脐带间充质干细胞移植对1型糖尿病大鼠模型血糖及肾脏病变的影响研究

目的 观察脐带间充质干细胞(UC-MSCs)移植后在1型糖尿病大鼠模型胰腺、肾脏组织中的存活及转归,对血糖及肾脏病变的改善情况.方法 将雄性Wistar大鼠20只随机选择6只为正常组,其余大鼠按空腹体重经腹腔注射相应STZ(60 mg/kg),3 d后随机测血糖≥16.7 mmol/L为造模成功,本组共成功造模12只,随机分为糖尿病组和移植组,每组6只.移植组大鼠经尾静脉注射BrdU标记的UC-MSCs悬液0.5 ml(细胞数2×106个),糖尿病组注射等量PBS溶液.注射后14、28 d测定大鼠血糖、胰岛素、24 h尿蛋白、β2微球蛋白水平;28 d后处死大鼠,观察大鼠肾脏病理变化和标记干细胞存活情况.结果与正常组比较,移植组和糖尿病组在注射14、28 d后血糖、24 h尿蛋白、尿β2微球蛋白较正常组均显著升高,胰岛素水平显著降低(P＜0.01);与糖尿病组比较,移植组胰岛素水平升高,血糖、24 h尿蛋白降低(P＜0.05).糖尿病组肾小球肥大、基底膜增厚,移植组较糖尿病组明显改善.在胰腺、肾脏组织中均可见少量BrdU标记的阳性细胞.结论 UC-MSCs能趋化定位于1型糖尿病大鼠模型胰腺及肾脏,降低血糖,增加胰岛素分泌,减少蛋白尿,改善胰腺及肾脏功能.     

葛根素对脐带间质干细胞增殖与成骨分化的作用

葛根素是从豆科植物野葛的干燥根中提取的一种异黄酮类化合物[1]。已广泛应用于临床,可治疗多种疾病,如冠心病、心绞痛、心肌梗死等[2?4]。文献报道葛根素能够促进大鼠成骨细胞增殖,抑制破骨细胞的骨吸收活性,且能够促进大鼠骨髓间质干细胞     

人脐带问充质干细胞体外培养、鉴定及其诱导分化的研究

目的通过体外分离、培养及鉴定人脐带间充质干细胞（humanumbilicalcordmesenchymalstemcells,hUCMSCs）,探讨其多向分化潜能。方法取正常足月新生儿脐带,采用组织贴壁培养法分离原代hUCMSCs,观察细胞生长形态。采用流式细胞仪技术检测hUCMSCs细胞表型及细胞周期。通过成神经细胞诱导和成脂肪细胞诱导,鉴定hUCMSCs的多向诱导分化能力。结果成功分离和培养hUCMSCs原代细胞,经流式细胞仪鉴定高表达间质细胞标志CD44和CDl05,阳性率为96．73％和96．10％,整合素受体CD29阳性率为99．53％;低表达造血系标志CD34和CD45阳性率为0．80％和1．91％,人白细胞抗原HLA-DR阳性率为1．41％。细胞周期检测hUCMSCs主要处于G0／G1期。hUCMSCs成神经细胞诱导,出现神经元样细胞;免疫组化检测神经巢蛋白（Nestin）呈阳性表达。hUCMSCs成脂肪细胞诱导,出现空泡样脂肪滴,油红O染色可见脂质沉积。结论hUCMSCs具有多向分化潜能,可跨胚层诱导分化为多种组织类型的细胞。     

骨髓间充质干细胞移植促进大鼠脊髓损伤后行为功能恢复的研究

目的:探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植促进大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后行为功能恢复的机制并评价其疗效.方法:利用NYU Impactor-Ⅱ打击器制作大鼠TIO SCI模型,细胞移植预实验证实BMSCs在体内定植后,分别于损伤后3 d(Ⅱ组)和1周(Ⅲ组)移植在体外稳定传10代的BMSCs,以DMEM作为阴性对照(Ⅰ组),术后用BBB评分和脚印分析进行大鼠行为功能的评价.3个月后处死动物,取出损伤处脊髓做10 mm快速冰冻切片后,行HE,NF和ED1免疫组化染色,根据各组间阳性反应面积百分比进行比较.结果:BMSCs倍增周期约为2～3 d,术后第4周各组间BBB评分差异开始有统计学意义(P<0.05或P<0.01),术后第6周起Ⅱ组和Ⅲ组之间脚印分析结果差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01). NF和ED1染色阳性反应面积百分比各组间差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论:BMSCs可以改善脊髓损伤后局部的微环境,促进轴突的再生和大鼠运动功能的恢复.     

