急性胰腺炎外周循环和胰腺微循环血小板内皮细胞粘附分子-1的表达

目的　探讨急性胰腺炎 (AP)外周循环和胰腺微循环中血小板内皮细胞粘附分子 1(PECAM 1)表达的变化规律。方法　Wistar大鼠 48只 ,诱发AP动物模型 ,用流式细胞仪分析脾静脉和下腔静脉血中多形核白细胞 (PMN )PECAM 1的表达。结果　 ( 1)在急性水肿性胰腺炎(AEP)动物模型中 ,外周循环和胰腺微循环PMNPECAM 1的表达水平在AEP 2、4h组相近 ,自 4h开始 ,外周循环PMNPECAM 1的表达上调直至 8h ;胰腺微循环PMNPECAM 1的表达下调直至 8h ,在AEP 8h组 ,差异有显著性 ( P <0 .0 5 )。 ( 2 )在急性坏死性胰腺炎 (ANP)模型中 ,胰腺微循环PMNPECAM 1的表达下调 ;外周循环组PMNPECAM 1的表达未见明显变化 ,在ANP 4、6h组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　AEP胰腺微循环和外周循环PMNPECAM 1的表达呈逆向性 ,在胰腺微循环呈下调趋势 ,在外周循环呈上调趋势 ;ANP胰腺微循环PMNPECAM 1的表达呈加速性下调 ,该结果显示 ,在ANP早期 ,抑制PMNPECAM 1的过度表达可能有助于改善AP病理改变。     

急性胰腺炎胰腺微循环血小板内皮细胞粘附分子-1的表达

目的　探讨急性胰腺炎 (AP)胰腺微循环中血小板内皮细胞粘附分子 1 (PECAM 1 )表达的变化规律。方法　Wistar大鼠 48只 ,诱发AP动物模型 ,用流式细胞仪分析脾静脉血中白细胞PECAM 1的表达。结果　与正常组相比 ,各实验组多形核白细胞 (PMN)PECAM 1的表达下调 ,在急性坏死性胰腺炎 (ANP)组差异有显著性 ,ANP 2h组 [(63 .0± 1 9.2 ) % ,P <0 .0 5] ,ANP 4、6h组[(38.1± 2 1 .2 ) %、(32 .9± 1 4 .5) % ,P <0 .0 0 1 ] ;淋巴细胞PECAM 1的表达轻度下调 ,差异无显著性(P >0 .0 5)。结论　胰腺微循环中PMNPECAM 1表达的下调说明PMN的激活 ,可促进PMN外渗 ;抑制PMNPECAM 1的过度表达可能是治疗AP和 /或阻断AP向坏死型转化的一种潜在途径     

"清下1号"对急性水肿性胰腺炎胰腺局部微循环的作用

中西医结合治疗急性胰腺炎(AP)取得了可喜的成绩,但疗效的作用机制尚不清楚.我们运用蛙皮素(caerulein)诱发急性水肿性胰腺炎(AEP)动物模型,观察我院常用中药复方"清下1号"(MCP-1)对AEP胰腺微循环的影响,为阐明AP中西医结合治疗作用原理以及临床经验的推广提供依据. 1.材料与方法:健康成年雄性Wist-ar大鼠36只,随机分为(1)对照组(n=12),于实验开始后经皮下注射生理盐水;(2)AEP自然病程组,于实验开始后1 h、2 h经大鼠左背腹膜后间隙皮下注射蛙皮素5.5μg/kg和7.5μg/kg;(3)MCP-1治疗组,于最后一次注射蛙皮素后1h经鼻饲管给予MCP-1 20 ml/kg.     

