双水相萃取长鱼蛋白酶的工艺研究

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系以分离纯化长鱼蛋白酶。通过研究不同成相盐及其浓度、不同PEG分子量及其浓度和不同p H对双水相萃取长鱼蛋白酶的影响。结果表明,最优化的双水相体系为25%PEG1000、20%(NH4)2SO4和p H7.0,在此条件下长鱼蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为90.5%和4.40。     

双水相萃取分离米曲霉中性蛋白酶

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系萃取分离米曲霉中性蛋白酶。探讨了不同成相盐及其浓度、成相聚合物PEG及其浓度、pH和NaCl浓度对中性蛋白酶萃取的影响。结果表明,适宜的双水相萃取体系为20%PEG1000/25%(NH4)2SO4(m/m)、pH8.0、不添加NaCl,此条件下中性蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为99.88%和2.32。     

双水相提取糖化酶的研究

利用PEG/(NH4)2SO4双水相系统从粗酶液中提取糖化酶。研究了PEG、(NH42)SO4、NaCl溶液浓度对糖化酶分配系数、回收率以及分相时间的影响,确定了提取糖化酶的最佳条件,即PEG溶液浓度为24%,(NH42)SO4溶液浓度为20%时,分配系数最小为0.0120,糖化酶回收率最高为98.81%。     

响应面分析法优化麦麸酯酶双水相萃取的条件

研究采用聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取麦麸酯酶,通过单因素实验考察不同PEG分子量、PEG浓度、无机盐种类、无机盐浓度、pH和离子强度对麦麸酯酶总蛋白分配系数、酶活回收率、纯化倍数的影响,并通过响应面分析法优化了萃取条件。结果表明最佳萃取条件为:PEG1000质量浓度为21%、(NH4)2SO4质量浓度为18%、pH4.4。回归方程预测双水相萃取纯化倍数可达到2.9208,三次验证实验的平均纯化倍数为2.9190,与预测值相对误差为0.06%。     

米根霉液态发酵产糖化酶工艺条件研究

米根霉具有较强的产淀粉糖化酶能力。本研究通过对米根霉液态发酵工艺条件的研究来提高其产糖化酶能力,为红曲黄酒纯种酿造技术奠定基础。以米根霉为出发菌株,大米液化液作为碳源进行摇瓶发酵,通过正交试验优化液态培养基配方,并通过单因素试验得出米根霉的培养条件。优化的摇瓶发酵最佳培养基为:液化液浓度50%,NH4Cl 5 g/L,KH2PO41 g/L,MgSO4·5H2O 0.3 g/L,FeSO4·7H2O 0.4 g/L,CaCO38 g/L;发酵条件为:初始pH6.0,装液量50 mL,摇床转速150r/min,接种量6%,发酵温度为32℃。该发酵条件下,菌株摇瓶发酵液的糖化酶活力达到196.6 U/mL±8.1 U/mL。     

类芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的分离与纯化

类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CH-3是一株高产β-甘露聚糖酶的菌株。本研究采用乙醇沉淀法、硫酸铵盐析法、聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对CH-3菌株产生的β-甘露聚糖酶进行分离与纯化,以选出纯化率高且残余酶活力高的方法。结果发现,乙醇沉淀法和硫酸铵盐析法纯化效果较差,聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系的纯化效果较好,PEG浓度为20%(m/m)时,上相测得的总酶活力最高,可以达到221 U/m L。在(NH4)2SO4浓度为18%(m/m)时,上相测得总酶活力最高,可以达到264 U/m L,同时酶萃取率达最大值为86.2%。因此,最优的双水相体系是20%(m/m)PEG和浓度为18%(m/m)(NH4)2SO4。     

米根霉L-乳酸发酵动力学

通过正交试验研究米根霉AS3.819利用葡萄糖发酵生产L-乳酸时,发酵培养基中葡萄糖、(NH4)2SO4、KH2PO4、ZnSO4·7H2O、MgSO4对发酵的影响.确定的最佳发酵培养基组成:葡萄糖80 g/L、(NH4)2SO4 2 g/L、KH2PO4 0.3 g/L、ZnSO4·7H2O 0.05 g/L、MgSO40.3 g/L.在此培养基组中平均发酵产L-乳酸61.5g/L,对葡萄糖的平均转化率为76.9%.初步建立米根霉AS3.819利用葡萄糖发酵生产L-乳酸的动力学模型,并通过发酵动力学试验获得到模型参数,对培养基中初始葡萄糖质量浓度分别为72、74g/L的发酵过程进行预报.结果表明,建立的动力学模型能较好地描述米根霉发酵生产L-乳酸的过程:L-乳酸的生成机制是以生长机制为主的混合动力学机制.     

