洛铂联合伊立替康治疗广泛期小细胞肺癌的临床观察

目的: 评价洛铂联合伊立替康治疗广泛期小细胞肺癌的临床疗效和安全性。方法: 洛铂 35 mg/m²第1天,伊立替康 80 mg/m²第1、8天,每 21 d 为一周期,每2个周期结束复查影像学资料行疗效评价,治疗既往未接受过化疗的广泛期小细胞肺癌25例。结果: 25例患者均可评价疗效,完全缓解(CR)1例,部分缓解(PR)9例,稳定(SD)7例,进展(PD)8例。客观缓解率(ORR) 40%, 疾病控制率(DCR) 68%, 中位无进展生存期(PFS)5.3 个月,中位生存期(OS) 7.6 个月,主要毒副反应为血液学毒性及消化道反应。结论: 洛铂联合伊立替康方案作为广泛期SCLC化疗有较好的疗效,毒副反应可以耐受。     

白英提取物诱导人肝癌BEL-7404 细胞凋亡作用

目的 探讨中药白英提取物对肝癌BEL-7404 细胞系的凋亡作用。方法 用不同浓度的白英提取物处理肝癌BEL-7404 细胞, 通过观察细胞形态、DNA凝胶电泳法研究白英提取物诱导肝癌BEL-7404 细胞产生凋亡现象。结果 光学显微镜下可见细胞呈凋亡特征性变化, 凝胶电泳可见细胞DNA 有规律断裂形成梯形图谱。结论 白英可诱导肝癌BEL-7404 细胞产生凋亡。     

高通量低能量激光照射诱导人肺腺癌细胞凋亡过程中survivin的抗凋亡效应的研究

目的: 近年来的研究工作表明高通量低能量激光照射(high fluence low-power laser irradiation,HF-LPLI)能诱导细胞凋亡,但survivin是否参与此过程以及它的调节作用尚不清楚。因此,文中主要研究在HF-LPLI处理下,survivin在活细胞中的动态分布以及表达量的变化。方法: 应用荧光探针GFP-survivin,在人肺腺癌细胞（human lung adenocarcinoma cells,ASTC-α-1）中实时监测HF-LPLI处理下GFP-survivin的动态行为以及表达量的变化。结果: 实验结果表明,通过240 J/cm2的氦氖激光照射,survivin在处理后3 h进入细胞核,并且survivin在细胞内的表达量呈持续升高的趋势。结论: 实验结果预示,HF-LPI处理可能调节了肿瘤细胞survivin的表达并且参与调控了某些相关的细胞信号通路蛋白,比如p53、Akt等。进一步的研究将探讨在HF-LPLI处理下,survivin具体调控的转录因子以及调控机制。     

伊立替康与拓扑替康分别联合奈达铂治疗小细胞肺癌的疗效及安全性比较

目的: 本研究旨在比较伊立替康（CPT）与拓扑替康（TPT）分别联合奈达铂（NDP）治疗广泛期小细胞肺癌的临床疗效及安全性。 方法: 前瞻性分析了89例广泛期小细胞肺癌患者,其中44例CPT+NDP组,45例TPT+NDP组,两组均以3周为1个周期,至少化疗两个周期,CPT+NDP组第1天静脉注射奈达铂80 mg/m2,第1、8、15天静脉注射伊立替康60 mg/m2;TPT+NDP组第1天静脉注射奈达铂80 mg/m2,第1～5天静脉注射拓扑替康1.2 mg/m2,比较两组的临床有效率（RR）,疾病控制率（DCR）,中位总生存期（OS）,中位无进展生存期（OS）和不良反应的差异。结果: 两组的RR分别为36.36%和37.78%,DCR分别为72.73%和66.67%,无统计学差异（P>0.05）,表明两组的近期疗效相似。两组的中位无进展生存期分别为6.5个月和5.8个月,中位总生存期分别为12.0个月和11.2个月,两组无统计学差异（P>0.05）,表明两组远期疗效相似。CPT+NDP组腹泻和中性粒细胞减少的不良反应重于TPT+NDP组(P<0.05),而TPT+NDP组白细胞减少和血小板减少的不良反应重于CPT+NDP组（P<0.05）。结论: CPT+NDP组及TPT+NDP组治疗广泛期小细胞肺癌的近期、远期疗效相似,前者不良反应以腹泻和中性粒细胞减少为主,后者不良反应以白细胞和血小板减少为主,但均能耐受,可根据患者身体具体情况选择药物。     