中药复方“清下1号”对急性水肿性胰腺炎局部微循环损伤的作用

目的探讨大鼠急性水肿性胰腺炎(AEP)动物模型的早期微循环改变及中药复方清下1号（MCP-1）对AEP胰腺微循环的作用。方法用异硫氰酸荧光素-荧光标记红细胞(FITC-RBC)胰腺活体微循环技术、微血管树脂/墨汁灌注光镜和扫描电镜、透射电镜技术,用蛙皮缩胆囊肽诱发大鼠急性胰腺炎（AP）动物模型,观察36只Wistar大鼠的早期微循环改变、MCP-1应用后胰腺局部微循环的反应。结果与AEP自然病程组比较,MCP-1治疗组血清淀粉酶由（2997.7±801.4）?IU/L降至（1909.7±295.5）?IU/L（P<0.01）;胰腺间质炎性细胞浸润减少;腺泡细胞胞浆内空泡减少;毛细血管密度由（52.8±6.1）%增至（63.2±5.5）%（P<0.01);微血管管径由（4.5±0.4）?μm增至（5.9±0.6）?μm（P<0.05）;FITC-RBC显示胰腺微循环流速、流量增加,灌流稳定(0.87±0.06)nl/min（P<0.01)。结论MCP-1具有显著改善AP胰腺微循环的作用,抗AP胰腺局部微循环损伤是实现MCP-1疗效的重要机制。     

急性水肿性胰腺炎血管内皮细胞血管内皮钙粘着蛋白的表达及中药对其的影响

目的　了解急性水肿性胰腺炎 (AEP)胰腺外分泌部血管内皮细胞血管内皮钙粘着蛋白 (VE cadherin)的表达、分布及中药对它的调节作用。方法　应用荧光免疫组织化学染色和共聚焦激光扫描显微镜技术 ,观察 2 6只正常、AEP及中药华西胰腺炎 1号 (WPY)治疗的AEPWistar大鼠胰腺血管内皮VE cadherin的表达。结果　在AEP病程中 ,VE cadherin在微血管内皮细胞间连接处消失 ,毛细血管内皮处分布异常 ,其表达 ( 1.14± 0 .0 8、0 .90± 0 .0 8、1.19± 0 .0 6、1.0 4± 0 .0 5 )较正常 ( 1.41± 0 .0 6 )减少 ,两者比较 ,差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。治疗后 ,定位及其表达( 1.2 5± 0 .0 7,P <0 .0 1)有所恢复。结论　VE cadherin分布异常、表达水平下降是AEP血管通透性增高的重要原因。中药WPY可改善其表达。     

急性水肿性胰腺炎内源性RAS的活化与局部微循环障碍关系的研究

目的探讨急性胰腺炎(AP)胰腺内源性肾素一血管紧张素系统(RAs)的活化与胰腺局部做循环障碍之间的关系，为进一步阐明AP时胰腺局部微循环损伤的机制提供实验依据：方法采用异硫氢酸荧光素(FTTC标记红细胞进行胰腺局部微循环活体观察，放免法检测局部微循环血浆及咦腺局部组织AngⅡ的含量变化。结果(1)与正常对照组相比，AEP组胰腺微循环血浆及局部组织AngⅡ的表达自2h开始上调，直至8h(P＜0．05)，其中自4h开始局部组织AngⅡ的含量明显高于血浆中AngⅡ的含量，差异有显著性(P＜0．05)；(2)与正常对照组相比，AEP组胰腺局部组织在疾病早期即开始出现血液流速减慢、流量减少等微循环障碍表现；(3)胰腺局部微循环血量随着RAS活化的上调而逐渐减少，相关分析显示两者呈显著线性相关(r=0．5449，P＜0．05)。结论胰腺局部组织的RAS参与AP早期的微循环损伤的病理过程，抑制或拮抗胰腺局部组织的RAS的活化可能有助于胰腺局部微循环障碍的改善。     