人脐带间充质干细胞对CCl_4致大鼠肝硬化的保护作用研究

目的:研究人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)对CCl4致大鼠肝硬化的保护作用及其机制。方法:对大鼠皮下注射CCl4建立肝硬化模型,并于造模成功后继续半剂量注射CCl4,建模成功后随机分为模型组、生理盐水(NS)组、HUC-MSCs组(1×107个/mL),每组24只,后2组通过尾静脉注射,移植相应药物或细胞1mL,移植后第1、3、5周末观察各组大鼠肝组织病理学变化及其血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、胆固醇(CHO)、白蛋白(ALB)、转化生长因子β(1TGF-β1)、肝细胞生长因子(HGF)水平和肝组织中人表皮生长因子受体(EGF-R)的表达情况;另选取8只正常大鼠设为正常对照组。结果:模型组和NS组相似,大鼠肝内胶原纤维增生明显,肝细胞排列紊乱,HUC-MSCs组移植后5周大鼠的肝内胶原纤维增生减少,有较多正常肝细胞;与正常对照组比较,模型组和NS组大鼠的ALT、AST、TGF-β1、HGF水平均明显升高,CHO、ALB含量明显降低(P<0.01);与模型组比较,HUC-MSCs组上述指标均明显好转(P<0.05或P<0.01),其中ALT、ALB、TGF-β1水平与移植后的时间呈正相关;HUC-MSCs组移植后1、3、5周大鼠肝组织中均有人EGF-R的阳性表达。结论:HUC-MSCs可促进肝功能的改善,修复肝硬化损伤的肝脏组织。     

人脐带间充质干细胞对大鼠烧伤的治疗作用

目的探讨人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对重度烧伤大鼠的治疗作用。方法分离纯化人UC-MSCs。24只SD大鼠均分为两组:治疗组烧伤后实施UC-MSCs移植;对照组烧伤后滴入PRMI 1640培养液。HE染色观察大鼠皮损的病理结构,比较创面愈合率。结果成功培养获得UC-MSCs,所得细胞分别经形态学、流式细胞术、体外分化方法作表型鉴定。治疗组大鼠创面愈合时间为(22.0±3.1)d,短于对照组的(27.0±3.1)d(P<0.05)。术后14d,治疗组创面愈合率为(56.3±9.8)%,高于对照组的(47.2±8.3)%(P<0.05)。结论局部UC-MSCs移植能有效促进烧伤组织恢复。     

电磁场不同处理时间对人脐带间充质干细胞增殖与分化的影响

目的研究频率50 Hz强度1.8 m T下的不同处理时间正弦交变电磁场对体外培养人脐带间充质干细胞增殖与分化的影响。方法体外分离培养人脐带间充质干细胞,传代后随机分为6组,每天于倒置相差显微镜下观察细胞形态;MTT测定细胞增殖;10 d、12 d、14 d和16 d测定ALP活性;15 d行茜素红钙化结节染色以及17 d行vonkossa染色;第13 d ALP组织化学染色;在磁场处理后的4 d和6 d行Real-time RT-PCR检测Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ)和骨形态发生蛋白(BMP-2)mRNA表达量的变化。结果 0.5 h组可促进细胞增殖;磁场处理10 d~12 d后细胞出现钙化趋势;2.5 h组在SEMFs处理16 d和18 d后ALP活性均高于对照组(P<0.05);1.5 h组、2.0 h组和2.5 h组钙化结节茜素红染色面积均高于对照组(P<0.01,P<0.05);1.5 h组Collagen-ⅠmRNA表达水平高于对照组(P<0.05),2.0 h和2.5 h组ALP组织化学染色面积、Collagen-Ⅰ、BMP-2 mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论 50 Hz 1.8 m T的正弦交变磁场能促进体外培养人脐带间充质干细胞成骨性分化,尤以处理2.5 h促进人脐带间充质干细胞成骨性分化最为明显。     

