供者活化型KIR2DS5在单倍体相合造血干细胞移植预后中的意义

本研究探讨供者杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）和受者人类白细胞抗原（HLA）基因型在单倍体相合造血干细胞移植（HSCT）预后中的意义。26例患者接受单倍体相合HSCT,均未进行体外T细胞去除（TCD）。采用序列特异性引物聚合酶链式反应（PCR-SSP）分型技术对供、受者HLA和供者KIR基因型进行检测。根据供者KIR和受者HLA-Bw4组、-C1组、-C2组等位基因分析结果进行供受者KIR/HLA分组。对KIR/HLA不合与相合组、Bw4不合与相合组、C2不合与相合组、Bw4和C2均不合组与至少其一相合组在造血重建、移植物抗宿主病（GVHD）、无病生存（DFS）、移植后感染及移植相关死亡（TRM）等方面的差异进行比较;并就供者活化型KIR对单倍体相合HSCT预后的影响进行评价。结果表明：各组在造血重建、急性或慢性GVHD发生率、DFS、移植后感染及TRM等方面均无显著性差异（p均〉0.05）,但C2不合组发生严重GVHD4例。供者活化型KIR2DS5阳性组2年DFS明显优于阴性组,分别为（85.7±13.2）%、（31.2±12.8）%,p〈0.05〕。结论：供者KIR及受者HLA基因型对单倍体相合HSCT预后有影响,供者携带活化型KIR2DS5可能有助于提高患者的DFS。     

非血缘关系HLA全相合造血干细胞移植中供者-受者NK细胞KIR的研究

目的研究自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）的生物学功能及供者抑制性KIR和受者HLA遗传背景在无关供者全相合造血干细胞移植（HSCT）中的作用。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应（SSP—PCR）和序列特异性寡核苷酸探针聚合酶链反应（SSOP—PCR）的方法，对中国造血干细胞捐献者资料库中提供的51对HLA全相合供、受者进行KIR及HLA分型，患者中急性淋巴细胞白血病ALL18例，慢性粒细胞白血病（CML）15例，急性髓系白血病（AML）10例及其他患者8例。结果51对供者一受者均存在2DL1、2DL2／L3、2DIA、3DL2和3DL3，基因频率均为1，96．7％的个体表达KIR3DL1。供-受者中21．57％KIR完全相同；78．43％KIR不完全相同，而KIR不相同又分为受者KIR基因型包含供者KIR为25．49％，供者KIR基因型包含受者KIR为27．45％。74.62％的供者KIR2DL1无受者C2配体，5．91％的供者KIR2DL2／L3无受者C1配体，19．74％的供者KIR3DLl无受者Bw4配体，54．91％的供者KIR3DL2无受者A3、A11配体。结论KIR独特型和HLA-Ⅰ类抗原是独立遗传的。供者KIR2DL1和KIR3DL2是主要引起NK细胞异源活性的受体，供、受者的KIR／HLA不匹配可能在全相合的无关供者异基因HSCT中起着十分重要的作用。KIR受体-配体模型可以更好地提示HSCT的预后。     

