不同来源的巨噬细胞在小鼠肾脏纤维化中的作用

目的 探讨不同来源的巨噬细胞在小鼠肾纤维化中的作用.方法 8～10周龄巨噬细胞CX3CR1GFP转基因雄性C57/B6小鼠12只和6只同样周龄大小的雄性C57/B6小鼠(WT组),其中转基因小鼠随机分为两组,其中一组采用单侧输尿管结扎(UUO)的方法建立UUO模型,另一组为Sham组,均于建模后2周处死动物,留取肾组织标本.共分为4组:WT组、Sham组、UUO(-)组(UUO模型未结扎输尿管一侧)、UUO(+)组(UUO模型结扎输尿管一侧).Masson和苏木素-伊红(HE)染色检测肾组织胶原纤维沉积及炎性巨噬细胞浸润;流式细胞术检测组织定居型巨噬细胞及增殖变化,免疫荧光染色法检测肾间质组织定居型巨噬细胞及增殖变化.结果 Masson和HE染色显示:与WT组、Sham组和UUO(-)组比较,UUO(+)组小鼠肾组织胶原纤维沉积和炎性巨噬细胞浸润增多(P＜0.05),且WT组、Sham组、UUO(-)组多组间无明显差异(P＞0.05);流式细胞术结果显示:与Sham组和UUO(-)组比较,UUO(+)组小鼠肾组织定居型巨噬细胞(CD11B+ F4/80+ CX3CR1GFP+)和骨髓来源的炎性巨噬细胞(CD11B+ F4/80+ CRR2+)浸润明显增多(P＜0.05),且组织定居型巨噬细胞基本为Ly6c-巨噬细胞;免疫荧光染色结果显示:与Sham组和UUO(-)组比较,UUO(+)组小鼠组织定居型巨噬细胞浸润(CX3CR1GFP+)及其增殖(CX3CR1GFP+ KI67+)明显增加(P＜0.05).结论 UUO诱导的肾间质纤维化模型中,组织定居型巨噬细胞和骨髓来源的炎性巨噬细胞的浸润均增加,且以组织定居型巨噬细胞及其增殖为主,推测组织定居型巨噬细胞及其增殖主要参与肾纤维化形成.     

不同来源的巨噬细胞在小鼠肾脏纤维化中的作用

目的 探讨不同来源的巨噬细胞在小鼠肾纤维化中的作用.方法 8～10周龄巨噬细胞CX3CR1GFP转基因雄性C57/B6小鼠12只和6只同样周龄大小的雄性C57/B6小鼠(WT组),其中转基因小鼠随机分为两组,其中一组采用单侧输尿管结扎(UUO)的方法建立UUO模型,另一组为Sham组,均于建模后2周处死动物,留取肾组织标本.共分为4组:WT组、Sham组、UUO(-)组(UUO模型未结扎输尿管一侧)、UUO(+)组(UUO模型结扎输尿管一侧).Masson和苏木素-伊红(HE)染色检测肾组织胶原纤维沉积及炎性巨噬细胞浸润;流式细胞术检测组织定居型巨噬细胞及增殖变化,免疫荧光染色法检测肾间质组织定居型巨噬细胞及增殖变化.结果 Masson和HE染色显示:与WT组、Sham组和UUO(-)组比较,UUO(+)组小鼠肾组织胶原纤维沉积和炎性巨噬细胞浸润增多(P＜0.05),且WT组、Sham组、UUO(-)组多组间无明显差异(P＞0.05);流式细胞术结果显示:与Sham组和UUO(-)组比较,UUO(+)组小鼠肾组织定居型巨噬细胞(CD11B+ F4/80+ CX3CR1GFP+)和骨髓来源的炎性巨噬细胞(CD11B+ F4/80+ CRR2+)浸润明显增多(P＜0.05),且组织定居型巨噬细胞基本为Ly6c-巨噬细胞;免疫荧光染色结果显示:与Sham组和UUO(-)组比较,UUO(+)组小鼠组织定居型巨噬细胞浸润(CX3CR1GFP+)及其增殖(CX3CR1GFP+ KI67+)明显增加(P＜0.05).结论 UUO诱导的肾间质纤维化模型中,组织定居型巨噬细胞和骨髓来源的炎性巨噬细胞的浸润均增加,且以组织定居型巨噬细胞及其增殖为主,推测组织定居型巨噬细胞及其增殖主要参与肾纤维化形成.     