急性水肿性胰腺炎大鼠胰腺微血流变化和环氧合酶-2的表达

目的　探讨环氧合酶 2 (COX 2 )mRNA的表达在急性水肿性胰腺炎 (AEP)大鼠胰腺局部微血管变化中的作用。方法　皮下注射蛙皮缩胆囊肽 (Caerulein)诱发急性水肿性胰腺炎。RT PCR检测胰腺COX 2mRNA表达。分光光度法检测胰腺炎指标 :血浆髓过氧化酶 (MPO)和血清淀粉酶 (AMS)的活性。异硫氰酸荧光素标记红细胞 (FITC RBC)技术对胰腺活体进行局部微血管观察。结果　COX 2mRNA在正常对照组各时点均呈低水平表达 ,而在AEP组表达在Caerulein诱发后上调 ;与正常组相比 ,AEP组血清淀粉酶 (AMS)、血浆髓过氧化酶 (MPO)活性水平增加 (P <0 0 5 ) ;与对照组相比 ,AEP组的胰腺微血管改变如下 :胰腺毛细血管血流 4～ 8h减少、功能毛细血管密度 4～ 8h减少、毛细血管在 8h趋于通透。结论　COX 2在AEP组中的表达上调是客观反映胰腺微循环功能损害 ,如毛细血管灌流、血流及组织水肿等的指标。     

异丙酚对人脐静脉内皮细胞上细胞间粘附分子-1表达的影响

目的 观察异丙酚对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)上细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达及对中性粒细胞(PMN)在内皮细胞上粘附数的影响。方法利用人脐带体外培养获得人脐静脉内皮细胞,将其随机分为空白组、异丙酚组、内毒素组、异丙酚 内毒索组。用流式细胞仪检测人脐静脉内皮细胞上ICAM-1的表达量。利用PMN分离液从人全血中分离出PMN。在光镜下计数PMN在内皮细胞上的粘附数。结果 4 μg/ml异丙酚对人脐静脉内皮细胞上ICAM-1的表达和对PMN在内皮细胞上的粘附数均无显著影响(P>0.05);40μg/ml异丙酚对人脐静脉内皮细胞上ICAM-1的表达和对PMN在内皮细胞上的粘附数均有抑制作用(P<0.01)。结论40μg/ml异丙酚对PMN与内皮细胞之间的过度粘附有抑制作用,从而可能对机体有一定的保护作用。     

胰腺炎微循环障碍加重过程中血管内皮生长因子的表达及意义

目的:探讨在胰腺炎微循环障碍加重的过程中,血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况及其意义。方法:选取实验用大鼠共30只,其中15只大鼠处理为急性水肿型胰腺炎(AEP),另外15只大鼠则处理为胰腺炎微循环障碍加重后的急性坏死型胰腺炎(ANP),测量2组大鼠血清中VEGF的含量,检测VEGF在胰腺组织中的表达情况,同时将胰腺置于光学显微镜下,观察病理改变。结果:2组血清中均有较高的VEGF含量,ANP组高于AEP组(P<0.05);ANP组大鼠胰腺组织中的VEGF表达明显升高,与AEP组相比差异有统计学意义(P<0.01);光学显微镜下观察2组大鼠的胰腺组织,AEP组间质充血,存在坏死的腺泡灶,而ANP组则出现间质的出血,腺泡灶也存在大范围的坏死,同时大量红细胞沉积,坏死更加明显。结论:在胰腺炎微循环障碍加重之后,VEGF出现明显的高表达,在临床上可以作为疾病加重的指标之一。     

水肿型胰腺炎向坏死型胰腺炎进展中VEGF的表达及意义

目的：探讨在胰腺微循环障碍加重过程中血管内皮生长因子（VEGF）的表达及意义。方法：将大鼠随机分为假手术对照组（N组）、急性水肿型胰腺炎组（AEP组）及急性坏死型胰腺炎组（ANP组）。于建模后6、12和24h,分别采用ELISA法检测各组血清中的VEGF、TNF-α及淀粉酶（AMY）含量,免疫组织化学方法检测各组胰腺组织中VEGF蛋白的表达情况,并分析比较。结果：AEP组与ANP组胰腺组织中各时相点VEGF染色评分均明显高于N组（P〈0．05）;建模6hANP组的评分显著高于AEP组（P〈0．05）,而12和24hANP组的评分均明显低于AEP组（P〈0．05）。ANP组和AEP组血清VEGF、TNF-α与AMY含量均显著高于N组（P〈O05）;ANP组与AEP组之间差异亦有统计学意义（P〈0．05）,但AEP组建模24hVEGF含量和12hAMY含量与ANP组差异无统计学意义（P〉0．05）;血清VEGF与TNF-α（正相关（P〈O.05）。结论：VEGF作为相对独立的微循环影响因素与全身炎症反应呈正相关,但在胰腺微循环障碍持续加重期,胰腺组织及血管内皮细胞严重受损,VEGF表达减少,胰腺坏死病变难以逆转。     

