幽门螺杆菌疫苗的研究现状

幽门螺杆菌（ＨＨ）是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因,并与胃癌的发生密切相关,其相关致病因子主要包括尿素酶、细胞粘附素、过氧化氢酶、脂酶、蛋白酶、细菌毒素和能导致炎症反应的物质。ＨＰ的致病机理与ＨＰ的致病性和宿主免疫应答有关,尤以细菌的毒性占主导地位。近年来国内外均关注ＨＰ的免疫预防和治疗。由于ＨＰ减毒活疫苗的研究条件尚不成熟,目前正重点进行全菌体死疫苗、组分疫苗及基因工程疫苗的研究,ＨＰ动物模型、疫苗的免疫途径、免疫佐剂的研究已取得了令人满意的进展,ＨＰ疫苗的治疗作用更引起了人们的关注。本文对ＨＰ的致病机理、疫苗的研究进展等做一综述。     

幽门螺杆菌及其疫苗研究现状及前景

幽门螺杆菌与引起慢性胃炎,消化性溃疡,胃癌等密切相关,但在其预防和治疗方面有和是一步探索。本文对幽门螺杆菌疫苗研究的进展进行了综述。今后疫苗可能将有效地预防和治疗幽门螺杆菌所致胃,十二指肠疾病。     

A组轮状病毒多个结构蛋白抗原表位的串联表达及其免疫原性的检测

从北京腹泻婴儿粪便提取的轮状病毒(rotavirus,RV)(T114株)的RNA中,克隆到轮状病毒结构蛋白基因vp4,vp6和vp7的全长cDNA,对它们编码的蛋白质序列和可能的抗原表位肽进行了预测,选择了RV主要抗原蛋白VP7、VP6和VP4的4个抗原表位肽,通过人工合成DNA的方式将这些抗原表位肽基因串联融合成一个阅读框RME(rotavirus multipleepitopes,RME)并构建原核表达载体.大肠杆菌表达的RME在ELISA反应中可被RV多克隆抗体识别,纯化的RME蛋白注射免疫小鼠可诱导特异性免疫应答,产生高滴度的同源氨基酸序列特异抗体和人RV抗体,其中针对RME的IgG抗体滴度达到l∶40 000,针对单个抗原表位EV7、EV6和EV4的IgG抗体滴度达l∶10 000～l∶20 000,针对RV Wa株的IgG抗体滴度较低为l∶2 500,但能特异地中和该病毒对MAC145细胞的侵染.上述结果为新型RV基因工程疫苗的研发提供了论据和基础.     

关于幽门螺杆菌疫苗及其相关性研究的报告

幽门螺杆菌感染是慢性胃炎、消化性溃疡的主要致病因素,并且与胃癌的发生有关。本文报告了幽门螺杆菌疫苗及其相关性研究的成果,包括细菌的分离培养、毒力基因分型、抗原的纯化及单克隆抗体的研制、动物模型的建立及其基因工程株的构建等。     