纳米氧化镍致大鼠肺毒性实验研究

目的探讨纳米氧化镍急性染毒致大鼠急性肺毒性的研究。方法将50只Wistar大鼠,雌雄各半,按体质量(180~220 g)分为5组,分别为0.9%氯化钠注射液对照组、微米氧化镍对照组(20 mg/ml)及纳米氧化镍(0.8、4、20 mg/ml)组。以非暴露式气管滴注法染毒,3 d 1次,染尘15 d后,腹主动脉抽血处死。分别对肺泡灌洗液和血清中总蛋白、白蛋白、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶的含量进行检测。结果大鼠支气管肺泡灌洗液中总蛋白含量、白蛋白含量、乳酸脱氢酶活力、碱性磷酸酶活力和酸性磷酸酶活力与0.9%氯化钠注射液对照组相比,纳米氧化镍中、高剂量组均升高且差异有统计学意义(P<0.05),各剂量组血清中总蛋白、白蛋白、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶水平的变化与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),纳米染毒剂量组之间的差异无统计学意义(P>0.05),同等剂量纳米与微米染毒组间的差异也无统计学意义(P>0.05)。结论纳米氧化镍可能对大鼠肺组织有急性毒性,且有剂量效应关系。     

不同方案移植脐带间充质干细胞对硫代乙酰胺所致大鼠肝纤维化治疗效果的比较

目的 观察不同方案移植人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)对硫代乙酰胺(TAA)所致大鼠肝纤维化的治疗效果.方法 选取30只正常大鼠作为对照组,其余大鼠应用TAA建立肝纤维化模型,造模成功的60只随机分为模型组和治疗组,每组30只.对照组不作任何处理,模型组给予生理盐水,治疗组采用尾静脉注射的方式移植hUCMSCs.各组分别于单次治疗后1、2、4周和多次治疗后1周和1年收集大鼠血液和肝脏标本,观察体重,检测肝功能,观察肝脏病理变化及肝纤维化程度.结果 模型组和治疗组大鼠体重均低于对照组,治疗组单次治疗后4周与多次治疗后1周体重高于模型组(P<0.05).模型组在单次治疗1、2、4周和多次治疗1周后血氨(BAM)、胆红素(TBIL)和碱性磷酸酶(AKP)血清浓度高于对照组,白蛋白/球蛋白(ALB/GLB)低于对照组,多次治疗后1年BAM高于对照组(P<0.05,P<0.01).治疗组单次治疗后1、2、4周及多次治疗后1周、1年BAM水平低于模型组(P<0.01);治疗组TBIL、AKP水平单次治疗后2、4周和多次治疗后1周低于模型组,ALB/GLB水平单次治疗后1、2、4周和多次治疗后1周高于模型组(P<0.05,P<0.01).治疗组单次治疗后2、4周和多次治疗后1周和1年肝脏纤维化程度均轻于模型组,且多次治疗后1周和1年轻于单次治疗后2、4周(P<0.01).结论 hUCMSCs移植可改善肝纤维化大鼠的肝功能和肝脏纤维化程度,治疗效果随着hUCMSCs移植次数的增多和恢复期的延长而提高.     

脐带来源间充质干细胞的免疫抑制功能研究

目的 观察人源脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对异体总淋巴细胞和不同淋巴细胞亚群增殖能力的影响,以及对细胞因子分泌的影响。方法 分离并培养hUC-MSCs及健康成人外周血淋巴细胞,以淋巴细胞为阴性对照,MTT法检测共培养（淋巴细胞：hUC-MSCs为1：0.5、1：1、1：5、1：10）3 d后淋巴细胞的增殖情况;流式细胞仪检测共培养体系中CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺、CD3^-CD16⁺CD56⁺、CD4⁺CD45RA⁺CCR7⁺的细胞比例;ELISA法检测白细胞介素（IL）-2、IL-4、IL-10、γ-干扰素（INF-γ）细胞因子分泌情况。结果 与阴性对照组比较,hUC-MSCs对淋巴细胞的增殖具有显著抑制作用（P<0.05）,抑制效果随数量增加而增强;hUC-MSCs能够显著增加共培养体系中CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺细胞比例（P<0.05）,显著降低CD4⁺CD45RA⁺CCR7⁺细胞比例（P<0.05）,对CD3^-CD16⁺CD56⁺细胞比例无显著影响;hUC-MSCs能够显著降低IL-2、IL-4、INF-γ水平,显著增加IL-10的分泌水平（P<0.05）。结论 hUC-MSCs具有免疫抑制功能。     