NS-398 诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的: 研究选择性环氧化酶-2(COX-2) 抑制剂NS-398 对人肝癌细胞HepG₂ 凋亡的影响, 及其相关蛋白Bcl-2 在细胞凋亡中的作用。方法: 通过体外细胞培养, 应用荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪观察NS-398 对HepG₂ 的凋亡诱导作用, 应用免疫细胞化学法观察Bcl-2 在人肝癌细胞HepG₂ 凋亡中的表达。结果: NS-398 处理HepG₂ 细胞后, 电镜下可见到细胞核固缩、染色质凝集成新月型紧靠核膜周边,核碎裂、染色质片断化等典型的细胞凋亡形态变化。荧光显微镜及流式细胞检测则未见凋亡征象。免疫细胞化学分析显示, NS-398 处理后的HepG₂ 细胞,其Bcl-2 表达较对照组明显下降。结论: COX-2 选择性抑制剂NS-398 对人肝癌HepG₂ 细胞有显著的凋亡诱导作用;抗凋亡基因Bcl-2 在NS-398 诱导的HepG₂ 细胞凋亡中有重要的调控作用。     

地塞米松对顺铂诱导的HepG2细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响

目的: 探讨地塞米松对顺铂诱导HepG2细胞凋亡的影响,并观察Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。方法: HepG2细胞与顺铂及不同浓度的地塞米松共培养,RT-PCR检测Bcl-2、Caspase-3的mRNA表达,Western blot检测Bcl-2、Caspase-3蛋白表达,流式细胞术(FACS)检测各组HepG2细胞的凋亡情况。结果: 随着地塞米松浓度的增加,HepG2细胞中Bcl-2蛋白表达量升高,Caspase-3蛋白表达量下降。同时细胞凋亡率降低。结论: 地塞米松部分通过Bcl-2途径抑制肝癌细胞的凋亡,而Caspase-3又在调控细胞凋亡中起重要作用。     

TO901317促进人乳腺癌细胞凋亡的研究

目的: 研究肝X受体激动剂TO901317对人乳腺癌细胞凋亡的影响。方法: 不同浓度（0, 10, 20, 40 μmol/L）TO901317处理MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞不同时间（0, 12, 24, 48 h）,用MTT法检测细胞活力,Hoechst 33342染色及流式Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot进一步检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase 3和cleaved-Caspase 3等的表达。 结果: 随着TO901317处理浓度的增加和时间的延长,对细胞活力的抑制作用逐渐增强,凋亡现象逐渐明显。进一步通过Western blot检测发现,TO901317可下调Bcl-2蛋白表达,促使凋亡蛋白Bax和cleaved-Caspase 3表达增多,进一步证实TO901317促进两种乳腺癌细胞凋亡。 结论: TO901317能促进MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞凋亡。     

As2O3 诱导K562细胞凋亡过程中细胞表面电荷变化的研究

目的:研究三氧化二砷(As₂O₃) 诱导K₅₆₂ 细胞凋亡时细胞表面电荷的变化, 阐明As₂O₃ 诱导K₅₆₂细胞凋亡的可能机制, 为As₂O₃ 在临床上的应用提供理论依据。方法:应用细胞电泳仪检测As₂O₃ 诱导K₅₆₂细胞凋亡中细胞电泳率的变化。通过细胞增殖、活力检测, 形态学观察, 亚G1 期细胞含量和DNA 凝胶电泳等鉴定细胞凋亡。结果:1.0 ～ 20 μmol·L^-1As₂O₃ 作用于K₅₆₂细胞, 在细胞形态、DNA 凝胶电泳、FCM 显示出典型的细胞凋亡特征之前, 试验组细胞表面电荷已在1.6 h 左右开始下降, 6 h 内降低最明显, 6 h 后虽有下降, 但幅度明显减弱。与对照组比较, 低于1.0 μmol·L^-1 的As₂O₃ 对细胞表面电荷影响不大。结论:细胞表面电荷的下降是K₅₆₂ 细胞凋亡的早期事件。细胞表面电荷的下降有一定的时间范围, 超过此范围, 细胞表面电荷下降趋向无限大。     

眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导人胃癌细胞MGC-803细胞凋亡的实验研究

目的: 研究眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(NA-LAAO)对人胃癌细胞MGC-803的细胞毒性、诱导凋亡作用及可能机制。方法: 采用CCK-8法测定细胞毒性;采用DNA倍体分析和Annexin V/碘化丙啶染色测定细胞凋亡;采用发色底物法测定Caspase-3酶活性;采用Western-blot方法测定聚二磷酸腺苷核糖多聚酸-1(PARP-1)切割。结果: NA-LAAO可抑制MGC-803细胞增殖,6、12、24 h 的IC₅₀分别为(2.48±0.41) 、(1.74±0.27) 和(0.83±0.19) mg/L;NA-LAAO可使细胞DNA分布出现亚二倍体凋亡峰,并可促使细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻;NA-LAAO可激活Caspase-3并可促使其底物PARP-1降解。结论: NA-LAAO可能通过激活Caspase-3这一分子机制而诱导细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖。     

阿司匹林诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及抑制增殖的机制研究

目的: 探讨阿司匹林对于宫颈癌Hela细胞的凋亡诱导作用以及增殖抑制的相关机制。方法: 通过离体培养宫颈癌Hela细胞,以不同剂量的阿司匹林对其增殖过程进行干预,利用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒检测Hela细胞的凋亡情况。同时,采用Western-blot法检测NF-κB p65、Bcl-2以及Bax蛋白的表达情况。最后,通过碘化丙啶（PI）染色测定宫颈癌Hela细胞周期分布情况。结果: 阿司匹林1.0、5.0、10.0 mmol/L剂量组能够显著增加宫颈癌Hela细胞的凋亡率,其S期、G2/M期细胞所占比例明显减少,同时G0、G1期细胞分布明显提高。NF-κB p65蛋白、Bcl-2蛋白表达水平显著降低,其下降程度与所接受阿司匹林剂量有明显相关性,同时Bax蛋白表达水平提高。 结论: 阿司匹林能够通过抑制NF-κB p65、Bcl-2蛋白表达水平并提高Bax蛋白表达水平,干预相关细胞周期分布最终诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡,其诱导机制的强弱程度呈现明显的剂量相关性。     

新型格列酮类化合物ANY2对HepG2细胞糖代谢的影响

目的: 体外实验研究新型格列酮类化合物ANY₂对糖代谢的影响。方法: 采用高浓度胰岛素持续作用肝癌细胞株( HepG₂)24 h 建立胰岛素抵抗模型( IR-HepG₂),并观察ANY₂对细胞葡萄糖消耗(GC) 、对细胞内糖原含量、糖异生及糖酵解作用的影响。结果: ANY₂能显著增加 IR-HepG₂在高、中、低糖条件下的葡萄糖消耗, 并呈明显的剂量依赖性;增加 IR-HepG₂细胞内糖原含量,但与模型组相比,仅在高浓度差异有统计学意义;减少IR-HepG2 细胞以乳酸为底物的糖异生量;提高糖酵解作用中IR-HepG₂细胞乳酸的生成和细胞内丙酮酸激酶(PK) 活力。结论: ANY₂可显著改善IR-HepG₂ 细胞的糖代谢作用。     

