阻断Wnt/β-catenin信号通路对肝星状细胞活化的影响

目的：探讨活化的肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）内是否存在功能性Wnt／β-catenin信号通路的激活，以及阻断该信号通路对HSC活化的影响。方法：免疫细胞化学染色检测β-catenin在HSC-T6细胞内的表达。通过转染T细胞因子（T-cell factor，TCF）依赖的荧光素酶报告质粒（pTOPFLASH）测定HSC-T6细胞内的Wnt／β-catenin信号。将TCF的显性负性突变体（dominant negative TCF，dnTCF）表达质粒转染HSC-T6阻断Wnt／β-catenin信号的转导．用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原表达变化。结果：HSC-T6细胞的核内有β-catenin的表达，转染pTOPFLASH的细胞荧光素酶活性显著高于对照组（P〈0．01）。与对照组相比，转染dnTCF的HSC-T6细胞α-SMA及Ⅰ型胶原表达均显著下降（P〈0．05）。结论：活化的HSC中存在Wnt／β-catenin信号通路的激活．阻断该信号通路可抑制HSC的活化。     

血小板促进肝再生的作用机制及其研究进展

肝脏具有强大的再生能力,肝切除术或肝移植术的成功,主要取决于术后肝脏能否恢复正常的生理功能和体积。研究表明,血小板在促进肝再生中发挥着重要作用。然而,其作用机制尚未完全明确。本文就血小板促进肝再生的作用机制及其研究进展作一综述,以期为肝切除或肝移植相关术后肝再生提供新的治疗策略。     

微波辐射对基因表达和相关信号通路的影响

微波是一种频率在300MHz～300GHz的电磁波。随着微波技术广泛应用于农业、交通、通讯、医疗和军事等各领域，其所引起的生物效应越来越受到人们的关注。一定强度的微波辐射可通过热和（或）非热效应造成机体损伤，进而影响中枢神经、心血管、内分泌、消化、造血和免疫等系统的形态和功能、个体的生长发育以及肿瘤的发生等。近年来，对微波的生物效应及其机制的研究不断深入，特别是从基因及蛋白水平探讨微波对生物体的作用已成为研究的热点。本文就微波辐射后基因表达、差异基因和蛋白的筛选以及相关信号通路的变化进行综述。     

骨关节炎相关信号通路的研究

目前已经证实骨关节炎(OA)的发生、发展与许多细胞信号通路存在密切相关性。围绕这些通路进行相关药物及非药物治疗OA机制的研究成为热点,为了更方便地熟悉这些通路与OA的关系,本文将对Notch、Wnt、SDF-1/CXCR4、OPG-RANK-RANKL及p38-MAPK信号通路与OA的关系作一综述,以期为从信号通路层面研究OA的发病、治疗及康复机制奠定理论基础。     

特异性信号通路在骨修复和再生中的作用研究进展

骨再生策略修复骨缺损展示了巨大潜力.虽然骨骼具有较强的自愈和修复能力,但对于创伤、先天畸形、感染和手术引起的巨大骨缺损,骨骼很难自我修复.为了促进骨骼再生,必须通过生物活性植入材料、细胞和细胞内外分子信号传导途径诱导骨生长.其中间充质干细胞(MSC)在骨修复和重塑中具有重要作用.了解MSC和信号通路在骨修复和再生中的作用,对于骨修复材料的研究和发展至关重要.     

异基因骨髓移植治疗重型再生障碍性贫血

采用大剂量抗淋巴细胞球蛋白、环磷酰胺的非照射预处理方案对３例重型再生障碍性贫血患者进行了异基因骨髓移植（ａｌｌｏ－ＢＭＴ）治疗。３例患者均为男性，年龄分别为２８岁，２１岁，２０岁，病程分别为２周，３周，８周。诊断到骨髓移植平均为２４日。移植后均给予ＧＣＳＦ３００μｇ·ｍ￣（－２）·ｄ￣（－１）和的Ｍ－ＣＳＦ８００ＩＵ／ｄ。两例患者已分别正常生存３４￣＋月和３２￣＋月，其染色体及红细胞酶检查，均为供者型（４６ＸＸ）。另一例输血后移植的病例发生免疫排斥反应而死亡。２例移植成功的患者骨髓恢复造血的时间提前，中性粒细胞达＞０．５×１０￣９／Ｌ分别是１３日和１５日，免疫功能恢复时间也提前，Ｔ细胞亚群在术后３个月内恢复正常。作者阐述了预处理方案的机制，并指出联合应用细胞因子有协同造血和促进免疫恢复的功能，认为ａｌｌｏ－ＢＭＴ后６个月内不直接种疫苗。     

