长链非编码RNA PCAT-1对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制研究

目的 研究长链非编码RNA前列腺癌相关转录本1(lncRNA PCAT-1)对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 qRT-PCR检测lncRNA PCAT-1在胰腺癌细胞系Capan-1、Capan-2、PANC-1、SW1990和正常胰腺细胞hTERT-HPNE中的表达水平.lncRNA PCAT-1表达最高的胰腺癌细胞系分为sh-NC组和sh-PCAT-1组,进行NC干扰慢病毒(shRNA)和PCAT-1 shRNA感染,qRT-PCR检测各组细胞中lncRNA PCAT-1的表达水平.3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓(MTS)实验检测沉默lncRNA PCAT-1的表达对细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测沉默lncRNA PCAT-1的表达对细胞周期和凋亡的影响;皮下移植瘤实验检测沉默lncRNA PCAT-1的表达对胰腺癌细胞体内生长能力的影响;Western blot检测lncRNA PCAT-1对细胞周期相关蛋白、凋亡相关蛋白和PI3 K/AKT信号通路关键蛋白的表达影响.结果 qRT-PCR检测结果显示lncRNA PCAT-1在胰腺癌细胞系的表达水平高于在正常胰腺细胞hTERT-HPNE中的表达(P＜0.05),与Capan-1、Capan-2和SW1990细胞相比,PANC-1细胞中lncRNA PCAT-1的表达最高.PANC-1细胞感染PCAT-1 shRNA,qRT-PCR结果显示,与sh-NC组相比,sh-PCAT-1组细胞中lncRNA PCAT-1的表达降低(P＜0.05);沉默lncRNA PCAT-1的表达后,PANC-1细胞的增殖能力降低,细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增加,细胞体内裸鼠成瘤能力降低,细胞周期蛋白cyclinD1和CDK6蛋白的表达减少,抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白减少,促凋亡蛋白Bax蛋白表达增加,PI3 K/AKT信号通路关键蛋白pPI3K和pPAKT蛋白表达减少.结论 沉默lncRNA PCAT-1的表达可能通过调控PI3K/AKT信号通路抑制胰腺癌细胞增殖和促进细胞凋亡.lncRNA PCAT-1可能是治疗胰腺癌的新型靶标.     

CXXC4调控胰腺癌PANC-1细胞迁移和侵袭的实验研究

目的 探究CXXC指蛋白4(CXXC4)对胰腺癌PANC-1细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(EMT)进程的影响。方法 组织芯片免疫组织化学染色实验检测14份癌旁胰腺组织和87份胰腺癌组织中CXXC4表达情况。采用免疫荧光实验检测人正常胰腺导管上皮细胞HPNE及人胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1和BxPC-3中CXXC4蛋白的表达水平。采用Western blot实验检测CXXC4敲降和过表达的转染有效性,划痕和Transwell实验分析敲降或过表达CXXC4对PANC-1细胞迁移、侵袭的影响。采用Western blot和免疫荧光实验检测细胞EMT标志物E-cadherin、Vimentin和ZEB2的表达水平。通过STRING网站预测与CXCC4有相互作用的蛋白,筛选出的蛋白进行GO和KEGG富集分析。结果 免疫组化分析结果表明,CXXC4在胰腺癌组织中的表达水平低于癌旁胰腺组织(P<0.05)。免疫荧光实验结果显示,与HPNE细胞相比,CXXC4在PANC-1、AsPC-1和BxPC-3中的荧光强度均显著降低(均P<0.05)。划痕和Transwell实验结果显示...     

