小檗碱调节AKT/NF-κB信号通路对高糖诱导的足细胞损伤、凋亡和迁移的影响

目的 探究小檗碱(BBR)对高糖环境下足细胞的保护作用及其机制.方法 取指数生长期的足细胞进行实验,将细胞分为五组:正常组,高糖组,BBR 30、60、90 μmol/L组.Annexin FITC/PI双染法检测足细胞凋亡率,高内涵成像系统计算细胞数量,Transwell和细胞划痕实验检测其迁移能力,Western ...     

普伐他汀对高糖培养肾小球系膜细胞NF-κB信号传导通路的影响

目的探讨普伐他汀（PV）对高糖（HG）培养。肾小球系膜细胞（RMC）NF-κB信号传导通路的影响。方法将RMC分别培养于正常葡萄糖浓度（5.5mmol·L^-1,NC组）、HG浓度（25mmol·L^-1,HG组）和葡萄糖25mmol·L^-1＋PV100μmol·L^-1（HG＋PV组）中,采用CCK-8细胞计数法测定各组RMC增殖水平,同时采用RT-PCR法检测NF-κB mRNA表达。以及Phospho-ELISA法分别检测胞质和胞核内总NF-κB p65、活性NF-κB p65（NLS-NF-κB）、磷酸化NF-κB p65（Ser276-NF-κB）的表达。结果HG组RMC增殖水平较NC组显著增高（P〈0.01）,且RMC胞核内的NLS-NF-κB、Ser276-NF-κB表达水平均较NC组显著增高（均P〈0.01）;HG＋PV组的RMC增殖水平均较NC组和HG组显著降低（均P〈0.01）,且胞核内的NLS-NF-κB、Ser276-NF-κB表达水平均较NC组和HG组降低（均P〈0.05）;各组总NF-κB p65蛋白分泌水平、RMC胞质内NLS-NF-κB和Ser276-NF-κB表达水平及NF-κB mRNA表达水平的差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论PV可显著下调HG培养的RMC胞核内NF-κB信号传导通路的活化,并可能为其抑制RMC增殖的作用机制之一。     

小檗碱激活SIRT1/AMPK信号通路改善高糖诱导的系膜细胞异常增殖和自噬功能

目的 研究小檗碱(BBR)对高糖(HG)环境下的系膜细胞增殖和自噬水平的影响及具体的分子机制。方法 将指数生长期的系膜细胞分成以下几组：正常组、高糖组、高糖+小檗碱治疗组(30、60、90μmol/L)、高糖+小檗碱(90μmol/L)+腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂组(CC组);高内涵细胞成像仪计算系膜细胞的数量;免疫荧光法检测Ⅳ型胶原蛋白(Col-IV)、纤连蛋白(FN)、微管相关蛋白1轻链3 B(LC3B)在系膜细胞中表达情况;Western blot法检测细胞上LC3B、Beclin-1、p62、Col-IV、FN和沉默信息调节因子1(SIRT1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路蛋白表达水平。结果 与正常组比较,高内涵细胞成像仪结果显示高糖组系膜细胞异常增殖;免疫荧光法和Western blot法结果显示高糖组系膜细胞外基质沉积蛋白Col-IV、FN的表达水平升高;Western blot法结果显示高糖组系膜细胞中SIRT1、p-AMPK、LC3B、Beclin-1蛋白表达降低,p-p65、p62蛋白表达升高。与高糖组比较,BBR对高糖诱导的系膜细胞异常增殖能力具...     