活化性及抑制性免疫球蛋白样受体对非去T细胞异基因造血干细胞移植预后的影响

本研究探讨异源反应性NK细胞免疫球蛋白样受体（KIR）与HLA配体的关系对非去T细胞异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）预后的影响。应用序列特异性引物分型技术检测供受者的K／R及HM基因型,并对我院67例接受非去T细胞allo—HSCT的病例资料进行回顾性分析。根据供者KIR及受者H厶4关系及供者是否表达活化性KIR进行分组,通过单因素及多因素分析确定抑制性及活化性KIR基因对移植预后的影响。结果表明,抑制性KIR／配体相合组无事件生存率（EFS）略高于不合组,其中KIR2DL1／C2相合组3年EFS显著高于C=2不相合组（69．2％vs44．8％,P=0．043）,而抑制性K／R／配体相合组的复发率、急性GVHD发生率及移植相关死亡率（TRM）与不合组无显著差异。供者表达活化性KIR2DS2的患者,其3年EFS更高（81．3％vs52．6％,P=0．05）,且复发率显著减低（7．7％vs34．2％,P=0．05）。而受者不表达c2组配体时,供者表达活化性KIR2DSl的患者。即KIR2DS1阳性／HLA—C2阴性组,其3年EFS明显下降（P=0．028）,急性GVHD发生率明显上升（P=0．028）。多因素分析表明,疾病进展期、活化受体数目增多、供者不表达KIR2DS2表型是生存率下降的独立危险因素（HR=3．34、2．19、3．18;95％CI=1．43—7．82、0．99—4．83、0．93一11;P=0．005,0．053,0．066）。此外,疾病进展期、供者不表达KIR2DS2表型也是高复发率的独立危险因素（HR=6．72,9．43;95％CI为1．36—33．16,1．03—8．33;P=0．019,0．047）。而供者KIR2DSl阳性／受者HLA-C2阴性是移植相关死亡的唯一危险因素（HR=3．27,95％CI1．78—9．06,P=0．023）。结论：在非去T细胞allo-HSCT中,抑制性K／R／HLA不合对移植后患者生存率、疾病复发率及TRM的影响较小,但可能干扰移植早期抗病毒免疫。抑制性KIR2DL1／HLAC2不合组EFS显著低于相合组,这可能与该组患者TRM上升、急性GVHD发生率升高有关。而活化性K／R对患者EFS、复发及急性GVHD发生率都有影响。供者不表达KIR2DS2预示着生存期延长,这与复发率低有关,而供者KIR2DS1阳性／受者HLA-C2阴性组,预示着生存期缩短及急性GVHD发生率增高,TRM增高。因此,在非去Tallo—HSCT中,分析供受者KIR及其配体可以为供者优化选择提供分子生物学依据。     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体及HLA-Cw基因多态性与强直性脊柱炎遗传易感性研究

目的 探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIRs)2D基因及其配体HLA-Cw等位基因与强直性脊柱炎的遗传易感性是否相关.方法 以PCR-SSP基因分型技术检测105例强直性脊柱炎患者KIR2D基因(KIR2DL1、2DS1、2DL2、2DL3、2DS2)和HLA-Cw01～08等位基因,并将HLA-Cw01～08分成HLA-Cwlys和HLA-Cwan两组,分别计算KIR2D基因、HLA-Cw等位基因及活化性KIR/HLA-Cw组合基因型频率,并与51例骨关节炎患者和120名健康人群比较.结果 强直性脊柱炎组患者HLA-Cwlys基因频率为0.269 7,高于骨关节炎组患者的0.148 2(P=0.024)和健康对照者的0.138 8(P=0.001).强直性脊柱炎组患者KIR2DS1/HLA-Cwlys组合基因型阳性率为26.67%,明显高于骨关节炎组的11.76%(P=0.039)和健康对照组的13.33%(P=0.018).结论 HLA-Cwlys可能与强直性脊柱炎遗传易感性相关;当抑制性受体KIR2DL1的特异性配体HLA-Cwlys存在时,KIR2DS1基因携带者可能是强直性脊柱炎的高危人群.     

浙江汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性研究

本研究的目的是分析浙江汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）基因的多态性及基因型.采用序列特异性引物PCR法（PCR-SSP）进行KIR基因低分辨率检测和基因型分析.结果表明：①在浙江汉族人群中共检出目前已知的17个KIR基因.2DL4、3DL2和3DL3基因存在于所有个体,其基因频率为1.00.2DL1、2DL3、2DP1、3DP1＊003、3DL1、2DS4＊001/002基因较为常见,频率分别为0.902、0.902、0.902、0.902、0.7598、0.5615;而2DL2、2DL5A、2DL5B、2DS1、2DS2、2DS3、2DS4＊003、2DS5、3DS1和3DP1＊001/002基因频率较低.②浙江汉族人群中以A型单倍型为主,频率高达74.7%.在检测样本中共明确检出12种单倍型,最常见的是单倍型2,频率为53.0%.③共检出26种基因型,最常见为AJ（2,2）、AF（1,2）型,其次为AH（2,5）、NN2（2,6）、AI（1,5）和AG（1,1）.其中有15种基因型在白人中尚未见报道,4种基因型无法根据相关文献标准分析出单倍型.结论：浙江汉族人群有其独特的KIR基因频率和基因型频率分布.     