Protective effects of deferoxamine mesylate preconditioning on pancreatic tissue in orthotopic liver autotransplantation in rats

Background

Deferoxamine mesylate is known to ameliorate tissue ischemia-reperfusion injury. This study was designed to explore the impact of deferoxamine mesylate preconditioning (DMP) on pancreatic tissue and its possible effects during orthotopic liver autotransplantation.

Methods

A modified orthotopic liver autotransplantation model was used to simulate pancreatic ischemia-reperfusion injury. Sprague-Dawley rats (0.25-0.30 kg) were randomly divided into normal control, autotransplantation (AT), systemic deferoxamine mesylate preconditioning (SDMP), and partial deferoxamine mesylate conditioning (PDMC) groups. The SDMP group was injected with deferoxamine mesylate (75-90 mg; 300 mg/kg), via the celiac artery at 24 and 48 hours before surgery. During surgery, the PDMC group underwent liver perfusion by means of deferoxamine mesylate solution (20 ml; 0.6 mmol/L) rather than Ringer's lactate solution, with no prior preconditioning. At 6, 24, and 48 hours after surgery, the rats were sacrificed to sample their pancreatic tissues for the expression of hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α) and malondialdehyde (MDA) content. The samples were subjected to blood chemistry analyses, light and transmission electron microscopic morphological studies, and quantitative measurement of HIF-1α expression.

Results

The serum levels of amylase, lipase, and MDA in SDMP and PDMC groups were significantly lower than those in the AT group at 6, 24, and 48 hours after orthotopic liver autotransplantation (P < .05). Light and electron microscopic analyses showed much more severe pancreatic injury in the autotransplantation than in the SDMP and PDMC groups. The HIF-1α expression was increased in the SDMP and PDMC groups more than in the autotransplantation group (P < .05).

Conclusions

Deferoxamine mesylate preconditioning protected pancreatic tissue in orthotopic liver autotransplantation in rats. Inhibition of oxidative toxic reactions and up-regulated expression of HIF-1α protein are possible mechanisms.     

Effect of leukocyte depletion on endothelial cell activation and transendothelial migration of leukocytes during cardiopulmonary bypass

Background

Although leukocyte depletion from systemic circulation during cardiopulmonary bypass (CPB) has been studied, the effect of leukocyte depletion on the leukocyte-endothelial cascade remains poorly understood. So far, there has been no published work on the effects of leukocyte filters during cardiac operations from the viewpoint of endothelial activation and transendothelial neutrophil migration.

Methods

Thirty-two patients undergoing elective heart operations were randomly allocated to a leukocyte-depletion (LD) group or a control group. Blood samples were collected at seven time points: before sternotomy, at 30 minutes and at 60 minutes of CPB, at 5 minutes after coronary reperfusion, at the end of CPB, and at 2 hours and 24 hours after the cessation of CPB. The plasma concentrations of P-selectin, intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), interleukin-8, and platelet-endothelial cell adhesion molecule-1 (PECAM-1) were measured using enzyme-linked immunosorbent assays. Plasma malondialdehyde (MDA) concentration was determined by measurement of thiobarbituric acid-reactive substances in plasma. In addition, blood samples collected at intervals before and after operation were used for arterial blood gases.

