5-ALA-PDT对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞的抑制作用

目的:确定5-ALA-PDT对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞的抑制作用。方法:用5-ALA与A431细胞共同孵育,经630 nln红光照射后,采用MTF法检测细胞生长的抑制率,确定培育时间、5-ALA浓度及光照剂量对皮肤鳞状细胞癌A431细胞的抑制作用。结果:当光照剂量为80 J/cm~2和5-ALA浓度为3.2 mmol/L,5-ALA与A431细胞共同孵育120 min时,抑制率最大。结论:5-ALA-PDT对体外培养的A431细胞的增殖有明显抑制作用。     

ALA-PDT对皮肤鳞状细胞癌A431细胞甲基化及Gadd45a表达的影响

目的探究5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)对皮肤鳞状细胞癌(简称皮肤鳞癌)A431细胞甲基化及Gadd45a表达的影响。方法培养皮肤鳞癌A431细胞,将细胞分为对照组以及不同剂量的ALA-PDT处理组(ALA浓度分别为:0.1、0.5、2mmol/L),MTT检测各组细胞增殖活力。分别采用q PCR和Western blot方法检测ALA-PDT处理后A431细胞Gadd45a mRNA及Gadd45a蛋白表达。流式细胞术检测ALA-PDT处理后各组细胞凋亡率,并进一步观察经ALA-PDT处理后对A431细胞DNA总体甲基化水平的影响。结果不同ALA浓度(0.1、0.5、2mmol/L)ALA-PDT处理后,随ALA浓度上升A431细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均呈逐渐升高的趋势(P均0.05);经不同ALA浓度(0.1、0.5、2mmol/L)ALAPDT处理后A431细胞Gadd45a蛋白表达水平随ALA浓度上升而上升,而ALAPDT组DNA总体甲基化显著下降,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论 ALA-PDT治疗通过促进Gadd45a蛋白表达抑制皮肤鳞癌A431细胞增殖并促进凋亡,过表达的Gadd45a蛋白可抑制A431细胞DNA甲基化。     

氨基酮戊酸光动力疗法对浮游表皮葡萄球菌抑制作用的体外研究

目的 观察氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)对浮游表皮葡萄球菌的影响,探讨ALA最适浓度和最佳孵育时间.方法 实验分3组,第1组,50 mmol/L ALA与细菌37℃避光孵育3、5、8、12、16、18、20、24h;第2组,不同浓度ALA(10、20、30、40、50 mmol/L)与细菌37℃避光孵育16h;第3组,单纯胰蛋白陈大豆肉汤培养基(TSB)(不加ALA)与细菌37℃避光孵育24h.3个组均通过激光共聚焦显微镜( CLSM)检测不同时间点原卟啉Ⅸ(PpⅨ)的荧光强度并做定量分析.同时对第1组进行不同剂量(30、50、70、90、100 J/cm2)红光照射,第2组用100 J/cm2红光照射,第3组不照光,同时设不同剂量红光照射对照组.采用菌落计数法分析ALA-PDT对浮游表皮葡萄球菌的影响.结果 第1组,CLSM下均观察到砖红色荧光,荧光强度随着孵育时间的延长而逐渐增强,孵育16、18、20、24h的荧光强度明显高于3、5、8、12 h(P＜ 0.05);第2组,荧光强度随着ALA浓度的增加而增强,50 mmol/L ALA组荧光强度明显高于10、20、30、40 mmol/L ALA组(P＜0.05);第3组,未见砖红色荧光.前两组经红光照射后发现,随着ALA浓度和光剂量的增加,存活的细菌数逐渐减少,当ALA为50 mmol/L、光剂量为100 J/cm2时,细菌生长受到抑制.结论 ALA-PDT对浮游表皮葡萄球菌有明显抑制作用,最适治疗参数为50 mmol/L ALA、孵育16 h,光照剂量100 J/cm2.     