双水相法萃取生姜蛋白酶体系的建立

以生姜为原料,研究了采用双水相萃取技术分离提取生姜中生姜蛋白酶的提取条件,利用单因素试验与正交试验进行优化,优化得到的萃取方案为:PEG分子质量为4 000 u,PEG浓度为30%,选择盐种类为(NH4)2SO4,浓度为10%,体系pH为8.0。此双水相体系的生姜蛋白酶上相酶活力回收和纯化倍数都最高,分别可达393.77%和1.85。     

双水相萃取法提取紫花油豆中凝集素

本文建立了一种从紫花油豆中快速高效分离凝集素的方法,采用PEG-盐双水相体系进行分离,以上相蛋白得率和纯化倍数作为评价指标,分别考察了(NH4)2SO4质量分数、PEG600质量分数和体系p H值三种显著单因素,同时用SDS-PAGE电泳对其进行检测,探究凝集素在PEG600/(NH_4)_2SO_4双水相体系中的分配规律。结果表明:双水相体系分离凝集素的最优条件为(体系共5m L):3m L25%(w/w)的(NH4)2SO4溶液、1m L 90%(w/w)的PEG600溶液、1m L的粗蛋白提取液、调p H值为7.5,此时上相蛋白得率为42.32%,纯化倍数为3.08。     

两步盐析联合双水相萃取提取纯化蓝藻中藻蓝蛋白

以巢湖新鲜蓝藻为处理对象,采取冻融破壁的方式获取藻蓝蛋白的粗提液,采取两步盐析联合双水相萃取的方法提取纯化藻蓝蛋白。运用0.618法选点实验研究了两步盐析中(NH4)2SO4饱和度对提取纯化影响,构建了聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）-(NH4)2SO4的双水相体系,综合考虑PEG相对分子质量、PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数、pH值和藻蓝蛋白质量浓度对提取纯化藻蓝蛋白的影响。结果表明：室温25 ℃条件下,一步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为21%,二步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为30%。两步盐析后得到的藻蓝蛋白构建成PEG-(NH4)2SO4的双水相体系后,当PEG相对分子质量1 000、PEG 1 000质量分数10%、(NH4)2SO4质量分数25%时,藻蓝蛋白的纯度可达3.45。     

曲霉羧肽酶的分离纯化研究

采用 (NH4) 2 SO4、酒精、DE52 和SephadexG1 0 0对AspergillusspCP 1发酵液进行分离纯化 ,并检测在分离纯化过程中酶的回收率和比活力 ,最后用SDS PAGE电泳检验酶的纯度。确定 (NH4) 2 SO4饱和浓度在 60 %～ 90 %之间 ,酒精浓度为 3 5 %～ 70 %之间用于粗酶液的提纯 ;电泳得到一个清晰的条带。它们的分子质量约为 15 942u。     

曲霉糖化酶高产菌株平板分离培养基的筛选

以“苏-16”黄曲霉为出发菌株,筛选出曲霉糖化酶高产菌株,该菌株淀粉液化酶活力较原菌株提高85.2%,糖化酶活力提高24.4%。筛选培养基配比为:可溶性淀粉1.3%,(NH4)2SO40.3%,KH2PO40.1%,MgSO4·7H2O0.05%,FeSO·7HO0.001%,琼脂粉1.8%。(孙悟)     

猪肉内源性脂肪酶三种提取方法的比较研究

比较PEG2000/(NH4)2SO4双水相体系萃取法、反胶团提取法、双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合的三种方法对猪肉内源性脂肪酶萃取效果的影响。通过正交实验进一步优化每一种方法的提取条件。结果表明:在PEG2000浓度25%、(NH4)2SO4浓度12%、pH6.5、壳聚糖浓度为2.5mg/mL的条件下,进行双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合法萃取脂肪酶的萃取效果最佳,其萃取率为97.83%,分配系数为5.209,纯化倍数为7.74倍。     