NF-κB/IκB信号通路介导血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞促炎性细胞因子表达

目的：探讨核因子—κB(NF—κB)／IκB信号通路在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小球系膜细胞促炎性细胞因子表达中的作用。方法：应用核酸酶保护法检测系膜细胞肿瘤坏死因子α(TNF—α)、IL-1α和IL-1β mRNA表达；应用凝胶电泳迁移率和Western blot检测肾小球系膜细胞中NF—κB活化、p65亚基核转位以及IκBα和IκBβ的降解。结果：正常培养状态下，系膜细胞可组成型表达TNF—α和IL—1β，而不表达IL-1αmRNA，AngⅡ刺激后促炎性细胞因子表达显著上调，NF—κB特异性抑制剂2-硫代氨基甲酸吡咯烷显著抑制AngⅡ诱导的促炎性细胞因子基因表达；AngⅡ诱导系膜细胞NF—κB活化，p65核转位及胞质内IκBα和IκBα的降解。结论：AngⅡ诱导肾小球系膜细胞中促炎性细胞因子表达可能通过NF—κB／IκB信号转导通路来实现。     

沉默SIRT1基因对高糖诱导的系膜细胞NF-κB p65乙酰化

目的 探讨沉默信息调节因子1（SIRT1）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞（RMC）核因子κB（NF-κB） p65蛋白乙酰化及单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）表达的影响。 方法 构建干扰SIRT1基因的shRNA慢病毒质粒pTRC-shSIRT1并进行鉴定。将RMC分为高糖组（用高糖培养液培养）、白藜芦醇（SIRT1激活剂）+高糖组（用含1 μmol/L白藜芦醇的低糖培养液培养24 h后,换用高糖培养液培养）、SIRT1 RNAi组（添加干扰病毒pTRC-shSIRT1感染4 h后,换用低糖培养液培养）、SIRT1 RNAi+高糖组（添加干扰病毒pTRC-shSIRT1感染4 h后,换用高糖培养液培养）,同时设正常对照组和甘露醇高渗对照组。以实时荧光定量PCR检测SIRT1、MCP-1的mRNA表达,蛋白质印迹法检测SIRT1和NF-κB p65乙酰化蛋白的表达,ELISA技术检测MCP-1蛋白含量。 结果 质粒测序证实干扰SIRT1基因的shRNA慢病毒载体构建成功,且能抑制RMC中SIRT1基因表达（P<0.01）。高糖刺激使RMC SIRT1基因表达降低,NF-κB p65蛋白乙酰化增强,MCP-1 mRNA和蛋白水平增高;SIRT1激活剂白藜芦醇可逆转高糖引起的变化;而沉默SIRT1可促进高糖诱导的RMC NF-κB p56乙酰化及MCP-1 mRNA和蛋白表达（P<0.05或0.01）。 结论 SIRT1可抑制高糖诱导的RMC MCP-1表达,其机制可能与NF-κB p56去乙酰化有关。     

小檗碱对颈动脉粥样硬化家兔NF-κB的影响

目的:探讨小檗碱预防颈动脉粥样硬化形成的作用机制。方法:将24只雄性新西兰大白兔随机分成3组:正常组、颈动脉粥样硬化组(模型组)、小檗碱预防组(小檗碱组)。正常组给予正常饮食,模型组行高脂饲料喂养加颈动脉内膜空气干燥术建立颈动脉粥样硬化模型,小檗碱组在给予模型组相同处理的同时灌服小檗碱。术后4周麻醉处死,取颈动脉组织行HE染色、NF-κBP65免疫组织化学染色、RT-PCR法测NF-κBP65mRNA表达水平。结果:模型组血管病变以泡沫细胞为主,有动脉粥样斑块形成;小檗碱组血管主要显示内膜明显增厚,有少量泡沫细胞;小檗碱组NF-κBP65阳性细胞数密度高于正常组(P<0.05),明显低于模型组(P<0.05);RT-PCR半定量分析发现,小檗碱组NF-κBP65/β-actin扩增带吸光度值比值高于正常组(P<0.05),而明显低于模型组(P<0.05)。结论:小檗碱可能通过抑制NF-κB活性,降低组织中NF-κB含量,预防颈动脉粥样硬化形成。     

去线性泛素化酶OTULIN通过NF-κB通路调节炎症和细胞死亡的研究进展

核转录因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)通路在先天性免疫、抑制炎症反应、影响胚胎着床和发育等多个过程中发挥重要作用。线性泛素化修饰是近年发现的一种特殊类型的泛素化修饰方式。OTULIN是目前发现的可特异性降解线性泛素链的去泛素化酶。多数研究提示OTULIN可通过NF-κB通路调节炎症和细胞死亡,本文就此做一综述。     