聚乙交酯丙交酯纳米粒装载氨基酮戊酸光动力疗法对A431细胞的杀伤效应

【摘要】 目的 制备装载氨基酮戊酸（ALA）的聚乙交酯丙交酯纳米粒（PLGA NP）,增强ALA光动力体外杀伤人皮肤鳞癌A431细胞的效应。方法 改良复乳溶剂挥发法制备ALA PLGA NP,并对其粒径、包封率、载药量和形态进行表征。用透射电镜观察体外培养的A431细胞吸收ALA PLGA NP后的形态;用多功能酶标仪测定24 h内0.1 mmol/L ALA组、1 mmol/L ALA组、ALA PLGA NP组（含0.1 mmol/L ALA）、PLGA NP组生成的原卟啉IX（PpIX）荧光强度变化以确定最佳孵育时间。将培养A431细胞分为对照组、0.1 mmol/L ALA避光组、1 mmol/L ALA避光组、ALA PLGA NP避光组、PLGA NP避光组、单纯照光组、0.1 mmol/L ALA PDT组、1 mmol/L ALA PDT组、ALA PLGA NP PDT组、PLGA NP PDT组,对照组及各避光组严格避光,PDT组及单纯照光组用He-Ne激光照射,用噻唑蓝法测定其细胞杀伤效应。将A431细胞分为对照组、ALA PDT组、ALA PLGA NP PDT组,对照组避光,PDT组采用He-Ne激光照射,12、24 h后用流式细胞仪分析细胞凋亡情况。 结果 ALA PLGA NP呈球形,平均粒径为（65.6 ± 26.0） nm,包封率为（65.8 ± 7.2）%,载药量为（0.62 ± 0.27）%。ALA PLGA NP能被A431细胞吸收并聚集于细胞质中。PpIX荧光动力学检测显示24 h内ALA组、ALA PLGA NP组荧光强度随时间增加而上升。当孵育6 h、24 h时,ALA PLGA NP组生成的PpIX荧光强度均高于0.1 mmol/L ALA（均P < 0.01）。ALA PLGA NP PDT组对A431细胞的杀伤效应也明显强于0.1 mmol/L ALA PDT（6 h：t = 35.685,P < 0.01;24 h：t = 5.262,P < 0.01）。ALA PLGA NP PDT组细胞的凋亡率也高于ALA PDT组（12 h：t = 9.074,P < 0.01;24 h：t = 9.095,P < 0.01）。 结论 ALA PLGA NP能提高PpIX生成量,增强ALA PDT对A431细胞的体外杀伤效应以及ALA PDT诱导肿瘤细胞凋亡的效应。 【关键词】 肿瘤,鳞状细胞; 光化学疗法; 氨基酮戊酸; 纳米粒子     

氨基酮戊酸光动力疗法对鳞状细胞癌细胞株A431蛋白激酶D1及其磷酸化位点的影响

目的 研究氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）对皮肤鳞状细胞癌A431细胞蛋白激酶D1（PKD1）的影响,探讨ALA-PDT诱导A431细胞凋亡的机制。方法 体外培养A431细胞,用CCK-8法检测筛选出抑制作用最强的ALA浓度和光动力照射（PDT）剂量组合。将对数期生长A431细胞随机分为不予任何干预的对照组、ALA组、PDT组及ALA-PDT组,观察4组细胞接受相应干预12、24、36、48 h后细胞增殖抑制率和增殖抑制作用最强时间点的凋亡率。反转录PCR检测ALA-PDT作用A431细胞不同时间点后各组PKD1基因mRNA的表达。Western 印迹法检测各组A431细胞中PKD1及其磷酸化位点Tyr463蛋白（pTyr463）、Ser916蛋白（pSer916）表达。结果 ALA浓度1.5 mmol/L、光照剂量2 J/cm2为最佳剂量组合。4组细胞干预12、24、36、48 h的增殖抑制率差异有统计学意义（F = 39.56,P < 0.05）。孵育24 h时：ALA-PDT组细胞增殖抑制率（46.26% ± 1.25%）高于ALA组（14.65% ± 0.33%）、PDT组（14.96% ± 0.68%）和对照组（11.98% ± 0.32%）,差异有统计学意义（均P < 0.05 ）;ALA-PDT组细胞增殖抑制率高于12 h（P < 0.05）;4组细胞凋亡率差异有统计学意义（F = 16.32,P < 0.05）,ALA-PDT组（41.92% ± 3.23%）高于对照组（4.67% ± 0.88%）、ALA组（7.02% ± 1.52%）和PDT组（8.37% ± 0.59%）,均P < 0.05。ALA-PDT作用于A431细胞后0、6、12、24、36、48 h,细胞PKD1基因mRNA的相对表达量差异有统计学意义（F = 22.24,P < 0.05）,孵育24 h mRNA相对表达量低于0、6、12 h（均P < 0.05）,与36、48 h差异无统计学意义（均P > 0.05）。4组A431细胞中pSer916表达量差异无统计学意义（F = 1.53,P > 0.05）,PKD1和pTyr463表达量差异有统计学意义（F值为10.04、8.27,均P < 0.05）,ALA-PDT组PKD1、pTyr463的表达低于对照组、ALA组、PDT组（均P < 0.05）。结论 PKD1可能参与ALA-PDT疗法诱导A431细胞凋亡的光化学反应进程,且可能是通过Tyr463位点活化促进癌变的发展。     

