人绒毛膜滋养层细胞体外培养及其应用

胎盘是胎儿与母体之间进行物质交换的重要器官,由滋养层细胞、毛细血管内皮细胞以及二者之间的基膜所构成.滋养层细胞在胚胎植入过程中起重要的调节作用,其增殖、分化、浸润等功能的失调与各种妊娠相关疾病的发生发展密切相关.因此,滋养层细胞的体外分离培养为研究妊娠相关疾病的发病机制提供了重要的实验基础,为研究各种物质通过胎盘屏障进入胎儿的具体机制奠定了细胞学基础.采用恰当的培养方法 获得足够数量的高纯度滋养层细胞,是进行相关研究的重要环节.该文对近年来国内外各种分离培养滋养层细胞的方法 进行综述.     

体外感染巨细胞病毒的胎盘滋养层细胞超微结构的变化

目的探讨巨细胞病毒(CMV)对胎盘滋养层细胞超微结构的影响.方法取无菌胎盘组织分离提纯滋养层细胞,以含20%感染CMV患者血清的培养液感染滋养层细胞(实验组),同时用含20%正常人血清的培养液感染滋养层细胞作为阴性对照(对照组),以透射电子显微镜观察其超微结构变化.结果实验组滋养层细胞肿胀,可见"猫头鹰眼细胞",细胞内观察到许多病毒颗粒样结构;溶酶体大量增生,可见到类似病毒核衣壳样小空泡;粗面内质网和高尔基复合体增生,线粒体增大.结论CMV可通过感染胎盘滋养层细胞进而使胎儿发生宫内感染;CMV使胎盘滋养层细胞超微结构发生改变,影响其在母-胎界面的免疫调节,丧失了对胚胎的免疫保护.     

体外感染巨细胞病毒的胎盘滋养层细胞超微结构的变化

目的:探讨巨细胞病毒(CMV)对胎盘滋养层细胞超微结构的影响。方法:取无菌胎盘组织分离提纯滋养层细胞,以含20%感染CMV患者血清的培养液感染滋养层细胞(实验组),同时用含20%正常人血清的培养液感染滋养层细胞作为阴性对照(对照组),以透射电子显微镜观察其超微结构变化。结果:实验组滋养层细胞肿胀,可见"猫头鹰眼细胞",细胞内观察到许多病毒颗粒样结构;溶酶体大量增生,可见到类似病毒核衣壳样小空泡;粗面内质网和高尔基复合体增生,线粒体增大。结论:CMV可通过感染胎盘滋养层细胞进而使胎儿发生宫内感染;CMV使胎盘滋养层细胞超微结构发生改变,影响其在母一胎界面的免疫调节,丧失了对胚胎的免疫保护。     

补体C3c及免疫复合物在HBV宫内传播中作用

目的探讨补体C3c及HBsAg-抗-HBs-补体C3c免疫复合物在乙型肝炎病毒（HBV）宫内传播机制中的作用。方法运用直接免疫荧光标记方法和免疫荧光双标记法分别检测母血乙肝表面抗原阳性胎盘组织中C3。及HBsAg-抗-HBs-补体C3c复合物的分布，在激光共聚焦显微镜下进行观察。结果在感染HBV的胎盘组织中，存在补体C3c和HBsAg-抗HBs-补体C3c复合物，位于胎盘滋养层细胞。结论HBV感染胎盘组织时，可能首先通过HBsAg-抗HBs-补体C3c复合物沉积在滋养层细胞表面与相应的IgG-Fc受体或补体成分C3结合，这对HBV病毒颗粒最终感染胎盘组织有着重要的意义。     

胎盘异铁蛋白在异常妊娠中作用的研究进展

胎盘异铁蛋白是一种免疫抑制因子 ,主要抑制妊娠过程中母体淋巴细胞对胎儿的同种异体免疫 ,使妊娠得以顺利进行 ,其低水平表达 ,不仅与一些肿瘤发生有关 ,而且与许多异常妊娠 ,如早产、流产、异位妊娠、胎儿宫内发育迟缓、妊高征、滋养细胞肿瘤以及多种妊娠合并症关系密切。对胎盘异铁蛋白的研究将促进妇产科多种疾病的诊治进展。     

