ATRA和雄黄对白血病细胞PML基因及蛋白表达的影响

目的：探讨PML基因及蛋白在白血病中的表达和细胞内分布定位。方法经ATRA、雄黄处理后的NB4、HL－60、K562细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright‘s染色及荧光染色法;PML蛋白细胞内分布定位采用免疫荧光技术;PMLmRNA表达采用RT－PCR法。结果1,ATRA处理后,NB4和HL－60细胞形态学上出现分化表现,K562细胞无变化;经雄黄处理后,各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。2．ATRA处理后,NB4细胞内融合蛋白降解,PML蛋白恢复定位,HL－60、K562钠PML蛋白定位分布无变化;雄黄处理后NB4细胞内融合蛋白降解,PML聚积于POD结构,随后降解;在HL－60及K562细胞,PML发生相似改变。3．ATRA、雄黄处理后各组织细胞PMLmRNA表达均无显著影响。结论在不同诱导剂刺激下,PML基因在蛋白水平参与细胞终末分化及诱导白血病细胞凋亡机制;PML蛋白在POD中发挥诱导凋亡控制细胞生长的作用。     

槲皮素对NB4,HL—60细胞形态、PML mRNA及蛋白表达的影响

目的 探讨槲皮素对NB4,HL-60细胞的形态、PML mRNA及蛋白的表达影响。方法 以NB4,HL-60细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright′s染色法及荧光染色法;PML蛋白细胞内分布定位采用免疫荧光技术;PML mRNA表达采用RT-PCR法。结果 1）经槲皮素处理后,各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。2）槲皮素处理后NB4细胞内融合蛋白降解,PML聚积于POD结构,随后降解;在HL-60细胞,PML发生相似改变。3）槲皮素处理后各组细胞PML mRNA表达均无显著影响。结论 在槲皮素诱导下,PML在蛋白水平参与诱导白血病细胞凋亡机制;槲皮素能诱导,NB4,HL-60细胞凋亡,抑制白血病细胞生长。     

SeO2诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和p53表达调控的影响

目的：研究SeO2对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、红白血病细胞K562、急性粒细胞白血病细胞株HL-60的增生、凋亡及Bcl-2和p53表达水平的影响。方法:采用流式细胞术测定细胞的凋亡率及Bcl-2和p53的表达。结果:10和30mmol／L SeO2能抑制3种细胞增生。30mmol／L SeO2作用48h能使54．0％的NB4细胞、46．5％的K562细胞和49．6％的HL-60细胞发生凋亡；能使NB4和K562细胞Bcl-2表达显著下降、促进p53的表达。结论:SeO2对3种白血病细胞均有诱导凋亡作用，在凋亡过程中涉及了细胞内凋亡相关基因Bcl-2和p53表达和调控。     

补骨脂素加长波紫外线光化学疗法诱导HL-60、K562细胞凋亡及对Fas、FasL表达的影响

目的探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(PUVA)光化学疗法(UVA)诱导人白血病细胞HL-60、K562凋亡及对Fas、FasL表达的影响。方法以HL-60、K562细胞为研究对象,以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas、FasL在基因、蛋白水平的表达为检测指标,观察PSO加波长为360 nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果PSO、UVA照射及PUVA均可诱导HL-60、K562细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者。电镜下观察经PUVA处理后的HL-60、K562细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变。PSO、UVA照射及PUVA均可上调HL-60、K562细胞Fas在基因、蛋白水平的表达,下调FasL在基因、蛋白水平的表达,PUVA的作用显著强于前两者。结论PUVA可诱导白血病细胞HL-60、K562发生凋亡,作用强于PSO及UVA照射。PUVA诱导HL-60、K562细胞凋亡的途径之一为上调细胞Fas基因表达水平,下调FasL基因表达水平。     

SeO2诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和p53表达调控的影响

目的 研究SeO₂对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、红白血病细胞K562、急性粒细胞白血病细胞株HL-60的增生、凋亡及Bcl-2和p53表达水平的影响。方法 采用流式细胞术测定细胞的凋亡率及Bcl-2和p53的表达。结果 10和30mmol/LSeO2能抑制3种细胞增生。30mmol/LSeO₂作用48h能使54.0%的NB4细胞、46.5%的K562细胞和49.6%的HL-60细胞发生凋亡;能使NB4和K562细胞Bcl-2表达显著下降、促进p53的表达。结论 SeO₂对3种白血病细胞均有诱导凋亡作用,在凋亡过程中涉及了细胞内凋亡相关基因Bcl-2和p53表达和调控。     

槲皮素对K562细胞形态及VEGF表达的影响

目的探讨槲皮素对K562细胞的形态、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白分泌和VEGF mRNA表达的影响.方法以K562细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright's染色法;AnnecxinV标记检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测VEGF mRNA表达;ELISA法检测VEGF蛋白表达.结果1.经槲皮素处理后,细胞形态学上出现凋亡特征性改变;2.槲皮素处理后K562细胞凋亡率明显增加(P＜0.01);3.槲皮素能下调K562细胞VEGF mRNA的表达(P＜0.05);4.槲皮素处理后K562细胞显著降低VEGF蛋白的分泌(P＜0.05).结论槲皮素在体外能抑制白血病细胞K562生长并诱导其凋亡;槲皮素可抑制白血病细胞分泌VEGF.     

