TNFa诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的：探索肿瘤坏死因子a（TNFa）诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法 用细胞体外培养方法，以TNFa不同剂量，不同时间作用于入大肠癌Lovo细胞，经Hoechst33258荧光染色，光镜观察细胞的形态改变；DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳，检测DNA断裂情况。结果：TNFal×10^5μ/ml作用12-48h和1×10^4-1×10^5μ/ml作用45h，Lovo细胞出现逐渐明显的凋亡形态学改变，1×10^5μ/ml作用48h，DNA电泳出现显示凋亡特性的梯形条带。结论 TNFa能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡，并存在时间与剂量效应。     

TNFα诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的:探索肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细胞体外培养方法,以TNFα不同剂量、不同时间作用于人大肠癌Lovo细胞,经Hoechst33258荧光染色,光镜观察细胞的形态改变;DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳,检测DNA断裂情况。结果:TNFα1×10~5μ/ml作用12—48h和1×10~4—1×10~5μ/ml作用48h,Lovo细胞出现逐渐明显的凋亡形态学改变;1×10~5μ/ml作用48h,DNA电泳出现显示凋亡特性的梯形条带。结论 TNFα能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡,并存在时间与剂量效应。     

TNFα诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的探索肿瘤坏死因子α(TNF_α)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细胞体外培养方法,以TNF_α不同剂量、不同时间作用于人大肠癌Lovo细胞,经Hoechsl 33258荧光染色,光镜观察细胞的形态改变;DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳,检则DNA断裂情况。结果TNFal×10~5μ/ml作用12-48h和J×10~4-1 x10~5μ/ml作用48h.Lovo细胞出现逐渐明显的凋亡形态学改变;1×10~5μ/ml作用48h.DNA电泳出现显示凋亡特性的梯形条带。结论TNF_α能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡,并存在时间与效果效应。     

辣椒素促进大肠癌细胞凋亡作用机制的研究

目的观察辣椒素对大肠癌细胞增殖和凋亡的作用,进一步了解其作用机制是否参与经典Wnt信号通路和(或)非经典Wnt信号通路。方法用免疫组化染色法显示大肠癌细胞Ls174是否表达COX-2、β-catenin、STAT3、AP-1。不同浓度梯度的辣椒素在不同时间点24 h、48 h、72 h作用于大肠癌细胞后,用MTT法观察其对大肠癌细胞增殖率的影响,同时用流式细胞仪检测其对大肠癌细胞凋亡率的影响。用荧光定量PCR仪分别检测基因COX-2、β-catenin、STAT3、AP-1 mRNA的表达量在辣椒素对其作用前后的变化。结果免疫组化染色法显示大肠癌细胞Ls174中,COX-2、β-catenin、STAT3、AP-1均呈阳性表达。辣椒素可下调COX-2和β-catenin mRNA的表达。200~400μmol/L辣椒素作用大肠癌细胞24~48 h后COX-2 mRNA下调为对照组的18.0%~89.0%,β-catenin mRNA下调为对照组的21.6%~81.9%,且下调幅度随辣椒素浓度的加大及作用时间的延长而增强。STAT3的表达在24~48 h内则增加了20.0%~100%。而AP-1的表达则无明显变化。MTT法检测显示其对细胞增殖的影响呈时间和浓度依赖。100~400μmol/L辣椒素作用细胞24 h,细胞增殖的抑制率由4.5%增至59.0%,延长至48 h后抑制率为65.0%~87.0%,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。流式细胞仪检测的细胞凋亡率随浓度及时间延长也呈现出依赖性,且细胞周期G1期由28.0%上调至40.0%,而S期则由58.0%下调至34.5%。结论辣椒素在抑制大肠癌细胞增殖的同时促进细胞的凋亡,其作用呈时间和浓度依赖。     