胎盘异铁蛋白在异常妊娠中作用的研究进展

胎盘异铁蛋白是一种免疫抑制因子，主要抑制妊娠过程中母体淋巴细胞对胎儿的同种异体免疫，使妊娠得以顺利进行，其低水平表达，不仅与一些肿瘤发生有关，而且与许多异常妊娠，如早产、流产、异位妊娠、胎儿宫内发育迟缓、妊高征、滋养细胞肿瘤以及多种妊娠合并症关系密切。对胎盘异铁蛋白的研究将促进妇产科多种疾病的诊治进展。     

常见组蛋白修饰调控滋养层细胞谱系分化的研究进展

胎盘是决定妊娠建立及维持胎儿正常生长发育的重要器官, 其介导了母胎间的复杂对话。滋养层细胞是执行胎盘功能的一类重要细胞类型, 在胎盘发育过程中, 滋养层干细胞可分化为多种滋养层细胞亚型, 从而维持胎盘的结构和功能。组蛋白修饰可通过调控染色质的结构及基因转录参与滋养层细胞谱系的建立和维持。本文系统性总结了重要组蛋白甲基化及乙酰化修饰调控滋养层干细胞分化及胎盘发育的复杂作用及机制。     

细胞MAPK信号转导对滋养细胞功能的影响

胎盘滋养细胞是妊娠过程中最活跃的细胞之一,其功能失调导致一系列的妊娠相关疾病.因此,滋养细胞成为研究妊娠相关疾病的焦点.细胞内信号转导与疾病关系的研究是揭开疾病发病机制的重要途径,丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)是细胞内信号转导的重要途径,可能参与细胞生长、发育、分裂等多种生理过程,并在细胞恶性侵袭等病理生理过程中起重要的作用.妊娠期滋养细胞的MAPK通路可能对滋养细胞黏附、侵袭功能的影响起关键作用.     

妊娠滋养细胞疾病相关研究进展

妊娠滋养细胞疾病(GTD)是一组以滋养层细胞异常增生为特征的异质性疾病,具有广泛的组织学形态和临床生物学行为,主要包括葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌(简称绒癌)及胎盘部位滋养细胞肿瘤,其发病机制尚不明确.近年来,基于分子生物学层面的GTD病因学研究有了新的进展.综述有关细胞遗传、AP-1癌基因、maspin肿瘤抑制基因、抵抗素侵袭因子及环境因素等在滋养细胞疾病发病中的作用.     

Fas、Bcl-2与胎盘细胞凋亡的关系及在子痫前期发病中的作用

目的 探讨凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在胎盘滋养叶细胞中的表达及其意义,滋养叶细胞凋亡与Fas、Bcl-2两种蛋白的关系,从而于细胞凋亡的角度探讨子痫前期的发病机制.方法 用免疫组织化学SP法检测重度子痫前期患者20例,轻度子痫前期20例(试验组),同时选择同期正常晚孕妇女20例(对照组)做胎盘组织中Fas、Bcl-2蛋白的表达及滋养叶细胞凋亡检测.结果 细胞凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在子痫前期及正常孕妇胎盘组织中均有表达.Fas蛋白的表达在试验组明显高于对照组(P＜0.05),Bcl-2蛋白的表达在试验组低于对照组(P＜0.05);在试验组及对照组均可观察到细胞凋亡现象,在滋养层细胞(合体细胞滋养层及细胞滋养层)、间质细胞、血管内皮细胞胞浆及细胞核内均有表达,尤以合体细胞最多见.试验组细胞凋亡较对照组明显增多(P＜0.05).子痫前期时,Bcl-2与Fas蛋白的表达呈负性相关;Bcl-2蛋白表达与胎盘细胞凋亡呈负性相关,而Fas蛋白的表达与胎盘细胞凋亡呈正性相关(P＜0.01).结论 子痫前期的发病原因可能与胎盘滋养叶细胞凋亡及Bcl-2、Fas基因异常表达有关.     

