商陆抗病毒蛋白对感染细胞模型中HCV复制的影响

目的：探讨商陆抗病毒蛋白（PAP）对丙型肝炎病毒（HCV）感染细胞模型中HCV复制的影响。方法：用不同浓度PAP处理HCV感染细胞模型（HCV-HepG2），以荧光定量PCR法检测培养上清液中及细胞内HCV RNA，以不同浓度的α-2b干扰素（IFNα-2b）处理同样的细胞模型作为对照。结果：经PAP处理后各模型组细胞内HCV RNA含量于48小时、96小时和144小时进行比较，差异有非常显著性意义（P〈0．01）；培养上清液中HCV RNA含量在48小时时，各组间比较，差异无显著性意义（P〉0．05），但在96小时和144小时时，各组间比较差异有非常显著性意义（P〈0．01）。PAP对HCV的抑制作用随PAP浓度的增加而增强，以100μg／ml浓度的抑制作用最强。用IFN-α2b处理HCV—HepG2模型亦得出类似的结果。两者均以第48小时的抑制率最高。但在96小时、144小时时PAP对细胞内HCV的抑制作用明显强于IFN（P〈0．05，P〈0．01）。结论：PAP对HCV感染细胞模型中的HCV复制有明显地抑制作用，且作用强于IFN-α2b。PAP对细胞无明显毒性。     

商陆抗病毒蛋白体外对HepG2.2.15细胞HBV复制的影响

目的　探讨商陆抗病毒蛋白 (pokeweedantiviralprotein ,PAP)体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的活性。方法　以不同浓度的PAP S作用于培养的HepG2 .2 .15细胞 ,采用ELISA、荧光定量PCR法分别检测细胞上清液中的HBsAg、HBeAg及HBVDNA水平的变化 ,并用MTT比色法检测细胞成活率。结果　随着PAP S浓度的增加 ,对HBsAg、HBVDNA的抑制作用亦逐渐增强 ,不同药物剂量组之间差异十分显著 (P <0 .0 1)。PAP S处理后 96h ,PAP S对HBsAg和HBeAg的半数抑制浓度 (ID50 )分别为 6.9μg/ml和 3 .2 μg/ml ,半数中毒浓度 (CD50 )为 2 9.3 μg/ml,治疗指数 (TI) =ID50 /CD50 分别为 4.3和9.3。MTT试验结果显示 ,药物的细胞毒性也呈剂量依赖型 ,倒置显微镜下观察在 5 0 μg/ml～ 10 0 μg/ml剂量组出现部分细胞脱壁和死亡现象。结论　PAP S在体外有直接的抗HBV作用。。     

外周血树突状细胞中HCV复制的证据

HCV肝外复制导致机体抗病毒免疫力低下 ,可能是丙型肝炎慢性化原因之一。树突状细胞 (DCs)作为专职抗原提呈细胞 ,能够诱发特异性免疫反应 ,DCs 是病毒的最好靶位。选择HCV阳性患者 2 4例 ,分离其外周血树突状细胞 (PBDCs) ,应用RT PCR技术检测其中的HCV基因序列 ,2 4份样品中检测到 6份阳性 ,并且 ,2 4份样品中检测到 3份复制链HCVRNA。选择1例 ,分析其HCV准种在PBDC分布 ,结果显示 ,主要的氨基酸序列和高变区 1和糖蛋白E2 的理化特性均不同于血清中的病毒株。通过这些资料提示 ,在HCV的自然感染过程中 ,PBDCs成为一个HC…     

商陆抗病毒蛋白体外抑制乙型肝炎病毒复制的研究

商陆抗病毒蛋白（pokeweed antiviral protein，PAP）是从美洲商陆种子或叶子中提取的一种碱性蛋白，具有抑制流感病毒、脊髓灰质炎病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、HIV等多种病毒复制的作用。我们先前的研究发现：天然PAP种子体外直接作用于HepG2．2．15细胞，显示有较强的抗HBV作用，但在高剂量时对细胞有一定毒性。本研究旨在探讨PAP真核表达质粒体外对HBV的抑制作用。[第一段]     