Fas基因的RNA抑制抗Alzheimer病细胞凋亡作用的研究

目的探讨Fas基因的RNA抑制对阿尔茨海默病(AD)的抗细胞凋亡作用。方法NGF诱导PC12细胞为类神经细胞。细胞随机分为对照组、模型组、GFP siRNA组;Fas siRNA组。对照组用完全培养液培养,其他三组细胞用Aβ25~35制作AD细胞模型。于制作模型前24 h进行转染。于造模后对Fas、Caspase-3及细胞凋亡率等指标进行检测。结果(1)模型组细胞凋亡率(49.33±18.93)明显高于对照组(4.05±0.67)(P<0.01),Fas siRNA组凋亡率(6.74±1.01)明显低于模型组(P<0.01)。(2)Fas、Caspase-3阳性率:模型组的Fas阳性率(41.65±9.67)、caspase-3阳性率(36.75±9.61)明显高于对照组(9.12±4.18,10.12±3.69)(P<0.01)。Fas siRNA组Fas阳性率(15.46±8.69)、caspase-3阳性率(19.13±6.75)明显低于模型组(P<0.01)。结论针对Fas的siRNA能有效地抑制AD细胞凋亡,对Aβ毒性作用下的神经细胞损伤有一定的保护作用。     

bax基因对大肠癌细胞株HT-29作用的实验研究

目的 探索用双重腺病毒载体介导bax基因大肠癌进行基因治疗。方法 双重腺病毒载体介导bax表达，相关显微镜、MTT比色法、流式细胞仪观察bax基因对HT－29的作用，Western Blot检测Bax蛋白的表达。结果 Ad/Gt-bax能有效地引起HT－29形态学的改变，当加入Ad/PGK-GV16后，该作用更为显著，呈典型的凋亡形态学特征 ，其生长抑制率及凋亡诱导率分别为57.4%和28.2%，与Ad/GT-bax组的29.2%和12.6%相比，差异有显著性（P＜0．05）。Ad/GT-bax与Ad/PGK-GV16同时应用能起Bax蛋白大量表达,而单用Ad/GT-Bax，则Bax蛋白表达量较低。结论 bax基因具有有效诱导人大肠癌细胞株HT－29凋亡的作用。     

针对caspase-3基因的RNA抑制对帕金森病细胞的抗凋亡作用

目的 探讨针对caspase-3基因的 RNA抑制对帕金森病细胞的抗凋亡作用.方法 NGF诱导PC12细胞为类神经细胞.细胞随机分为对照组、模型组、GFP siRNA组、caspase-3 siRNA组.对照组用完全培养液培养,其他3组细胞用6-羟基多巴胺制作帕金森病细胞模型.于制作模型前24 h进行转染.造模后对caspase-3及细胞凋亡率等指标进行检测.结果 (1)凋亡率:模型组细胞凋亡率[(65.36±10.10)%]明显高于对照组[(5.00±1.00)%],有显著性差异(P<0.01);caspase-3 siRNA组[(19.00±4.08)%]明显低于模型组(P<0.01).(2)caspase-3阳性率:模型组的caspase-3阳性率[(30.15±7.02)%]明显高于对照组[(8.20±2.45)%],差异有统计学意义(P<0.01);caspase-3 siRNA 组caspase-3阳性率[(12.00±2.90)%]明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 针对caspase-3的 siRNA能有效地抑制帕金森病细胞凋亡,对6-羟基多巴胺毒性作用下的神经细胞损伤有一定的保护作用.     

凋亡素基因对人结肠癌细胞作用的研究

目的探讨凋亡素基因的导人对人结肠癌细胞的影响。方法将凋亡素基因VP3克隆人真核表达载体pEGFP-C2，构建成重组质粒pEGFP-VP3。用脂质体转染法将pEGFP-C2和pEGFP—VP3分组分别转染人类结肠癌细胞（Lovo）和小鼠胚胎成纤维细胞（NIH3T3），通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在不同组细胞中的定位、表达及细胞的生长、凋亡情况，MTT法测定不同组细胞的生长曲线，并用AnnexinV—FITC流式细胞技术检测细胞的凋亡率。结果在Lovo／EGFP组和3T3／EGFP—VP3组细胞中，EGFP均匀分布于细胞中，细胞形态无明显变化，细胞凋亡率较非转染细胞组亦无明显增加。而在Lovo／EGFP-VP3组细胞中，EGFP-VP3以荧光颗粒形式集中在细胞核，并逐渐变粗，最后细胞碎裂成片状，流式细胞技术检测Lov0／EGFP-VP3组的细胞凋亡率明显高于其他对照组（P〈0．01）。结论pEGFP-VP3可诱导人类结肠癌细胞凋亡。     

