血管紧张素转换酶抑制肽定量构效关系研究进展

在血压调节方面,血管紧张素转换酶（ACE）的活性是重要的影响因子。ACE抑制肽具有抑制ACE活性、降低血压等作用。其毒副作用小、安全性高。该文主要对血压调节机制、ACE抑制肽的降压机理、食源性ACE抑制肽的制备以及定量构效关系进行综述介绍,对指导ACE抑制肽的分子设计过程给予理论分析,有望开发出高活性的功能性食品及降血压药物。     

深海鲑鱼皮来源ACE抑制肽的分离及鉴定

为了考察海洋胶原低聚肽中ACE抑制肽的活性和结构,本文以深海鲑鱼皮为原料,采用两步酶解法制备出海洋胶原低聚肽,在对其分子量分布进行分析的基础上,测定了其血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性。结果表明,海洋胶原低聚肽中分子量小于1000 u的组分高达90.79%,主要分布在132~576 u范围内,其ACE抑制活性的IC50为1.18±0.12 mg/m L。然后利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对海洋胶原低聚肽进行分离纯化,收集11个组分峰,对其ACE抑制活性进行了测定。结果表明,有7个组分的ACE抑制活性比海洋胶原低聚肽高。最后利用Q-TOF质谱仪对收集的11个组分进行了结构鉴定,并对鉴定出的15个肽段进行了ACE抑制活性测定。结果表明,15个肽段均有一定的ACE抑制活性,其中Ala-Pro(AP)、Val-Arg(VR)、Gly-Arg(GR)的ACE抑制率比海洋胶原低聚肽高,IC50值分别为0.07±0.01 mg/m L、0.35±0.03 mg/m L、0.92±0.85 mg/m L,活性大约是海洋胶原低聚肽的16.86、3.37、1.28倍,是具有较高ACE抑制活性的肽段。     

蚕蛹源ACE抑制肽的稳定性和抑制ACE动力学

研究了温度、pH、干燥方式和体外肠道酶消化对蚕蛹源ACE抑制肽稳定性的影响,并通过Lineweaver-Burk双倒数曲线作图和紫外光谱初步探讨了蚕蛹源ACE抑制肽对ACE的抑制机理。结果表明:蚕蛹源ACE抑制肽在高温、酸性和碱性条件下不稳定,易失活;冷冻干燥和喷雾干燥对蚕蛹源ACE抑制肽的活性影响较小;蚕蛹源ACE抑制肽对胃蛋白酶、胰蛋白酶和α-胰凝乳蛋白酶具有较强的抗消化能力,经胃蛋白酶、胰蛋白酶和α-胰凝乳蛋白酶共同消化后,蚕蛹源ACE抑制肽仍能保留初始活性的94.0%;蚕蛹源ACE抑制肽竞争性抑制ACE,其抑制常数(Ki)为0.06 mg/mL;ACE被蚕蛹源ACE抑制肽抑制后,ACE在240～280 nm附近的紫外吸光值明显增加,初步揭示了蚕蛹源ACE抑制肽抑制ACE活性时,ACE的分子结构发生了改变。     

海洋蛋白源ACE抑制肽研究进展

血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽在血压调节中起着重要作用,食源性ACE抑制肽具有较强降血压效果,是调节血压的潜在活性成分。海洋蛋白源ACE抑制肽是食源性活性肽的重要组成部分,是未来研究的热点。本文综述了海洋蛋白源ACE抑制肽的制备、纯化、结构鉴定、体外和体内活性研究及构效关系等研究进展,同时对海洋蛋白源ACE抑制肽的研究和应用前景进行展望。     

发酵乳中ACE抑制肽生成的外部因素条件的研究

探讨了促进发酵乳中ACE抑制肽生成的外部因素条件。研究结果表明,菌株发酵凝乳(pH4.7～5.0)后,产生肽量迅速积累,ACE抑制活性大幅度增强,产生的肽量与ACE抑制活性具有正相关性。添加乳清蛋白和酪蛋白可提高发酵乳中的肽含量,添加酪蛋白组更为突出;添加乳清蛋白组肽粉ACE抑制活性减弱,而添加酪蛋白组肽粉ACE抑制活性增强。与发酵温度42℃相比,37℃发酵条件下有利于发酵乳ACE抑制肽生成;与4℃冷藏处理相比,37℃条件下保温培养对提高ACE抑制活性和肽含量更为显著(P<0.01),实验结果为发酵法生产ACE抑制肽提供了可靠的技术依据。     