HLA相合亲缘供受者自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因的分析

本研究分析HLA相合亲缘关系供受者自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）基因分布情况并探讨其KIR相合的可能性。采用Luminex流式技术和测序方法检测HLA—A，-B，-Cw和-DRBl位点；利用序列特异性引物PCR法（PCR．SSP）检测KIR基因。结果表明：在HLA—A，-B，-Cw和-DRBl等8个位点相合的27对亲缘关系供受者样本中检出17个KIR基因，其中KIR3DL3、KIR3DPI、KIR2DL4和KIR3DL2基因存在于所有个体；检出20种KIR基因型和12种单倍体。常见基因型为2，2。频率为29．6％；最常见单倍体是2，频率为53、0％，样本以A型单倍体为主，频率为67．2％；12对（44、4％）供者KIR与受者KIR基因型和单倍体完全相同，13对（48、1％）供者KIR与受者KIR存在1个单倍体相同，2对（7．4％）供者KIR与受者KIR基因型和单倍体完全不同；1对供者KIR2DLl与受者HLA—Cw（Lys80）配基完全相合，17对供者KIR2DL2／2DL3与受者HLA—Cw（Asn80）配基完全相合，5对供者KIR3DLl与受者HLA—B（Bw4）配基完全相合。结论：HLA相合亲缘关系供受者KIR匹配的错配率比较高。     

健康人外周血KIR表达规律分析

本研究旨在分析杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)在健康人的基因型及表达谱,探索KIR受体在健康人的表达调控规律。采用PCR及RT-PCR技术检测健康人NK-92MI及Molt4细胞系中KIR2DL1、2DL2、2DL3、2DL4、2DL5、2DS1、2DS2、2DS3、2DS4、2DS5、3DL1、3DL2、3DL3、3DS1、2DP1、3DP1的基因型及KIR2DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、KIR3DL1、KIR2DS1、KIR2DS3及KIR2DS2/4受体mRNA的表达。结果表明,KIR2DL1、KIR2DL3、KIR2DL4、KIR3DL2、KIR3DL3和KIR3DP1在所有受试者、NK-92MI及Molt4细胞中均能检测到基因型。NK-92MI表达KIR2DL1、KIR2DL3及KIR2DS2/4,Molt4不表达KIR。比对健康人的基因型及mRNA表现型发现,若健康人能检测到KIR2DL1、2DL2、2DL3、2DS1、2DS2、2DS3和2DS4的基因型,其外周血几乎均有相应的KIR的mRNA表达,但KIR各基因的表达强度不同。结论:KIR各基因在健康人的表达水平不同,同一个体中各基因的表达量不一致,同一KIR基因在不同个体内的表达水平也不一致。     