细胞凋亡与大肠癌

对大肠癌的细胞凋亡情况及与凋亡调控的主要相关基因作一综述。     

艾灸对大肠癌作用的实验研究

艾灸治疗肿瘤已有报道,但其抗肿瘤机制的实验研究报道极少[1],为了揭示艾灸抗肿瘤作用及其机制,我们采用人结肠高分化腺癌SW-480细胞株的裸小鼠移植瘤模型,对艾灸的抑瘤作用及其机制作了初步研究,旨在为艾灸抗肿瘤的临床应用提供实验依据。1　材料与方法1.1　动物和饲养环境:第三军医大学实验动物中心提供的BALB/C无胸腺裸小鼠,鼠龄5～7周,体重(20±2)g,雌雄不拘,饲养于SPF环境中,实验时按无菌规则操作。1.2　肿瘤动物模型制作:癌株为人结肠腺癌细胞株SW-480,从传代裸小鼠皮下剥离癌体,剪成1mm×1mm×1mm癌块,套管针接种于裸小鼠右腋部…     

Livin基因沉默对大肠癌细胞凋亡和化疗敏感性的影响

目的 观察沉默Livin基因对大肠癌HT-29细胞凋亡和化疗敏感性的影响.方法 采用脂质体转染技术将化学合成的Livin siRNA转入HT-29细胞,RT-PCR和Western印迹法检测转染效果.选用5-氟尿嘧啶(5-FU)作用于转染和未转染的细胞,MTT检测各组细胞的增殖、流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果 si-Livin1转染组Livinα mRNA、Livinβ mRNA和Livin蛋白表达水平较其余干扰组和对照组显著降低(P<0.01).5-FU对HT-29细胞的生长抑制作用强于si-Livin1转染组(P<0.01),而si-Livin1+5-FU组对细胞的生长抑制率显著高于单独si-Livin1转染组和单独5-FU作用组(P<0.01).与空白对照组比较,si-Livin1转染可使细胞出现明显凋亡现象(P<0.01),5-FU对细胞的促凋亡作用强于si-Livin1转染组(P<0.01),si-Livin1+5-FU组的凋亡率显著高于单独si-Livin1转染组和单独5-FU作用组(P<0.01).结论 siRNA沉默Livin基因能够抑制HT-29细胞的生长,促其凋亡,提高5-FU的化疗敏感性.Livin基因有望成为大肠癌治疗的新靶点.     

抑制 RhoA 基因表达诱导乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨抑制RhoA基因表达诱导乳腺癌（ BC）细胞凋亡的作用。方法通过已建立的RhoA腺病毒载体系统,感染BC MCF -7细胞。经过细胞培养、病毒滴度等,将收集的样本分别用Western blot、RT-PCR技术检测RhoA 蛋白表达和基因表达变化;对感染Adsi RNA-RhoA的BC 细胞进行MTT检测及细胞内DNA片段化检测。结果腺病毒siRNA-RhoA感染BC细胞能明显抑制RhoA基因表达（抑制率为75．64％）,降低RhoA基因的mRNA转录水平69．44％。 MTT检测结果表明,感染腺病毒Adsi RNA-RhoA组的肿瘤细胞生长、增殖被明显抑制。 TUNEL检测显示,抑制RhoA基因表达能明显导致BC细胞凋亡。结论利用siRNA抑制BC细胞中RhoA基因表达,能诱导BC细胞凋亡。     

抗细胞凋亡基因及其与大肠癌关系的研究进展

大肠癌是常见的恶性肿瘤之一,近年来发病率有逐渐增高的趋势.凋亡的调节对人体组织保持内环境稳态及正常细胞形态至关重要,这一过程受到干扰将使细胞寿命无限延长或累积突变,有利于大肠癌的发生.大肠癌的发生与细胞凋亡的关系已经受到普遍的重视,通过对抗细胞凋亡基因及其与大肠癌关系的研究,对了解大肠癌发病机制有重要意义,在临床上可为大肠癌的诊断及治疗提供一些思路和方法.本文就几种重要的抗细胞凋亡基因及其与大肠癌关系的研究进展作简要综述.     

