蛋鸡血清载脂蛋白AⅡ的分离纯化及其抗血清的制备

本文介绍了一种在普通实验室条件下,分离纯化蛋鸡血清载脂蛋白AⅡ及其抗血清制备的一种简便易行的方法。用磷钨酸镁沉淀分离出蛋鸡血清HDL。乙醇/丙酮(1∶1V/V)脱脂后经DEAE Sepharose CL-6B和Sephadex G-150柱层析。获得的apoAⅡ经15%的尿素-SDS-PAGE电泳显示为单一条带。分子量测算大约为8673u。本方法的优点是通过使用易行的磷钨酸镁沉淀法代替了超速离心的复杂过程。不需特殊仪器,缩短了制备时间且分离效果理想。     

鸡血清载脂蛋白AⅡ的分离纯化及其含量的测定

本研究建立了一种在普通实验室条件下,分离纯化鸡血清载脂蛋白AⅡ(apo AⅡ)及其抗血清制备的方法。用磷钨酸镁沉淀法分离出鸡血清高密度脂蛋白(HDL),乙醇/丙酮(1∶1)脱脂后经DEAE Sepharose CL-6B和Sephadex G-150柱层析,获得的apo AⅡ经尿素-SDS-PAGE电泳显示为单一条带,相对分子质量为8 673。采用弗氏佐剂充分乳化的上述蛋白对新西兰雄兔进行多次多点皮内或皮下注射,分离兔抗鸡apo AⅡ血清后自行制备标准血清(1.112 g/L),采用免疫透射比浊法测得鸡血清apo AⅡ的生理含量为(1.295±0.21)g/L。此方法简便易行、准确可靠,有利于临床推广应用。     

猪IgM的分离纯化及其抗血清的制备

经硫酸锌盐析沉淀、Sephadex G-200凝胶过滤层析,分离纯化猪血清中IgM,得到了均一性较好的IgM,用此IgM免疫家兔制备了与IgG、IgA无交叉反应的特异性较强的抗IgM血清。     

丹顶鹤血清IgY的纯化及其抗血清的制备

利用分离的丹顶鹤血清,应用饱和硫酸铵沉淀法对血清中的IgY进行初步提取,然后通过DEAE-52纤维柱进行纯化,SDS-PAGE测定IgY的纯度,最后以纯化后的丹顶鹤IgY为免疫原常规免疫法制备兔抗丹顶鹤IgY血清。结果表明:提纯后的IgY经电泳检测在分子质量63ku和27ku处出现2条特异性条带,经扫描软件分析其纯度大于90%;常规免疫法制备的兔抗丹顶鹤IgY血清经免疫双扩散法测定效价为1∶32。     

鸡免疫球蛋白(GIgG)轻链的分离纯化及其抗血清的制备

经硫酸铵盐析、柱色谱分离得到纯化的鸡血清IgG。继用2-巯基乙醇还原、碘乙酰胶烷化拆开IgG的轻、重链,再经Sephadex G100凝胶过滤柱色谱分离得到IgG轻链。以IgG轻链免疫家兔制得兔抗鸡IgG轻链抗血清。     

鸡免疫球蛋白AFc(IgAFc)重链的分离纯化及其抗血清的制备

经硫酸铰盐析、柱色谱分离得到纯化的鸡胆汁免疫球蛋白A(IgA)。然后用木瓜蛋白酶水解IgA,再经DEAE_(52)—纤维素柱色谱纯化得到IgAFc重链。用IgAFc重链免疫家兔制得兔抗鸡IgAFc重链抗血清。     

山羊甲状腺球蛋白的分离,纯化及抗血清制备

山羊甲状腺球蛋白的分离、纯化及抗血清制备陈创夫（新疆塔里木农垦大学畜牧兽医系，阿拉尔８４３３００）刘永庆，张远钰，王水琴（中国人民解放军农牧大学）梅文辉，高民（内蒙古畜牧科学院兽医所）甲状腺球蛋白（ＴｈｙｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎＴＧ）是一种糖蛋白，由甲状...     