整合素连接激酶在梗阻性肾病肾小管上皮细胞转分化中的作用及尿激酶对其表达调节的研究

目的 研究整合素连接激酶(ILK)在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及尿激酶对其的影响.方法 将雄性CD-1小鼠随机分为假手术对照组(Sham,n=20)、UUO组(UUO,n=28)和尿激酶治疗组(uPA,n=28),分别于术后1、3、7和14 d处死小鼠.Masson染色观察肾间质纤维化.免疫荧光和Western印迹检测小鼠肾组织ILK的分布及表达.免疫组化检测肾组织上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)的表达.RT-PCR检测ILK、E-cadherin和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达.结果 与Sham组相比,UUO组术后1dILKmRNA及蛋白表达均增高,7d达到高峰:E-cadherin mRNA及蛋白表达明显减少,α-SMA mRNA表达显著上调.与UUO组同时间点相比,uPA治疗组ILK、α-SMA表达均被显著抑制(P<0.05);E-cadherin表达则增高(P<0.05).结论 ILK通过介导肾小管上皮细胞转分化而参与肾间质纤维化的发生发展.uPA能减轻肾小管间质纤维化,这可能与其抑制肾小管细胞ILK表达有关.     

MicroRNA-21在单侧输尿管梗阻大鼠间质纤维化肾脏组织中的表达及意义?

目的：观察 MicroRNA-21(miRNA-21)在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏组织中的表达,初步探讨其在转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3致大鼠肾间质纤维化(RIF)信号通路中的机制。方法选择20只 SD 雄性大鼠,分为 UUO 组和假手术组(Sham 组),分别于建模后第3天、第7天各采集每组5只大鼠肾脏组织,应用实时荧光定量 PCR(Real-time qPCR)方法检测肾脏组织中 miRNA-21的表达变化,采用 Masson 染色、苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学技术评价肾组织纤维化,使用免疫组织化学检测肾脏组织中 TGF-β1、Smad3、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况。结果建模后第3天和第7天 UUO 组肾脏组织中 miRNA-21与 Sham 组比较均升高(P <0.01),7 d UUO 组肾组织中 miRNA-21与3 d UUO 组相比升高(P <0.01)。建模后3、7 d UUO 组 Masson 染色纤维化评分、TGF-β1、Samd3、α-SMA 及 Col-Ⅰ蛋白阳性表达面积较 Sham 组升高(P <0.01),以上指标7 d UUO 组较3 d UUO 组比较表达增强(P <0.01)。UUO 组肾组织中 miRNA-21的表达与肾间质纤维化评分正相关(r=0.888,P <0.01);肾组织 miRNA-21与 TGF-β1、Smad3、Col-Ⅰ、α-SMA 蛋白表达呈正相关(r =0.799、0.849、0.882、0.896,P <0.01)。结论UUO 大鼠肾组织中 miRNA-21在建模后表达上调,且间质纤维化程度越重表达越高,TGF-β1/Smad3信号通路可能是通过上调 miRNA-21从而介导大鼠肾间质纤维化。     

他汀类药物抗炎护肾作用机制的实验研究

目的 在UUO模型上观察氟伐他汀对肾间质巨噬细胞细胞浸润、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达及肾间质纤维化程度的影响,探讨他汀类药物的抗炎护肾作用机制.方法 72只SD雌性大鼠随机分成对照组(n=24)、UUO模型组(单侧输尿管梗阻术,n=24)和氟伐他汀治疗组[UUO FVT组,单侧输尿管梗阻术 氟伐他汀20 mg/(kg·d),n=24].于术后第3,7,10,14天分别处死各组大鼠.用HE及Masson染色动态观察肾脏病理变化,免疫组织化学法测定MCP-1的表达和巨噬细胞浸润.结果 UUO模型组大鼠肾小管-间质MCP-1与单核巨噬细胞抗原ED-1的表达及肾间质胶原相对面积较对照组显著增加(P＜0.05);而术后各时间点,治疗组大鼠肾小管-间质MCP-1、ED-1的表达及肾间质胶原相对面积较UUO模型组显著减少(P＜0.05).结论 氟伐他汀可降低MCP-1表达、抑制巨噬细胞浸润,减轻肾间质纤维化,提示他汀类药物具有抗炎护肾的作用.     