B细胞：HCV感染与复制的载体

B细胞作为HCV的复制载体,可能导致临床上HCV持续感染、感染的复发和HCV感染各种肝外表现的根源等。本文介绍了有关HCV感染B细胞并在其中复制、HCV逃避免疫反应机制以及HCV的淋巴细胞泛嗜性等方面的研究进展。     

商陆抗病毒蛋白不同结构域的抗乙型肝炎病毒活性

目的 比较全长和不同片段缺失型商陆抗病毒蛋白(PAP)基因真核表达质粒体外抗HBV作用及其细胞毒性作用.方法 将全长和不同片段缺失型PAP基因真核表达质粒用脂质体转染HepG2.2.15细胞,收获生长良好的HepG2.2.15细胞,转染前1 d,接种于24孔培养细胞板,培养20 h后,待细胞密度达到40%～50%时进行转染.细胞随机分为4组:pXF3H组,转染空质粒pXF3H作为对照;pXF3H-PAP_(12)组,转染全长PAP的真核表达质粒pXF3H-PAP_(12);pXF3H-PAP_(14)组,转染C端缺失25个氨基酸的PAP的真核表达质粒pXF3H-PAP_(14);pXF3H-PAP3_(34)组,转染既缺失N端69个氨基酸又缺失C端25个氨基酸的PAP的真核表达质粒pXF3H-PAP_(34).转染的质粒剂量为每孔1.0μg,终浓度为2.0μg/ml,质粒DNA(μg)和脂质体(μl)的比例为1:2.5,转染72 h后收集细胞及培养上清液.酶联免疫吸附法检测培养上清液HBsAg和HBeAg,荧光定量PCR检测HBV DNA水平,四甲基偶氮唑盐比色法检测各质粒对转染细胞的毒性作用.应用SPSS12.0软件包处理数据,两样本均数的比较采用t检验,率的比较采用χ~2检验.结果 对HBsAg、HBeAg、HBVDNA的抑制率,pXF3H-PAP_(14)组分别为56.3%、75.8%和61.7%,pXF3H-PAP_(12)组分别为61.4%、84.2%和63.2%,两组间差异无统计学意义.但pXF3H-PAP_(14)组细胞毒性 (抑制率为10.2%)明显低于pXF3H-PAP_(12)组(抑制率为27.1%),χ~2=7.7,P<0.01.pXF3H-PAP_(34)组无细胞毒性,但其抗HBV作用也丧失,对HBsAg、HBeAg、HBV DNA的抑制率分别为7.8%、11.0%、20.5%.结论 PAP的C端25个氨基酸与细胞毒性相关,与抗HBV活性无关;PAP的N端69个氨基酸与抗HBV活性相关.     

商陆抗病毒蛋白抗HCV作用的初步研究

目的　探讨商陆抗病毒蛋白 (PAP)对HCV的抑制作用。方法　用不同浓度PAP处理HCV感染细胞模型 ,用荧光定量PCR检测HCVRNA。结果　HepG2 细胞内HCV持续表达达 3 0d以上。PAP处理HCV HepG2 细胞后 ,各组细胞内HCVRNA含量在 48h、96h和 14 4h差异非常显著 (P <0 .0 1)。培养上清液HCVRNA含量在 48h时 ,各组间无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,但在 96h和 14 4h时 ,各组间差异非常显著 (P <0 .0 1)。此种抑制作用随PAP浓度的增加而增强。结论　PAP具有抑制HCV复制和表达的作用。     

维生素A缺乏与HCV慢性感染和干扰素的抗病毒治疗无应答相关

最近的数据表明,维生素A能调节I型干扰素受体的表达,增强α-干扰素抑制丙型肝炎病毒（HCV）复制效果。本研究旨在探讨慢性丙型肝炎病毒感染的患者维生素A缺乏的流行病学,评估是否维生素A缺乏症与干扰素的抗病毒治疗无应答相关。     

慢性丙型肝炎感染进程中抗病毒治疗的影响Almasion PL, et al／／Panminerva Med

慢性丙型肝炎导致肝硬化和肝细胞癌的进程一般在10到30年之间。许多因素被认为与疾病进展相关，其中HCV的持续复制被认为是肝炎恶化的主要决定因素。这样一来，任何慢性丙型肝炎的治疗都主要集中在减少由长期抑制病毒活动而致的炎性坏死。对长期应用干扰素治疗的病人随访后，作者估计了清除HCV的后续影响。然后与没有接受治疗的病人对比，作者分析了持续清除病毒的病人从肝炎进展到肝硬化和肝细胞癌的比例。     

