引物各1对,获得的扩增曲线基线平整、指数区明显、斜率大且固定。两基因的熔解曲线显示单特异峰,Tm分别为88.5和85℃。两基因标准曲线的斜率分别为-3.307和-3.308,扩增效率都约为100.6%,Ct值在13～32范围内有良好的线性关系。构建的实时荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强,准确可靠、重复性好,检测周期短,为进一步研究HSP90基因在胁迫下的表达差异奠定了基础。     

基于裸DNA晶体结构的DNA结构力常数的计算

依据最新NDB数据库中裸DNA晶体结构数据,考虑DNA结构的序列依赖特性,对10个二联体计算了DNA动力学结构模型中的关键参数:力常数矩阵,矩阵中的非对角项反映了结构参数间的关联.     

土壤类芽孢杆菌POR鉴定方法的建立

以gyrB基因为靶标，设计土壤类芽孢杆菌的特异性引物，建立了土壤类芽孢杆菌的特异性PCR鉴定方法。该方法具有较高的特异性，可有效区分胶质类芽孢杆菌及其它各种细菌茵种。该PCR方法也具有较好的灵敏度，可检测只含1到10细胞之间的检测样品。     

用升华法从燕山聚脂厂废渣中提取苯甲酸

叙述了燕山聚脂厂废渣中苯甲酸的提取方法。利用苯甲酸的升华特性,将温度控制在100～110℃,使占废渣总量近40％的苯甲酸得到了回收,回收率大于99％。方法简便易行,准确度高,设备简单经济。并对升华出的苯甲酸的纯度用紫外光谱法进行了分析,方法回收率为99.0％～99.8％,精密度为0.025％,升华出的苯甲酸纯度为98.3％。     

基于反滴定的润滑油酸值测定方法

酸值是衡量润滑油腐蚀性和使用性能的重要质量指标。酸值测定通常采用国家标准方法进行。对颜色浅的润滑油,标准方法可取得令人满意的结果,但对使用过的润滑油或颜色较深的润滑油,由于滴定终点不易判断,往往具有比较大的测定误差。文章基于反滴定理论,建立了一种新的酸值测定方法,以克服当前方法中存在的滴定终点不易判断的不足。测定时,含破乳剂的碱性水溶液充分与待测润滑油作用,以中和润滑油中酸性物质,分层后未反应的碱性物质进入水相。用标准酸溶液中和水相中的碱性物质,即可获得润滑油的酸值。由于滴定是在水溶液中进行的,终点易判定,特别适用于使用过的润滑油的酸值的测定。研究结果表明所建方法与国家标准方法的测定结果有很好的一致性,线性相关系数为0 .9982 ,平行测定标准偏差小于3.9% ,能满足快速测定要求。     

生物信息学中的MicroRNA预测研究

为microRNA预测的研究提供参考,讨论了生物信息学中有关MicroRNA预测研究的若干问题。根据最新的研究成果,由MicroRNA预测的特征信息和数据源,从结构序列分析方法、比较基因组方法和机器学习方法等方面对MicroRNA预测的生物信息学方法做了回顾和展望,指出了该领域研究的趋势。通过对3类方法的比较结果表明,采用机器学习方法的效果更优越,能较精确地预测出MicroRNA。     

自锚式悬索桥断索动力冲击效应模型试验研究

为探讨自锚式悬索桥在吊索瞬时破断作用下的动力冲击效应,以某在役自锚式悬索桥为背景,基于刚度相似理论建立1：80的缩尺试验模型,进行不同区段内吊索的断索动力冲击效应模型试验。试验结果表明：不同区段吊索破断引起的冲击效应不同;断索会引起与破断吊索同侧同跨的相邻吊索区域内的动态内力重分布且动力冲击效应明显;与瞬断吊索紧邻的两根吊索中,较长吊索的动力冲击系数（DIF）和动力放大系数（DAF）均较大,其动力冲击效应和冲击作用敏感性更高;瞬断工况下的吊索拉力动态响应峰值较断索前普遍达到2倍以上,吊索的安全储备明显较低。相邻吊索在断索作用下的动力冲击效应显著,若相邻吊索存在腐蚀等缺陷,极易导致桥梁连续性断索,严重影响桥梁安全。     

多重PCR法检测食品中大肠杆菌O157

以大肠杆菌O157的stx1、stx2、wzy基因为靶基因,建立了一种新的多重PCR检测方法。PCR扩增结果与各参考菌株基因型一致。PCR结果表明,wzy基因特异性强,可作为检测O157菌株的标志基因,且为开发大肠杆菌O157的分子检测技术提供新的研究思路。