免疫活性细胞表达杀伤细胞抑制性受体与造血干细胞移植后移植物抗宿主病的关系

本研究的目的是探讨造血干细胞移植后杀伤细胞抑制性受体(KIR)CD158和CD94与GVHD发生的关系。用流式细胞术检测分析T淋巴细胞和NK细胞表达CD158a，CD158b和CD94表达状况，同时用PCR方法分析供受HLA—Cw配型，比较异基因外周血造血干细胞移植(allb-PBSCT)和脐血移植(UCBT)后该KIR分子变化和HLA—Cw相合或错配与GVHD发生的关系。结果表明：无论是PBSCT或是UCBT，移植后CD3^ CD158a^ 和CD3^ CD158b^ T细胞均增高并以CD8^ CD158b^ 细胞升高为主。发生急性与慢性GVHD组CD3^ CD158b^ 细胞均呈不同程度升高，在急性GVHD病例中升高最明显。急性GVHD期(即移植早期)KIR表达增高，慢性GVHD阶段(即移植后期)KIR呈减低趋势。CD94主要表达于CD3^ CD8^ T细胞，在UCBT或PBSCT后CD94在CD4^ T细胞和CD8^ T细胞均明显增高。5例HLA—Cw相合无1例发生重症GVHD；2例HLA—Cw不相合病例，有1例发生急重症GVHD，并死于间质性肺炎(IP)，另1例为AML(M5)，完全植入，无重度GVHD发生，但于53天后复发。4例相关相合移植中2例无急性GVHD，而无关相合4例均发生不同程度GVHD。结论：GVHD的发生与KIR表达有一定关系。CD158b分子可能是移植后早期T淋巴细胞活化的负调控分子。从T细胞表达KIR来理解GVHD发生机理，特别是与HLA-Cw特异性识别结合将有利于寻找一条新的特异性建立免疫耐受和减低GVHD的新策略。     

HLA—Cw配型与异基因造血干细胞移植后GVHD关系的临床初探

目的探讨HLA-Cw配型在异基因造血干细胞移植中与GVHD的发生和复发的关系。方法对HLA6个位点（A、B、DR／DQ）全相合的同胞供者9例异基因外周血干细胞移植和10例脐带血移植进一步进行HLA-Cw配型,分析HLA-Cw配型与GVHD发生的关系。结果16例HLA-Cw相合者,共植入15例（94％）,其中Ⅰ-Ⅱ度急性GVHD发生11例（69％）,Ⅲ度急性GVHD2例（12．5％）,慢性GVHD15例（94％）,无复发病例。在HLA—Cw不相合3例中,2例发生Ⅲ度GVHD并且早期死亡,1例早期复发。在HLA—Cw配型相合与不相合两组间,急性Ⅰ～Ⅱ度及Ⅲ度GVHD的发生其差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论HLA—Cw配型相合供体造血干细胞移植有利于减少植入后急性GVHD发生及复发,提示HLA-Cw位点配型在造血干细胞移植,尤其是异基因移植中具有重要意义。     

供者KIR基因型B／X对无关HLA全相合造血干细胞移植的影响

目的分析NK细胞免疫球蛋白样受体（KIR）B／X基因型对无关供者HLA全相合造血干细胞移植患者预后的影响。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应（SSP．PCR）和序列特异性寡核苷酸探针聚合酶链反应（SSOP-PCR）的方法,对52对HLA全相合供．受者进行KIR与HLA分型．患者中急性淋巴细胞白血病（ALL）22例,急性髓系自血病（AML）13例,慢性粒细胞白血病（CML）15例,骨髓增生异常综合征（MDS）l例,急性杂合型白血病（HAL）l例。结果①28例供者KIR基因型为B／X,24例供者KIR基因型为A／A。②KIR基因型B／X组患者移植后中性粒细胞和血小板的重建时间与A／A基因型组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;两者的Ⅲ^。-Ⅳ^。急性GVHD（10．7％VS20．8％,P=-0．266）和慢性GVHD（53．6％Vs29．2％,P=0．067）之间的差异无统计学意义。B／X基因型组患者移植后3年持续缓解率（70．7％VS62．5％．P=0．414）和3年总生存率（75．5％VS62．5％,P=0．194）高于A／A组,但差异无统计学意义。结论在无关供者HLA全相合造血干细胞移植中,供者KIR基因型B／X可能增加了患者慢性GVHD的发生率,对持续缓解率和总生存率无明显影响。     