福辛普利对肾间质纤维化大鼠转化生长因子β激活激酶表达的下调作用

目的观察福辛普利对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾脏转化生长因子β激活激酶(TGF-activated kinase1,TAK1)表达的影响,及其对肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的保护作用。方法采用单侧输尿管结扎术致RIF大鼠模型。72只大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组、UUO模型组及福辛普利治疗组,每组24只。治疗组于术后2d给予福辛普利10mg/(kg.d)灌胃,假手术组与模型组每天给予等量生理盐水灌胃。各组分别于术后7、14、21d处死8只大鼠,采用HE及Masson染色观察梗阻侧肾脏病理变化,原位杂交、RT-PCR及Western blot检测肾组织TAK1的表达。结果模型组大鼠梗阻侧肾脏肾小管间质损伤指数明显高于同期假手术组(P0.05),福辛普利干预后肾小管间质损伤指数明显降低(P0.05);TAK1mRNA和蛋白表达情况:模型组各时间段TAK1表达升高,且随着病理损害的进展呈现下降趋势,但表达量仍显著高于同期假手术组(P0.05),经福辛普利干预后表达显著下降(P0.05)。结论福辛普利可能通过下调TAK1表达,从而减轻UUO术后肾组织间质纤维化的病程进展。     

迷迭香酸对单侧输尿管梗阻小鼠肾脏的抗氧化保护作用

目的:探讨迷迭香酸对小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化的抗氧化保护作用.方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分成3组:假手术对照组(Sham组,n=8)、UUO模型组(结扎左侧输尿管制作UUO模型,n=24)、UUO迷迭香酸干预组(UUO+RA组,n=24).除Sham组外,其余2组根据不同的观察时间细分为3、7、14天亚组n=8).术后第3、7、14天分别处死各组小鼠.组织病理学方法观察肾小管间质损伤情况;Western blotting方法检测肾组织中波形蛋白(Vimentin)和E-5黏蛋白(E-cadherin)表达;比色法测定小鼠左肾皮质匀浆中脂质过氧化标志物MDA以及抗氧化酶SOD的含量.结果:UUO模型组与假手术组比较:随着模型损伤时间的延长,肾间质损伤程度逐渐加重,Vimentin和MDA含量明显增高,E-cadherin和SOD含量明显降低.迷迭香酸干预组与UUO模型组比较:3大时肾脏病理、Vimentin、E-cadherin以及MDA、SOD含量无明显改变;7天时肾间质纤维化减轻,Vimentin、MDA含量降低,E-cadherin、SOD含量增高;14天时肾间质纤维化明显减轻,Vimentin、MDA含量明显降低.E-cadherin、SOD含量明显增高.结论:迷迭香酸可能通过减少单侧输尿管梗阻侧肾皮质脂质过氧化物的产生、增加抗氧化酶的含量.从而改善小鼠氧化应激所致的肾问质纤维化.     

白三烯受体拮抗剂孟鲁斯特对小鼠气道炎症的抑制作用

[目的]探讨白三烯受体1拮抗剂孟鲁斯特(montelukast,MK)抑制小鼠气道炎症的作用及可能的机制.[方法]致敏的BALB/c小鼠持续吸入10 g/L雾化卵白蛋白(OVA)30 min,OVA吸入前2 d开始连续3 d或5 d尾静脉给予MK或生理盐水(saline),OVA吸入后24 h及72 h取材,瑞氏染色观察支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)中炎症细胞的渗出情况;ELISA方法检测血清、BALF和肺组织中有关细胞因子水平;HE、刚果红染色观察肺组织炎症细胞的渗出;免疫组化染色观察血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)和嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)的表达;原位杂交研究IL-5 mRNA的变化.[结果]给予MK 5 d减少BALF嗜酸性粒细胞渗出达90%以上,嗜酸性粒细胞减少随MK剂量(10、25、62.5 mg/kg)的增加呈量效关系.ELISA结果表明给予3 d MK使肺、血清和BALF中IL-5、IL-4水平显著降低,肺IL-13含量也明显减少(P＜0.05),但MK组肺组织eotaxan下降与saline组比较无明显差异(P＞0.05).免疫组化显示MK组肺组织VCAM-1和eotaxin表达比saline组明显减弱;原位杂交可见MK组肺组织IL-5 mRNA的表达比saline组减弱.[结论]MK减轻气道炎症,可能通过抑制VCAM-1表达和IL-5、IL-4、IL-13等细胞因子分泌起作用.急性哮喘中应用大剂量MK抗炎治疗值得进一步探讨.     