熊果酸抑制HepG2中C-反应蛋白的异常表达及其对HUVECs的损伤

目的: 研究不同剂量的熊果酸(UA)对IL-6诱导的HepG2细胞中C-反应蛋白(CRP)异常表达的抑制作用以及对CRP所致人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法: IL-6(30 ng/mL)、UA(6.5、12.5、25 μmol/L)与IL-6(30 ng/mL)共同作用于HepG2细胞48 h,分别用MTT法、Western blot法及RT-PCR法检测各组细胞活力、CRP蛋白及mRNA表达情况。CRP(25 μg/mL)、UA(5,10,20 μmol/L)与CRP(25 μg/mL)共同作用于HUVECs 24 h,分别用MTT法、Western blot法及RT-PCR法检测各组细胞增殖、VCAM-1和LOX-1的蛋白及mRNA表达。结果: UA能显著抑制IL-6诱导的HUVECs细胞活力下降及细胞中CRP蛋白与mRNA的表达升高;UA显著抑制CRP引起的内皮细胞增殖,并且在mRNA及蛋白水平均能显著抑制CRP诱导的HUVECs异常高表达VCAM-1及LOX-1。结论: UA可通过抑制肝脏合成炎症因子CRP而降低血液中CRP浓度,并降低CRP等炎症因子对内皮细胞的损伤等途径从而发挥抗心肌缺血及动脉粥样硬化等心血管疾病的作用。     

盐酸表柔比星联合奥沙利铂对肝癌HepG2细胞凋亡的抑制作用

目的: 探讨盐酸表柔比星联合奥沙利铂对肝癌细胞HepG2的抑制作用。方法: 盐酸表柔比星和奥沙利铂单独及联合给药用MTT法测定HepG2细胞的增殖,用Hoechst 33258染色法检测细胞核凋亡情况,用DNA ladder检测DNA的裂解情况。结果: 人肝癌HepG2细胞经奥沙利铂、盐酸表柔比星以及两者联合作用后,在不同时间、不同浓度均能出现细胞抑制作用,并且均呈现剂量-时间依赖效应,与单药组相比,联合用药组抑制率明显增高,q值大部分为 0.85～1.15,呈现明显的相加作用,在(35+5) μg/mL 组作用 24 h,(20+2) μg/mL 组作用48、72 h 时两组实验组q值＜0.85,出现拮抗作用。(25+3) μg/mL 组作用 24 h 为最佳作用时间和作用浓度。结论: 奥沙利铂及盐酸表柔比星对肝癌HepG2细胞有增殖抑制及促凋亡作用,两药联合作用表现为相加作用,其机制需进一步研究。     

CYP2C19基因多态性真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立

目的: 构建细胞色素P450 CYP2C19^*1、^*2、^*3真核表达载体,并分别转染人肝癌细胞(HepG2),建立高表达目的基因的稳定转染细胞系。方法: 应用化学合成法合成CYP2C19^*1(野生型)序列,再以此为模板,体外定点突变PCR法构建^*2、^*3(突变型)。DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.l(-),经菌落PCR、酶切以及测序鉴定后,脂质体转染法转染HepG2细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,RT-PCR、Western Blot 分别检测CYP2C19^*1、^*2、^*3 mRNA以及蛋白的表达。结果: 成功构建了pcDNA3.1(-)-CYP2C19^*1、^*2、^*3表达质粒,并建立了相应稳定转染细胞系。进一步的RT-PCR和Western Blot检测结果表明,目的基因均得到了稳定的表达。结论: 人CYP2C19^*1、^*2、^*3稳定表达细胞系为研究创新药物或新药先导化合物临床前代谢性质的筛选和预测以及为临床潜在药物相互作用提供了有效实验平台。     

C2-神经酰胺诱导大鼠脑胶质瘤细胞C6 的早期凋亡作用

目的: 研究外源性C2-神经酰胺对大鼠脑胶质瘤细胞C6活力的抑制作用以及早期凋亡诱导作用。方法: 采用MTT 法测定C2-神经酰胺对C6 细胞活力的影响;倒置荧光显微系统观察细胞形态变化;AnnexinⅤ PI 双染色流式细胞术对细胞早期凋亡进行定量分析。结果: C2-神经酰胺可显著抑制C6 细胞的活力, IC₅₀为2.2×10^-5 mol·L^-1;荧光染色可见核浓染等细胞凋亡特征形态改变;流式细胞术分析表明C2-神经酰胺可诱导C6 细胞发生早期凋亡作用,且凋亡百分率呈时间及浓度依赖性, C2-神经酰胺2×10^-5 mol·L^-1处理24 h 后平均早期凋亡率高达49.3 %。结论: C2-神经酰胺主要通过诱导早期细胞凋亡对大鼠脑胶质瘤C6 细胞发挥细胞毒作用, 提高神经酰胺水平有望成为肿瘤化疗的新途径。     