Results

Our studies show significant increases of plasma levels of P-selectin, ICAM-1, interleukin-8, PECAM-1, and MDA during and after CPB in the control group. Interestingly, a significant decrease of plasma levels of P-selectin, ICAM-1, interleukin-8, PECAM-1, and MDA, and better preservation of lung function could be found in the LD group compared with the control group.

Conclusions

Our results demonstrate a rationale for using a leukocyte filter in patients undergoing cardiac surgery to attenuate the endothelial-mediated component of the CPB-induced inflammatory response by reducing endothelial activation and neutrophil transmigration.     

常温机械灌注对大鼠心脏死亡器官捐献供肝微循环保护作用的研究

目的探讨常温机械灌注(normothermic machine perfusion,NMP)对大鼠心脏死亡器官捐献(donation after circulatory death,DCD)供肝微循环发挥的作用。方法采用夹闭SD大鼠胸主动脉热缺血30 min获取DCD供肝;在体外建立大鼠NMP系统。根据不同的保存供肝方式,将实验分为:正常(Normal)组(n=6),留取血清及肝脏待用;NMP组(n=30),保存4、6和8 h后收集肝脏标本,灌注后0、2、4、6 h和8 h收集流入道、流出道灌注液待检;静态冷保存(SCS)组(n=6),肝脏以20 ml 4℃UW液冲出肝内血液,并于UW液中4℃SCS 6 h后收集肝脏标本。采用生物化学方法检测流出道灌注液的肝功能;HE染色观察肝组织病理学改变;透射电镜观察肝细胞超微结构;TUNEL检测肝脏细胞凋亡情况;Western blot检测肝脏组织内皮素-1(endothelin-1,ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)、细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和血管间黏附分子-1(intervascular adhesion molecule-1,VCAM-1)的表达情况。结果与SCS比较,NMP能显著改善DCD供肝组织学损伤,Suzuki评分NMP组(3.40±0.55)显著低于SCS组(7.00±0.71,F=229.75,P<0.05);减轻肝细胞凋亡,NMP组凋亡细胞数(9.80±1.48)显著低于SCS组(33.40±4.39,F=166.58,P<0.05);同时能修复肝细胞线粒体损伤,NMP组不可逆损伤线粒体数量(1.60±0.55)显著低于SCS组(2.80±0.45,F=36.29,P<0.05)。进一步发现,NMP可改善DCD肝脏微循环:①抑制细胞间黏附,改善内皮细胞损伤,与SCS比较,NMP显著抑制肝内ICAM-1(F=1728.45,P<0.05)、VCAM-1(F=254.72,P<0.05)和vWF(F=595.30,P<0.05)的表达;②改善肝脏ET-1/NOS平衡和微循环灌注,与SCS相比,NMP显著抑制肝内ET-1(F=1372.51,P<0.05)、iNOS(F=1102.20,P<0.05)的表达,促进eNOS(F=271.66,P<0.05)的表达。结论NMP能够改善大鼠DCD供肝质量,其机制可能通过抑制细胞间黏附,改善窦内皮损伤及微循环灌注发挥保护作用的。     

不同氧合器对体外循环心脏手术患儿中性粒细胞凋亡的影响

目的 研究小儿体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)中不同氧合器对中性粒细胞(PMN)凋亡的影响,为减轻体外循环伞身炎症反应提供新的思路.方法 将60例室间隔缺损患儿随机分为两组(n=30):西京-90鼓泡式氧合器组(B组)和希健-Ⅱ膜式氧合器组(M组).分别于CPB前、CPB结束时、CPB结束后4、8、24 h 5个时点采取静脉血,以伞血细胞计数仪测定PMN数量,流式细胞仪测定PMN凋亡率和PMN表面黏附分子CD11b表达变化,ELISA法测定血浆弹性蛋白酶浓度.结果 两组患者CPB结束后PMN凋亡率明显降低(P<0.05),PMN数量、CD11b表达、血浆弹性蛋白酶浓度明显升高(P<0.05),在CPB结束时及CPB结束后4、8 h PMN凋亡率M组均高于B组(P<0.05);而PMN数量、CD11b表达、血浆弹性蛋白酶水平B组均高于M组(P<0.05).CPB结束后24 h PMN数量B组高于M组(P<0.05).结论 与西京-90鼓泡氧合器相比,应用希健-Ⅱ膜式氧合器可以减轻CPB对PMN凋亡的抑制,进而减轻全身炎症反应.     