人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株电压门控钾通道的研究

目的 探讨电压门控钾通道在人皮肤鳞状细胞癌A431细胞和人角质形成细胞HaCaT细胞中的作用.方法 噻唑蓝方法研究加入含有不同浓度四乙胺的培养基对A431细胞和HaCaT细胞的增殖的影响;提取体外培养A431细胞、HaCaT细胞以及人正常表皮组织的蛋白,ELISA方法检测电压门控钾通道蛋白(HERG)在它们中的表达,比较它们的差异.结果 四乙胺对体外培养的A431细胞和HaCaT细胞的增殖抑制效应具有时间依赖与剂量依赖的特点,当四乙胺的浓度≥10 mmol/L且作用时间≥24 h,可以使A431细胞和HaCaT细胞的增殖受到明显的抑制.HERG钾通道蛋白在A431细胞、HaCaT细胞和人正常皮肤表皮组织均有表达,平均浓度分别为(49.7114±3.55696)pg/ml、(35.7471±4.14696)pg/ml、(36.8857±3.47810)pg/ml,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论 阻断电压门控钾通道可抑制A431细胞和HaCaT细胞的增殖;电压门控钾通道可能在人皮肤鳞状细胞癌细胞上的表达更显著.

Abstract：

Objective To investigate the role of voltage-gated potassium channel in the human skin squamous cell carcinoma A431 cells and human keratinocyte HaCaT cells. Methods MTT assay was performed to detect the effect of different concentrations of tetraethylammonium (TEA) on the proliferation of cultured A431 cells and HaCaT cells. Besides, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was conducted to detect the expression of HERG channel protein in A431 cells, HaCaT cells and normal human skin tissue.Results TEA inhibited the proliferation of A431 cells and HaCaT cells in a dose- and time-dependent manner.After treated with TEA (≥ 10 mmol/L) for 24 or more hours, the proliferation of A431 cells and HaCaT cells was obviously suppressed. A significant difference was observed in the average concentration of HERG channel protein between A431 cells, HaCaT cells and normal human skin tissue (49.7114 ± 3.55696 pg/ml, 35.7471 ±4.14696 pg/ml, 36.8857 ± 3.47810 pg/ml, all P < 0.05). Conclusions The block of voltage-gated potassium channel could inhibit the proliferation of A431 cells and HaCaT cells, and the expression of voltage-gated potassium channel seems to be higher in human skin squamous cell carcinoma cells.     

光诱导纳米二氧化钛抑制人表皮鳞状细胞癌细株A431的实验研究

目的 探讨纳米二氧化钛(TiO2)颗粒光催化活性对人表皮鳞状细胞癌细胞株A431的生长抑制效应及机制.方法 单纯紫外线(主要波长为253.7 nm,功率30 W,光距30 cm,照射时间15 min)、不同浓度(100、200、300、400、500、600 mg/L)纳米TiO2及纳米TiO2+紫外线作用于A431细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测上述因素对A431细胞生长抑制率的影响;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测A431细胞凋亡率;罗丹明123(Rho123)染色法检测A431细胞线粒体跨膜电位的变化.采用SPSS13.0统计软件进行t检验和方差分析,组间比较采用SNK检验.结果 实验干预24、48、72 h后,100、200、300、400、500、600 mg/L纳米TiO2+紫外线组A431细胞的生长抑制率增高,且呈浓度依赖效应,3个时间点不同浓度组比较,F值分别为21.54、77.56、20.27,P值均＜0.05(n=6),SNK检验示各组间差异均有统计学意义;而不同浓度单纯纳米TiO2组细胞生长抑制率在3个时间点均无明显增高,差异均无统计学意义(P值均＞ 0.05).纳米TiO2联合紫外线照射可诱导A431细胞发生凋亡,并降低A431细胞线粒体跨膜电位,100、200、400 mg/L纳米TiO2+紫外线组凋亡率分别为8.86％±0.22％、11.72％±0.29％、31.24％±0.78％,空白对照组为2.69％±0.28％,经方差分析,差异有统计学意义(F=256.61,P＜0.05,n=3);以上3个浓度组线粒体跨膜电位总荧光强度值分别为758.48±15.42、676.60±14.35、557.71±13.12,空白对照组为2943.65±70.26,经方差分析,差异有统计学意义(F=208.57,P＜0.05,n=3),SNK检验示各组间差异均有统计学意义.结论 纳米TiO2+紫外线对A431细胞有生长抑制作用,并能诱导细胞凋亡,线粒体跨膜电位下降可能是其诱导细胞凋亡的机制之一;单纯纳米TiO2对A431细胞的生长无抑制作用.     

