海洋假单胞菌GY-1菌株的抗菌作用及其胞外抗菌蛋白的分离纯化

采用对峙培养法和牛津杯法测定海洋假单胞杆菌(Pseudomonas) GY-1菌株和发酵液的抑菌作用。结果表明：GY-1菌株和发酵液对小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、禾谷镰刀病菌(Fusarium graminearum)、菠菜早疫病菌(Alternaria solania)、斑点落叶病菌(Alternaria alternata)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)和小麦叶枯病菌(Alternaria tenuis Nees)等植物病原真菌有较强的抑制作用。发酵液采用硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow柱层析、Sephadex G-75凝胶层析,以小麦根腐病菌为指示菌进行活性追踪和SDS-PAGE电泳纯度跟踪检测,纯化出一种对小麦根腐病菌具有明显抗菌作用的抗菌蛋白,其分子质量约为70.9kD。     

生姜内生菌抗菌蛋白提取及性质

从生姜中采用常规无菌组织分离法分离纯化内生菌.用碱裂解法分离的提取内生菌中的抗菌蛋白,通过抑菌圈测试法检测其对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌活性,并对其生物稳定性进行研究和分析.结果发现抗菌蛋白对枯草芽孢杆菌抑菌效果最强,其次为金黄色葡萄球菌,对大肠杆菌的抑菌效果相对较弱.抗菌蛋白的最适pH范围是6.0～7.5,对胰蛋白酶有较好的稳定性、且耐热性强.     

一株产胞外多糖的大豆内生菌SE01的分离鉴定及生物学特性

微生物胞外多糖（Exopolysaccharide,EPS）是一种重要的生物资源,近年来内生菌的EPS备受关注。为探索更多产EPS的菌种资源,进一步挖掘大豆内生菌资源,本研究从大豆种子中筛选出EPS产量最高的菌株SE01,并对其进行形态学和分子学鉴定、生物学特性（温度、pH、转速、蔗糖耐受性、NaCl耐受性）以及生理生化研究。实验结果显示,在发酵48 h后,菌株SE01的EPS产量最高为0.63 g/L;菌株SE01菌落为圆形,呈乳白色,边缘光滑,表面有光泽且粘稠;在显微镜下观察革兰氏染色后的菌体呈粉红色的短杆状,为革兰氏阴性菌;生理生化实验和16S rDNA鉴定结果显示,菌株SE01为阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）,并命名为Enterobacter cloacae SE01;Enterobacter cloacae SE01最适生长条件为温度30℃、pH5、转速120 r/min,该菌株对蔗糖耐受高,但对NaCl耐受性较低,增大NaCl浓度能抑制其生长。本研究结果为大豆内生菌源EPS的开发和应用提供数据支持。     

一株产胞外多糖植物内生菌EJS-3菌株的分离和鉴定

从中药植物-百部的组织中分离到一株高产胞外多糖的植物内生菌EJS-3菌株,该菌株在产糖培养基中可以得到23.6g/L的胞外多糖,转化率为47.2%(gEPS/g蔗糖)。通过16SrRNA基因序列分析对该菌株进行了鉴定。通过PCR扩增,得到1450bp的16SrRNA序列。PCR产物序列通过BLAST软件在NCBI网站中进行同源性比较。通过Bioedit7.0和Treedrawing软件绘制系统发育树。结果显示,EJS-3的16SrRNA序列和数据库中的类多粘芽孢杆菌KCTC1663菌株的序列的同源性为99.31%。在细菌系统发育分类学上,EJS-3菌株归属多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)。     

假肠膜明串珠菌胞外多糖的分离纯化及其抗氧化特性研究

从东北自然酸菜发酵液中筛选得到一株高产胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)的乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB),经生理生化试验、形态学观察及分子生物学试验鉴定该菌株为假肠膜明串珠菌(Leuconostoc pseudomesenteroides)。以该菌株为供试菌进行发酵产糖及分离纯化EPS,并采用7种方法测定纯EPS的抗氧化能力。结果表明,Leu. pseudomesenteroides能够产生(38.42±2.15)g/L的EPS,且表现出良好的体外抗氧化活性,清除能力随着浓度的增加而增强,DPPH·、·OH、O~(2-)·、H_2O_2、和NO_2~-清除率及Fe~(2+)螯合能力分别为(65.34±3.54)%、(78.24±3.52)%、(77.48±2.45)%、(82.78±3.76)%、(38.34±3.28)%和(92.37±2.34)%。     