甘遂对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织微循环的影响及其机制

目的： 探讨甘遂对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠胰腺组织微循环的影响及其机制。方法：SD大鼠随机分为假手术组（S组）、SAP组和甘遂治疗组（K组），每组40只。检测各组手术后2，6，12，24h的血清淀粉酶水平，胰腺组织TXB2和6-Keto-PGF1α含量、COX-2mRNA和蛋白表达水平、光镜和电镜观察胰腺组织结构，以及术后72h死亡率。结果：（1）胰腺组织TXB2，6-Keto-PGF1α水平及TXB2/PGF1α比值：SAP组在各时间点均较S组显著升高（P<0.01）；K组TXB2及TXB2/PGF1α比值在6，12，24h点均较SAP组显著降低（P<0.01），但仍高于S组（P<0.01）。(2)COX-2mRNA和蛋白表达：S组COX-2mRNA和COX-2蛋白表达均极弱；SAP组表达均明显；K组COX-2mRNA表达6，12h明显弱于SAP组（P<0.05），COX-2蛋白表达6，12，24h均显著低于SAP组（P<0.01）。(3)胰腺组织TXB2/PGF1α比值与COX-2蛋白表达呈显著正相关（r=0.867,P<0.01）。(4)光镜和电镜观察：S组胰腺组织结构正常；SAP组胰腺组织有出血坏死，微血管内大量血栓形成；K组胰腺组织损害较SAP组减轻，微血管内血栓明显减少。（5）72h死亡率：S组为0%，K组为12.5%，两者均明显低于SAP组（62.5%）（均P<0.05）。结论：重症急性胰腺炎时有COX-2 的高表达和TXA2/PGI2之间的失衡，甘遂可以下调COX-2的表达，纠正TXA2/PGI2之间的失衡，而改善胰腺微循环。这可能是其治疗大鼠SAP的作用机理之一。     

胃去门静脉循环断流术对肝前型门静脉高压犬胃黏膜及微循环血管超微结构的影响

目的 观察胃去门静脉循环断流术（de-splanchnic circulation of the stomach，DSCS）对肝前型门静脉高压犬胃黏膜及黏膜下微循环血管超微结构的影响。方法 将12只成年杂种犬按照“李宗芳法”（门静脉缩窄一半，丝线引起门静脉慢性血栓形成）制作犬肝前型门静脉高压食管静脉曲张模型，并于建模后4周造影检查侧支循环及曲张静脉形成情况。成模后随机分为两组，分别行贲门周围血管离断术和DSCS手术，于开腹后、手术后即刻及术后4周末测定食管曲张静脉压力，手术前、手术后4周末测定肝功能指标。术后4周末取胃组织进行透射电镜观察。结果 DSCS手术组食管曲张静脉压力由术前的(22.1±0.9) cm H2O降至术后4周的(17.8±0.4) cm H2O，差异有统计学意义(P＜0.01)。手术前后肝功能指标变化不明显(P＞0.05)。超微结构显示贲门周围血管离断术组胃黏膜上皮细胞微绒毛断裂、脱落，微绒毛明显减少，黏膜下微静脉内皮细胞基膜厚薄不均且不连续，内皮细胞间隙可见明显红细胞聚集；而DSCS组胃黏膜上皮细胞微绒毛排列较整齐，断裂少见，黏膜下微静脉内皮细胞未见明显异常。结论 DSCS手术可降低肝前型门静脉高压犬食管曲张静脉压力，改善胃黏膜及黏膜下微循环血管超微结构。