胃癌患者外周血调节性T细胞检测及初步分析

目的 检测胃癌患者外周血调节性T细胞(Treg)水平并对其进行初步分析.方法 四色流式细胞仪检测术前胃癌患者(n=25)及正常健康者(n=25)外周血CD4+ CD25+ FOXP3+Treg水平.结果 正常对照组CD4+ CD25+ FOXP3+ Treg/PBL为(1.229±0.656)%,胃癌组CD4+ CD25+ FOXP3+ Tres/PBL为(1.993±0.830)%.胃癌患者外周血Treg较正常对照组明显升高(P<0.01).结论 胃癌患者周血Treg水平升高,可因其免疫负调作用而导致免疫抑制.     

大肠癌患者中调节性T细胞的表达及其临床意义

目的 观察CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)及其特异性标志物叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)蛋白在大肠癌患者外周血及淋巴组织中的变化情况,以了解Tregs在肿瘤免疫中的作用.方法 流式细胞仪检测30例大肠癌患者术前7 d、术后14 d外周血Tregs及CD4+、CD8+T细胞比例.应用免疫组织化学染色定性分析大肠癌患者手术切除标本中淋巴结组织Foxp3蛋白的表达水平.结果 大肠癌患者术前外周血中Tregs比例显著高于对照组(t=2.843,P<0.01).术前外周血CD8+T细胞比例与Tregs比例呈负相关(rs=-0.849,P<0.01).术后Tregs比例明显降低(t=6.16,P<0.01).淋巴结转移患者术前Tregs比例及Foxp3蛋白淋巴结检出率明显高于未转移者(Z=-2.56,P<0.01;χ2=4.474,P<0.05).TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者外周血Tregs比例明显高于Ⅱ期患者(Z=1.818,P<0.01).结论 大肠癌患者外周血Tregs比例显著增高,提示与肿瘤患者细胞免疫功能抑制有关.并且可能与肿瘤的转移有关.大肠癌患者淋巴结中特异性Foxp3蛋白表达,提示其在体内与抗肿瘤免疫有关.     

调节性T细胞在乳腺癌患者体内的表达及其临床意义

目的 探讨乳腺癌患者外周血和肿瘤组织CD4+ CD25+ CD127low/-T细胞(Tregs)的变化及其临床意义.方法 采用流式细胞术对48例乳腺癌患者及12例健康志愿者外周血Treg细胞进行检测,同时对10例乳腺癌患者癌组织及癌旁组织Treg细胞进行检测.结果 10例乳腺癌患者癌组织Treg细胞表达为(39.74 ±9.02)％,显著高于其癌旁组织的表达[(29.81±8.52)％,P＜0.05].48例乳腺癌患者外周血Treg细胞表达为(7.04±1.56)％,显著高于12例健康志愿者外周血Treg细胞的表达[(4.01±1.05)％,P＜0.05].且随着疾病的进展,外周血Treg细胞水平升高,Ⅱ期+Ⅲ期乳腺癌患者外周血Treg细胞表达为(8.15±1.28)％,显著高于Ⅰ期患者[(6.39±0.81)％,P＜0.05]和健康志愿者[(4.01±1.05)％,P＜0.05].结论 Treg细胞在乳腺癌患者外周血和肿瘤组织的高表达,可能是肿瘤长期免疫逃逸的重要原因,其外周血数量与乳腺癌进展密切相关,越晚期表达水平越高.     

梗阻性大肠癌患者术前外周血细胞免疫水平检测及其临床意义

为观察梗阻性因素对大肠癌患者术前外周血细胞免疫水平的影响,探讨其对一期切除吻合术式选择的影响,我们使用流式细胞仪对21例梗阻性大肠癌患者、72例非梗阻性大肠癌患者术前3d内外周血T淋巴细胞亚群、自然杀伤（NK）细胞活性进行检测,并选取同期15名健康志愿者作为对照,进行对比分析。结果显示,与对照组相比,梗阻性大肠癌组和非梗阻性大肠癌组外周血CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋比值及NK细胞显著减少（P〈0．01）,CD8^＋细胞增多（P〈0．01）;但梗阻性大肠癌组T细胞亚群和NK细胞与非梗阻性大肠癌组相比,差异无统计学意义（P〉0．05）。结果表明,单从细胞免疫角度进行考虑,梗阻性因素并不影响对大肠癌患者行一期切除吻合术式的选择。     