骨髓移植后糖尿病小鼠胰岛再生的途径

目的：观察骨髓来源细胞（BMDCs）移植后新生胰岛B细胞的来源。方法：建立糖尿病小鼠模型并分成两组：实验组小鼠（n=10）通过尾静脉移植BMDCs;对照组小鼠（n=10）通过尾静脉注射磷酸盐缓冲液。观察两组小鼠血糖的变化、胰岛β细胞数量、胰腺组织相关标记物的表达。结果：与对照组比较,实验组小鼠移植后第4周血糖出现明显下降（18．7±2．3mmol·L^-1比26．3±2．3mmol·L^-1,P〈0．01）,并持续下降至第6周（17．5±6．7mmol．L^-1比27．6±0．3mmol．L^-1,P〈O．01）,胰岛B细胞数目显著增加（527．9±206．0个比92．8±34．8个,P〈0．01）;实验组小鼠胰岛内发现BrdU和Insulin双阳性细胞,表明有0细胞的自身增殖。同时也发现部分BrdU阳性细胞不表达Insulin,但表达PDX-1;另外,实验发现胰岛内存在Ngn3阳性细胞以及Insulin和G1ucagon双阳性细胞,表明在胰岛内存在可以分化成β细胞的千细胞。结论：BMDCs移植能促进糖尿病小鼠胰岛β细胞的再生,新生的胰岛β细胞来源于胰岛口细胞的自身增殖,也来源于胰岛干细胞的增殖分化。     

雌激素通过NF-κB信号通路影响肝癌细胞的肿瘤学行为研究

目的探讨雌激素对HepG2和BEL7402两种肝癌细胞增殖及迁移能力的抑制和诱导凋亡的作用及其相应机制。方法利用MTS试验检测不同浓度的雌激素在不同时间点对HepG2和BEL7402两种肝癌细胞增殖能力的影响。Annexin V/PI流式细胞术检测不同浓度的雌激素诱导HepG2和BEL7402细胞凋亡的情况。Transwell迁移实验检测雌激素对HepG2和BEL7402细胞迁移能力的影响。采用Western blotting法检测不同浓度下雌激素对肝癌细胞中NF-κB信号通路的活性及其下游相关基因c-Myc、Cyclin D1、基质金属蛋白酶(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)和Bcl-2表达的影响。结果 MTS试验结果显示,在不同时间点雌激素有效抑制了HepG2和BEL7402细胞的增殖,并随着雌激素浓度的升高其抑制肝癌细胞增殖的效果逐渐增强,与此同时,雌激素也降低了c-Myc、Cyclin D1等增殖相关基因的表达。Annexin V/PI流式细胞术数据显示雌激素诱导HepG2和BEL7402细胞的凋亡并呈明显剂量依赖性,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达出现下降。Transwell迁移实验证明雌激素明显抑制了HepG2和BEL7402细胞的迁移能力并且降低了MMP-9和VEGF的表达。验证了雌激素可有效抑制HepG2和BEL7402肝癌细胞中NF-κB信号通路的活性。结论雌激素通过下调NF-κB信号通路的活性及下游相关分子的表达,而抑制肝癌细胞的增殖与迁移并诱导其凋亡。     

同种反应性自然杀伤细胞对小鼠单倍体相合骨髓移植后免疫重建的影响

本研究旨在探讨同种反应性自然杀伤(alloNK)细胞对小鼠单倍体相合骨髓移植(BMT)后免疫重建的影响。以(C57BL/6×BALB/c)BCF1(H-2d/b)为供鼠,BALB/c(H-2d)为受鼠,建立小鼠单倍体相合BMT模型,根据回输物不同将实验分为单纯BMT组、非同种反应性NK(non-alloNK)细胞组、alloNK细胞组。移植后2个月以胸腺组织病理、脾脏NK细胞比例、脾细胞增殖反应及脾细胞培养上清中细胞因子浓度等指标评价alloNK细胞对免疫重建的影响。结果显示,光学显微镜下各组小鼠胸腺组织病理学表现无明显差别;移植后2个月non-alloNK组小鼠脾脏NK细胞比例显著低于单纯BMT组(P<0.05);各组小鼠脾细胞体外增殖反应无明显差别;alloNK组小鼠脾细胞培养24和48 h时培养上清中干扰素-γ的浓度均显著低于其他2组(P<0.05),而各组之间白介素4水平无明显差别。结论:alloNK细胞用于单倍体BMT小鼠不损伤胸腺的结构,可能诱导Th2免疫反应的偏移。     