人脐带间充质干细胞对大鼠受损子宫内膜的影响

目的 探讨人脐带华通氏胶间充质干细胞(WJ-MSCs)移植对大鼠受损子宫内膜的影响.方法 妊娠大鼠25只均分为五组.于妊娠第3天阻断子宫动脉血流30 min(A1组和B1组)或60 min(A2组和B2组),建立大鼠胚泡着床障碍的动物模型.A2和B2组子宫动脉夹闭同时经子宫角部注入WJ-MSCs;A1和B1组未注入WJ-MSCs.于妊娠第9天,观察胚泡着床情况,化学发光法检测血清雌二醇、孕酮,光镜及透射电镜观察子宫内膜的形态及超微结构变化.结果与空白对照组妊娠大鼠比较.结果 与对照组比较,A1和B1组胚泡着床率明显下降(P＜0.01),子宫内膜、腺体和间质细胞明显损伤;B1组比A1组明显,出现明显细胞凋亡.而A2及B2组子宫内膜改变明显轻于A1和B1组,胚泡着床数与对照组相仿(P＞0.05).五组大鼠血性激素水平无统计学差异(P＞0.05).结论 WJ-MSCs能明显促进胚胎着床期子宫内膜的生长及腺体的增生和发育.     

低氧培养环境对脐带间充质干细胞增殖及生物学特性的影响

目的 研究低氧环境对人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）增殖及生物学特性的影响。方法 分别在5% O₂和21% O₂环境下培养hUCMSCs,使用群体倍增时间（PDT）评价hUCMSCs的增殖情况;流式细胞术检测细胞表面标志CD73、CD90、CD105、CD34、CD45、HLA-DR的表达;培养基诱导分化后,茜素红-S对含钙骨细胞染色检测成骨诱导分化,油红O对脂滴染色检测成脂诱导分化,阿尔新蓝8GX对蛋白多糖检测软骨诱导分化;羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）染色法检测hUCMSCs对植物血凝素P（PHA-P）刺激的外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的增殖抑制作用,并应用流式细胞术检测对CD8+T细胞的抑制作用;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、肝细胞生长因子（HGF）、胰岛素样生长因子2（IGF-2）、转化生长因子β（TGF-β）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、基质细胞衍生生长因子1（SDF-1）、神经生长因子（NGF）mRNA表达;试剂盒法检测细胞培养上清中IGF-2浓度。结果 21% O₂和5% O₂环境培养的hUCMSCs表面标志CD73、CD90、CD105的表达均为阳性（＞95%）,CD34、CD45、HLA-DR的表达均为阴性（＜2%）,均具有成骨、成脂、成软骨三系分化的能力;5% O₂组的PDT均显著小于21% O₂组（P＜0.05）;PBMC经PHA-P刺激后观察到细胞增殖聚集,与hUCMSCs共培养后几乎没有聚集出现,与PBMC＋PHA-P组比较,PBMC＋PHA-P＋hUCMSCs（21%或5% O₂）组子代细胞明显减少,PBMC＋PHA-P＋hUCMSCs（5% O₂）组PBMC抑制率为（61.44±0.92）%,与PBMC＋PHA-P＋hUCMSCs （21% O₂）抑制率（60.48±4.00）%相当,无统计学差异,且两组hUCMSCs对CD8+T细胞的抑制作用无统计学差异。与21% O₂组比较,5% O₂组hUCMSCs HIF-1α、IGF-2、SDF-1、HGF、VEGF、bFGF、NGF mRNA表达水平显著升高（P＜0.05、0.001）,TGF-β无明显变化; 5% O₂组hUCMSCs培养上清IGF-2水平显著高于21% O₂组（P＜0.001）。结论 5% O₂环境可使hUCMSCs的增殖能力和相关生长因子的表达增强,尤其是IGF-2,但依然保持着与21% O₂环境培养的hUCMSCs相似的表型、分化能力以及淋巴细胞增殖抑制能力。     