外源HCV核心基因表达载体在HepG2中蛋白表达的亚细胞定位

目的研究HCV全长（天然）核心蛋白（C蛋白）和成熟C蛋白在HepG2细胞内的亚细胞定位，为进一步研究C蛋白与宿主细胞蛋白因子相互作用提供实验依据。方法设计HCV全长和成熟核心基因引物，以pBRTM／HCV1-3011为真核表达载体为模版行PCR；将PCR扩增产物酶切纯化后定向插入pEGFP-C1的BeglⅡ和EcoRⅠ位点，得到能表达全长HCV核心蛋白（C191aa．）和成熟核心蛋白（C173aa．）的真核表达载体pEGFP-C1-C191、pEGFP-C1-C173；将扩增pEGFP-C1-C191、pEGFP-C1-C173质粒转染到HepG2细胞中，28h、5d在荧光显微镜下观察两种C蛋白的亚细胞定位。5d后再用免疫细胞化学法观察两种C蛋白在HepG2细胞中着色现象。结果HCV核心基因PCR产物和构建的pEGFP-C1-C191、pEGFP-C1-C173经扩增测序证实。pEGDP-C1-C191转染HepG2细胞28h后融合荧光全长C蛋白C191主要出现在核膜和胞质中，少部分出现在胞核及其膜中；而pEGDP-C1-C173转染HepG2细胞28h后主要定位在核中和核膜上。但pEGDP-C1-C191转染HepG2细胞5d后，其表达的融合荧光蛋白主要出现在核内和核膜上，少量在胞质中；而成熟C蛋白C173则仍然在胞核内及核膜上。pEGDP-C1-C转染HepG2细胞5d后进行免疫细胞化学显示，C191蛋白和C173蛋白主要在核中、核膜着色，胞质有少量着色。结论HCV全长C蛋白的亚细胞定位是一动态过程，先出现在胞质中和核膜上，最后定位在核中和核膜上；成熟C蛋白主要定位在核中和核膜上。这种现象为解释瞬时转染HCV不同长度C基因对p53／p21通路作用出现相反结果奠定基础。     

Inhibition of hepatitis B virus replication by pokeweed antiviral protein in vitro

AIM： To explore the inhibitory effects of pokeweed antiviral protein seed （PAP-S） and PAP encoded by a eukaryotic expression plasmid on hepatitis B virus （HBV） replication in vitro. METHODS： HepG2 2.2.15 cells in cultured medium were treated with different concentrations of PAP-S. HBsAg, HBeAg and HBV DNA in supernatants were determined by ELISA and fluorescent quantitative PCR respectively. MTT method was used to assay for cytotoxicity. HepG2 were cotransfected with various amounts of PAP encoded by a eukaryotic expression plasmid and replication competent wild-type HBV 1.3 fold overlength plasmid. On d 3 after transfection, HBsAg and HBeAg were determined by using ELISA. Levels of HBV core-associated DNA and RNA were detected by using Southern and Northern blot, respectively. RESULTS： The inhibitory effects of PAP-S on HBsAg, HBeAg and HBV DNA were gradually enhanced with the increase of PAP concentration. When the concentration of PAP-S was 10 μg/mL, the inhibition rates of HBsAg, HBeAg and HBV DNA were 20.9%, 30.2% and 50%, respectively. After transfection of 1.0 μg and 2.0 μg plasmid pXF3H-PAP, the levels of HBV nucleocapside- associated DNA were reduced by 38.0% and 74.0% respectively, the levels of HBsAg in the media by 76.8% and 99.7% respectively, and the levels of HBeAg by 72.7% and 99.3% respectively as compared with controls. Transfection with 2 μg plasmid pXF3H-PAP reduced the levels of HBV nucleocapside-associated RNA by 69.0%.CONCLUSION： Both PAP-S and PAP encoded by a eukaryotic expression plasmid could effectively inhibit HBV replication and antigen expression in vitro, and the inhibitory effects were dose-dependent.     