细胞色素P450 2E1在利福平减弱异烟肼引起肝脏发生氧化应激中的作用

目的 研究利福平(RIF)减弱异烟肼(INH)引起小鼠肝脏发生氧化应激的作用机制.方法 将♀ICR成年健康小鼠随机分为4组:50 mg/kgINH组;100 mg/kg RIF组;INH+RIF组:同时给予INH(50 mg/kg)和RIF(100 mg/kg);对照组:给予等容量的溶剂,所有小鼠每日均给予处理1次,连续处理1 周.分析血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)、总胆红素(TB)和总胆汁酸(TBA)水平,Griffith法测定肝脏组织谷胱甘肽(GSH)含量,TBARS比色法分析肝脏组织脂质过氧化水平,RT-PCR技术检测肝脏组织细胞色素P450 2E1(CYP 2E1)mRNA水平,Western blot检测肝脏组织CYP 2E1蛋白表达水平.结果 INH、RIF及RIF与INH共处理组小鼠血清中ALT均轻度升高,INH处理显著升高肝脏组织脂质过氧化水平并降低GSH含量, RIF共处理显著减弱INH升高肝脏组织脂质过氧化水平并降低GSH含量.单纯RIF处理显著下调肝脏组织CYP 2E1蛋白表达水平,且RIF共处理显著减弱INH对肝脏组织CYP 2E1蛋白表达的诱导作用;所有处理对CYP 2E1 mRNA水平无明显影响.结论 RIF减弱INH引起肝脏组织发生氧化应激中, CYP 2E1发挥了一定作用.     

UUO肾间质纤维化动物模型的制作及研究进展

肾间质纤维化(RIF)是多种肾脏疾病发展至终末期肾功能衰竭(ESRD)的共同通路和主要的病理基础,以胶原蛋白为主的细胞外基质(ECM)的合成与降解失衡为主要特征.其发生机制复杂,多种细胞及细胞因子和多条细胞信号通路参与了此过程.建立一种理想的RIF动物模型,对于研究RIF发生机制以及探寻各种延缓和阻断其进展的新方法,具有十分重要的意义.单侧输尿管梗阻(UUO)模型是目前研究肾小管间质进行性纤维化较为成熟的一种实验动物模型.近年来很多学者采用这一模型来研究RIF的发生机制及防治方法.现将UUO肾间质纤维化动物模型的制作和相关研究进展作一综述.     

FTY720对大鼠肾间质纤维化的抑制作用

目的 研究FTY720对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的防治作用及机制.方法 将45只SD大鼠随机分成假手术组(SHAM),单侧输尿管梗阻组(UUO)和FTY720治疗组(UUO FTY720).治疗组于术前3 d给予FTY720 0.5 mg/(kg·d)灌胃,UUO模型组和SHAM组给予等量生理盐水.3组分别于术后7、14、21 d各处死5只大鼠,并收集血清和24 h尿液,观察肾功能和24 h尿蛋白变化.取梗阻侧肾做组织学检查,观察肾间质纤维化程度.用免疫组化方法检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)、CD3、ED-1的表达水平.结果 术后14 d时治疗组24 h尿蛋白较模型组明显降低(P＜0.05).术后7、14、21 d治疗组血肌酐水平与模型组相比较均明显降低(P＜0.05),治疗组与SHAM组比较差异无显著性意义.治疗组术后7、14 d血尿素氮较模型组均有一定程度下降(P＜0.05).病理检查显示,治疗组纤维化程度较模型组明显减轻.免疫组化结果显示,α-SMA表达,SHAM组仅限于血管,治疗组和模型组表达明显增多,但治疗组表达要弱于模型组(P＜0.05).SHAM组肾间质有少量Ⅲ型胶原表达,模型组表达逐渐增强,治疗组较模型组表达明显减少(P＜0.05).SHAM组肾间质各时间点均未见炎性细胞浸润,与模型组相比,治疗组肾问质CD3、ED-1阳性细胞数降低(P＜0.01).结论 新型免疫调节剂FTY720可以明显减少UUO大鼠肾间质T淋巴细胞和巨噬细胞浸润,在一定程度上可以抑制肾小管上皮细胞转分化和细胞外基质积聚,从而减轻UUO后大鼠肾问质纤维化的程度,保护肾功能.     