脐带间充质干细胞通过调节IL-6延缓小鼠银屑病样皮损的研究

目的 通过咪喹莫特（IMQ）乳膏涂抹诱导产生银屑病样皮损的小鼠模型,观察人源脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对其整体和局部作用效果。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和hUC-MSCs组,模型组和hUC-MSCs组每日定时在小鼠裸露背部涂抹5% IMQ乳膏62.5 mg,对照组涂抹凡士林。在开始涂抹前1天（0 d）和涂抹后的第6天,对照组和模型组sc 200 μL的生理盐水,hUC-MSCs组每只小鼠sc 2×10⁶个hUC-MSCs。采用银屑病样皮损面积和疾病严重指数（PASI）评分标准观察银屑病样小鼠模型皮损变化情况;通过HE染色观察表皮层厚度,角质层角化程度及炎性细胞浸润程度;采集小鼠的静脉血,试剂盒法检测血清白细胞介素-6（IL-6）的浓度,评估小鼠炎症反应。结果 hUC-MSCs组与同期模型组比较,皮损症状轻,通过PASI积分趋势图可见,hUC-MSCs能延缓皮损出现,同时减缓皮损严重程度,加快皮损部分的恢复;HE染色显示,hUC-MSCs组角化不全的细胞明显减少,红细胞外溢真皮层增生和炎性细胞浸润程度明显低于模型组,造模后6 d表皮层厚度显著低于模型组（P<0.01）;hUC-MSCs组血清IL-6浓度在造模后的第12天显著低于模型组。结论 银屑病样小鼠模型sc hUC-MSCs后能延缓银屑病的发生,并减轻银屑病症状,加快银屑病样皮损部分的恢复,可能通过调节IL-6发挥免疫调节作用。     

体外培养人脐带血间充质干细胞向胰岛细胞分化及对糖尿病治疗的实验研究

目的研究人脐带血间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的潜能及其移植后对糖尿病大鼠的治疗效果。方法体外分离培养HUCB-MSCs,在胰岛细胞培养条件下经药物定向诱导其分化;免疫组化对诱导细胞进行胰岛β细胞标记鉴定;双硫腙染色鉴定锌离子表达及检测胰岛样细胞的移植效果。结果 HUCB-MSCs经诱导后,免疫细胞化学染色显示表达人胰岛素;双硫腙染色呈棕红色;移植后2周,胰岛样细胞组血糖浓度明显降低。结论 HUCB-MSCs在体外诱导培养条件下,具有向胰岛素分泌细胞分化的潜能,这种细胞可能为Ⅰ型糖尿病提供一条新的治疗途径。     

人脐带间充质干细胞对传统胎盘屏障模型屏障功能的影响及作用机制

目的 通过构建体外胎盘屏障模型,研究人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对传统胎盘屏障模型功能的影响及其可能的分子机制。方法 将hUC-MSC、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人滋养层细胞(HTR-8)共同培养于transwell中建立体外胎盘屏障模型,设置对照组(HUVEC+HTR-8)、forskolin组(HUVEC+HTR-8+forskolin)、MSC组(HUVEC+HTR-8+hUC-MSC)、MSC+forskolin组(HUVEC+HTR-8+hUC-MSC+forskolin),通过测量跨膜电阻值、荧光黄CH的渗透性以及P-糖蛋白(P-gp)的活性,评估各组体外胎盘屏障模型的功能;利用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和Westernblotting检测各组体外胎盘屏障模型中P-gp、紧密连接蛋白5(Claudin-5)、闭合小环蛋白-1(ZO-1)、ZO-2、血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)的mRNA及蛋白表达水平;利用LC-MS/MS检测阿替洛尔、米诺地尔、美托洛尔3种渗透性工具药透过各组体外胎盘屏障模型的表观渗透系数(P_app),验证模型的功能完整性。结果 与对照组相比,forskolin、MSC、MSC+forskolin组的跨膜电阻值均显著增高(P<0.05、0.001)、P-gp外排功能均增强、荧光黄的P_app值均显著降低(P<0.05、0.01、0.001),且二者联用后作用效果尤为显著,表明该模型具备完整的屏障功能,且MSC+forskolin屏障功能最好;qRT-PCR和Western blotting结果显示,与对照组相比,forskolin组P-gp、ZO-1、ZO-2、CD31的表达显著增加(P<0.05、0.01、0.001),MSC组P-gp、Claudin5、ZO-1和CD31的表达也显著增加(P<0.05、0.01、0.001);联合应用后,各蛋白的mRNA及蛋白表达水平均更显著增加(P<0.01、0.001),表明hUC-MSC增强传统胎盘屏障功能;与对照组相比,各实验组的P_app值均降低,MSC+forskolin组3个工具药均差异显著,美托洛尔差异最显著。结论 hUC-MSC通过增强传统胎盘屏障模型中紧密连接蛋白和外排蛋白的表达,进一步增强了传统胎盘屏障模型的屏障功能。     