幽门螺杆菌致病岛CagL重组抗原的可溶性表达及其多克隆抗体的制备和分析*

目的:利用原核表达和蛋白质纯化技术获得高纯度的幽门螺杆菌致病岛CagL重组抗原(rCagL),利用其制备anti-CagL多克隆抗体,并分析抗体的特异性。方法:通过生物信息学软件分析rCagL的抗原结构;利用PCR长片段DNA合成技术合成不含有信号肽序列的幽门螺杆菌致病岛CagL基因,将其插入表达质粒pCzn1中,构建重组质粒pCzn1-rCagL。然后,将pCzn1-rCagL转入大肠杆菌Arctic Express中,经IPTG诱导表达后,通过Ni-IDA镍离子亲和层析纯化重组抗原rCagL,利用Western blot鉴定rCagL与His标签抗体和Anti-H. pylori抗体的免疫反应性;最后,通过rCagL辅以弗氏佐剂免疫BALB/c小鼠,制备anti-CagL多克隆抗血清,通过ELISA方法分析抗血清的特异性。结果:生物信息学软件表明重组抗原rCagL具有较好的抗原性质;重组质粒pCzn1-rCagL经双酶切和基因测序等技术鉴定,证实rCagL核苷酸序列与理论序列完全一致;基因工程菌株pCzn1-rCagL/Arctic Express在低温11℃条件经IPTG诱导表达。 SDS-PAGE实验结果证实:rCagL可实现相对高效地可溶性蛋白表达,可溶性蛋白约占包涵体的62.07%。经Ni-IDA亲和层析柱纯化,可获得高纯度rCagL,纯度约为96.6%。Western blot结果证实:重组抗原rCagL可特异性与His标签抗体和Anti-H. pylori抗体结合。ELISA结果证实:经rCagL免疫小鼠制备的多克隆抗体anti-CagL可特异性识别rCagL和H. pylori裂解物,具有较高的抗体特异性。结论:重组抗原rCagL在低温条件下可实现可溶性表达,经纯化可获得高纯度抗原蛋白;rCagL具有较好的抗原性,制备的多克隆抗体具有较好的免疫特异性,为发展H. pylori相关诊断试剂奠定了实验基础。     

幽门螺杆菌的治疗性疫苗

幽门螺杆菌感染的传统治疗方案面临着耐药性和依从性差的问题,而其治疗性疫苗有着广阔的应用前景.该文综述近年来幽门螺杆菌治疗性疫苗的研究进展,分别阐述幽门螺杆菌的感染免疫机制、主要抗原、佐剂、已有的治疗性疫苗等方面.     

幽门螺杆菌疫苗常用抗原的研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)属于Ⅰ类致癌因子,是慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等的首要病原菌。目前临床疗法存在诸多不足,而疫苗接种被认为是对抗大多数细菌感染的有效手段,也是当前防治H.pylori感染的研究热点,可作为抗生素疗法的补充。目前尚未研发出高效、安全的H.pylori疫苗,选择合适的抗原是研制疫苗成功的重要因素。本文总结了H.pylori疫苗研发领域经典抗原的研究进展,从分泌型毒力蛋白抗原、菌体表面抗原和胞内蛋白抗原三方面作一综述,为H.pylori感染预防的新策略提供更多依据。     

利用展示尿素酶B表位的大肠杆菌菌蜕递送幽门螺杆菌核酸疫苗

探讨和分析了重组大肠杆菌菌蜕递送系统能否进一步提高幽门螺杆菌核酸疫苗的免疫应答水平.首先构建了展示尿素酶B表位的重组大肠杆菌菌蜕,然后以此菌蜕包裹幽门螺杆菌核酸疫苗pcDNAKAT,经DNA凝胶电泳、荧光显微镜观察和FACS分析,表明该质粒DNA可以非特异地结合到大肠杆菌菌蜕内膜上.该核酸疫苗经重组菌蜕包裹后免疫小鼠,其血清抗过氧化氢酶抗体效价由单独免疫时的1∶(307±39)提高到1∶(520±54),二者差异极显著(P=0.005 8),结果表明利用菌蜕递送系统能较好地提高核酸疫苗的免疫应答水平.     