槲皮素对K562细胞形态及VEGF表达的影响

目的探讨槲皮素对K562细胞的形态、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白分泌和VEGF mRNA表达的影响.方法以K562细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright's染色法;AnnecxinV标记检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测VEGF mRNA表达;ELISA法检测VEGF蛋白表达.结果1.经槲皮素处理后,细胞形态学上出现凋亡特征性改变;2.槲皮素处理后K562细胞凋亡率明显增加(P＜0.01);3.槲皮素能下调K562细胞VEGF mRNA的表达(P＜0.05);4.槲皮素处理后K562细胞显著降低VEGF蛋白的分泌(P＜0.05).结论槲皮素在体外能抑制白血病细胞K562生长并诱导其凋亡;槲皮素可抑制白血病细胞分泌VEGF.     

通关藤提取物对白血病细胞的抑制作用及诱导凋亡研究

目的:探讨通关藤提取物对白血病细胞的抑制和凋亡作用。方法:以通关藤提取物处理白血病HL-60细胞、K562细胞,MTT法检测其对2种细胞的抑制作用,Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡程度,JC-1染色法检测细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm) 水平。结果:通关藤提取物对HL-60细胞的抑制作用强于K562细胞,增加药物作用的浓度和时间可以增强其对K562细胞的抑制作用。较高浓度的通关藤提取物能降低细胞内ΔΨm,并促进HL-60和K562细胞的凋亡。结论:通关藤提取物对不同白血病细胞有不同程度的抑制作用,可能是通过降低ΔΨm途径触发白血病细胞凋亡。      

STUDY ON EFFECTS OF QUERCETIN ON PML GENE AND PROTEIN IN LEUKEMIA CELL LINES

Objective To investigate the effect of quercetin on PML gene and protein expression andlocalization in leukemia cell lines. Methods Cell morphology was assayed by Wright's stain and fluorescence stain, and PML mRNA expression by RT-PCR , PML protein localization by immuno-fluorescence. Results NB4 and HL-60 cells differentiated morphologically after treatment with all-trans-retinoic acid (ATRA) while K562 cells did not differentiate. Typical apoptosis was found in each cell line after treatment with quercetin. Immuno-fluorescence analysis showed , after treatment with ATRA , the fusion protein disappeared in NB4 cells and PML protein relocated , while HL-60 and K562 cells had no difference from control cells. After treatment with quercetin, the fusion protein disappeared in NB4 cells, PML protein relocated, then degraded. In HL-60 cells and K562 cells, PML protein also located and then degraded . The expression of PML mRNA was not changed in all three cell lines after treatment with ATRA or quercetin. C     

中药518对人白血病细胞K_(562)、NB_4作用研究

目的　研究中药 5 18对K562 、NB4 细胞的作用 ;并比较 5 18A、5 18B药效。方法　用台盼蓝染色、光镜观察、流式细胞仪方法 ,观察 5 18A、5 18B处理K562 、NB4 细胞后形态学、生化指标的改变。结果　台盼蓝染色法证实 5 18A、5 18B对K562 、NB4 细胞有抑制作用 ,抑制率与药物浓度正相关 ;光镜下可见给药后细胞形态学改变 ;流式细胞仪检测显示中药 5 18对K562 细胞作用 48h后出现凋亡峰。结论　 5 18A、5 18B对K562 、NB4 细胞有抑制增殖作用 ,诱导K562 细胞凋亡 ,5 18A药效优于 5 18B。     

Effects of red orpiment on cell morphology and expression of PML mRNA and protein in NB4 and HL-60 cells

Objective To investigate the effects of red orpiment on cell morphology,expression of promyelocytic leukemia(PML)mRNA and its protein localization in NB4 and HL-60 cell lines.Methods Cell morphology was assayed by Wright’s staining and fluorescence staining,while PML mRNA expression was determined by RT-PCR.PML protein localization by evaluated by immunofluorescence staining.Results The typical apoptosis was found in NB4 and HL-60 cells treatment with red orpiment.The furion protein was no longer observed in NB4 cells,PML protein was relocated,and then degraded.In HL-60 cells,PML protein underwent a similar progress.The expression of promyelocytic leukemia(PML) mRNA was not changed in the treated cells.Concluslon Red orpiment inhibits the proliferation of leukemia cells by inducing them to undergo apoptosis.     