水菖蒲内生菌分离与抗菌活性菌株筛选

对水菖蒲内生真菌进行分离,并进行抗菌活性的筛选。采用改良氯化三苯四氮唑显色(TTC)微量稀释法筛选抗菌活性菌株。以18 种常见导致食品腐败的细菌、酵母菌和霉菌为指示菌研究活性菌株的抗菌能力。结果显示,水菖蒲内存在广泛的具有抗菌活性的内生菌,占内生菌总数的40.7%,高活性菌株占内生菌总数的12.39%。其中S9 菌株发酵液具有抗细菌、酵母菌和丝状真菌的广谱抗菌能力,是潜在的食品防腐抗菌资源。     

乳酸菌胞外多糖分离纯化方法研究进展

本文针对乳酸菌胞外多糖（exopolysaccharide,EPS）的分离纯化方法进行分析与研究,探讨了目前在乳酸菌EPS分离、纯化研究中常用手段的优缺点,旨在寻找较优方法,以达到进行化学结构鉴定与功能试验的纯度要求,为单独研究EPS的分子结构、生理功能与分子作用机制奠定基础。     

产胞外多糖罗汉果内生菌的筛选及其发酵条件优化

该研究利用α-萘酚-硫酸法和苯酚-硫酸法从罗汉果中筛选产胞外多糖的内生菌株,采用形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并采用单因素和正交试验对其产胞外多糖的发酵条件进行优化。结果表明,筛选到一株产胞外多糖的罗汉果内生菌株,编号为LHG-3,并被鉴定为韦德曼尼芽孢杆菌（Bacillus wiedmannii）。菌株LHG-3产胞外多糖的最佳培养基为超级肉汤（TB）培养基,在此基础上,经优化得出最优发酵条件为蔗糖2.5%、尿素1.2%、氯化钙0.4%、pH值7.0、接种量8%,在30 ℃条件下培养42 h后,胞外多糖产量达到（1.59±0.03）mg/mL,是优化前的1.9倍。     

假单胞菌胞外弹性蛋白酶的纯化研究

假单胞菌的发酵液经过硫酸铵盐析、透析、DEA E-Sephadex A25阴离子交换层析、Sephadex G75凝胶过滤层析等纯化步骤,获得了较纯的酶蛋白。SDS-PAGE凝胶电泳:分离胶12%、压缩胶4%,15m A、30m A恒流电泳后,采用考马斯亮蓝染色和银染色,并用H PLC检测,将蛋白质转移到PV DF膜上,N-端测定10个氨基酸序列。结果表明:SDS-PAGE电泳得到单一条带,H PLC检测活性峰为单峰。该酶在SD S-PAG E上测得的分子质量为32000Da,N-端氨基酸测序结果为APPSNLM QLP。     

恒山黄芪内生真菌分离鉴定及抗菌活性的研究

目的:分离和鉴定恒山黄芪的内生真菌,并对其进行活性筛选。方法:采用形态学方法对分离菌株进行鉴定,以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白假丝酵母和青霉为指示菌对分离得到的植物内生真菌进行抗菌活性实验。结果:从恒山黄芪中分离得到内生真菌菌株49株,经分类鉴定,分属于3目、6科、17属。49株内生真菌中有33株菌至少能抑制1种指示菌,占总菌数的67.35%。结论:恒山黄芪内生真菌种类多样,具有很好的研究和应用价值。     