利福平诱导小鼠脂肪肝实验模型的研究

目的：观察利福平( RIF)引起的小鼠肝脏脂肪变及其动态演变过程,为进一步探讨药物性脂肪肝的机制奠定基础。方法将42只成年健康雄性 ICR小鼠随机分为7组(对照组,RIF 8 h、24 h、3 d、1周、2周、4周组),经灌胃给予RIF处理(200 mg/kg),末次给药后禁食6 h处死小鼠,采集血液及肝脏组织。计算肝脏系数;检测血清丙氨酸氨基转移酶( ALT)活性;HE染色观察肝脏组织病理学改变;检测血清中三酰甘油(TG)、胆固醇酯(TCH)、高密度脂蛋白(HDL)、极低密度脂蛋白( VLDL)水平;检测肝脏组织中TG水平;油红O染色检测肝脏组织脂质沉积。结果与对照组比较, RIF处理组小鼠肝脏重量、系数均从24 h开始逐渐升高,4周时达到高峰;与对照组比较,24 h、3 d、1周、2周组ALT水平逐渐升高,4周组ALT水平显著升高。 HE染色显示8、24 h组肝脏组织无明显变化,3 d组可见小的空泡,而从1周开始出现显著增多的大的圆形空泡。8、24 h组血清中TG和VLDL水平较对照组轻度升高,3 d时升高最明显,而1、2、4周组中呈下降趋势,且显著低于对照组。 RIF处理各组血清TCH、HDL水平均较对照组降低。肝脏组织TG含量从8 h开始明显升高,1周时达峰值,之后2、4周组呈下降趋势但仍显著高于对照组。油红O染色结果显示,8、24 h组肝脏组织中可见少量脂质沉积,从3d组开始出现显著增多的大圆形脂滴。结论 RIF能引起小鼠肝脏组织中脂质沉积,且呈明显的时间效应关系。     

甲磺酸伊马替尼对单侧输尿管梗阻小鼠肾脏间质纤维化的影响

目的 研究甲磺酸伊马替尼(STI 571)对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化的防治作用.方法 48只小鼠随机分为4组:假手术组,模型组,小剂量治疗组[80 mg/(kg·d)],大剂量治疗组[160 mg/(kg·d)].采用左侧输尿管双结扎的方法建立UUO模型,治疗组每天以80、160 mg/kg STI 571灌胃.于术后第8、11天分别处死各组小鼠6只.用酸水解-比色法测定肾组织胶原的含量;用免疫组化技术检测肾脏纤维连结蛋白(FN)的沉积.利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察FN和Ⅲ型胶原(Col Ⅲ) mRNA表达.结果 治疗组的肾组织胶原含量在术后第11天显著低于模型组(P<0.05),且不同剂量组之间差异有显著性意义(P<0.05).模型组和治疗组左肾FN含量随梗阻时间延长而逐渐增加,术后第11天治疗组的表达较模型组明显减低(P<0.05),且不同剂量组之间存在显著差异(均P<0.05).模型组FN和Col Ⅲα1 mRNA表达随梗阻时间延长而逐渐增加,在对应时间点上治疗组FN和Col Ⅲα1 mRNA表达较模型组明显减低(均P<0.05),且不同剂量组之间存在显著差异(P<0.05).结论 STI 571可显著减轻UUO小鼠梗阻侧肾脏间质纤维化,下调FN和Col Ⅲ的表达,减少肾间质细胞外基质的沉积,对UUO小鼠肾间质纤维化有一定防治作用.     

脂肪酸合成在利福平引起小鼠肝脏脂肪变性中的作用

目的 研究利福平(RIF)引起小鼠肝脏发生脂肪变性的作用机制.方法 将雌性ICR成年健康小鼠随机分为对照组和RIF组,分别灌胃给予等量的生理盐水或RIF(200 mg/kg),连续处理1周及单次处理.分析血清和肝脏中甘油三酯(TG)水平,油红O染色观察肝脏脂肪聚集情况,RT-PCR法检测肝脏脂肪酸合成酶(Fasn)、乙...     