靶向PSMA多价纳米抗体的制备及其生物学活性表征*

目的:构建原核表达系统,制备靶向前列腺特异性膜抗原(prostate-specific membrane antigen,PSMA)多价纳米抗体并初步评价其生物学活性。方法:Bglbrick法构建多价纳米抗体表达载体,转化至大肠杆菌表达并利用亲和层析法纯化。联合蛋白质电泳和Western blot验证纯化产物,BCA法检测表达量。通过免疫荧光和流式细胞术定性评估PSMA特异性亲和能力,细胞ELISA法定量检测PSMA亲和水平,流式细胞术检测内吞效率。结果:成功构建靶向PSMA单价、二价、三价和四价纳米抗体大肠杆菌表达菌株。发酵结果表明四种纳米抗体均能在摇瓶水平实现高效可溶表达,其中二价纳米抗体表达量最高[(259.14±23.56) mg/L],单价纳米抗体表达量最低[(100.58±6.27) mg/L]。亲和实验结果证实四种纳米抗体均能特异性识别并结合PSMA阳性肿瘤细胞,与单价纳米抗体相比,二价、三价和四价纳米抗体对PSMA亲和能力分别提高了3.32倍、2.29倍和2.03倍。最后的内吞实验显示四种纳米抗体均能被PSMA阳性肿瘤细胞高效摄取,30 min内的摄取率均在80%以上。结论:靶向PSMA的多价纳米抗体,尤其是二价纳米抗体,具有比单价纳米抗体更高的产量和亲和水平,且具备不亚于单价纳米抗体的内吞效率,是未来基于PSMA肿瘤诊疗试剂开发的重要候选。     

幽门螺杆菌基因组研究

幽门螺杆菌Helicobacter pylori(Hp)是引起人慢性活动性胃炎和消化性溃疡的病原菌,同时与胃癌的发生密切相关.近年来Hp感染过程和其致病性的分子机理研究受到广泛的关注.根据其全基因组测序及基因功能解析结果阐述了Hp基因组中重要的结构特征,基因的表达调控方式,以及毒力相关基因在Hp感染中的作用等.     

复方嗜酸乳杆菌片治疗幽门螺杆菌感染的Meta分析

系统评价复方嗜酸乳杆菌片治疗幽门螺杆菌感染的有效性、安全性。

以“复方嗜酸乳杆菌片”“幽门螺杆菌感染”“Compound Eosinophil-Lactobacillus Tablets”“Helicobacter pylori infection”为主题词, 系统检索The Cochrane Library、PubMed、Springer、ProQuest、中国知网、万方和维普等数据库(建库-2020年5月)的随机对照试验文献。利用RevMan 5.3软件对复方嗜酸乳杆菌片的有效性、安全性进行Meta分析。

依据严格的纳入排除标准, 最终纳入18篇随机对照试验文献。Meta分析结果显示: 复方嗜酸乳杆菌片与一线治疗方案联合用药治疗幽门螺杆菌感染临床疗效更优[RR=0.84, 95%CI(0.80, 0.87), P < 0.000 01], 安全性更好[OR=2.83, 95%CI(2.30, 3.49), P < 0.000 01]。进一步亚组分析表明, 复方嗜酸乳杆菌片与四联疗法联合用药治疗幽门螺杆菌感染与四联疗法相比, 临床疗效更优[RR=0.88, 95%CI(0.83, 0.93), P < 0.000 01], 安全性更优[OR=2.58, 95%CI(1.92, 3.48), P < 0.000 01];复方嗜酸乳杆菌片联合三联疗法治疗幽门螺杆菌感染较三联疗法临床疗效更优[RR=0.81, 95%CI(0.76, 0.85), P < 0.000 01], 且安全性好[OR=3.09, 95%CI(2.31, 4.14), P < 0.000 01]。

基于现有文献, 在治疗幽门螺杆菌感染时, 复方嗜酸乳杆菌片与四联疗法或三联疗法联合用药具有一定的临床优势, 能提高幽门螺杆菌根除率, 降低不良反应发生率, 提高安全性。

     