N-myc下游调节基因对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制研究

目的 探究N-myc下游调节基因（NDRG1）对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响，并分析可能的机制。方法 体外培养人胰腺癌细胞系MZ-3262细胞，并分为空白对照组（细胞不做特殊处理）、pcDNA-NC组（细胞转染pcDNA-NC）、pcDNA-NDRG1组（细胞转染pcDNA-NDRG1）、通路抑制剂组［转染pcDNA-NDRG1后加入含终浓度为1 mmol/L 磷脂肌醇3-激酶（PI3K）通路激活剂bpv的培养液］；采用实时荧光定量聚合酶链反应检测NDRG1 mRNA的表达；CCK-8法检测细胞存活情况；划痕实验、Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力；Western blotting检测NDRG1、增殖及侵袭迁移相关蛋白［细胞增殖相关核抗原（PCNA）、E-钙黏附蛋白（E-Cadherin）、N-钙黏附蛋白（N-Cadherin）、波形蛋白（Vimentin）］及蛋白激酶B/转录激活因子3（Akt/STAT3）通路蛋白［PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、STAT3］的表达。结果 与空白对照组、pcDNA-NC组比较，pcDNA-NDRG1组、通路激活剂组MZ-3262细胞NDRG1 mRNA和蛋白、E-Cadherin蛋白相对表达量升高（P <0.05），细胞存活率、侵袭细胞数、划痕愈合率、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-STAT3/STAT3相对表达量降低（P <0.05）；但通路激活剂组MZ-3262细胞NDRG1 mRNA和蛋白、E-Cadherin蛋白相对表达量低于pcDNA-NDRG1组（P <0.05），细胞存活率、侵袭细胞数、划痕愈合率、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-STAT3/STAT3相对表达量高于pcDNA-NDRG1组（P <0.05）。结论 过表达NDRG1表达可能通过抑制PI3K/Akt/STAT3通路活化，抑制胰腺癌MZ-3262细胞增殖、侵袭及迁移。     

MicroRNA-219a-5p和AFAP1L2对胰腺癌细胞的作用研究

目的 探讨microRNA-219a-5p（miR-219a-5p）和肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2（AFAP1L2）对胰腺癌细胞的作用。方法 分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blotting法检测胰腺癌细胞株（PANC-1、BXPC-3、SW1990、Capan-1）及正常胰腺导管上皮细胞（HPDE）miR-219a-5p、AFAP1L2的表达，采用siRNA及过表达质粒下调或上调AFAP1L2表达，CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。采用mimics或inhibitor上调或下调miR-219a-5p表达，CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。流式细胞术检测不同干预条件下细胞凋亡和细胞周期。生物信息学预测两者可能具有靶向调控关系。qRT-PCR和Western blotting法检测AFAP1L2 mRNA及蛋白表达，荧光素酶实验观察二者碱基配对关系，进一步验证miR-219a-5p对AFAP1L2具有靶向调控作用。结果 与HPDE细胞比较，胰腺癌细胞株中miR-219a-5p表达较低（P <0.05）。AFAP1L2 mRNA及蛋白在胰腺癌细胞株中的表达高于在HPDE细胞中的表达（P <0.05）。Capan-1或SW1990细胞培养48 h后，与空白对照组（NC组）比较，pCMV-EGFP-AFAP1L2组光密度（OD）值升高（P <0.05），siAFAP1L2组OD值下降（P <0.05），AFAP1L2对胰腺癌细胞增殖具有正向调控作用。Capan-1及SW1990细胞培养48 h后，与miR-NC组比较，miR-219a-5p mimics组OD值下降（P <0.05），miR-219a-5p inhibitor组OD值升高（P <0.05），miR-219a-5p表达对胰腺癌细胞增殖具有负向调控作用；上调miR-219a-5p表达，可诱导细胞S期阻滞，导致细胞凋亡增加。miR-219a-5p负向调控AFAP1L2表达；荧光素酶实验显示，miR-219a-5p与AFAP1L2的3''-URT互补结合，miR-219a-5p与AFAP1L2存在靶向调控关系。结论 miR-219a-5p通过靶向调控AFAP1L2表达负向介导胰腺癌细胞增殖及凋亡。     