反复自然流产患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的检测

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)在反复自然流产发病机制中的作用。方法:应用流式细胞术检测29例原因不明的反复自然流产妇女(URSA组)和20例正常妊娠妇女(正常对照组)外周血中CD4+CD25+Tr的比例。结果:URSA组外周血中CD4+CD25brightTr百分率[(1.98±0.96)%]显著低于正常对照组[(3.21±1.25)%,P<0.05],而2组间CD4+CD25+总百分率、CD4+CD25dim细胞百分率以及CD4+CD25bright/CD4+比值均无显著性差异(P均>0.05)。结论:URSA的发生可能与患者CD4+CD25brightTr比例下降有关,CD4+CD25brightTr在母胎免疫耐受中发挥重要作用。     

特发性膜性肾病患者外周血滤泡辅助性T细胞的表达特点及临床意义

目的 探讨滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells,Tfh)及其亚型在特发性膜性肾病患者外周血表达的特点,Tfh细胞与特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)免疫紊乱的关系及IMN患者Tfh细胞表达异常的临床意义。方法 纳入2020年1月至2020年12月就诊于新疆维吾尔自治区人民医院肾脏病科的新发IMN患者41例,定为病例组;并纳入同期于新疆维吾尔自治区人民医院体检中心进行健康体检的健康志愿者30名,定为健康对照组。流式细胞法检测两组外周血Tfh细胞及其两个亚群[诱导性协同共刺激分子阳性Tfh细胞(inducible synergistic co-stimulation molecules positive Tfh cell,ICOS⁺Tfh)和程序性死亡受体1阳性Tfh细胞(programmed cell death protein 1 positive Tfh cell,PD-1⁺Tfh)],并计算ICOS⁺/PD-1⁺     

流式细胞术检测甲状腺癌患者外周血T细胞亚群及其与临床病理的关系

目的 探讨应用流式细胞术检测甲状腺癌患者细胞免疫功能的方法及其与临床病理的关系.方法 应用三色免疫荧光流式细胞仪测定25例甲状腺癌患者及10例甲状腺良性肿瘤对照者外周血T细胞亚群CD4+CD25+Treg/CD4+Treg比值.结果 甲状腺癌患者外周血中CD4+CD25+/CD4+(%)为72.62±3.16,良性肿瘤对照组为43.36±3.04,差异有统计学意义(P＜0.01),甲状腺癌患者外周血中CD4+CD25+/CD8+为0.70±0.08,良性肿瘤对照组为0.43±0.05,甲状腺癌中的升高更明显(P＜0.05).甲状腺癌外周血中的CD4+CD25+Treg细胞所占比值与甲状腺癌患者的年龄、性别、肿瘤的位置、大小、病理类型、临床分期无明显相关(P＞0.05).结论 甲状腺癌患者外周血中CD4+CD25+Treg增多.CD4+CD25+Treg与CD4+T细胞的比例亦升高.甲状腺癌患者外周血中CD4+CD25+Treg在甲状腺癌的早期即已经升高.     