产白藜芦醇葡萄内生菌的分离与鉴定

从酿酒葡萄梅洛特的葡萄皮、葡萄穗轴及梗中分离出30株葡萄内生菌,经过摇瓶液体发酵后检测发酵液提取物,发现有7株内生真菌具有产白藜芦醇的能力。其中菌株MG1发酵产白藜芦醇的能力稳定、产量高,达97μg/L,其他几株菌株白藜芦醇产量较低且不稳定。对菌株MG1的分类鉴定进行重点研究,结合形态学特征及分子生物检测结果,鉴定其为链格孢属菌。     

猪源双歧杆菌的分离纯化及初步鉴定

本研究选用双歧杆菌增殖培养基，从13d龄和30d龄未断奶健康仔猪肠道和粪便中分离纯化出双歧杆菌，进行了各种生理生化鉴定实验，对其进行了初步鉴定。     

一株黄芪内生真菌甾醇类代谢产物的分离和鉴定

目的:研究分离自夏季黄芪根部的内生真菌AR-17-S03的次级代谢产物。方法:采用组织学的方法从恒山黄芪中分离内生真菌,真菌的鉴定采用形态学法结合分子生物学法,采用硅胶柱色谱法、薄层层析制备色谱(pTLC)、Sephadex LH-20凝胶柱色谱法和半制备HPLC色谱法分离内生真菌代谢产物,采用质谱法、核磁共振法结合物化性质鉴定分离得到的9个化合物。结果:经形态学结合分子生物学鉴定该菌株黑曲霉,为9个甾醇类化合物鉴定为麦角甾醇、过氧化麦角甾醇、胆固醇、啤酒甾醇、23-甲基麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,9α-三醇、5α,8α-表二氧麦角甾-6,9(11),22-三烯-3β-醇、5α,8α-表二氧-23-甲基麦角甾-6,22-二烯-3β-醇、麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮、3β,5α-二羟基麦角甾-7,22-二烯-6-酮。结论:其中,23-甲基麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,9α-三醇、5α,8α-表二氧-23-甲基麦角甾-6,22-二烯-3β-醇、麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮是首次从黄芪内生真菌中分离得到。     

猕猴桃广谱拮抗内生菌分离鉴定及其对樱桃圣女果采后的保鲜作用

筛选具有广谱抑菌效果的内生菌并研究其发酵液对樱桃圣女果采后保鲜效果的影响。采用研磨法从健康猕猴桃的根、茎、叶和果实中分离纯化了18株内生菌,通过平板对峙法选出强活性菌株MR-1,并对其进行菌体、菌落形态的观察、生理生化测定及16S rRNA测序分析,进行菌种鉴定。进一步研究该活性菌株对8种常见致病菌的抑制效果以及樱桃圣女果主要病害菌的抑制作用。结果表明,菌株MR-1对采后致病菌拮抗效果较强,初步鉴定其为解淀粉芽孢杆菌,其对8种植物病原菌均有较强的拮抗作用,对链格孢、灰葡萄孢、辣椒炭疽病菌3种圣女果主要病害菌表现出较强的抑制作用,经内生菌MR-1发酵滤液处理的樱桃圣女果保鲜效果最好,其次为复合果蔬保鲜剂。储藏第8 d,与空白对照组相比,其腐烂直径分别下降了50.6%、50.6%及44.9%。解淀粉芽孢杆菌MR-1次级代谢产物丰富,其在果蔬保鲜中有较好的应用前景。     

肉桂醛-大豆分离蛋白可食膜的抑菌及其对冷鲜猪肉的保鲜

本文研究了添加0%,1%,2%,3%,4%,5%和6%肉桂醛含量的大豆分离蛋白膜的水溶性、水蒸气透过系数、抗拉强度和断裂伸长率的变化以及上述膜对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、气假单胞菌和酵母菌的抑菌活性。并研究了添加6%肉桂醛的大豆分离蛋白可食膜在冷藏温度为4℃时对冷鲜猪肉的保鲜效果。结果表明:肉桂醛含量对大豆分离蛋白膜的水溶性、水蒸气透过系数、抗拉强度和断裂伸长率均有一定影响;当大豆分离蛋白膜中肉桂醛含量为3%时能完全抑制大肠杆菌的生长,4%时能完全抑制金黄色葡萄球菌和气假单胞菌的生长,2%时即能抑制酵母菌的生长;且添加肉桂醛含量为6%的大豆分离蛋白可食膜能明显提高冷鲜猪肉的保鲜效果。     