凋亡抑制基因的研究现状

自 1 993年首次成功地从杆状病毒株ＣｐＧＶ和ＯｐＭＮＰＶ中分离出病毒性凋亡抑制蛋白因子 (ｉｎ ｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｐｒｏｔｅｉｎｓ,ＩＡＰｓ)以来[1,2 ] ,ＩＡＰｓ正日益成为学术界内的一个研究热点。在ＩＡＰｓ被发现之前 ,凋亡和凋亡抑制在肿瘤发生、发展及转归中的作用已形成了共识 :诱导凋亡是放疗、化疗杀伤肿瘤细胞的共同途径 ,而抑制凋亡则是癌细胞的一个生物学共性。ＩＡＰｓ是一类抑制细胞程序性死亡 ,亦即调节凋亡的蛋白因子 ,广泛存在于各种恶性肿瘤细胞中。ＩＡＰｓ可分为病毒性和非病毒性两大类 ,它…     

姜黄素对人脑胶质瘤SHG-44细胞抑制及凋亡的实验研究

目的探讨姜黄素（erueumin）对人脑胶质瘤SHG-44细胞体外抑制及凋亡调控作用。方法20-80μmol／L姜黄素分别处理SHG-44细胞48h后，MTT法测定姜黄素对SHG-44细胞的细胞抑制作用及各种caspase抑制剂对姜黄素作用的影响；通过流式细胞仪AnnexinV—FITC／PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡；透射电镜观察细胞形态学变化；荧光分光光度法检测easpase-3活性的改变。结果姜黄素明显抑制SHG-44细胞的增殖；诱导SHG-44细胞凋亡；caspase-3活性增强，各种caspase抑制剂可抑制姜黄素诱导的SHG-44细胞凋亡。结论姜黄素可明显抑制并诱导SHG-44细胞凋亡。     

施他宁抑制大肠癌细胞转移的实验观察

自2004年8月以来。我们对施他宁抑制大肠癌细胞转移的作用进行了实验研究。现报告如下。     

Raf激酶抑制蛋白在非甾体抗炎药诱导小鼠大肠癌细胞凋亡过程中的作用

非甾体抗炎药(NSAID)可通过诱导细胞凋亡和抑制血管生成,发挥抑制肿瘤恶性转化和生长的作用[1].     

TFPI基因转染对血管平滑肌细胞中细胞凋亡抑制蛋白的调控

目的研究组织因子途径抑制物(TFPI)基因转染对大鼠血管平滑肌细胞中细胞凋亡抑制蛋白(IAP)表达的影响,探讨TFPI诱导细胞凋亡的可能机制。方法将含有人TFPI基因的重组腺病毒或含β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的重组腺病毒或DMEM在体外分别转染大鼠血管平滑肌细胞,用ELISA方法测定转染后细胞中TFPI蛋白的表达水平,用RT-PCR方法测定基因转染后不同时间点细胞中c-IAP1mRNA的表达,用Western-blot方法检测基因转染后不同时间点细胞中survivin的表达。结果基因转染后1天在血管平滑肌细胞中即可检测到TFPI蛋白表达,峰值出现在转染后第3天;基因转染后3天和7天,TFPI组c-IAP1 mRNA的表达与对照组相比明显减少(P0.05);基因转染后3、5、7天,TFPI组survivin的表达与对照组相比明显减少(P0.05),且具有明显的时间依赖性。结论 TFPI可能通过抑制IAP的表达来发挥诱导平滑肌细胞凋亡的作用,从而抑制冠状动脉介入治疗后再狭窄发生。