HLA-Cw位点在单倍型相合的造血干细胞移植中作用的初步探讨

目的 探讨HLA—Cw位点对单倍型相合的造血干细胞移植（HSCT）预后的影响。方法 对单倍型相合的供受者进行HLA—A、B、DR、Cw位点检测，总结2002年7月至2006年3月接受HLA单倍型相合HSCT的21例恶性血液病患者（标危8例，高危13例）的临床资料，分析HLA-Cw位点对移植物抗宿主病（GVHD）及生存率的影响。结果 20例患者获得稳定的造血重建，HLA—Cw相合组（13例）和不合组（7例）患者移植后中性粒细胞达0．5×10^9／L的中位时间分别为12d和13d，血小板达20×10^9／L的中位时间分别为20d和23d；两组差异无统计学意义（P〉0．05）。HLA—Cw相合组Ⅱ～Ⅳ度急性GVHD发生率为76．9％，HLA—Cw不合组为14．3％，差异有统计学意义（P〈0．05）。HLA—Cw相合组慢性GVHD的发生率为85．7％，HLA—Cw不合组为57．1％，差异无统计学意义（P〉0．05）。两组28个月累积生存率分别为49．0％和85．7％（P〉0．05）。存活患者Karnofsky评分大于90％。结论 在单倍体相合的HSCT中，选择与受者HLA-Cw位点不合的供者，有助于减低急性GVHD的发生率，有利于长期生存，可以作为供者优化选择的指标之一。     

几类恶性血液病病人杀伤免疫球蛋白样受体基因型的表达在高危及标危组的差异分析

本研究探讨几类高危和标危恶性血液病患者杀伤免疫球蛋白样受体（KIR）基因表达的异同。54例恶性血液病患者分为高危组（27例）和低危组（27例），其中急性髓系白血病14例、急性淋巴细胞白血病16例、慢性髓系白血病20例、骨髓增生异常综合征3例、急性混合白血病1例。用序列特异性引物PCR分型技术检测了6个激活性KIR基因（KIR2DS1-S5、3DS1）和6个抑制性KIR基因（KIR2DL1-2DL4、3DL1-3DL2）的表达，其中24例患者用流式细胞仪测定了NK细胞、T细胞表面CD158a（KIR2DL1、2DS1）、CD158b（KIR2DL2、2DL3、2DS2、2DS3）、CD158e（KIR3DL1、3DS1）的表达。结果显示，标危组病人激活性KIR基因的阳性率均高于高危组患者，2DS1（P=0.014）、2DS2（P=0.046）、3DS1（P=0．005）的差异有统计学意义；抑制性KIR基因的表达在两组患者之间的差异无统计学意义（P〉0.05）。在髓系恶性血液病病人中标危组病人KIR激活性基因表达率仍然高于高危组患者，其中2DS1（66.7％vs29.4％．P=0.022）、2DS2（57.6％vs17.6％，P=0.013）和2DS3（33.3％vs5.9％。p=0．039）。高危组患者同时表达两种以上激活性KIR基因的比例显著低于标危组（P=0.035）。高危和标危组患者NK细胞和T细胞表面CD158a、CD158b、CD158e的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：几类恶性血液病患者激活性KIR基因表达在高危和标危之间存在差异。     