Nrf2基因敲除加剧单侧输尿管梗阻肾纤维化模型中巨噬细胞介导的炎症损伤作用

目的：研究Nrf2基因敲除对小鼠单侧输尿管梗阻（UUO）肾纤维化模型中炎症损伤的作用及其机制。方法：将实验小鼠分为4组：Nrf2野生型UUO组（Nrf2Wild-type UUO）、Nrf2野生型假手术组（Nrf2Wild-type Sham）、Nrf2敲除型UUO组（Nrf2KO UUO）和Nrf2敲除型假手术组（Nrf2KO Sham）,每组6只。PAS与Masson染色分别用于检测肾组织损伤和总胶原累积程度;免疫组织化学染色检测巨噬细胞标志物CD68、IRF5表达;ELISA检测iNOS水平;qRT-PCR检测促炎症基因IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达;Western blot检测IRF5蛋白的表达。结果：PAS染色显示,Nrf2基因敲除没有明显引起肾组织损伤,但构建UUO模型后,其肾组织损伤明显加剧。Masson和免疫组织化学染色结果显示,Nrf2基因敲除可加重UUO模型中肾间质纤维化程度,并促进CD68阳性的巨噬细胞大量浸润,且ELISA结果显示iNOS表达水平也明显升高（P＜0.05）。深入研究发现,Nrf2KO UUO组与Nrf2Wild-type UUO组相比,肾组织中促炎基因IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达水平明显升高（P＜0.05）。同时,Western blot和免疫组织化学染色结果显示,Nrf2基因敲除可增加IRF5蛋白的表达（P＜0.05）。结论：Nrf2基因敲除加剧了UUO肾纤维化模型中的炎症损伤作用,其机制可能是通过促进IRF5介导的炎症型巨噬细胞浸润,进而增加炎症因子的合成与释放。     

大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化动物模型的实验研究

目的观察单侧输尿管梗阻大鼠模型中肾功能、肾病理改变、肾组织-αSMA表达的变化,验证UUO制作RIF动物模型的可行性。方法将32只Waster大鼠随机分为假手术组、模型组,每组16只。在术后3、10、203、0 d每组各处死4只,处死前1 d测定各组大鼠24 h尿蛋白定量,处死时抽取其腹主动脉血测定血清肌酐、尿素氮水平;左肾组织行HE染色,动态观察肾病理学变化,评定各组大鼠肾间质损害程度;免疫组化方法测定肾间质-αSMA,并分析其与肾间质损伤指数的相关性。结果各组大鼠24 h尿蛋白无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠血肌酐、尿素氮在第3天时无统计学意义(P>0.05)。模型组血清肌酐、尿素氮在10 d时高于假手术组(P<0.01),20d达到高峰,继之出现下降。模型组的肾间质损伤指数及-αSMA的表达明显高于假手术组(P<0.01),-αSMA表达的相对量与肾间质损伤指数呈正相关(r=0.92,P<0.001)。结论UUO可以快速建立RIF动物模型,并作为延缓肾功能损害治疗的理想模型。     

选择性环氧化酶-2抑制剂对梗阻性肾病大鼠肾组织中巨噬细胞趋化蛋白-1的调节

目的 探讨塞来昔布(celecoxib)与吲哚美辛(indomethacin)比较对单侧榆尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾脏的保护作用及可能机制.方法 大鼠随机分为4组:模型组(UUO组),塞来昔布治疗组(UUO+celecoxib组),吲哚美辛治疗组(UUO+indomethacin组)和假手术组即对照组(SOR).4周后检测各组大鼠血清肌酐及尿素氮水平,并采用放射免疫方法 测定大鼠尿液血栓烷素B2(TXB2)浓度.应用免疫组织化学方法 检测肾脏巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、转化生长因子-β,(TGF-β1)及Ⅳ型胶原(ColIV)的蛋白水平.结果 塞来昔布及吲哚美辛均可以降低尿TXB2浓度,以塞来昔布组更为显著;与对照组相比,其余3组,MCP-1、TGF-β;及ColⅣ的蛋白表达水平均显著上升,肾间质纤维化严重;塞来昔布治疗后,上述蛋白表达水平显著下调,肾间质纤维化程度明显减轻.结论 塞来昔布能减轻UUO大鼠肾间质纤维化,下调MCP-1的表达,减少肾间质单核巨噬细胞浸润可能是其机制之一.     