鸡产蛋下降综合症病毒快速纯化及其抗血清制备

为研制鸡产蛋下降综合症病毒（ EDS-76）检测用标准抗原及标准多抗血清,以EDS-76国际通用毒株AV-127株为抗原,进行了EDS-76病毒抗原纯化及多抗血清制备。研究表明,经氯仿抽提,并经PEG浓缩处理病毒的尿囊液可获得良好的纯化效果,纯化病毒背景干净,血凝效价达19Log2。以此研制出的鸡抗 EDS-76多抗血清血凝抑制效价达13Log2,间接免疫荧光效价达1∶2000,Western-blot试验分析表明该多抗血清可以识别两个分子大小在50 kD至85 kD之间的蛋白抗原,HI及IFA 试验发现所制备的特异性,多抗血清与12种常见禽病病原（ NDV、AIV-A、ALV-J、ALV、GPV、REV、MDV、IBV、CAV、IBDV、TMUV、REOV）均不反应。本研究建立的快速简便的EDS-76病毒纯化方法以及获得的抗EDS-76多抗血清,为进一步研制EDS-76标准抗原以及标准多抗血清提供了有效的方法与材料。     

鸡免疫球蛋白G Fc(IgG Fc)片段的分离纯化及其抗血清的制备 Ⅱ.豚鼠抗鸡IgG Fc片段血清的制备

经硫酸铵盐析、DEAE 32-纤维素和Sephadex G 200柱色谱法分离得到纯化的鸡血清IgG。然后用木瓜蛋白酶水解IgG,再经DEAE 32-纤维素柱色谱纯化制得IgG Fc片段,并以IgG Fc片段免疫豚鼠制备豚鼠抗鸡IgG Fc血清。     

兔抗鸡IgG荧光抗体的制备及应用

本试验通过提取鸡的免疫球蛋白(IgG),与弗氏完全佐剂按照1:1的比例免疫兔子3次,然后提取兔的IgG并经过异硫氰酸荧光素染色。经检测,制备出的兔抗鸡IgG荧光抗体敏感性高、特异性强,是比较理想的检测试剂。     

鸡Mx基因的表达及其抗血清的制备

Mx蛋白已被证明具有抗A型流感病毒、Thogoto病毒和水泡性口膜炎病毒等的生物活性.本研究通过PCR扩增,将Mx基因克隆至pMD18-T载体;经测序验证后将Mx基因克隆到原核表达载体pProExHTa和pcDNA3.1中.以构建的重组质粒pProExHTa-Mx转化大肠杆菌BL21,进行诱导表达,以切胶纯化方式回收了Mx融合蛋白,加佐剂乳化,免疫新西兰白兔制备抗血清;SDS-PAGE和western blot分析表明:Mx基因在大肠杆菌中以融合蛋白形式稳定表达,表达产物的相对分子量约80 ku,与预期值相符;抗血清能与Mx蛋白发生特异性反应.以真核表达重组质粒pcDNA3.1-Mx转染293T细胞,间接免疫荧光试验结果表明:原核表达蛋白免疫动物制备的抗血清与真核表达的Mx蛋白发生良好的免疫反应,表明用原核表达的Mx蛋白具有真核表达Mx蛋白相似的免疫学活性.抗血清的制备为鸡Mx蛋白的功能研究、Mx蛋白在转基因动物机体中表达的检测奠定了基础.     

鸡STARD3胞外域的原核表达及其抗血清制备

为获得鸡类固醇激素合成急性调节蛋白结构域3(STARD3)胞外域融合蛋白的特异性抗血清,采用人工合成方法获得鸡STARD3胞外域基因,利用pGEX6P-1质粒及BL21(DE3)进行原核表达,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,利用Western blot及间接ELISA方法测定抗体特异性和效价。结果显示:获得了STARD3胞外域融合蛋白的特异性抗血清,效价大于1∶6 400。本试验为研究鸡STARD3蛋白功能奠定了基础。     