抗日本血吸虫pVAX1／SjHGPRT·SDISP多价疫苗的构建方法探讨

目的：探讨抗日本血吸虫生殖产卵编码基因多价疫苗pVAX1／SjHGPRT·SDISP的构建方法并从基因与蛋白水平验证该构建方法是否成功。方法：分别以pcDNA3．0／SjHGPRT、pcDNA3．0／SjSDISP为模板,设计引物扩增SjHGPRT、sjSDISP,采用overlap方法扩增全长SjHGPRT·SDISP。将纯化后的产物sjHGPRT·SDISP以及pVaxl质粒采用KpnI和XbaI双酶切,1％低熔点胶回收目的DNA片段以及酶切后Pvaxl载体片段双胶连。连接产物转化至DH5a细胞。挑选阳性克隆采用双酶切以及测序方法从基因水平鉴定是否构建成功。将构建产物免疫观察动物,采用免疫组化方法从蛋白水平鉴定疫苗pVAX1／SjHGPRT·SDISP是否构建成功。结果：酶切方法以及测序结果均显示重组质粒的插入序列分别与目的基因完全一致,昆明小鼠肌肉组织酶免疫组织化学染色显示免疫组小鼠肌细胞中呈现较强的棕黄色颗粒,而阴性对照组肌细胞呈阴性。结论：真核重组质粒pVAX1／SjHG—PRT·SDISP构建成功,且在昆明鼠肌肉细胞内能够获得良好的表达。     

抗日本血吸虫pVAX1／SjHGPRT-SDISP多价疫苗对昆明小鼠的保护作用及其机制探讨

目的：探讨抗日本血吸虫生殖产卵编码基因多价疫苗pVAX1／sjHGPRToSDISP对昆明小鼠的保护作用及其机制。方法：选取昆明小鼠30只,分别使用pVAX1／sjHGPRToSDISP、pVAX1以及生理盐水,每只小鼠100ug或等量经左腿股四头肌注射。处理2周后,采集动物模型血样检测IgG、IL-2,IL-4,IL-10以及INF-Y表达量。处理4周后,以20±1条尾蚴贴腹感染,感染6周后检测减虫率、减卵率。结果：尾蚴攻击动物后6周,pVAX1／sjHGPRToSDISP免疫组的肝脏减虫率为42．2％,子宫与肝脏减卵率分别为68．04％以及72．96％。与对照组比较,差异有显著性。pVAX1／sjHGPRToSDISP免疫组虫体内IgG、IL-4以及INF．V表达量明显升高．与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论：pVAX1／sjHGPRToSDISP多价疫苗具有较好的免疫保护作用,且该类作用的机制与IgG、IL-4以及INF—v的表达升高存在关联。     

抗日本血吸虫pVAX1/ SjHGPRT·SDISP 多价疫苗对昆明小鼠的保护 作用及其机制探讨

目的:探讨抗日本血吸虫生殖产卵编码基因多价疫苗pVAX1/SjHGPRToSDISP对昆明小鼠的保护作用及其机制。方法:选取昆明小鼠30只,分别使用pVAX1/SjHGPRToSDISP、pVAX1以及生理盐水,每只小鼠100μg或等量经左腿股四头肌注射。处理2周后,采集动物模型血样检测IgG、IL-2,IL-4,IL-10以及INF-γ表达量。处理4周后,以20±1条尾蚴贴腹感染,感染6周后检测减虫率、减卵率。结果:尾蚴攻击动物后6周,pVAX1/SjHGPRToSDISP免疫组的肝脏减虫率为42.2%,子宫与肝脏减卵率分别为68.04%以及72.96%。与对照组比较,差异有显著性。pVAX1/SjHGPRToSDISP免疫组虫体内IgG、IL-4以及INF-γ表达量明显升高,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:pVAX1/SjHGPRToSDISP多价疫苗具有较好的免疫保护作用,且该类作用的机制与IgG、IL-4以及INF-γ的表达升高存在关联。     

Antimicrobial activity of aqueous extracts of Larrea divaricata Cav (jarilla) against Helicobacter pylori

We studied here the effect of aqueous extracts of Larrea divaricata Cav on the growth of Helicobacter pylori. Results show that cold extract, infusion, decoction and simulated digestion had inhibitory activity at 0.04–0.1 mg/l against clarithromycin and metronidazole susceptible and resistant H. pylori strains. These results support the popular use of L. divaricata Cav in gastric disturbances and prompt further research to characterize these compounds with a therapeutic potential against gastric ulcers and gastric cancer associated with H. pylori.