EFFECTS OF QUERCETIN ON CELL MORPHOLOGY AND EXPRESSION OF PML mRNA AND PROTEIN OF NB4 AND HL-60 CELLS

R6StUn Obotif Etudier l' activitd de qUehetine sur la mOW cellulaire, l' exI7rhaon dePML W et ta bolhotion de potdine PML des ceIlules W, HL-60. -- In mthe cellu-laire a etd etudide avec coloration de Wright, Asnt fiuorescent, I' extwon de PML mRNA per RTme etIa bolbotion de petdine M per ta metbo d' hamumpuoreasnce. helfats L' aaptOSe tyPque fottrouvde chez les celluIeS M et ar60 wt le traitemet per qUendtine. L' analySe d' imnzumpuorare amontrd qu' wi le traitemet per quercdt…     

5-AZA-CdR联合EGCG对HL-60和K562的影响

目的 探讨细胞因子INFα和甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷(5-AZA-CdR)能否诱导HL-60和K562 Xaf1表达,以及Xafl表达诱导剂联合表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是否具有协同抗癌作用.方法 (1)1000U/mlINFα和不同剂量的5-AZA-CdR作用于HL-60和K562 48 h.通过RT-PCR检测Xaf1和XIAP mRNA的表达并比较差异.(2)最佳Xaf1表达诱导剂联合EGCG作用于白血病细胞,流式细胞技术检测Bcl-2家族成员、线粒体膜电位和细胞凋亡的情况.结果 (1)随5-AZA-CdR剂量增加,HL-60和K562 Xaf1 mRNA表达增加,INFα也能诱导Xaf1表达,以5-AZA-CdR(5 μmol/L)的作用最强;ISFα和5-AZA-CdR均不影响XIAP mRNA的表达.(2)5-AZA-CdR和EGCG可改变HL-60和K562细胞Bcl-2(Bcl-x1)和Bax的表达,降低线粒体膜电位,诱导细胞凋亡,二者联合作用被加强.结论 (1)INFα和5-AZA-CdR能诱导HL-60和K562 Xaf1 mRNA的表达,且5-AZA-CdR的作用具有剂量依赖性.(2)5-AZA-CdR和EGCG在体外能诱导白血病细胞凋亡,并具有协同效应.     

DAPK过表达对HL-60 细胞生物学功能及caspase-3 表达的影响

目的探讨死亡相关蛋白激酶（DAPK）过表达对HL-60细胞生物学功能及对caspase-3表达的影响。方法采用RT-PCR技 术检测白血病细胞株DAPK基因mRNA的表达。运用真核表达载体pReceiver-M29-DAPK,用脂质体LipofectamineTM 2000介 导转染HL-60细胞,研究其过表达对白血病细胞凋亡、细胞周期及分化的影响,并对caspase-3表达的影响。结果DAPK基因在 K562、Molt4、U937细胞表达阳性,而HL-60细胞则表达阴性。转染pReceiver-M29-DAPK后,应用流式细胞术和Hoechst33342 染色可观察到转染后HL-60细胞出现凋亡,凋亡细胞百分率显著增高。PI单染和瑞氏染色法分析观察转染前后的HL-60细胞, 各细胞周期及形态均无改变。转染后caspase-3的表达水平显著增高。结论DAPK基因过表达的HL-60细胞凋亡增强,但对 HL-60细胞周期和细胞分化无影响。Caspase-3可能参与了凋亡调控。     

六种中药提取物对白血病细胞株的体外抑制作用研究

目的研究中药有效成分丹参酮ⅡA、粉防己碱、和厚朴酚、姜黄素、冬凌草甲素和丹皮酚对白血病细胞株SUP-B15、K562、CEM、HL-60、NB4的抗增殖作用。方法采用改良MTT法测定6种中药有效成分作用于上述5种白血病细胞株96h后细胞增殖活性的变化,利用线性回归方法计算药物对细胞作用的半数抑制浓度(IC50)值。结果丹参酮ⅡA对SUP-B15、K562、CEM、HL-60、NB4均有一定的增殖抑制作用,但是对HL-60细胞株的抑制作用明显低于其它白血病细胞株。粉防己碱、和厚朴酚、姜黄素、冬凌草甲素对5种细胞株均有增殖抑制作用,且作用相似,抑制作用差异无统计学意义。丹皮酚对5种肿瘤细胞株的增殖有一定的影响,但作用最弱。结论粉防己碱、和厚朴酚、姜黄素、冬凌草甲素对5种白血病细胞株SUP-B15、K562、CEM、HL-60、NB4均有增殖抑制作用,且差异并无统计学意义,证明它们抗白血病作用具有广谱性。丹参酮ⅡA对SUP-B15、K562、CEM、NB4的增殖抑制作用明显优于HL-60细胞株,说明它的抗白血病作用在不同细胞株中有差异性。丹皮酚对5种白血病细胞株的作用最弱。