罗汉果对雄性小鼠骨髓微核和精子形态的影响

背景:对罗汉果的遗传毒性进行研究,可为其安全使用提供实验依据.目的:观察罗汉果水提液对雄性小鼠骨髓细胞微核率和附睾精子畸形率的影响,了解其是否有遗传毒性.方法:按罗汉果水提液最大使用剂量(3 g/mL)和最大灌胃容量(20 mL/kg)灌胃小鼠,观察罗汉果水提液的急性毒性.将雄性昆明小鼠随机分为5组,分别灌胃给予30,15,7.5 g/kg的罗汉果水煎液、蒸馏水,连续5 d;或腹腔注射40 mg/kg环磷酰胺.于灌胃第5天,采用骨髓嗜多染红细胞微核试验计算小鼠的骨髓微核率.于首次灌胃后第35天,观察小鼠精子畸形率.结果与结论:罗汉果水提液对昆明小鼠的经口急性毒性最大耐受剂量大于120 g/kg.罗汉果水提液30,15,7.5 g/kg灌胃后,小鼠的骨髓微核率、精子畸形率与正常小鼠无差异(P > 0.05),均明显低于环磷酰胺诱发的骨髓微核率和精子畸形率(P < 0.05).说明罗汉果水提液对成年雄性小鼠无明显遗传毒性.     

骨髓基质干细胞成骨分化过程中Wnt、骨形态发生蛋白2信号通路相关因子与辛伐他汀的作用

背景:辛伐他汀可促进体外培养的人或鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化,但作用机制尚不清楚。目的:观察辛伐他汀对大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化过程中Wnt与骨形态发生蛋白2信号途径中相关因子表达的影响。方法:取6周龄雌性SD大鼠双侧股骨、胫骨全骨髓进行体外成骨细胞诱导培养。实验分为对照组及SIM组。SIM组加入浓度为10-7mol/L辛伐他汀,对照组加入等量无水乙醇和PBS。培养14d,行碱性磷酸酶染色,28d时,行vonKossa染色观察细胞外基质矿化情况;培养14,21d,免疫荧光细胞化学染色观察成骨细胞中β-catenin,Smad1/5,Cbfa1的表达及分布。结果与结论:大鼠骨髓基质干细胞经体外诱导后可分化为具有碱性磷酸酶活性和矿化细胞外基质能力的成熟成骨细胞。辛伐他汀可显著上调骨髓基质干细胞成骨分化过程中碱性磷酸酶的表达。同时,与对照组比较,SIM组β-catenin,Smad1/5,Cbfa1表达明显增多(P<0.05),且呈现明显的核内聚集趋势。说明辛伐他汀促进骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的作用可能与调控Wnt与骨形态发生蛋白2信号通路中相关因子的表达及细胞内分布有关。     

罗汉果对雄性小鼠骨髓微核和精子形态的影响

背景：对罗汉果的遗传毒性进行研究,可为其安全使用提供实验依据。目的：观察罗汉果水提液对雄性小鼠骨髓细胞微核率和附睾精子畸形率的影响,了解其是否有遗传毒性。方法：按罗汉果水提液最大使用剂量（3g/mL）和最大灌胃容量（20mL/kg）灌胃小鼠,观察罗汉果水提液的急性毒性。将雄性昆明小鼠随机分为5组,分别灌胃给予30,15,7.5g/kg的罗汉果水煎液、蒸馏水,连续5d;或腹腔注射40mg/kg环磷酰胺。于灌胃第5天,采用骨髓嗜多染红细胞微核试验计算小鼠的骨髓微核率。于首次灌胃后第35天,观察小鼠精子畸形率。结果与结论：罗汉果水提液对昆明小鼠的经口急性毒性最大耐受剂量大于120g/kg。罗汉果水提液30,15,7.5g/kg灌胃后,小鼠的骨髓微核率、精子畸形率与正常小鼠无差异（P〉0.05）,均明显低于环磷酰胺诱发的骨髓微核率和精子畸形率（P〈0.05）。说明罗汉果水提液对成年雄性小鼠无明显遗传毒性。     