红曲霉奶酪的生物活性研究及ACE抑制肽的筛选

研究红曲霉对奶酪成熟过程中生物活性肽,尤其血管紧张素转换酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制肽的影响。以不接种红曲霉的奶酪为对照组,研究奶酪成熟过程中的可溶性氮含量、α-葡萄糖苷酶抑制活性和ACE抑制活性,对红曲霉奶酪肽谱进行鉴定,利用生物信息学和分子对接等方法对潜在的活性肽进行筛选,并对筛选肽进行合成和评价。结果表明,相比于对照组,在pH 4.6和三氯乙酸条件下,奶酪成熟结束时的可溶性氮相对含量分别提高57.98%和38.34%,α-葡萄糖苷酶抑制活性和ACE抑制活性分别提高32.21%和73.98%。在红曲霉奶酪提取物中共鉴定到1 796种肽,其中51条ACE抑制肽、28条抗氧化肽、7条降血糖肽等。筛选到两种ACE抑制肽YPFPGPI和FPEVFGK,半抑制浓度分别为207.31μmol/L和410.61μmol/L,酶抑制类型均是非竞争性抑制。该研究提供了一种快速筛选ACE抑制肽的方法,证明奶酪中添加红曲霉能够有效提高ACE抑制活性,为挖掘红曲霉奶酪的功能特性潜力提供了参考。     

两步法制备高活性酪蛋白ACE抑制肽的工艺参数研究

为了制备高活性ACE 抑制肽,研究两步法高活性酪蛋白ACE 抑制肽的制备工艺条件参数。利用枯草杆菌碱性蛋白酶55℃水解酪蛋白6h 制备酪蛋白ACE 抑制肽,IC50 为38.6μg/mL;采用相同的酶进行Plastein 反应来修饰酪蛋白ACE 抑制肽,并应用响应面分析法优化修饰反应条件。固定酪蛋白ACE 抑制肽质量分数为35%,以ACE 抑制肽的游离氨基减少量为指标,优化的修饰反应条件为酶添加量7.7kU/g 蛋白质、温度42.7℃、反应时间6h,在此条件下,酪蛋白ACE 抑制肽的游离氨基减少量达到179.72μmol/g 蛋白质。ACE 抑制活性分析结果表明,修饰后ACE 抑制肽的抑制活性显著提高且与修饰反应程度相关,IC50 可降0.5μg/mL。     

酶膜耦合制备高活性ACE抑制玉米肽及结构研究

为了充分提高酶解效率及获得高活性的ACE抑制玉米肽,采用酶解与膜分离耦合技术连续化制备高活性ACE抑制玉米肽,考察了该制备过程中产品的质量和稳定性,比较了不同分子质量级分玉米肽的ACE抑制活性,以及采用HPLC-MS/MS对几种玉米肽的结构进行了解析。结果显示:在连续制备5 h内,所得产品的ACE抑制活性及肽含量较稳定,ACE抑制率在84%左右(最高达到89.82%),其中Mw<3 ku级分玉米肽其ACE抑制活性最高(IC50=0.29 mg/mL);解析出了3种玉米肽的结构,其氨基酸序列分别为QQLLPF、QQFLPF和QFLPF。试验表明:连续化酶膜耦合技术制备的ACE抑制玉米肽产品质量高且稳定,其中Mw<3 ku的玉米肽级分的ACE抑制活性最高;解析出的3种玉米肽均具有ACE抑制肽的结构特点。     

ACE抑制肽研究进展

该文对目前国内外有关ACE抑制肽研究进展进行综述,重点介绍制备ACE抑制肽原料、分离提取方法、结构与活性关系、活性测定方法和功能性评价方法,并简介其在食品中应用及发展前景,以期为对ACE抑制肽进一步研究提供参考。     

酪蛋白源降血压肽稳定性及其抑制作用机理的研究

酪蛋白源降血压肽经体外胃肠道蛋白酶消化后,其ACE抑制活性仍能保持原来活性的94%.降血压肽与ACE作用前后,其ACE抑制活性和肽谱基本保持不变,证实了酶解乳蛋白源降血压肽是真正的抑制剂类型,不受ACE作用.采用抑制酶解动力学方法,初步探讨降血压肽的抑制作用机理,根据lineweaver-Burk方程,确定酶解酪蛋白源降血压肽是非竞争性抑制类型.     

利用对虾消化腺丝氨酸蛋白酶制备鲍鱼外套膜ACE抑制肽

利用鲍鱼加工副产物外套膜制备具有抑制血管紧张素转移酶(angiotensin converting enzyme,ACE)活性的生物活性肽,为鲍鱼加工副产物的高值化利用提供新思路.采用从凡纳滨对虾消化腺中制备的丝氨酸蛋白酶,酶解皱纹盘鲍外套膜蛋白,以酶解物ACE抑制活性为评价指标优化条件.酶解液通过3 kDa超滤膜后,...     