苍耳内生真菌的分离鉴定及抗菌活性研究

从植物苍耳中分离内生真菌,选出8株进行抑菌活性测定,有6株对番茄早疫病菌抑制率大于50%。菌株SC008对5种植物病原菌的抑制率均大于50%。对内生真菌SC008进行形态学观察及ITS序列鉴定,初步判定菌株SC008归属于黑孢霉属(Nigrospora Zim.)。碳氮源实验表明,SC008在以乳糖和蔗糖为碳源及以酵母提取物和牛肉膏为氮源的培养基上生长良好。     

棉籽抗菌活性肽的分离纯化及鉴定

通过体外模拟消化系统对棉籽分离蛋白(cottonseed protein isolate,CPI)进行酶解,得到具有抗菌活性的酶解产物,并采用超滤(ultrafiltration,UF)、阴离子交换色谱(anion exchange chromatography,AEC)、半制备高效液相色谱(semi-preparation high performance liquid chromatography,semi-P-HPLC)分离技术对棉籽抗菌活性肽进行分离纯化,用电喷雾串联质谱(electrospray ionization-tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS)鉴定棉籽抗菌肽的氨基酸序列。在抗菌活性肽分离纯化过程中,用UF对具有抗菌活性的CPI酶解产物进行分离,得到3个组分U-Ⅰ~U-Ⅲ。抗菌活性检测表明U-Ⅲ的抗菌能力最强;用AEC分离U-Ⅲ得到3个组分QF-Ⅰ~QF-Ⅲ,其中QF-Ⅱ抗菌能力最强;进一步采用semi-P-HPLC分离QF-Ⅱ得到4个组分PF-Ⅰ~PF-Ⅳ,其中PF-Ⅲ的抗菌能力最强,经HPLC检测为单一峰,ESI-MS/MS检测分析得到该肽的氨基酸序列为ISGLIYEETR(Ile-Ser-Gly-Leu-Ile-Tyr-Glu-Glu-Thr-Arg)。     

青海酸奶中乳酸菌的分离鉴定及抑菌谱研究

从青海高原自然发酵酸奶中通过定向分离出51株乳酸菌,经形态、生理生化和16S rDNA鉴定,该菌株为乳酸乳球菌乳酸亚种(L.lactis subsp.Lactis).采用改良M17琼脂培养基进行培养,实验选革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、酵母菌和霉菌作为检测指示菌,对其抑菌谱进行研究,结果显示:乳酸菌产抑菌物质具有较广的抑...     

自然制曲的蚕豆曲中优势微生物的分离与初步鉴定

通过各种培养基进行分离培养,对自然制曲蚕豆曲中的细菌总数、芽孢杆菌、酵母菌、霉菌进行计数;对霉菌进行初步鉴定.结果:从自然制曲蚕豆曲中分离出的霉菌,经鉴定为米曲霉和总状毛霉;微生物菌群,以霉菌为主,米曲霉和毛霉数量分别为2.8×107,3.0×106cfu/g;其次为细菌,数量为5.3×104 cfu/g;酵母菌数量为2.6×102 cfu/g;芽孢杆菌:没有检出.     

一株蓝麻黄内生细菌的分离鉴定和抑菌活性研究

为筛选具有拮抗活性的植物内生菌,以新疆有毒植物蓝麻黄(E.glauca)为材料,采用研磨法和琼脂扩散法从中分离并筛选出一株对多种植物致病菌具有较强抗性的内生细菌XJEG-GB-13。对其生物学特性进行初步研究,研究表明,最适生长温度为37℃,最适生长pH 值为6.0。根据其形态特征、生理生化检测、16S rDNA 测序,将其鉴定为枯草芽孢杆菌的一个亚种Bacillus subtilis subsp. subtilis。XJEG-GB-13 的获得可为进一步研究高效拮抗菌的拮抗机制提供实验材料。