乙型肝炎肝硬化并发细菌感染患者外周血调节性T细胞动态变化及临床意义

目的探讨乙型肝炎肝硬化失代偿期并发细菌感染患者调节性T（Treg）细胞比例及活性的变化情况。方法选取2009年1月-2011年12月武汉大学人民医院30例乙型肝炎肝硬化失代偿期并发细菌感染患者,20例乙型肝炎肝硬化失代偿期无细菌感染患者及10名健康对照者,应用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）。应用流式细胞术检测各组患者PBMC中CD4^＋CD25^＋ CD127^low Treg细胞占CD4^＋细胞的比例。通过单向混合淋巴细胞反应（MLR）,观察从各组患者PBMC中分离的CD4^＋CD25^＋CD127^low Treg细胞抑制淋巴细胞增殖的能力变化。采用One—way ANOVA及t检验进行统计学分析。结果乙型肝炎肝硬化失代偿期并发细菌感染患者PBMC中Treg细胞占CD4^＋细胞的比例明显低于乙型肝炎肝硬化失代偿期无细菌感染患者[（4．07±1．18）％w．（9．74±3．00）％,t=9．35,P〈0．01]。加入乙型肝炎肝硬化失代偿期并发细菌感染患者分离得到的Treg细胞的MLR,Treg细胞抑制同源性PBMC增殖能力被明显削弱,cpm=（22．79±4．94）×10^3,与乙型肝炎肝硬化失代偿期无细菌感染患者以及健康对照者比较差异均有统计学意义[cpm=（6．43±1．19）×10^3和（5．96±1．25）×10^3,t=16．09和16．51,P均〈0．01]。结论乙型肝炎肝硬化失代偿期并发细菌感染患者存在Treg细胞数量及活性下降。     

关节置换患者外周血调节T细胞水平变化及其临床意义

目的探讨调节性T细胞(Treg)与关节置换假体植入的关系及临床意义。方法 2009年1月至2009年6月将人工髋关节置换手术患者及同期无假体植入的关节镜手术患者分为两组,用流式细胞仪检测术前及术后3 d外周血Treg水平并进行统计学分析。结果关节置换组术前外周血中Treg的水平为(2.99±1.33),术后为(4.66±1.96),两者比较差异有统计学意义(P0.01);非假体植入组术前为(3.36±1.61),术后为(3.47±1.83),两者比较差异无统计学意义(P0.05);术后关节置换组与非假体植入组对比,两组间Treg水平的差异有统计学意义(P0.01)。结论假体植入体内可使患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平显著升高,提示关节置换假体感染引起的免疫反应与单纯组织感染时的免疫反应不同,T细胞能否成为假体感染的病情进展及疗效评估的指标有待进一步研究。     

胃癌患者外周血调节性T细胞密度的临床意义及预后价值研究

目的 了解胃癌患者外周血调节性T细胞（Treg）密度与患者临床病理特征及术后预后的关系.方法 使用流式细胞计数法测定一组接受根治性手术的胃癌患者（n=75）及健康对照组（n=25）外周血中CD4＋ CD25＋ FoxP3＋的Treg密度,比较两组患者Treg的平均水平,并分析Treg密度与胃癌患者的临床病理特征及预后的关系.结果 胃癌患者外周血Treg平均密度显著高于对照组（P =0.007）.与Treg低密度的患者相比,高密度的患者肿瘤平均直径较大（P=0.013）、TNM分期更高（P =0.029）,其术后复发率较高（P =0.029）、生存时间较短（P =0.025）.结论 胃癌患者外周血Treg密度显著增加,且提示预后不佳.     

肝癌患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化及其意义

目的 探讨应用流式细胞术检测肝癌患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化及意义.方法 应用三色免疫荧光流式细胞仪测定37例肝癌患者及30例肝硬化患者外周血T细胞亚群CD4~+CD25~+/CD~+比值.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血中转化生长因子β1(TGF-B1)的表达水平.结果 肝癌患者外周血CD4~+CD25~+/CD4~+比值较肝硬化患者显著增高,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);肝癌患者外周血中CD4~+CD25~+T细胞水平与肝癌原发肿瘤的大小、TGF-βl呈正相关(P<0.05).结论 肝癌患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞增多,对肝癌患者具有免疫抑制作用.     

大鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离及功能鉴定

目的：研究利用免疫磁珠分选法稳定分离正常大鼠脾脏CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的方法。方法：采用免疫磁珠两步法分离大鼠脾组织CD4^＋CD25^＋T细胞。首先采用藻红蛋白（PE）标记的抗CD25抗体和抗PE多功能磁珠试剂盒阳性分选CD25^＋T细胞,再用抗异硫氰酸荧光素（FITC）标记抗体和抗IgG磁珠阳性分选获得CD4^＋CD25^＋T细胞。分离后的细胞经流式细胞仪检测分离纯度,台盼蓝染色检测细胞存活率,体外增殖实验检测其对CD4^＋CD25^-T细胞的免疫抑制作用。结果：两次阳性分选后获得的CD4^＋CD25^＋T细胞纯度为（90.4±1.6）%,细胞存活率为（92.6±2.4）%。体外增殖实验表明,CD4^＋CD25^＋T细胞能明显抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖（P〈0.01）。结论：采用免疫磁珠法两次阳性分选,可稳定地获得纯度理想并有免疫抑制功能的大鼠CD4^＋CD25^＋T细胞。     