海蜇ACE抑制肽水解用酶的筛选

采用肽含量、ACE抑制率和肽的比例等多个指标对六种蛋白酶的水解效果进行评价筛选海蜇ACE抑制肽的酶法制备用酶。试验结果表明,不同的蛋白酶对海蜇的水解效果不同,综合考虑三项指标,复合蛋白酶是海蜇ACE抑制肽酶法制备的理想用酶     

小麦谷朊蛋白ACE抑制肽分离纯化研究

为了探讨和研究小麦谷朊蛋白ACE抑制肽分离提纯方法、技术参数及分离效果,首先采用超滤、纳滤膜技术将谷朊蛋白水解液按照相对分子质量的不同进行分离纯化,采用高效液相色谱法和SHR大鼠实验检ACE抑制抑制效果,并对高抑制活性的组分采用凝胶排阻色谱(Sephadex G-25)进一步分离纯化。结果显示膜过滤和凝胶排阻色谱(Sephadex G-25)能够有效分离和纯化谷朊蛋白抑制肽,IC50由0.125mg/mL降低到0.106mg/mL。一次性灌胃SHR大鼠一星期后动脉血压降低(8.86±2.23)mmHg,证明谷朊蛋白抑制肽经过分离纯化后具有良好的降血压效果。     

酪蛋白双酶水解物ACE抑制肽的分离纯化

采用胃蛋白酶和胰蛋白酶依次对酪蛋白进行双酶水解,制备ACE抑制肽。水解物经截留分子质量6ku的超滤膜初步分离,再通过Sephadex G-15进一步纯化,体外测定各分离产物ACE活性的半数抑制质量浓度(IC50值)。纯化得到的各组分经毛细管电泳分析肽谱、Q-TOF LC/MS检测分子质量范围。结果显示：双酶水解产物IC50值为560μg/mL,超滤流出物IC50值为250μg/mL;Sephadex G-15分离得到3个组分,组分Ⅰ的IC50值为123.41μg/mL,含有19个肽段;组分Ⅱ的IC50值为66.67μg/mL,含有14个肽段;组分Ⅲ的IC50值为64.29μg/mL,含有5个肽段。Q-TOF LC/MS测得纯化组分的分子质量范围为400～800u。     

Effect of angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory peptide purified from enzymatic hydrolysates of <Emphasis Type="Italic">Styela plicata</Emphasis>

Angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory peptide was isolated from Styela plicata. The S. plicata was hydrolyzed with various proteases including Protamex, Kojizyme, Neutrase, Flavourzyme, Alcalase, trypsin, α-chymotrypsin, pepsin, and papain. The hydrolysate prepared with Protamex had the highest ACE inhibitory activity compared to the other hydrolysates. We attempted to isolate ACE inhibitory peptides from hydrolysate prepared with Protamex using ultra-filtration, gel filtration on a Sephadex G-25 column and reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) on an ODS column. IC₅₀ value of the purified ACE inhibitory peptide was 24.7 μM, and Lineweaver–Burk plots suggest that the purified peptide from S. plicata acts as mixed-type inhibitor against ACE. Amino acid sequence of the purified peptide was identified as Met-Leu-Leu-Cys-Ser, with a molecular weight 566.4 Da. The results of this study suggest that peptides derived from S. plicata may be beneficial as anti-hypertension compounds in functional foods resource.     

酶法制备鱼降血压肽的工艺优化及其组分分析

为了开发鲬鱼蛋白,以体外血管紧张素转换酶(ACE)抑制率为指标,通过适宜酶酶解鲬鱼蛋白质制备降血压活性肽。根据供试酶的水解进程筛选适宜水解酶,在单因素试验的基础上,采用响应面分析法优化水解条件,凝胶过滤层析法测定活性肽相对分子质量分布。结果表明,Alcalase是供试酶中最适的水解酶,最优水解条件为:温度48.9℃,pH7.93,加酶量为32396.6 U/g·pro,固液比1:5 g/mL,水解时间2.5 h。在此条件下,酶解液的ACE抑制率IC₅₀=0.269 mg/mL;酶解物经Sephadex G-15凝胶过滤层析得到三个组分,相对分子质量分别为635、258、67,其中的2号组分(C=0.74 mg/mL) ACE抑制活性相对较高,达到89.09%。     