黄芪汤调节TLR4/NF-κB信号通路改善高糖诱导足细胞损伤的研究

  目的  探讨黄芪汤对高糖诱导足细胞损伤的作用及机制。  方法  体外培养人足细胞, 采用30 mmol·L-1葡萄糖干预24 h诱导足细胞损伤, 分别设置对照组、模型组、黄芪汤低浓度组(10 μg·mL-1)、黄芪汤中浓度组(30 μg·mL-1)和黄芪汤高浓度组(100 μg·mL-1)。采用CCK-8法检测细胞增殖能力, 划痕实验检测细胞迁移能力,qPCR法检测TNF-α、IL-6等炎症因子mRNA表达, ELISA法检测足细胞上清TNF-α、IL-6的含量,Western blot法检测足细胞TLR4、NF-κB、p-NF-κB、TNF-α及IL-6蛋白表达。  结果  与对照组比较, 模型组细胞划痕愈合率明显降低(P < 0.01),足细胞中TNF-α、IL-6、CCL24 mRNA表达水平,上清液中TNF-α、IL-6的含量和TLR4、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α及IL-6蛋白表达均显著增加(P < 0.05,P < 0.01)。与模型组相比, 黄芪汤组细胞划痕率明显升高(P < 0.01),足细胞中TNF-α、IL-6的含量和mRNA表达,以及TLR4、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达均显著减少(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  黄芪汤能有效减轻高糖对人足细胞的炎症损伤, 增强细胞增殖、迁移能力, 抑制细胞凋亡, 其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路、下调炎症因子的表达有关。      

NF-κB信号通路与胃癌的研究进展

胃癌是全球常见的一种癌症,具有较高的发病率和病死率,目前关于胃癌发病机制的研究很多,但其确切机制迄今仍不清楚.核转录因子κB (nuclear factor kappa B,NF-κB)广泛存在于细胞中,并与肿瘤细胞分化、增殖、凋亡、免疫应答等应激反应息息相关,而胃癌的发生发展、浸润转移、治疗预后都涉及NF-κB信号通路的紊乱.本文就近年来NF-κB信号通路在胃癌发病机制中的研究进展作一综述.     

青藤碱抑制ERK/NF-κB信号通路缓解LPS诱导急性肺损伤

目的 验证青藤碱对急性肺损伤保护作用及作用机制;方法 建立脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠模型,给予青藤碱治疗,检测血液及肺泡灌洗液的炎症指标以及ERK/NF-κB信号通路的激活情况,并通过HE和CD68免疫组化检测病理变化。结果 青藤碱提取液可以有效抑制ERK/NF-κB通路,减少炎症因子释放,减轻LPS导致的肺炎症细胞浸润及病理变化。结论 青藤碱可以通过抑制ERK/NF-κB通路缓解LPS诱导的急性肺损伤。     