商陆抗病毒蛋白体外抑制HBV的实验研究

探讨商陆抗病毒蛋白 (pokeweedativiralproteinPAP)体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的作用。不同浓度的PAP-S(pokeweedantiviralproteinfromseeds)作用于HepG2 2 15 ,应用ELISA、荧光定量PCR ,分别检测药物作用后细胞上清液的HBsAg、HBeAg、HBVDNA水平的变化。PAP -S处理HepG2 2 15后 72h发现 ,PAP -S在 >1μg/ml时有明显的抗HBV效应 ,在所试验浓度范围 (1- 10 ) μg/ml内 ,倒置显微镜下未发现明显的细胞毒性 ,PAP -S为 5 0 μg/ml时 ,发现部分细胞脱壁。PAP -S对HBsAg、HBeAg、HBVDNA呈剂量时间依赖性。PAP -S在体外有较强的抗HBV作用     

Cleavage of intracellular hepatitis C RNA in the virus core protein coding region by deoxyribozymes

Hepatitis C virus (HCV) infection represents an important global health problem. Current antiviral therapeutics for HCV have proven inadequate in stemming the disease process. A novel therapeutic strategy involves the use of deoxyribozymes, also known as DNA enzymes or DNAzymes. These catalytic DNA molecules, designed to target and cleave specific RNA sequences, have shown promise in in vitro experimental models for various diseases and may serve as an alternative or adjunct to current HCV drug therapy. We designed and tested several deoxyribozymes that can bind and cleave highly conserved RNA sequences encoding the HCV core protein in in vitro systems. One of these deoxyribozymes reduced the level of our HCV RNA target by 32% and 48% after 24 h of cell exposure when tested in human hepatoma and epithelial cell lines, respectively. As this deoxyribozyme showed significant cleavage activity against HCV core protein target RNA in human cells, it may have potential as a therapeutic candidate for clinical trial in HCV infected patients.     

商陆抗病毒蛋白在急性人乙型肝炎病毒感染小鼠体内的抑制作用

目的 探讨商陆抗病毒蛋白(PAP)在急性HBV感染小鼠模型体内抗HBV的效果.方法 通过尾静脉注射具有复制能力的HBV真核表达质粒来建立小鼠急性HBV感染模型.根据注射后第1天小鼠血清HBsAg和HBeAg水平,从35只小鼠中选出24只进行配对,分为PAP治疗组(腹腔注射0.25 mg/kg PAP)和对照组.于PAP注射前、注射后第1、3、5、7天,时间分辨免疫荧光分析法检测小鼠血清HBsAg、HBeAg和抗-HBc水平,荧光定量PCR检测小鼠血清HBV DNA水平.注射后第7天HE染色检测肝组织病理变化,免疫组织化学检测肝组织HBsAg、HBeAg表达.采用配对t检验进行统计学分析.结果 与对照组相比,在PAP腹腔注射后第1、3、5天对HBsAg的抑制率分别为23%(t=116.3,P<0.05)、47%(t=38.2,P<0.05)、68%(t=23.7,P<0.05),对HBeAg的抑制率分别为36%(t=34.2,P<0.05)、55%(t=61.6,P<0.05)、83%(t=98.8,P<0.05),对HBV DNA的抑制率分别为70.7%(t=6.6,P<0.05)、86.9%(t=5.9,P<0.05)、95.2%(t=36.6,P<0.05)、95.3%(t=19.7,P<0.05).结论 0.25 mg/kg剂量的PAP在急性HBV感染小鼠模型体内对血清和肝组织的HBsAg、HBeAg的表达及HBV DNA的复制均有明显的抑制效果.     

宿主 microRNAs 在 HCV 复制及搞 HCV 治疗中的作用

HCV 感染是导致慢性肝炎、肝硬化及肝细胞癌（HCC）的主要原因之一。微小 RNA（miRNAs）是一类非编码小分子 RNA,可参与人体多种生理、病理过程。简述了 miRNAs 调控 HCV 复制的机制,探讨了肝特异性 microRNA －122（miR －122）拮抗剂对丙型肝炎抗病毒治疗的作用。认为 miRNAs 对 HCV 的表达起着重要调节作用,有望成为治疗 HCV 感染的一种措施,但仍需进一步研究。