The c-erbB-related oncoproteins in normal placenta and in gestational trophoblastic diseases (in vitro study)]

In this study the expression of epidermal growth factor receptor (EGFR) and c-erbB-2, c-erbB-3 and c-erbB-4 oncogenes were investigated in gestational trophoblastic diseases and normal first trimester placenta. Furthermore, the possibility that macrophage (IL-1 alpha, IL-1 beta, TNF) and lymphocyte (IL-2, gamma-IFN, GM-CSF) cytokines effects are mediated by changes in EGFR expression were studied. Paraffin sections of 16 cases of partial mole, 25 cases of complete mole, 10 cases of gestational choriocarcinoma and 11 cases of therapeutic abortion were studied immunohistochemically for EGFR, c-erbB-2, c-erbB-3 and c-erbB-4 proteins. The presence of EGFR mRNA was studied using in situ hybridization. JEG-3 human choriocarcinoma cells were incubated with varying concentrations of interleukin 1-alpha, interleukin 1-beta, interleukin 2, gamma-interferon, granulocyte-macrophage colony stimulating factor and tumor necrosis factor-alpha, and the expression of EGFR was measured by radioimmunoassay using a murine monoclonal antibody with specificity for EGFR. Staining for EGFR was detected immunohistochemically in all cell type in gestational trophoblastic diseases and normal placenta. The levels of expression of EGFR in choriocarcinoma and syncytiotrophoblasts and cytotrophoblasts in complete mole were significantly greater than those in syncytiotrophoblasts and cytotrophoblasts in both normal placenta and partial mole (p < 0.01, p < 0.01). The immunoreactivity of c-erbB-2 was significantly stronger in choriocarcinoma and extravillous trophoblast in complete mole than that in extravillous trophoblast in partial mole and normal placenta (p < 0.02, p < 0.01, respectively). Strong immunostaining for EGFR (p = 0.02) and c-erbB-3 (p < 0.01) in extravillous trophoblasts of complete mole was found to be significantly correlated with the development of persistent postmolar gestational trophoblastic tumor. Macrophage-derived cytokines IL-1 alpha, IL-1 beta and TNF significantly suppressed cell growth; this was associated with a significant increase in EGFR expression. The lymphocyte (IL-2, gamma-IFN, GM-CSF) cytokines had no significant effect on either EGFR expression or cell growth. These findings support the concept that cytokines may act as paracrine mediators of autocrine processes involved in choriocarcinoma cell growth regulation by modulating growth factor receptor expression. The EGFR-related family of oncogenes may be important in the pathogenesis and prognosis of gestational trophoblastic diseases.     

孕早期胎盘HBV感染的危险因素分析

目的:观察孕早期HBsAg阳性孕妇流产胎盘组织(乙型肝炎病毒)HBV感染情况,分析可能的危险因素,为进一步探讨HBV宫内感染机制提供线索,并为预防措施的制订提供初步的理论依据。方法:采用巢式病例对照研究,对355例自愿流产孕妇中外周血HBsAg阳性者按统一的调查表进行调查,并对其流产胎盘进行免疫组化和HBVDNA原位杂交检测,运用SPSS10.0统计软件对资料和结果进行统计处理和分析。结果:孕妇HBsAg携带率为7%;早期发育的胎盘HBV感染率为32%;孕妇外周血HBVDNA的高浓度(OR=22.5,P=0.004)和HBeAg阳性(OR=12.5,P=0.008),是孕早期胎盘感染的主要危险因素。结论:HBV可感染早期发育的胎盘,感染率为32%;血HBVDNA的高浓度和HBeAg阳性的孕妇,其孕早期胎盘感染HBV的可能性较大。     