丙泊酚对高糖诱导的肾小球系膜细胞转化生长因子－β和核转录因子－κB 表达的影响

目的：观察丙泊酚对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子－β（TGF －β）和核转录因－κB （NF －κB）表达的影响。方法在体外培养的系膜细胞上进行研究。设立正常葡萄糖对照组（糖浓度为5．6 mmol／L）、高糖组（30 mmol ／L）以及 PDTC 干预组（100μmol／L）和分别含丙泊酚12．5、50、100μmol／L 的干预组。用 ELISA法检测培养细胞上清中 TGF －β蛋白,以实时荧光定量 PCR 检测 TGF －βmRNA 的表达,Western blot 方法检测系膜细胞内磷酸化 NF －κBp65（p －NF －κBp65）蛋白的表达。结果高糖诱导系膜细胞24 h 后,TGF －β蛋白分泌明显增强（P ＜0．01）,丙泊酚（12．5、50、100μmol ／L）对高糖诱导的系膜细胞分泌的 TGF －β的抑制作用随浓度的变化而变化;系膜细胞在低浓度葡萄糖水平下可低水平表达 TGF －βmRNA,高糖作用24 h 后,TGF －βmRNA 表达明显增强（P ＜0．01）,丙泊酚可明显下调高糖诱导的 TGF －βmRNA 的表达（P ＜0．01）;在高糖作用1 h 后,系膜细胞内的 p －NF －κBp65蛋白表达增强（P ＜0．05）,丙泊酚能够部分抑制高糖诱导的系膜细胞 p －NF －κBp65蛋白增多（P ＜0．05）。结论在体外含高糖培养条件下,丙泊酚可以抑制 TGF －βmRNA 及蛋白在系膜细胞的表达,部分逆转高糖诱导的系膜细胞 NF －κB 的活化,提示丙泊酚对糖尿病肾病可能有抗炎、抗纤维化作用。     

小檗碱抑制JAK2/STAT3信号通路缓解高糖诱导的足细胞EMT和凋亡

目的 探讨小檗碱(BBR)对高糖(HG)环境诱导的足细胞上皮间质转化(EMT)和凋亡的调节作用及部分机制。方法 将指数生长期的足细胞分为以下几组：正常组、高糖组、小檗碱(30、60和90μmol/L)给药组。流式细胞术检测足细胞凋亡情况;Transwell和划痕实验检测足细胞迁移能力;Western blot检测细胞凋亡蛋白Bim、足细胞EMT相关蛋白nephrin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)和酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)通路相关蛋白的表达水平;激光共聚焦法检测EMT相关蛋白nephrin、α-SMA和vimentin在足细胞中的表达情况。结果 流式细胞术结果表明BBR(30、60和90μmol/L)能够减少高糖环境下的足细胞凋亡;Transwell和划痕实验结果表明BBR(30、60和90μmol/L)能抑制高糖环境下的足细胞异常迁移;Western blot结果表明BBR(30、60和90μmol/L)可以降低高糖环境下足细胞中p-JAK2、p-STAT3、α-SMA、vimentin、Bim蛋白的表达,升高n...     

NF-κB信号转导通路与胰岛素抵抗

核因子-κB（NF—κB）信号转导通路包括NF—κB、NF—κB抑制蛋白（IκB）和IκB激酶（IKK）。其中,NF—κB是一种重要的核转录因子,参与炎症反应、免疫反应、细胞凋亡及物质代谢等多种生物进程。IKK具有丝氨酸／苏氨酸激酶活性,能使多种蛋白的丝氨酸／苏氨酸残基磷酸化。NF—κB信号转导通路的活化与胰岛素抵抗的发生密切相关。文章就NF—κB在胰岛素抵抗发生中作用作一综述。     

当归芍药散通过调节Sirt1/NF-κB信号通路改善高脂饮食诱导大鼠非酒精性脂肪肝炎症反应

目的 研究当归芍药散治疗高脂饮食（high-fat diet,HFD）诱导的大鼠非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）炎症反应的作用机制。方法 将大鼠随机分为5组：正常组、HFD组、阿伐他丁组、当归芍药散低剂量组、当归芍药散高剂量组。大鼠给予高脂肪饲料（59.3%脂肪饲料）6周,正常组大鼠同时给予正常饲料。从第5周开始,阿伐他丁组大鼠灌胃给予25 mg/kg阿伐他丁2周,当归芍药散低剂量组大鼠灌胃给予12.9 g/kg当归芍药散2周,当归芍药散高剂量组大鼠灌胃给予25.8 g/kg当归芍药散2周,检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、甘油三酯（triglyceride,TG）、胆固醇（cholesterol,TC）、血清细胞因子水平。同时检测大鼠肝脏沉默信息调节因子1（sirtuin 1,Sirt1）/核转录因子-κB（nuclear factor kappa-B,NF-κB）信号通路蛋白表达。结果 与模型组比较,当归芍药散能显著降低血清ALT、AST、TG、TC、血清细胞因子水平,改善肝脏组织病理学改变。此外,显著增加大鼠肝脏Sirt1表达,抑制肝脏NF-κB蛋白表达。结论 当归芍药散通过Sirt1/NF-κB通路治疗HFD大鼠NAFLD。     