microRNA-372靶向SDC1抑制人胰腺癌上皮间质转化及侵袭

目的 探讨microRNA-372（miR-372）靶向调控SDC1基因表达抑制人胰腺癌上皮间质转化及侵袭的机制研究。方法 收集人胰腺癌及癌旁组织手术标本;qRT-PCR和免疫组化法检测组织中miR-372和SDC1表达;筛选miR-372表达水平最高的人胰腺癌细胞系进行分组和转染,实验分成6组,即空白对照组、阴性对照组、miR-372 mimic组、miR-372 inhibitor组、siRNA-SDC1组和miR-372 inhibitor+siRNA-SDC1组;双荧光素酶报告基因试验验证miR-372和SDC1基因的靶向关系;CCK8法、流式细胞术、划痕试验及Transwell试验分别检测各组细胞转染后增殖能力、凋亡情况、迁移及侵袭能力;qRT-PCR和Western blot法检测各组细胞转染后SDC1和上皮细胞标志物E-cadherin及间质表型细胞标志物Vimentin的表达水平。结果 SDC1蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织（P<0.05）。胰腺癌中miR-372、SDC1表达与肿瘤分化程度、转移和TNM分期显著相关（P<0.05）。双荧光素酶报告基因试验结果显示SDC1是miR-372的靶基因。与空白对照组和阴性对照组比较,miR-372 mimic组和siRNA-SDC1组细胞的生长、迁移和侵袭受到抑制,凋亡率增加,SDC1和Vimentin的表达水平明显降低,E-cadherin的表达水平明显升高（P均<0.05）;而miR-372 inhibitor组的趋势与miR-372 mimic组和siRNA-SDC1相反（P均<0.05）;然而,miR-372 inhibitor+siRNA-SDC1组与空白对照组和阴性对照组比较,各项指标差异均无统计学意义。结论 miR-372可能通过靶向抑制SDC1基因表达,抑制人胰腺癌细胞的迁移、侵袭和上皮间质转化。     

HIF-1α基因沉默后对SW480人结肠癌细胞生物学特性的影响

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α）基因沉默对SW480人结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法 利用脂质体法转染介导的siRNA干扰技术转染人结肠癌细胞SW480,设立干扰组：转染HIF-1α干扰序列;阴性对照组：转染无关序列;空载体组：为空白质粒;空白对照组：未转染。用Real-time PCR及Western blot、MTT比色法、流式细胞仪(FCM) 检测各组HIF-1α mRNA及蛋白的表达、SW480细胞增殖及凋亡。结果 干扰组在各时间点对HIF-1α mRNA表达的沉默效率均在80％以上,高于其他3组(P均＜0.05);与其余3组相比,干扰组HIF-1α蛋白相对表达量降低(P<0.05),增殖曲线表明其增殖受抑;凋亡率显著升高(P<0.01)。结论 HIF-1α基因沉默可促进人结肠癌细胞SW480凋亡,抑制肿瘤细胞生长。     

FGF21过表达抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭并促进细胞凋亡

目的 探讨成纤维细胞生长因子21(FGF21)基因过表达对人胰腺癌细胞株PANC-1凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响。方法 将含FGF21基因序列的重组慢病毒载体FGF21-3xflag-ZsGreen-PURO和空载体HBLV-ZsGreen-PURO感染人胰腺癌PANC-1细胞,采用Western blot和RT-qPCR检测过表达FGF21的PANC-1细胞中FGF21、Caspase3、Cleaved-caspase3、Caspase9蛋白和FGF21、肿癌坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的mRNA表达,流式细胞仪检测过表达FGF21的PANC-1细胞的凋亡,CCK-8法检测其增殖能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测其迁移和侵袭能力。结果 HBLV-h-FGF21-3xflag-ZsGreen-PURO转染人胰腺癌细胞株PANC-1后,FGF21蛋白表达水平较空载体感染组升高,凋亡蛋白Caspase3、Cleavedcaspase3、Caspase9蛋白的表达水平均升高（P均<0.01）;FGF21的mRNA表达水平较空载体感染组升高,且TNF...     

联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 探讨联氨基姜黄素（hydrazinocurcumin,HC）脂质体纳米颗粒（NPs）对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 通过薄膜分散-超声法制备联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒（HC-NPs）。用HC-NPs处理细胞后,MTT法检测细胞增殖,刘氏染色法检测细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,Transwell检测细胞的侵袭和迁移,Western blotting检测与细胞周期、凋亡、侵袭及迁移相关蛋白分子的变化。结果 HC-NPs可抑制MDA-MB-231细胞的增殖,使细胞形态变圆,诱导细胞发生G₂/M期阻滞,使细胞凋亡率明显增加（P＜0.01）,抑制细胞的侵袭和迁移。HC-NPs可下调磷酸化-信号转导和转录激活因子（p-STAT3）以及下游分子Cyclin D1、Survivin、Bcl-2及MMP-9的表达,上调Bax的表达。结论 HC-NPs可能通过抑制STAT3的激活,抑制细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。     