供受体KIR和HLA-Cw基因与无关供体造血干细胞移植后巨细胞病毒激活的相关性

目的 探讨移植物非去T细胞的无关供体造血干细胞移植(HSCT)后患者巨细胞病毒(CMV)激活与供受体杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)和HLA-Cw基因的相关性.方法 以2003年1月至2008年12月48例行无关供体HSCT患者为研究对象,采用PCR-SSP和PCR-SSOP方法 检测供受体KIR基因单体型和HLA-Cw位点,免疫组化监测这些患者移植后CMV感染情况.结果 供受体HLA-Cw相合33例,不合15例,CMV激活率分别为48.5%和66.7%,两组比较差异无统计学意义(χ~2=1.39,P=0.2375),供受体均属于HLA-C1组的有37例,均属于HLA-C2组11例,CMV激活率分别为64.9%和18.2%,两组比较差异有统计学意义(χ~2=18.13,P＜0.0001).供体为KIR单体型A的移植有26例,供体为KIR单体型B的移植有22例,CMV激活率分别为57.7%和50.0%,两者比较差异无统计学意义(χ~2=0.28,P=0.5941).供体激活性KIR基因小于、等于受体的激活性KIR基因的有34例,CMV激活率为70.6%,供体激活性KIR基因大于受体激活性KIR基因的有14例,CMV激活率为14.3%,两者比较差异有统计学意义(χ~2=12.44,P=0.0004).结论 在无关供体HSCT中受体和供体不同激活性KIR的数量和HLA-Cw位点差异可能与CMV激活存在相关性.     

四川骨髓库汉族人群KIR基因多态性研究

目的了解四川骨髓库汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(K IR)基因多态性、基因型及其单体型的组成特点。方法随机选取四川骨髓库中川籍汉族捐献者标本135份,采用序列特异性引物扩增(PCR-SSP)对其进行基因检测,并依据Hsu等建立的方法进行基因型和单体型分析。结果在四川骨髓库汉族人群中,3DL3、3DL2、2DL4基因存在于所有个体,常见基因有2DL3、2DP1、2DL1、3DL1、2DS4*001/002,频率较低的有2DS2、2DL2、2DL5、3DS1、2DS3、2DS5、2DS1、2DS4*003基因。四川骨髓库汉族人群中共发现31种基因型,其中以AF(1,2)AJ(2,2)2型最为多见,频率分别为18.52%和20.74%,同时发现12种单体型,以单体型2最为多见,占43.4%。另外,四川骨髓库汉族人群有14种基因型难以通过Hsu的方法判定基因型,其中7种见于中国其他汉族人群的报道,另7种在其他人群中亦有报道。四川骨髓库汉族人群有6种基因型无法根据Hsu的方法判定其单体型组成。结论四川汉族人群KIR基因分布表现出中国汉族人群的特点,同时也具有独特的基因型和单体型分布特征。     

供者KIR和受者HLA遗传背景与血缘关系全相合造血干细胞移植预后的关系

目的探索供者抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like re- ceptor,KIR)和受者HLA遗传背景与血缘关系全相合造血干细胞移植(HSCT)预后的关系。方法采用反向序列特异性寡核苷酸探针(RSSOP)和(或)序列特异性引物PCR(PCR-SSP)分型技术检测HLA 基因型,采用PCR-SSP技术检测供者KIR基因型。对59例接受血缘关系HLA-ABDR全相合、非去除 T细胞HSCT的恶性血液病患者病例资料进行回顾性分析。结果Ⅱ-Ⅳ级急性移植物抗宿主病 (aGVHD)发生率在KIR-HLA相容组患者为32％,非相容组患者为78％,两者差异有统计学意义(P= 0．026);Ⅱ-Ⅳ级aGVHD在Bw4相容组患者为24％,Bw4非相容组患者为61％,差异亦有统计学意义(P=0．018)。真菌感染发生率在Bw4相容组患者为14％,Bw4非相容组患者为44％,前者显著低于后者(P=0．028)。髓系疾病中,真菌感染发生率在Bw4相容组与Bw4非相容组患者分别为12％和 80％,前者明显低于后者(P=0．002);C2相容组患者总生存(Overall survival,OS)率显著高于C2非相容组患者(P=0．01)。结论供者KIR和受者HLA遗传背景与血缘HIA全相合HSCT预后与 aGVHD发生率、OS率和真菌感染发生率均有相关关系。供者KIR与受者HLA相容时,受者aGVHD 发生率下降。选择Bw4相容的供者有助于减轻患者aGVHD及真菌感染发生率,选择C2相容的供者有助于提高患者OS率。研究结果为遗传学指标指导下供者优化选择提供分子依据,为临床制定治疗方案提供参考。