豆粕血管紧张素转化酶抑制肽的结构鉴定及作用机制解析

以大豆粕为原材料,利用超声辅助酶解技术、超滤-?KTA层析相结合的方法分离纯化获取豆粕酶解产物中血管紧张素转化酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制肽,对其分子质量分布进行研究,后通过质谱分析与分子对接技术鉴定并筛选出ACE抑制活性肽的氨基酸序列,经固相合成肽序列,检测其ACE抑制肽的活性并基于分子对接技术探索其抑制机制。结果表明：经超声辅助酶解提取获得的豆粕肽分子质量主要分布在6 000 Da以下;根据分子对接的最低预测自由能筛选出的GVRP（－8.44 kcal/mol）和IIVTP（－9.04 kcal/mol）可以抑制ACE活性,半抑制浓度（50% inhibitory concentration,IC50）分别为（84±0.06）、（77±0.08）μmol/L;分子对接结果表明：GVRP、IIVTP能够与ACE的活性口袋S1、S1′、S2形成氢键相互作用,共有的过近接触（3.5 ?范围内）ACE氨基酸残基为His513、Ala354和Glu384。本研究基于串联质谱与分子对接技术,建立从混合多肽中快速鉴定、筛选活性多肽的方法,探究活性多肽与ACE稳定结合并体现其ACE活性的抑制机制,为后续的深入研究提供一定参考。     

高效液相色谱法快速测定降血压肽的血管紧张素转换酶抑制活性

建立了体外快速测定降血压肽的血管紧张素转换酶抑制活性的高效液相色谱分析方法。以马尿酰组氨酰亮氨酸(HHL)为反应底物,血管紧张素转换酶(ACE)为催化剂,反应所生成的马尿酸为测定指标,未加酶抑制剂的反应为空白对照。使用Symmetry C18分析型色谱柱(5μm 3.9×150 mm,),柱温25℃,流动相A为乙腈(含0.05%三氟乙酸),流动相B为超纯水(含0.05%三氟乙酸),采用梯度洗脱方式,流速0.8 mL/min,检测波长228 nm。在马尿酸浓度为12.5～200μg/mL时,马尿酸浓度与其峰面积呈良好的线性关系(R~2=0.9999);该方法具有良好的准确性和重现性,对马尿酸的回收率为93.23%～100.25%。高效液相色谱法和紫外比色法对血管紧张素转换酶抑制活性无显善差异(P>0.05)。结果显示,高效液相色谱法具有检测快速、操作简便、灵敏度高等优点,为降血压产品的研制提供了简便可靠的检测手段。     

Yak milk casein as a functional ingredient: preparation and identification of angiotensin-I-converting enzyme inhibitory peptides

Yak milk casein derived from Qula, a traditional Tibetan acid curd cheese, was hydrolyzed by six commercially available proteases (Trypsin, Pepsin, Alcalase, Flavourzyme, Papain and Neutrase). These hydrolysates were assayed for their inhibitory activity of Angiotensin-I-converting enzyme (ACE). The hydrolysates obtained by Neutrase from Bacillus amyloliquefaciens showed the highest ACE inhibitory activity. The IC50 value of Neutrase-hydrolysate was 0.38 mg/ml. The hydrolysate obtained by Neutrase was further separated by consecutive ultra-filtration with 10 kDa and then with 6 kDa molecular weight cut-offs into different permeated parts and fractionated by gel filtration chromatography with a Sephadex G-25 column. The active fraction was subjected to RP-HPLC, in which five peaks were purified and identified. Amino acid sequence analysis confirmed that the peptides and origins were as follows: YQKFPQY (alphas2-CN; f89-95), LPQNIPPL (beta-CN; f70-77), SKVLPVPQK (beta-CN; f168-176), LPYPYY (kappa-CN; f56-61) and FLPYPYY (kappa-CN; f55-61). Their amino acid sequences matched well with those of known bioactive peptides from bovine casein. The results indicated that yak milk casein could be a resource to generate antihypertensive peptides and be used as multifunctional active ingredients for many value-added functional foods as well as a traditional food protein.     

Purification and characterization of angiotensin I converting enzyme inhibitory peptides from jellyfish Rhopilema esculentum

Two angiotensin I converting enzyme (ACE) inhibitory peptides were isolated from jellyfish Rhopilema esculentum protein hydrolysates prepared with pepsin and papain. Consecutive purification methods, including ion-exchange chromatography, size-exclusion chromatography and reverse-phase high-performance liquid chromatography, were used for isolation of ACE inhibitory peptides. The amino acid sequence of the peptides was identified as Gln-Pro-Gly-Pro-Thr and Gly-Asp-Ile-Gly-Tyr, respectively, and the IC₅₀ value of the purified peptides for ACE inhibitory activity was 80.67 μM and 32.56 μM. The purified peptides were evaluated for the antihypertensive effect in spontaneously hypertensive rats (SHR) after oral administration. Blood pressure decreased significantly after ingestion of the peptides. The results suggest that peptides derived from jellyfish R. esculentum may be beneficial as antihypertensive compounds in functional food resources.