银杏叶提取物通过JAK2/STAT3信号通路调控食管癌细胞EC9706增殖、凋亡、侵袭、迁移的研究

目的 探讨银杏叶提取物对食管癌细胞EC9706增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及机制。方法 食管癌细胞EC9706分为对照组（不做任何处理）、不同浓度银杏叶提取物组（100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L银杏叶提取物）、银杏叶提取物+白细胞介素-6（IL-6）组（20 ng/ml IL-6和400 mg/L银杏叶提取物）。采用CCK-8法检测各组细胞的光密度（OD）值;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭;Western blotting检测细胞增殖核抗原Ki-67、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved-caspase-3）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、磷酸化酪氨酸激酶2（p-JAK2）、磷酸化信号转导和转录激活因子3（p-STAT3）蛋白相对表达量。结果 对照组,100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L银杏叶提取物组,银杏叶提取物+IL-6组细胞OD值比较,差异有统计学意义（P <0.05）;与对照组相比,不同浓度银杏叶提取物组EC9706细胞OD值均降低（P <0.05）,细胞活性降低,且呈浓度依赖性;银杏叶提取物+IL-6组较400 mg/L银杏叶提取物组EC9706细胞活性升高（P <0.05）。5组的细胞凋亡率比较,差异有统计学意义（P <0.05）;与对照组相比,不同浓度银杏叶提取物组EC9706细胞凋亡率升高（P <0.05）,且呈浓度依赖性;银杏叶提取物+IL-6组EC9706细胞凋亡率较400 mg/L银杏叶提取物组降低（P <0.05）。5组细胞的Ki-67、Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）;不同浓度银杏叶提取物组Ki-67蛋白相对表达量较对照组均降低（P <0.05）,银杏叶提取物+IL-6组Ki-67蛋白相对表达量较400 mg/L银杏叶提取物组升高（P <0.05）;不同浓度银杏叶提取物组Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量较对照组均升高（P <0.05）,银杏叶提取物+IL-6组Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量较400 mg/L银杏叶提取物组降低（P <0.05）。对照组、400 mg/L银杏叶提取物组、银杏叶提取物+IL-6组细胞的MMP-2、MMP-9、p-JAK2、p-STAT3蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）;400 mg/L银杏叶提取物组较对照组均降低（P <0.05）,银杏叶提取物+IL-6组较400 mg/L银杏叶提取物组均升高（P <0.05）。对照组、400 mg/L银杏叶提取物组及银杏叶提取物+IL-6组EC9706细胞迁移数、细胞侵袭数比较,差异有统计学意义（P <0.05）;400 mg/L银杏叶提取物组EC9706细胞迁移数、细胞侵袭数较对照组减少（P <0.05）,银杏叶提取物+IL-6组EC9706细胞迁移数、细胞侵袭数较400 mg/L银杏叶提取物组增多（P <0.05）。结论 银杏叶提取物可能通过阻断JAK2/STAT3信号通路抑制食管癌细胞EC9706增殖、侵袭、迁移,促进细胞凋亡。     

miR-431-5p通过调控AKT1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡研究

目的研究miR-431-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测人正常胰腺上皮细胞hTERT-HPNE和胰腺癌细胞CFPAC-1和PANC-1中miR-431-5p表达水平。转染miR-431-5p模拟物至胰腺癌CFPAC-1细胞中过表达miR-431-5p后,MTT法测定细胞增殖活性,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞中Cyclin D1、p21、Bax、Bcl-2、E-cadherin、MMP-2和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-431-5p与AKT1的调控关系。结果与hTERT-HPNE细胞相比,胰腺癌细胞PANC-1和CFPAC-1中miR-431-5p表达量降低（P < 0.05）。过表达miR-431-5p后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数降低,凋亡率升高,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-431-5p在CFPAC-1细胞中靶向负调控AKT1表达。同时过表达miR-431-5p和AKT1后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数升高,凋亡率降低,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论miR-431-5p通过靶向抑制AKT1降低胰腺癌CFPAC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡,可能是胰腺癌的潜在分子治疗靶点。     