In vitro toxicity screening of magnetite nanoparticles by applying mesenchymal stem cells derived from human umbilical cord lining

Despite the growing interest in nanoparticles (NPs), their toxicity has not yet been defined and the development of new strategies and predictive models are required. Human stem cells (SCs) offer a promising and innovative cell‐based model. Among SCs, mesenchymal SCs (MSCs) derived from cord lining membrane (CL) may represent a new species‐specific tool for establishing efficient platforms for primary screening and toxicity/safety testing of NPs. Superparamagnetic iron oxide NPs, including magnetite (Fe₃O₄NPs), have aroused great public health and scientific concerns despite their extensive uses. In this study, CL‐MSCs were characterized and applied for in vitro toxicity screening of Fe₃O₄NPs. Cytotoxicity, internalization/uptake, differentiation and proliferative capacity were evaluated after exposure to different Fe₃O₄NP concentrations. Data were compared with those obtained from bone marrow (BM)‐MSCs. We observed, at early passages (P3), that: (1) cytotoxicity occurred at 10 μg/mL in CL‐MSCs and 100 μg/mL in BM‐MSCs (no differences in toxicity, between CL‐ and BM‐MSCs, were observed at higher dosage, 100‐300 μg/mL); (2) cell density decrease and monolayer features loss were affected at ≥50 μg/mL in CL‐MSCs only; and (3) NP uptake was concentration‐dependent in both MSCs. After 100 μg/mL Fe₃O₄NP exposures, the capacity of proliferation was decreased (P5‐P9) in CL‐MSCs without morphology alteration. Moreover, a progressive decrease of intracellular Fe₃O₄NPs was observed over culture time. Antigen surface expression and multilineage differentiation were not influenced. These findings suggest that CL‐MSCs could be used as a reliable cell‐based model for Fe₃O₄NP toxicity screening evaluation and support the use of this approach for improving the confidence degree on the safety of NPs to predict health outcomes.     

人源脐带间充质干细胞对膝骨关节炎模型大鼠的治疗作用

目的 观察人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对SD大鼠膝骨关节炎的治疗效果。方法 8周龄近交系SD雄性大鼠6只,均采用自身双侧对照研究。应用手术方法切断双膝关节前交叉韧带,手术后不固定伤肢,笼内自由活动。术后4周,右侧作为模型侧,左侧膝关节注射hUC-MSCs 100 μL（1×10⁷ cells/mL）。注射后4周,处死所有实验组大鼠并收取双侧膝关节标本,进行HE和甲苯胺蓝染色。结果 模型侧细胞排列紊乱,细胞簇集明显,有细胞消失、基质染色不均、软骨结构改变、表面凹凸不平、软骨层次较差等现象,表明软骨蜕变,骨关节炎形成;hUC-MSCs治疗侧与模型侧相比,软骨细胞排列基本整齐,呈柱状,细胞增生较多,细胞簇集明显减少,潮线较完整。软骨表面相对平滑,表明软骨处于损伤修复中。结论 hUC-MSCs移植治疗有助于改善大鼠膝骨关节炎,使大鼠关节软骨破坏减轻,促进软骨组织修复。     

凝胶法测定脐带间充质干细胞培养上清中细菌内毒素

目的 探讨凝胶法测定人脐带间充质干细胞培养上清中细菌内毒素的可行性。方法 收集人脐带间充质干细胞培养72 h的上清为供试品。参照《中国药典》2020年版第三部通则1143细菌内毒素检查法中凝胶法的具体要求和步骤对鲎试剂进行灵敏度复核,对供试品进行干扰初筛试验、干扰试验和供试品细菌内毒素的测定。结果 鲎试剂灵敏度测定值为0.125EU/mL,在0.5λ～2.0λ符合规定,可用于后续试验。供试品1、2、4倍稀释对鲎试剂均无干扰;干扰试验验证2倍稀释供试品对细菌内毒素凝胶法检测无干扰作用;采用凝胶法测定2倍稀释供试品的细菌内毒素含量均≤0.5 EU/mL,判定供试品中细菌内毒素含量合格。结论 凝胶法可用于人脐带间充质干细胞培养上清中细菌内毒素的检测。