NF-κB信号转导通路与胰岛素抵抗

核因子-κB(NF-κB)信号转导通路包括NF-κB、NF-κB抑制蛋白(IκB)和IκB激酶(IKK).其中,NF-κB是一种重要的核转录因子,参与炎症反应、免疫反应、细胞凋亡及物质代谢等多种生物进程.IKK具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性,能使多种蛋白的丝氨酸/苏氨酸残基磷酸化.NF-κB信号转导通路的活化与胰岛素抵抗的发生密切相关.文章就NF-κB在胰岛素抵抗发生中作用作一综述.     

高糖对大鼠肾系膜细胞增殖及NF-κBp65核转位的影响

目的：探讨高糖对大鼠肾系膜细胞增殖及NF-κBp65核转位的影响。方法：大鼠HBZY-1肾系膜细胞进行体外培养,用5.6mmol/L葡萄糖（正常对照组）、10、20、30mmol/L高糖分别作用12、24、48小时,用噻唑蓝（MTT）法测各组肾系膜细胞增殖,western-blot法测各组肾系膜细胞NF-κBp65总蛋白的表达;双染免疫荧光激光共聚焦显微镜测各组肾系膜细胞NF-κBp65核转位。结果：48h内,各高糖组大鼠肾系膜细胞的增殖无统计学差异（P〉0.05）;各高糖组NF-κBp65总蛋白的表达无统计学差异（P〉0.05）;高糖组NF-κBp65核转位增加（P〈0.01）,呈时间浓度依赖性。结论：在48h内,高糖直接促进肾系膜细胞NF-κBp65核转位导致NF-κB信号通路激活,并不促进大鼠肾系膜细胞的增殖及NF-κBp65总蛋白的表达增加。     

茶多酚对ox-LDL刺激的系膜细胞NF-κBp65活化的影响

目的观察茶多酚对培养的大鼠肾小球系膜细胞摄取氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)及其NF-κBp65的活化的影响.方法以ox-LDL刺激体外培养的大鼠系膜细胞,用不同浓度的茶多酚干预后,测定系膜细胞内总胆固醇(TC)含量,免疫组化染色检测NF-κBp65的活化.结果 ox-LDL刺激后,系膜细胞内TC含量明显增高,NF-κBp65活化率明显增加;茶多酚干预后系膜细胞内TC含量及其NF-κBp65的活化率明显下降.结论茶多酚可抑制系膜细胞摄取ox-LDL及其诱导的NF-κBp65的活化.     

绞股蓝皂苷对 AGEs 诱导下肾小球系膜细胞中核因子－κB 表达的影响

目的：观察绞股蓝皂苷（GP）对晚期糖基化终末产物（AGEs）诱导下人肾小球系膜细胞（HMCs）中核因子－κB（ NF－κB）表达的影响。方法将对数生长期的HMCs分为空白组、模型组、阳性组以及GP低、中、高剂组。空白组不给予任何诱导和干预,模型组、阳性组以及GP低、中、高剂量组均采用200 mg／L的AGEs诱导HMCs,GP低、中、高剂量组分别给予低、中、高剂量（25、75、150 mg／L）的GP干预,阳性组同时给予10－1 mmol／L的氨基胍盐酸盐（ AG）干预,培养72 h。半定量Real－Time PCR法检测各组中NF－κB mRNA的表达;Western blot－ting法检测各组中NF－κB蛋白的表达。结果模型组中NF－κB表达量较空白组增加（ P＜0．01）;GP干预后, HMCs中NF－κB表达量较模型组减少,且随着浓度增加,表达量逐渐减少（ P＜0．01）。结论 GP防治DN的机制可能与其呈剂量依赖性下调NF－κB的表达相关。