双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合分离猪胃蛋白酶

探索双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合分离猪胃蛋白酶,考察PEG分子质量、相质量分数、壳聚糖添加量、复合pH对分离效果的影响,结果表明:双水相萃取法中PEG分子质量为1000、其质量分数为20%、(NH4)2SO4的质量分数为15%,壳聚糖沉淀法中壳聚糖添加量为2.5mg/mL上相溶液、复合时pH为5.9时猪胃蛋白酶的纯化倍数最大,最大值为7.83。     

双水相萃取法提取果胶酶的研究

对PEG/(NH4)2SO4双水相提取果胶酶进行了研究,考察了PEG分子量、pH值、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等对果胶酶分配系数的影响,结果表明,双水相最佳提取条件为PEG1000 27%,(NH42)SO4 19%,NaCl 0.002%,pH 5.0,温度50℃,在此条件下果胶酶分配系数(K)可达14.0。     

PEG/(NH4)2SO4双水相体系提取和纯化糖化酶

用PEG／（NH4）2SO4双水相体系提取，纯化糖化酶，研究了影响体系分配系数，回收率和纯化因子的因素从而确定了萃取糖化酶的最佳条件。在WPEG为0．24，W（NH4）2SO4为0．08条件下，分配系数最小，达0．022，回收率为95．6％。     

用基因重组技术构建可降解淀粉和产生酒精的酵母工程菌

将酵母Ty转座子的δ序列 ,黑曲霉糖化酶cDNA及G418抗性基因neo重组进酵母整合型质粒YIplac12 8获得含LEU2 ,neo双标记基因 ,糖化酶cDNA的高整合型表达载体YIp12 8D 17N ,转化GRF18后获得整合型酵母转化子GRF18(YIp12 8D 17N)糖化酶基因在该菌株获得高效表达 ,产物分泌到胞外。Southern印迹分析证明 ,糖化酶基因已整合进工程菌染色体。GRF18(YIp12 8D 17N)在含 2 0 %可溶性淀粉的培养基中培养 2 4h ,淀粉水解率在98%以上 ,酒精浓度达到 9 5 % (v/v)在 2 5 %淀粉中酒精浓度达到 10 2 %。     

双水相萃取分离重组毕赤酵母碱性木聚糖酶

利用双水相萃取技术对来源于重组毕赤酵母的碱性木聚糖酶进行了初步分离。研究了聚乙二醇(PEG)分子量、PEG浓度、盐种类及浓度、Na Cl加入量和p H等因素对萃取效果的影响。结果表明,在PEG 4000浓度为20%,Na2HPO4浓度为18%,Na Cl浓度为0,p H6.0的条件下,获得最佳萃取效果,其结果为:分配系数(K)8.51,酶的活力回收率(Y)87.2%,纯化倍数(PF)2.54。     

双水相萃取法分离纯化α-淀粉酶的研究

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵双水相体系,对双水相萃取法分离纯化α-淀粉酶进行了研究,探讨了PEG分子量、PEG浓度和(NH4)2SO4浓度对α-淀粉酶的分配系数、酶活回收率和相体积比的影响。实验表明,由PEG40021%～22%(W/W)和(NH4)2SO414%～17%(W/W)所组成的双水相体系,在室温下对α-淀粉酶的酶活回收率可达94.84%,分配系数可达17.10。     

甜高粱茎秆固态发酵生产酒精

研究了水分和营养盐对甜高粱茎秆固态法酒精发酵的影响和固态发酵联产混菌蛋白饲料工艺的可行性.结果表明,以Y-PEG0701为发酵菌株,最适含水量为65%,营养盐的最适添加量分别为(NH4)2SO4 0.3%、KH2PO4 0.15%、MgSO4·7H2O 0.06%.在最适条件下,酒精浓度为7.4%,酒精产率为0.206g/g,转化率为95%.黑曲霉和白地霉混合酒糟残渣发酵后,蛋白饲料的粗蛋白和氨基酸含量均得到了显著的提高.