伏立诺他抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖及其血管生成拟态的相关研究

目的 研究伏立诺他(SAHA)对人胰腺癌PANC-1细胞体外增殖、迁移及其细胞凋亡的影响，观察SAHA对胰腺癌PANC-1细胞主导的血管生成拟态的作用以及对PANC-1细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达水平的影响。 方法 倒置显微镜下观察不同浓度的SAHA对PANC-1细胞增殖的作用。MTT比色法检测SAHA对PANC-1细胞的毒性作用。行细胞划痕试验观察SAHA对PANC-1细胞迁移的作用。流式细胞仪分析SAHA对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响。利用细胞三维培养技术观察经SAHA诱导24 h后的胰腺癌PANC-1细胞体外类血管结构形成情况。Western blotting技术检测SAHA处理后的胰腺癌PANC-1细胞中MMP-2的表达水平。 结果 SAHA能显著抑制人胰腺癌PANC-1细胞的生长，且呈明显的剂量依赖性关系。与对照组相比，SAHA组均能抑制PANC-1细胞迁移(均P＜0.01)。SAHA可诱导人胰腺癌PANC-1细胞发生细胞凋亡。体外三维培养显示，SAHA组较对照组均能抑制PANC-1细胞主导的血管生成拟态(均P＜0.05)。随着SAHA浓度的递增，PANC-1细胞中MMP-2的表达水平呈现下降趋势(P＜0.05)。 结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA能有效抑制人胰腺癌PANC-1细胞体外增殖、迁移并诱导其发生细胞凋亡，SAHA下调MMP-2的表达可能是SAHA抗胰腺癌血管生成拟态的机制之一。      

CXCR1调控STAT3信号通路对结肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨化学趋化因子受体1（CXCR1）对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 收集结肠癌组织和对应的癌旁组织,提取组织蛋白,Western blot法检测组织中CXCR1表达水平。以人结肠癌细胞HCT116为研究对象,细胞转染CXCR1小干扰RNA（CXCR1 siRNA组）,同时转染siRNA对照组。设置对照组,对照组中只加入转染试剂。培养48h后,Western blot法检测细胞中CXCR1、Bcl-2、Bax、STAT3、p-STAT3表达水平,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。人结肠癌细胞与STAT3信号通路抑制剂AG490作用后,检测细胞增殖凋亡情况。结果 CXCR1在结肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织（P<0.01）。CXCR1 siRNA组细胞中CXCR1、p-STAT3、Bcl-2蛋白水平和细胞存活率明显低于对照组（P<0.01）。CXCR1 siRNA组细胞中Bax水平和细胞凋亡率明显高于对照组（P<0.01）。siRNA对照组细胞中CXCR1、Bcl-2、Bax、STAT3、p-STAT3水平和细胞凋亡率、细胞存活率与对照组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。抑制剂作用后的细胞增殖凋亡趋势与CXCR1 siRNA组细胞相一致。结论 CXCR1在结肠癌组织中表达上调。抑制CXCR1的表达可以抑制结肠癌细胞增殖,促进结肠癌细胞凋亡,作用机制与STAT3信号通路有关。     