Expression of polo-like kinase (PLK) in the mouse placenta and ovary

The polo-like kinase (PLK) is a mammalian serine/threonine kinase involved in cell cycle regulation. Much evidence for the role of PLK in the cell cycle has come from studies of cultured cells; however, little is known about its function or even expression in vivo. The present study examined the features of PLK expression in the mouse placenta and ovary. Immunohistochemical studies showed that PLK is highly expressed in the basement membrane of the endometrial gland, in some endothelial cells, in endometrium after embryo implantation, in trophoblastic tissue invading the decidua, in the ovarian stroma and in some lutein bodies. In contrast, PLK was not detectable by immunohistochemistry in endometrial stroma before decidualization, in decidua, in trophoblastic tissue not invading the decidua or in ovarian follicles. PLK expression seemed to be correlated with the expression of proliferation cellular nuclear antigen (PCNA) in many placental and ovarian cells, reflecting a role in cellular proliferation. Nevertheless, in ovarian stroma and lutein bodies where PCNA was not expressed, PLK was strongly expressed. This finding indicates that PLK may have some post mitotic functions in certain specialized cell types.     

乙肝病毒宫内感染机制及影响因素的研究

从2例宫内感染胎儿胎盘组织检测到HBV DNA,提示HBV可通过胎盘屏障感染胎儿,或者先感染胎盘组织并在其中复制,再感染胎儿。研究表明因胎盘破裂,母血混入而感染胎儿不是宫内感染的主要原因。母亲HBeAg阳性,尤其是HBV DNA阳性,其胎儿宫内感染的机率较大,但来自母体的抗-HBc没有抑制HBV复制和表达的作用。     

人正常早孕滋养细胞体外培养株的系统鉴定

目的 建立人早孕滋养细胞株（HPT-8）的系统鉴定方法。方法 通过光镜、扫描电镜、透射电镜、免疫组化和免疫荧光激光共聚焦的方法对体外培养出的HPT-8进行系统鉴定评价。结果 电镜下可见细胞表面微绒毛丰富；胞质丰富；内质网扩张明显，细胞间紧密的桥粒样结构连接；检测细胞胞浆中角蛋白18和波形蛋白均为阳性，细胞胞浆中角蛋白7为阳性，细胞膜上移动相关蛋白为阳性。表皮生长因子受体、滋养细胞趋化因子和胎盘碱性磷酸酶结果均阳性，而人绒毛促性腺激素和胎盘催乳素结果均为阴性。结论 通过多种方法对HPT-8进行形态、超微结构、蛋白骨架和功能指标的综合评价，可以较全面的确定体外传至72代的细胞株HPT-8为具有部分内分泌功能的滋养细胞株，为进一步开展实验研究建立细胞模型。     

乙型肝炎病毒宫内传播机制的分子流行病学研究

为了解乙型肝炎病毒 ( HBV)宫内传播的危险因素与机制 ,笔者进行了病例对照研究与胎盘组织的免疫组化。收集陕西省妇幼保健院 2 4 2例 HBs Ag阳性的孕妇及其新生儿作为研究对象。结果显示 ,母亲 HBe Ag阳性 ( OR=32 .63)和先兆早产史 ( OR=2 2 .80 )是主要的危险因素。在 32例足月孕妇的免疫组化 HBs Ag阳性的胎盘组织中 ,HBs Ag阳性率在脱膜细胞层为 10 0 % ,滋养层细胞为 59.38% ,绒毛间质细胞为 65.50 % ,绒毛毛细血管内皮细胞为 39.38% ,表明 HBV感染从母面到胎儿血管呈逐渐下降趋势 ( P<0 .0 1)。而且绒毛毛细血管 HBs Ag阳性与婴儿宫内感染有关( OR=2 0 .86,P<0 .0 1)。根据上述结果 ,我们提出假设 :HBV宫内传播可能有两条途径 :经先兆早产等引起的胎盘血管渗漏的“血源传播”和 HBV经胎盘各层细胞“转移”至胎儿血循环的“细胞转移传播”。     