葡萄籽原花青素及UVA照射对HaCaT细胞增殖活性的影响

目的 观察葡萄籽原花青素（GSPE）和长波紫外线（UVA）对人角质形成细胞（HaCaT细胞）增殖的影响,以探讨GSPE有无光保护作用。方法 MTT法分别测定不同浓度GSPE以及不同剂量UVA对HaCaT细胞增殖活性的影响。结果 GSPE浓度为5-200μg/m L时,对HaCaT细胞增殖影响不明显,浓度为500μg/m L及以上时抑制细胞生长,且有统计学意义;UVA剂量超过10 J/cm2有抑制作用且随剂量增高抑制作用越明显,且有统计学意义,25 J/cm2时其抑制率达37.65%;浓度为50、100μg/mL的GSPE对25 J/cm2 UVA照射后的HaCaT细胞的增殖有明显促进作用。结论25 J/cm2的UVA对HaCaT细胞的增殖有明显抑制作用,而合适浓度的GSPE对HaCaT细胞增殖活性有光保护作用。     

葡萄籽原花青素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响

目的：明确葡萄籽原花青素（GSP）对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响。方法：体外培养A431细胞,用不同浓度的GSP（5、10、20、40、80 μg/mL）处理,采用MTT实验和克隆形成实验检测细胞活力和增殖能力,Western blot检测细胞通路PI3K/Akt/GSK-3β信号转导通路蛋白的表达。结果：随着GSP浓度增加,A431细胞活力及细胞克隆逐渐下降,细胞凋亡逐渐增加。GSP处理后A431细胞中p-PI3K、p-Akt和p-GSK-3β表达水平明显降低。结论：GSP可以诱导A431细胞凋亡和抑制A431细胞增殖,其机制可能与抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路活化有关。     

阿维A对人表皮鳞状细胞癌A431细胞株生长及凋亡的影响

目的 研究阿维A对上皮鳞状细胞癌(鳞癌)细胞生长的影响及其诱导凋亡作用。方法 以体外培养的人表皮鳞癌细胞A431细胞和角质形成细胞HaCaT细胞为研究对象,用MTT法观察阿维A对A431细胞和HaCaT细胞的生长抑制作用,用光镜和电镜观察细胞形态,流式细胞仪检测凋亡峰的出现,Annexin-V染色证实凋亡的发生。结果 随着阿维A作用时间的延长及剂量的增加,对A431细胞增殖的抑制作用增加。同样浓度和同样作用时间的阿维A对A431细胞增殖的抑制率高于对HaCaT细胞的抑制率。光镜和电镜观察显示随阿维A作用时间延长,A431凋亡细胞增多。流式细胞仪检测显示随阿维A作用时间的延长,亚G1期凋亡峰明显增加,Annexin-V染色阳性细胞数增多。结论 阿维A具有抗上皮鳞癌细胞生长及诱导上皮鳞癌细胞凋亡作用。     

5-ALA-PDT法在HPV11.HaCaT细胞模型中的应用

目的：确定光动力疗法(5-ALA-PDT)对携带HPV11全基因组的HaCaT细胞(HPV11.HaCaT)模型的影响。方法：HPV11.HaCaT细胞培养传代后分别用不同浓度5-ALA(0.375、0.75、1.5、3mM),或不同剂量红光(10、20、40J/cm2),或不同浓度5-ALA结合不同剂量红光处理。用MTT法检测细胞增殖,实时荧光定量PCR测定HPV11早期基因E5、E6和E7 mRNA的表达。结果：0.75mM以上浓度的5-ALA联合20或40J/cm2红光,细胞存活率均在50%以下(P<0.01)。0.375mM 5-ALA联合20J/cm2红光能明显降低HPV11E6和E7 mRNA表达,相对表达量为0.28和0.26(P<0.01),而0.75mM 5-ALA联合20J/cm2红光处理对HPV11 E6和E7 mRNA表达影响不明显,相对表达量为0.85和1.46(P>0.05),但以上两种处理条件对HPV11 E5 mRNA的表达均无明显影响。结论：5-ALA-PDT法应用于HPV11.HaCaT细胞模型能抑制HPV11.HaCaT细胞增殖,并能降低该细胞中HPV11 E6、E7mRNA的表达。     