NEDD4L和ULK1在非小细胞肺癌中的表达及预后价值

目的 研究非小细胞肺癌（NSCLC）组织中NEDD4样E3泛素蛋白连接酶（NEDD4L）、UNC-51样激酶1（ULK1）的表达及临床意义。方法 选取2017年1月—2018年1月三二〇一医院收治的88例NSCLC患者作为研究对象。应用R语言分析癌症基因组图谱（TCGA）数据库中NSCLC及癌旁组织中NEDD4L和ULK1 mRNA的表达差异，免疫组织化学法分析癌组织和癌旁组织中NEDD4L和ULK1蛋白的表达，Kaplan-Meier法分析NEDD4L、ULK1表达与患者生存预后的关系，单因素及多因素Cox回归分析影响NSCLC患者生存预后的危险因素。结果 癌组织NEDD4L mRNA相对表达量低于癌旁组织（P <0.05），ULK1 mRNA相对表达量高于癌旁组织（P <0.05）。癌组织NEDD4L的阳性表达率低于癌旁组织（P <0.05），ULK1的阳性表达率高于癌旁组织（P <0.05）。有无淋巴结转移、不同TNM分期患者的癌组织NEDD4L、ULK1阳性表达率比较，差异有统计学意义（P <0.05）。Spearman相关性分析结果显示，NSCLC患者癌组织中NEDD4L与ULK1的表达呈负相关（r_s =-0.587，P <0.05）。NEDD4L阴性表达患者3年总体生存率较阳性表达患者低（P <0.05），NEDD4L阳性表达患者平均生存时间较阴性表达患者长（P <0.05）。ULK1阳性表达患者3年总体生存率较阴性表达患者低（P <0.05），LK1阳性表达患者平均生存时间较阴性表达患者长（P <0.05）。单因素Cox回归分析结果显示，肿瘤TNM分期Ⅲ期［H^R=1.898（95% CI：1.320，2.729）］、NEDD4L阴性表达［H^R=1.654（95% CI：0.921，2.588）］和ULK1阳性表达［H^R=1.692（95% CI：0.860，2.650）］是NSCLC患者预后的影响因素（P <0.05）。多因素Cox回归分析结果显示，NEDD4L阴性表达［H^R=1.878（95% CI：0.961，2.995）］、ULK1阳性表达［H^R=1.679（95% CI：0.785，2.884）］及肿瘤TNM分期Ⅲ期［H^R=1.937（95% CI：1.131，3.317）］是NSCLC患者不良预后的独立危险因素（P <0.05）。结论 NSCLC中NEDD4L表达降低，ULK1表达升高，NEDD4L、ULK1的表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移有关，NEDD4L阴性表达、ULK1阳性表达是NSCLC患者不良预后的独立危险因素。     

Kruppel样因子6对肝癌HepG2细胞的作用及其缺失对斑马鱼肝脏发育的影响

目的 探讨Kruppel样因子6（KLF6）低表达对肝癌细胞凋亡及迁移能力的影响,并以斑马鱼作为动物模型,研究klf6基因沉默对肝脏发育的作用。方法 构建敲除KLF6基因质粒,转染肝癌细胞（HepG2）及正常人肝细胞（L-02）,通过免疫印迹（WB）、凋亡及细胞周期测定、划痕实验检测KLF6基因敲除后对HepG2细胞的影响;设计合成沉默KLF6基因的吗啉代寡核苷酸（Morpholino）,显微注射入转基因斑马鱼Tg（lfabp：eGFP）胚胎中,通过免疫荧光法观察KLF6蛋白表达的变化以及对转基因斑马鱼胚胎肝脏发育表型的影响。结果 体外实验表明,L-02细胞中的KLF6蛋白的表达量明显高于HepG2细胞;敲除KLF6基因后,HepG2细胞KLF6蛋白表达明显减少、凋亡减弱、细胞周期主要集中于S期、迁移能力增强;体内实验表明,klf6基因沉默后,斑马鱼胚胎肝脏中的KLF6蛋白表达量减少,肝脏发育明显迟缓。结论 KLF6基因低表达促进肝癌细胞的增殖和迁移能力,减少凋亡;且影响斑马鱼肝脏的正常发育。探讨KLF6基因低表达及其功能,可为以后斑马鱼肝癌模型建立及药物筛选提供理论基础。     

胰腺癌微环境下CXCL5的表达及其与患者不良预后的关系

目的 探讨胰腺癌微环境下趋化因子C-X-C配体5（CXCL5）的表达及其与患者不良预后的关系。方法 应用免疫组化检测38例胰腺癌组织标本中CXCL5的表达;应用ELISA检测正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7及胰腺癌细胞系AsPC-1,PANC-1, BxPC-3上清液中CXCL5的表达;分析CXCL5表达与胰腺癌患者临床病理资料及总生存率的相关性;采用BxPC-3细胞上清液（BxCM）体外模拟胰腺癌微环境,流式细胞仪、ELISA及细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤实验评价肿瘤微环境下CXCL5对树突状细胞（DC）免疫功能的影响。结果 CXCL5在胰腺癌组织中表达量显著高于对应癌旁组织（4.448 vs. 1.910,P<0.05）,在各胰腺癌细胞系上清液中表达量也均明显高于HPDE6-C7细胞（均P<0.05）;CXCL5表达量与胰腺癌的TNM分期、血管侵犯有关（均P<0.05）;CXCL5高表达胰腺癌患者的总生存率明显低于低表达者（5.263% vs. 26.316%, P<0.05）;下调CXCL5能够显著降低BxCM对DC的抑制（均P<0.05）。结论 CXCL5在胰腺癌中表达异常增高且与胰腺癌的TNM分期及不良预后密切相关,其机制可能与抑制DC的免疫功能有关。     