基于超疏水和卤代过氧化物酶活性协同防污的氧化铈纳米涂层研究

目的 将特定防污功能的纳米粒子引入到环氧复合涂料中,制备具有超疏水和卤代过氧化物酶活性协同防污的氧化铈纳米涂层。方法 以环氧树脂和羟基封端的聚二甲基硅氧烷为基质,球形氧化铈（CeO₂）纳米颗粒为填料,采用溶液共混的制备方式,通过空气喷涂法构建氧化铈超疏水纳米涂层。借助X射线衍射仪、扫描电子显微镜、接触角测试仪等设备对涂层进行表征,并以典型海洋污损生物芽孢杆菌和三角褐指藻为研究对象分析涂层的防污性能。结果 当涂层中纳米氧化铈的质量分数为55%时,氧化铈纳米涂层具有超疏水特性,接触角达到153°,接触角滞后低至3°。在防污性能方面,相比于环氧复合涂层,超疏水氧化铈纳米涂层对三角褐指藻和芽孢杆菌的防污率分别为97.5%和97.3%。在存在过氧化氢和溴化铵的条件下,失去疏水性能的氧化铈涂层通过卤代过氧化物酶的活性减少了96.2%的三角褐指藻和96.8%的芽孢杆菌贴附。结论 该体系所构建的纳米涂层在初期可以利用其超疏水性能防污,后期利用其卤代过氧化物酶的活性防污,实现防污的长效性。     

槐米中槲皮素提纯、鉴定以及诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用

目的 研究从槐米中槲皮素(Quercetin,Que)提取、鉴定和对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制以及诱导凋亡作用。方法 采用碱溶解酸沉淀法提纯槐米中槲皮素,并进行红外光谱分析;采用体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,用不同浓度槲皮素处理;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长抑制率;采用细胞凋亡DNA Ladder和FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞仪检测,槲皮素作用后MCF-7细胞凋亡情况。结果 不同浓度槲皮素对人乳腺癌MCF-7细胞有生长抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(P<0.05);10.0 mmol/L 槲皮素作用MCF-7细胞 2 d,DNA电泳出现特征性的凋亡条带;10.0 mmol/L 槲皮素处理MCF-7细胞 1 d、2 d 和 3 d,细胞凋亡率分别为(9.2±1.5)%、(30.0±11.8)%和(60.8±10.6)%。结论 用碱溶解酸沉淀法可从槐米中提纯槲皮素,提取的槲皮素对人乳腺癌MCF-7细胞有生长抑制和诱导凋亡作用。     

普罗布考通过调节肝癌细胞HepG2代谢重编程逆转Warburg效应抑制其转移和侵袭的机制研究

目的：研究普罗布考调节HepG2的代谢重编程逆转Warburg效应抑制其转移和侵袭的机制,为脂代谢调节药物的研究提供支持。方法：HepG2细胞体外培养后分为对照组（NC）、高剂量组（High）、中剂量组（Middle）和低剂量组（Low）,其中高、中、低剂量组的细胞分别使用100、50、10 μmol/L的普罗布考干预。CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期的变化,细胞划痕实验检测细胞转移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞中己糖激酶（HK）、丙酮酸激酶（PK）、乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸果糖激酶（PFKP）、丙酮酸脱氢酶（PDH）以及柠檬酸合酶（CS）的表达变化,试剂盒检测培养基中乳酸的含量,ECAR检测细胞糖酵解的压力,929 oxygen system检测细胞对于氧气的吸收水平检测。结果：普罗布考可以抑制HepG2的增殖,且有剂量依赖,还可以阻滞细胞周期。普罗布考可以提高HK、PK、LDH、PFKP以及PDH和CS的表达,增加耗氧量减少乳酸的产生,促进细胞的三羧酸循环。普罗布考还可以抑制HepG2的侵袭和迁移能力。结论：普罗布考可以调节肝癌细胞HepG2的代谢重编程、逆转Warburg效应从而抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。