骨髓基质干细胞成骨分化过程中Wnt、骨形态发生蛋白2信号通路相关因子与辛伐他汀的作用

背景：辛伐他汀可促进体外培养的人或鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化,但作用机制尚不清楚。目的：观察辛伐他汀对大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化过程中Wnt与骨形态发生蛋白2信号途径中相关因子表达的影响。方法：取6周龄雌性SD大鼠双侧股骨、胫骨全骨髓进行体外成骨细胞诱导培养。实验分为对照组及SIM组。SIM组加入浓度为10-7mol/L辛伐他汀,对照组加入等量无水乙醇和PBS。培养14d,行碱性磷酸酶染色,28d时,行vonKossa染色观察细胞外基质矿化情况;培养14,21d,免疫荧光细胞化学染色观察成骨细胞中β-catenin,Smad1/5,Cbfa1的表达及分布。结果与结论：大鼠骨髓基质干细胞经体外诱导后可分化为具有碱性磷酸酶活性和矿化细胞外基质能力的成熟成骨细胞。辛伐他汀可显著上调骨髓基质干细胞成骨分化过程中碱性磷酸酶的表达。同时,与对照组比较,SIM组β-catenin,Smad1/5,Cbfa1表达明显增多（P〈0.05）,且呈现明显的核内聚集趋势。说明辛伐他汀促进骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的作用可能与调控Wnt与骨形态发生蛋白2信号通路中相关因子的表达及细胞内分布有关。     

中医药对血管新生相关信号通路的影响

血管新生是机体常见的重要生理、病理过程,其过程涉及多种细胞、细胞因子及相关信号通路,多种疾病的发生发展均血管新生密切相关。细胞因子通过信号转导通路调节血管新生相关细胞的迁移、增殖、凋亡影响血管新生。近年来对血管新生机制的最新研究表明,VEGF通路、Notch通路、PTEN/PI3K/AKT通路、JAK/STAT通路参与调节血管新生。中医药可通过调节信号转导通路调节血管新生,在治疗以血管新生为主要病变基础的疾病上取得了一定成绩。     

Notch信号和血管内皮生长因子基因对大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化后内皮细胞功能的影响

目的 探讨Notch信号和血管内皮生长因子(VEGF165)基因对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)诱导分化后内皮细胞功能的影响.方法 分离、培养大鼠MSCs,用含VEGF165和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的细胞培养液培养大鼠MSCs 2周诱导其向内皮细胞分化;用脂质体将携带有VEGF165基因的质粒转染诱导内皮细胞并对转染效果进行鉴定,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染前后细胞上Notch信号受体Notch 1和配体Jagged 1的表达变化;用γ-内分泌酶抑制剂L-685458阻断细胞Notch信号通路的转导,划痕实验检测细胞迁移能力;将细胞接种在半固体培养基上,观察其形成毛细血管样结构的能力.结果 转染VEGF165基因的内皮细胞上表达有VEGF165 mRNA,说明实验成功地将VEGF165基因导入诱导后内皮细胞中.转染VEGF165基因后,细胞上Notch信号配体Jagged1 mRNA表达增强(1.08±0.01比1.01±0.02,P＜0.01),Notch1 mRNA表达无明显变化(0.60±0.02比0.59±0.01,P＞0.05);细胞的迁移能力增强(划痕空白处细胞个数:46.45±4.46比41.61±1.42,P＜0.05),形成毛细血管样结构能力无明显变化(细胞分级:3.00±0.89比2.00±0.89,P＞0.05).内皮细胞转染VEGF165基因后,以γ-内分泌酶抑制剂L-685458阻断细胞Notch信号通路的转导,则细胞迁移能力(划痕空白处细胞个数:51.72±3.47比46.45±4.46)和形成毛细血管样结构能力(细胞分级:4.17±0.75比3.00±0.89)均进一步增强(均P＜0.05).结论 转染VEGF165基因可增强大鼠MSCs诱导分化内皮细胞的功能,在此基础上阻断Notch信号通路转导可进一步增强细胞功能.     

Overview of the role of hematopoietic growth factors in bone marrow transplant recovery and bone marrow transplant failure

Morbidity of bone marrow transplantation has been reduced by the prophylactic use of myeloid stimulating growth factors. Trials are current exploring the usage of hematopoietic growth factors in a variety of other potential clinical applications in bone marrow transplantations. These include stimulation of multipotent progenitor cells, enhancement of monocyte macrophage function, enhancement of lymphocyte function, and alteration of inflammatory mediators which are causal of nonhematologic toxicities of bone marrow transplantation. Hematopoietic growth factors, factors which induce production of stimulatory cytokines and/or factors which alter inflammatory pathways, may be effective in improving the tolerability of patients undergoing bone marrow transplant.Presented as an invited lecture at the 6th International Symposium: Supportive Care in Cancer, New Orleans, La., USA, 2–5 March 1994