不同分期前列腺癌患者外周血CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的变化及与胰岛素抵抗的相关性

目的 :观察不同分期前列腺癌患者外周血单个核细胞CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的变化及与胰岛素抵抗的关系。方法:采用流式细胞术检测62例前列腺癌患者(患者组,临床TNM分期Ⅰ期5例、Ⅱ期16例、Ⅲ期21例、Ⅳ期20例)外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数目,计算CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的百分率;并检测其空腹胰岛素及空腹血糖水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用ELISA法测定外周血胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平,分析CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与胰岛素抵抗的相关性,并与42例健康体检者进行对照。结果:与健康对照组相比,前列腺癌患者HOMAIR明显升高(6.68±1.66 vs 3.68±1.42),IGF-1水平明显下降[(96.39±21.21)ng/ml vs(164.56±30.58)ng/ml],PBMC CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T淋巴细胞的百分率[(13.88±0.96)%vs(5.33±0.65)%]及CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对值[(3.55±0.29)×107vs(1.99±0.78)×107]明显升高(P0.05,P0.01)。患者PBMC CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T淋巴细胞的百分率及CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对数﹑HOMA-IR均随TNM分期逐渐加重而增加,IGF-1逐渐下降;相关性分析表明:CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T及CD4+CD25+Foxp3+Treg绝对数均与HOMA-IR呈明显正相关(r分别为0.689、0.722,P0.01),与IGF-1呈明显负相关(r分别为-0.896、-0.747,P0.01)。结论:前列腺癌患者存在不同程度的胰岛素抵抗,且随着疾病程度的加重,外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数目和比例及胰岛素抵抗逐渐加重;CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞可能通过调节胰岛素抵抗参与其形成和发展。     

胃癌患者外周血调节性T细胞的多种细胞因子水平的检测及其意义

目的探讨细胞因子在CD4^＋CD25^＋调节性T细胞免疫抑制机制中的作用，观察胃癌患者外周血中的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及其效应性T细胞CD4^＋CD25^-T细胞产生具有不同生物活性的细胞因子的水平。方法采用免疫磁珠分选方法分离胃癌患者外周血中的CD4^＋CD25^＋T细胞与CD4^＋CD25^-T细胞后，将CD4^＋CD25^＋T细胞与效应性T细胞CD4^＋CD25^-T细胞在体外分别单独培养及按不同比例共同培养后，再用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测单独及混合培养时细胞因子干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-10及转化生长因子（TGF）-β分泌的水平。结果健康对照及胃癌患者CD4^＋CD25^＋T细胞分泌抑制性细胞因子IL-10、TGF-β均显著高于CD4^＋CD25^-T细胞，而分泌细胞因子IFN-γ均显著低于CD4^＋CD25^-T细胞（P〈0．01）。CD4^＋CD25^＋T细胞在体外可明显抑制CD4^＋CD25^-T细胞产生IFN-γ的能力，且这种抑制能力呈效靶比关系（P〈0．01）；但CD4^＋CD25^＋T细胞与效应性T细胞CD4^＋CD25^-T细胞在体外共培养对IL-10及TGF-β的分泌无显著影响（P〉0．01）。结论CD4^＋CD25^＋调节性T在体外可能通过细胞因子的调节发挥对效应性T细胞的抑制作用。     