四硫代钼酸铵抑制铜转运蛋白-1用于胰腺癌治疗的体内外研究

  目的  检测胰腺癌细胞、原位异种移植的原位胰腺癌小鼠模型和临床胰腺癌组织标本中铜转运蛋白1（copper transporter 1, CTR1）的表达,并验证铜螯合剂四硫代钼酸铵（ammonium tetrathiomolybdate, TM）通过调控胰腺癌细胞中CTR1的表达对胰腺癌的抑制效果。  方法  采用免疫组化法检测22例临床胰腺导管癌及距肿瘤0.5~1 cm的癌旁组织标本中CTR1和抗氧化蛋白1（ATOX1）的表达情况。采用PANC-1细胞构建5只原位胰腺癌裸鼠模型,收集胰腺癌组织中及对应的正常胰腺组织,免疫组化法检测CTR1和ATOX1的表达情况,与临床标本进行比较。采用10、30、50、100 μmol/L TM处理人胰腺癌细胞株PANC-1 24 h、48 h、72 h后,使用CCK-8法检测细胞增殖情况;50 μmol/L TM处理PANC-1 24 h、48 h后,划痕实验检测PANC-1细胞侵袭能力变化;10、30、50、100 μmol/L TM处理PANC-1 48 h后,Western blot检测CTR1、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）和细胞周期蛋白CyclinD1的表达。采用PANC-1细胞建立裸鼠皮下荷瘤模型,分别给予不同剂量TM（0.3 mg/d,1.0 mg/d）灌胃24 d后,观察肿瘤生长情况。  结果  免疫组化结果提示,22例临床胰腺导管癌患者组织标本中,19例（86.36%）出现CTR1高表达,且在PANC-1裸鼠原位移植瘤组织中CTR1同样高表达。使用TM处理PANC-1细胞后,细胞增殖抑制程度随着TM剂量的升高、处理时间的延长而逐渐增强;细胞迁移能力下降;胞内CTR1、VEGF和CyclinD1的表达均随着TM剂量的升高而降低。PANC-1荷瘤裸鼠在给予不同剂量TM后,肿瘤生长出现抑制,TM高剂量组的肿瘤体积和肿瘤质量减小更为明显（P<0.05）。  结论  胰腺癌中CTR1表达异常增高,针对这一靶点使用铜螯合剂治疗可能有助于抑制胰腺癌生长迁移。     

内质网相关降解通路小分子抑制剂与传统抗癌药物联合运用对肿瘤细胞的抑制作用

目的 探究内质网相关降解通路(endoplasmic reticulum-associated degradation,ERAD)小分子抑制剂EeyarestatinⅠ(EerⅠ)与传统抗癌药物联合运用对肿瘤细胞的抑制作用。方法 不同剂量的EerⅠ处理结肠癌SW480和胰腺癌PANC-1细胞,MTS法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率;EerⅠ单独或与抗癌药物顺铂(cisplatin,CDDP)和硼替佐米(bortezomib,BTZ)联用处理SW480和PANC-1细胞,Western blot法检测细胞中Poly ADP-ribose polymerase(PARP)及其剪切体和糖调节蛋白(GRP78/BiP)的蛋白表达。结果 EerⅠ抑制SW480和PANC-1细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.01),且呈剂量-效应关系;联合用药的实验结果显示EerⅠ提高了SW480和PANC-1细胞对CDDP和BTZ的敏感度(P<0.01);Western blot法检测结果表明,联合用药促进了PARP在SW480和PANC-1细胞中的剪切,同时BTZ处理可提高BiP蛋白的表达,提示激活内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)反应。结论 ERAD通路抑制剂EerⅠ可明显增强传统抗癌药物CDDP和BTZ的抗癌活性,这为抗癌新药研发及肿瘤耐药性逆转剂的研究提供了新的线索。     