乙肝血清标记物阳性孕妇的胎盘组织和PBMC的HBVDNA检测及意义

为探讨乙型肝炎病毒（HBV）宫内感染的机理,本文采用原位分子杂交技术,测定了20份外周血HBsAg/HBeAg双阳孕妇胎盘组织和24份HBsAg阳性孕妇外周血单核细胞（PBMC）的HBV DNA,结果发现,胎盘组织HBV DNA均阳性;HBV DNA主要分布于胎盘蜕膜,而绒毛滋养层细胞未见阳性,提示HBV已侵袭胎盘蜕膜,且可能在蜕膜细胞中有复制,但未累及绒毛,PBM HBV DNA测定结果表明,HBV DNA阳性率为58．3％（14／24）,阳性的孕妇中,有2例其婴儿发生了宫内感染。     

人巨细胞病毒影响绒毛外细胞滋养细胞增殖功能的体外研究

目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)对绒毛外细胞滋养细胞增殖功能的影响。方法:选择绒毛外细胞滋养细胞株HPT-8进行研究,体外培养时加入HCMV,免疫荧光法检测HCMV PP65,MTT法检测不同浓度HCMV、不同作用时间对HPT-8增殖的影响。结果:病毒感染组HPT-8细胞内可见大量红色HCMV PP65抗原信号;与正常对照组比较,10～100μl病毒液作用12 h HPT-8增殖均无异常(P>0.05),70μl和100μl病毒液作用24 h HPT-8增殖明显抑制(P<0.05),20、30、40、50μl病毒液作用48 h HPT-8增殖均明显抑制(P<0.05),10μl病毒液作用72 h HPT-8增殖明显抑制(P<0.05);其中,48 h和72 h时间点,20μl、30μl、40μl病毒液导致的细胞增殖异常差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HCMV可感染HPT-8并在细胞内复制,抑制细胞增殖。     

胎盘Hofbauer细胞的体外培养和鉴定

目的 通过对早孕胎盘绒毛膜Hofbauer细胞的分离,纯化和培养,寻找一种稳定、简便的,可获得较高纯度Hofbauer细胞的培养方法,以满足后续实验要求.方法 通过胰酶/胶原酶联合消化法对妊娠6～10周绒毛组织进行消化,获得单细胞悬液,根据不同细胞贴壁时间的差异,对Hofbauer细胞进行纯化,并通过免疫组织化学法对Hofbauer细胞进行鉴定.结果 获得了较高纯度的胎盘Hofbauer细胞,免疫组化法鉴定CD68阳性,细胞生长状态良好.结论 利用胰酶/胶原酶联合消化法及差异贴壁法可以获得满意的人胎盘Hofbauer细胞.     

巨细胞病毒感染对人早孕绒毛及蜕膜组织的内分泌影响

目的:探讨人巨细胞病毒(humancytomegalovirusHCMV) 感染对人早孕绒毛及蜕膜组织的内分泌影响。方法: 采用体外培养早孕绒毛及蜕膜组织技术, 给予HCMV感染建立体外HCMV感染早孕绒毛及蜕膜模型, 采用放射免疫法检测HCMV感染后早孕绒毛及蜕膜组织培养上清液中hCG和PRL的水平。结果: ①正常早孕绒毛培养液中hCG分泌峰值在培养后第7天。给予高浓度HCMV干预后, hCG水平显著下降(P<0 .01 ), 给予中浓度HCMV干预后, hCG水平明显下降(P<0. 05 ),给予低度HCMV干预后, hCG水平于培养的第1~3天有所下降, 与正常对照组无显著差别(P>0 .05)。②正常蜕膜培养液中PRL分泌峰值在培养后第5天达峰值, 给予高浓度HCMV干预后, PRL水平显著下降(P<0 .001), 给予中浓度HCMV干预后,PRL水平明显下降(P<0 .01), 给予低度HCMV干预后, PRL水平于培养的第1~5天明显下降(P<0. 05) 后渐恢复至正常水平。结论: HCMV感染可影响早孕绒毛及蜕膜组织的hCG和PRL的分泌, 导致不良妊娠结局。