肝癌病人外周血中CD4+CD25+FOXP3+调节性T淋巴细胞表达水平的临床研究

目的 了解CD4+CD25+FOXP3+T调节性T细胞在肝癌病人外周血中的表达水平并探讨其临床意义.方法 应用流式细胞术测定18例肝癌病人外周血CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞百分比,并与26例l临床对照者和24例健康对照者进行比较.结果 肝癌病人外周血中CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞百分比(4.25%±3.98%)明显高于临床对照组(1.34%±1.14%)及健康对照组(1.29%±0.95%)(P＜0.01),而两个对照组之间并无显著性差异(P＞0.05).CD4+CD25+FOXP3+T细胞在肝癌病人外周血所占CD4+T细胞比率(2.94%±0.91%)也较临床对照组(0.76%±0.34%)及健康对照组(0.81%±0.29%)显著升高(P＜0.001),且升高幅度强于CD4+CD25+T细胞水平,两个对照组之间并无显著性差异(P＞0.05).结论 CD4+CD25+FOXP3+T细胞是更为准确的调节性T细胞,其在肝癌病人外周血中表达水平明显升高,检测CD4+CD25+FOXP3+T水平对肝癌的预防治疗具有重要临床意义.     

乳腺癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平的检测及意义

目的：探讨乳腺癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（Treg）水平检测的意义。 方法：流式细胞术检测74例乳腺癌患者与30例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞百分比,分析CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平与乳腺癌患者临床病理特征及相关免疫组化指标的关系。 结果：乳腺癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞的百分比高于健康对照者[（9.15± 2.24）% vs.（2.29±1.36）%],差异有统计学意义（P<0.05）。统计分析显示,乳腺癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平与肿瘤组织学分级、淋巴结转移、pTNM分期以及HER-2、pS2、nm23的表达有关（均P<0.05）,而与肿瘤大小、病理类型以及雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、p53、Ki-67表达无关（均P>0.05）。进一步相关性分析显示,CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平与肿瘤组织学分级、淋巴结转移数、pTNM分期、HER-2的表达呈正相关（r=0.583,r=0.333,r=0.919,r=0.604,均P<0.05）而与pS2、nm23表达呈负相关（r=-0.229,r=-0.401,均P<0.05）。 结论：乳腺癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞水平升高,并与与乳腺癌的进展、转移密切相关,对其检测可能有助于患者预后及治疗效果的评估。

     

兔肺VX2肿瘤手术切除模型中外周血CD4+CD25+调节性T细胞的变化和意义

目的 观察外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平在兔肺VX2肿瘤手术切除模型中的变化.方法 将30只纯种新西兰白兔随机分成3组.A组:建立兔肺VX2肿瘤手术切除模型;B组:建立兔肺VX2肿瘤模型,不进行肿瘤切除术;C组:不建立兔肺VX2肿瘤模型,仅行兔肺叶切除术.3组实验兔在相同的时间点抽取外周血,经流式细胞仪分析测定外周血CD4+CD25+调节性T细胞的水平.结果 兔在种植肿瘤后外周血CD4+CD25+调节性T细胞的水平增高(P＜0.01);手术切除兔肺VX2肿瘤后15 d和30 d,实验兔外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平较术前下降(P＜0.05),而不进行肿瘤切除的实验兔外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平持续增高(P＜O.05).结论 外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平升高可能与肿瘤的发生发展相关;手术切除肿瘤可减少肿瘤负荷,有利于机体抗肿瘤免疫功能的恢复.

Abstract：

Objective To analyze the change of CD4+ CD25 + regulatory T cells in peripheral blood in rabbit' s lung VX2 tumor resection model. Methods Thirty New Zealand rabbits were divided into 3 groups: group A, 10 rabbits with lung VX2 tumor receiving lobectomy; group B, 10 rabbits with lung VX2 tumor receiving no operation; group C, 10 rabbits without lung VX2 tumor receiving lobectomy only.The peripheral blood of rabbits was drawn. All the samples were analyzed by flow cytometry (FCM). Results The proportion of the CD4 + CD25 + regulatory T cells in peripheral blood of the rabbits was increased after the implantion of VX2 tumor ( P ＜ 0. 01 ), that in the rabbits with VX2 lung tumor receiving tumorectomy was obviously decreased at the 15th and 30th day after the operation (P ＜ 0. 05 ), but that in the rabbits with VX2 lung tumor receiving no operation did not have the same change ( P ＜ 0. 05 ). Conclusion The increase of the proportion of CD4 + CD25 + regulatory T cells in peripheral blood is related to immunosuppression. The functional disorder of immune system recovers in a certain extent after resection of the tumor.