沉默HE4对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡和JAK/STAT3信号通路的影响

目的 探讨沉默人附睾蛋白4(HE4)对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡和JAK/STAT3信号通路的影响.方法 选取124例结肠癌患者和40例健康人.用Western blot和免疫组织化学染色法检测结肠癌组织和癌旁组织中HE4的表达水平.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结肠癌患者和健康人血清中HE4的表达水平.Western blot检测结肠癌细胞株Caco-2、SW480、HT-29、HCT-116和正常结肠上皮细胞株HCoePic 中 HE4的表达水平.用 HE4 si-RNA 或 si-control 分别转染HT-29细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Annexin-V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况.Western blot检测JAK1、p-JAK1、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3的蛋白表达水平.结果 结肠癌组织HE4蛋白相对表达量高于癌旁组织(P＜0.05).HE4在结肠癌组织中呈阳性表达,其中高表达78例(62.90％),而癌旁组织中高表达仅24例(19.35％),差异有统计学意义(P＜0.05).结肠癌患者血清HE4浓度高于健康人(P＜0.05).结肠癌 Caco-2、SW480、HT-29、HCT-116细胞的HE4蛋白相对表达量均高于正常结肠上皮HCoePic细胞(均P＜0.05).HE4表达水平与性别、年龄、肿瘤大小无关,而与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关(P＜0.05).沉默HE4后,HT-29细胞的增殖和侵袭能力下降,而凋亡率提高(均P＜0.05).沉默HE4对JAK1、JAK2和STAT3总蛋白无明显影响,但是可以下调p-JAK1、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达量(均P＜0.05).结论 沉默HE4可以抑制结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡,并且下调JAK/STAT3信号通路相关蛋白的表达.     

RAB10对胰腺癌细胞生物学功能的影响及临床意义

目的 研究RAS癌基因家族成员RAB10在胰腺癌中的表达情况及其对人胰腺癌细胞系SW1990细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 利用癌症基因数据库GEPIA和TCGA中胰腺癌的数据分析RAB10 mRNA在胰腺癌组织中的表达；Cox回归分析RAB10 mRNA表达水平与胰腺癌患者预后关系；靶向RAB10的小干扰RNA(RAB10-siRNA)作为沉默组、构建过表达RAB10质粒(RAB10-OE)作为过表达组；使用Q-PCR检测沉默及过表达效果；Western blot实验检测蛋白表达水平；EdU细胞增殖实验、划痕实验、Transwell实验、流式细胞实验分别分析RAB10对SW1990增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。结果 胰腺癌组织中RAB10 mRNA的表达量明显高于正常胰腺组织(P<0.05);EdU细胞增殖实验结果显示，RAB10-OE组的SW1990细胞的增殖率明显高于对照组，RAB10-siRNA组SW1990细胞的增殖率低于对照组(P<0.05);Transwell实验和划痕实验结果显示，RAB10-OE组细胞侵袭率及迁移率均高于对照组，RAB10-siR...     

miR-519b-3p调控IL-6/STAT3通路对宫颈癌细胞凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨miR-519b-3p调控IL-6/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路对宫颈癌细胞(SiHa)凋亡、迁移、侵袭的影响。 方法qRT-PCR检测miR-519b-3p在宫颈癌组织中的表达。SiHa细胞分为miR-NC组、miR-519b-3p组、miR-NC+RhIL-6组、miR-519b-3p+RhIL-6组。流式细胞术评估SiHa细胞凋亡率,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。Western blotting检测B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、Bcl相关x蛋白(Bax)、STAT3和p-STAT3蛋白水平。 结果与癌旁组织比较,宫颈癌组织miR-519b-3p表达下调(P＜0.05)。SiHa细胞凋亡率、Bax和E-cadherin蛋白水平miR-519b-3p组高于miR-NC组,miR-NC+RhIL-6组低于miR-NC组,miR-519b-3p+RhIL-6组低于miR-519b-3p组(P＜0.05)。SiHa细胞迁移数、侵袭数、Bcl-2、N-cadherin、p-STAT3蛋白水平miR-519b-3p组低于miR-NC组,miR-NC+RhIL-6组高于miR-NC组,miR-519b-3p+RhIL-6组高于miR-519b-3p组(P＜0.05)。 结论miR-519b-3p通过抑制IL-6/STAT3通路来抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭,并增加细胞凋亡。