猪抗克伦特罗(CL)抗血清的制备及其IgG纯化与鉴定

为了获得高特异性、高纯度的猪抗克伦特罗 (CL)IgG ,将克伦特罗跟牛血清白蛋白 (BSA)偶联后 ,选取 1 0头大×大×约三元杂交猪 (5头为免疫组 ,5头为对照组 ) ,用偶联物BSA CL对其进行免疫 ,来制备猪抗CL抗血清。以卵清蛋白 (OVA)跟CL的偶联物OVA CL为包被抗原 ,采用ELISA法测定抗血清效价和血清阻断率。结果表明 ,有 4头猪体内产生了抗CL抗体 ,且在第 2次加强免疫后达到最大 ,效价为 1∶2 0 0 0 0 ;而当血清稀释率为 1∶40 0 ,CL的PBS液浓度在 1 8× 1 0 - 4 ～ 7 0× 1 0 - 7之间时 ,其阻断率为 80 %～ 1 8%。随后用正辛酸 硫酸铵法对血清抗体进行纯化 ,经紫外吸收法测定和SDS PAGE电泳试验结果表明IgG成份得到了纯化 ,可用于进一步的免疫试验     

高能量低蛋白质日粮对蛋鸡载脂蛋白AⅠ和脂质代谢的影响

本试验旨在研究高能量低蛋白质日粮对蛋鸡载脂蛋白A Ⅰ(apo A Ⅰ)和脂质代谢的影响.选用140日龄健康海兰褐壳蛋鸡102羽,随机分为2组,对照组日粮代谢能与粗蛋白质含晕分别为11.51 MJ/kg和15.58%,试验组日粮代谢能与粗蛋白质含量分别为14.47 MJ/kg和12.55%,每组设3个重复,每个重复17羽.于试验期第1天、第15天、第25天、第35天、第45天和第55天,每组取6羽采血制备血清和采集肝脏样品,测定血清apo A Ⅰ含量和与脂质代谢相关的指标.结果表明,与对照组相比,试验组血清甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇浓度分别从第35天和第45天起显著升高(P<0.05,P<0.01),第45天起高密度脂蛋白胆固醇显著降低(P<0.05);试验组血清和肝脏匀浆中脂肪酶活性第25天和第35天起显著升高(P<0.05,P<0.01),脂蛋白脂酶活力第45天和第35天起显著升高(P<0.05,P<0.01);试验组血清和肝脏匀浆中游离脂肪酸含量升高,从25天起与对照组差异极最著(P<0.01);第35天开始试验组血清apo A Ⅰ含量显著下降(P<0.05).结果提示,高能量低蛋白质日粮能降低产蛋鸡血清apo AⅠ含量,促进肝脂的蓄积,导致产蛋鸡脂质代谢平衡破坏.     

鲤鱼IgM的分离纯化及其抗血清的制备

为了分离纯化鲤鱼血清免疫球蛋白M(IgM),并制备该蛋白的多克隆抗体,试验用rProtein A FF亲和层析和Superdex200 Increase 10/300GL分子筛的方法分离纯化鲤鱼血清免疫球蛋白M(IgM),并通过SDS-PAGE对纯化蛋白的部分特性进行分析;以纯化后的蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔制备该蛋白的多抗血清,用ELISA法检测抗血清效价。结果表明:从鲤鱼血清中分离纯化出鲤鱼IgM蛋白,纯化后纯度可达99.53%;重链和轻链的分子质量分别为81.3 ku、26.4 ku;兔抗鲤鱼多抗效价高达1∶640 000以上。说明试验所采用的rProtein A FF亲和层析法可提取到高纯度的鲤鱼IgM,适合在实验室纯化鱼类IgM。     

鸡、鸭SIgA的分离纯化及其抗体制备

黏膜免疫系统是机体抵抗病原微生物入侵的第一道防线,由于黏膜免疫比传统免疫途径更少产生动物应激,接种方便并可产生有效免疫保护,其在预防动物传染性疾病的良好应用前景而日益引起人们的关注。分泌型免疫球蛋白A分子(SIgA)是黏膜免疫的主要效应因子,它不仅可防止病原微生物在     

鸭肝炎病毒Ⅰ型的分离及其鸡胚适应性

鸭病毒性肝炎(duckviralhepatitis-Ⅰ．DVH—Ⅰ)1945年首次发现于美国的长岛。1953年起蔓延至世界各地．是小鸭的一种急性致死性传染病。该病的特征是发病急．传播迅速．死亡率高．主要感染5周龄以内的小鸭．以2周龄内的雏鸭最易感．对新生鸭的发病率高达100％．死亡率90％以上。近几年来．该病在浙江省养鸭地区的发生率呈上升趋势。现将鸭肝炎病毒Ⅰ型的分离及其鸡胚适应性的试验结果介绍如下。