黄芪对UUO模型大鼠肾脏肝细胞生长因子表达的影响

目的 动态观察黄苠(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管间质纤维化的拈抗作用和肝细胞生长因子(HGF)表达的影响.方法 SD大鼠随机分为假手术组(SOR组)、UUO组和UUO+AM治疗组(AM组).在造模后3、7、14 d处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、HGF表达.实时荧光定量RT-PCR检测大鼠.HGF mRNA和α-SMA mRNA表达量.Western blot检测大鼠HGF及其受体C-met蛋白表达量.结果 与SOR组相比,各时间点UUO大鼠肾脏病理损害进行性加重,AM治疗后可明显减轻UUO大鼠肾小管损伤及肾间质纤维化程度(P<0.05).随着梗阻时间的延长,UUO大鼠肾组织α-SMA表达逐渐增加;HGF及其受体C-met呈现先升高后下降的表达规律,在UUO术后第7 d达高峰,此后大幅回落;与UUO组各对应时间点比较,AM治疗后可使肾组织中的HGF及其受体C-met表达显著增高,α-SMA表达明显降低(P<0.05).结论 AM可能通过诱导HGF及其受体C-met的表达,负性调控肾小管上皮细胞转分化,减轻肾间质纤维化.     

丝瓜提取物对小鼠巨噬细胞功能的影响

目的　探讨丝瓜的果、叶、藤提取物对小鼠巨噬细胞功能的影响。方法　将 50只小鼠随机等分为正常对照组、阳性对照组、实验Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组。正常对照组用生理盐水灌胃 ,实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别用丝瓜的果、叶和藤提取物灌胃 ,阳性对照组用胸腺肽灌胃 ;10d后检测小鼠腹腔巨噬细胞内酸性磷酸酶活性及巨噬细胞吞噬功能的变化。结果　实验组吞噬功能强度由高到低依次为实验Ⅲ组、实验Ⅰ组和实验Ⅱ组 ,但 3组比较无统计学差异 (P >0 .0 5)。各实验组与正常对照组相比 ,小鼠腹腔巨噬细胞内酸性磷酸酶活性和巨噬细胞吞噬功能均有不同程度增强 (P <0 .0 5) ,与阳性对照组相比无显著差异 (P >0 .0 5)。结论　丝瓜不同部位提取物对小鼠巨噬细胞功能均有增强作用     

Smurf2在梗阻性肾病小鼠肾小管上皮细胞转分化形成中的作用

目的:探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在小鼠单侧输尿管梗阻所致肾间质纤维化进展中的作用机制?方法:采用结扎雄性CD-1小鼠单侧输尿管(UUO)的方法建立肾间质纤维化动物模型,设假手术为对照组(Sham组)?术后3?7?14 d处死小鼠?用常规病理染色法观察两组小鼠肾组织形态和肾间质纤维化程度;以免疫蛋白印迹及免疫组织化学染色法检测两组小鼠肾组织中Smurf2?E-钙黏蛋白(E-cadherin)??琢-平滑肌肌动蛋白(?琢-SMA)和纤维连接素(FN)的表达和分布?结果:与Sham组相比,UUO术后7 d小鼠出现部分肾小管扩张?萎缩和肾间质纤维化?同时,UUO术后肾组织中Smurf2??琢-SMA和FN表达呈时间依赖性升高,E-cadherin表达则明显下降?并且,Smurf2蛋白主要分布于肾小管上皮细胞核内;?琢-SMA分布于肾小管上皮细胞和肾间质中;FN则分布于肾间质中?相关回归分析表明:UUO术后小鼠肾组织内Smurf2表达与?琢-SMA(r = 0.765,P <0.001)和FN蛋白水平呈正相关(r = 0.773,P < 0.001);与E-cadherin表达呈负相关(r = -0.656,P < 0.001)?结论:梗阻性肾病小鼠肾组织中Smurf2可能通过诱导肾小管EMT形成促进肾间质纤维化的进展?