姜黄挥发油联合顺铂对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的 探讨姜黄挥发油（TVO）联合顺铂对人皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）A431细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法 取对数生长期A431细胞,用5、10、20、40、80 mg/L TVO处理,对照组用含有1％二甲基亚砜（DMSO）的DMEM高糖培养基处理,24 h后,CCK8法检测细胞增殖情况。另取部分A431细胞,分为4组,分别用含1％ DMSO的DMEM高糖培养基（对照组）、40 mg/L TVO（TVO组）、10 mg/L顺铂（顺铂组）、40 mg/L TVO和10 mg/L顺铂（TVO + 顺铂组）处理24 h后,利用CCK8法检测细胞增殖活性;倒置显微镜观察细胞形态变化;吖啶橙（AO）/溴化乙锭（EB）双染色荧光显微镜观察细胞凋亡情况;比色法检测Caspase?3、Caspase?9酶活性;Western印迹检测Caspase?3、P糖蛋白表达。结果 5、10、20、40、80 mg/L TVO作用A431细胞24 h,对细胞增殖抑制率分别是（12.83 ± 6.4）%、（16.27 ± 11.4）%、（21.61 ± 9.1）%、（33.11 ± 2.0）%和（46.00 ± 3.3）%,与对照组（4.03 ± 1.4）%比较差异均有统计学意义（P < 0.05）;24 h时抑制50%细胞增殖的TVO浓度为（61.66 ± 1.03） mg/L;TVO组、顺铂组及TVO + 顺铂组细胞增殖抑制率显著上升,与对照组比较差异均有统计学意义（P < 0.05）,联合用药有协同作用,联合指数（CI）为1.366（P < 0.05）。TVO组、顺铂组细胞均不同程度变圆并出现凋亡,TVO + 顺铂组细胞明显减少,出现大量细胞碎片。TVO组、顺铂组及TVO + 顺铂组细胞Caspase?3酶活性分别是1.117 ± 0.095、1.381 ± 0.089、1.520 ± 0.115,Caspase?9酶活性分别是1.259 ± 0.059、1.829 ± 0.171、2.760 ± 0.297,Caspase?3蛋白表达量分别是1.156 ± 0.006、1.296 ± 0.021、1.482 ± 0.016,P糖蛋白表达量分别是1.311 ± 0.011、1.169 ± 0.012、0.528 ± 0.014,其中TVO + 顺铂组细胞Caspase?3、Caspase?9酶活性及Caspase?3蛋白表达量显著高于TVO组和顺铂组,P糖蛋白表达量显著低于TVO组和顺铂组,差异均有统计学意义（P < 0.01）。结论 姜黄挥发油与顺铂联用可协同抑制人皮肤鳞癌A431细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与活化Caspase系统并降低P糖蛋白表达相关。     

黄芩素对A431细胞埃兹蛋白表达及侵袭力的影响

目的 探讨黄芩素是否通过抑制埃兹蛋白来实现抑制A431细胞增殖、细胞周期进程及伪足的形成。方法 采用细胞划痕、微孔滤膜法（Transwell）检测黄芩素对A431细胞爬行的影响;RT－PCR检测黄芩素对A431细胞埃兹蛋白mRNA表达量的影响;Western印迹检测黄芩素及siRNA对A431细胞埃兹蛋白表达及其磷酸化的影响;扫描电镜观察黄芩素及siRNA对A431细胞伪足形成的影响。结果 细胞划痕实验显示,培养24 h时,黄芩素 5、10、20 μmol/L组细胞闭合宽度占原宽度的比例分别为13.3% ± 1.7%、7.6% ± 1.6%和5.9% ± 1.3%,黄芩素呈浓度依赖性抑制A431细胞爬行运动,黄芩素各组与阴性对照组（16.3% ± 2.3%）比较,差异均有统计学意义。Transwell实验证实,5、10、20 μmol/L黄芩素处理A431细胞48 h后,穿过人工基底膜的细胞数量分别为（46.5 ± 3.8）、（34.3 ± 3.4）和（25.3 ± 2.3）个/Hp,各处理组与阴性对照组（56.3 ± 3.8个/Hp）经方差分析,P < 0.01;而与siRNA组（28.3 ± 2.1个/Hp）比较,P > 0.05。Western印迹及RT－PCR检测显示,0、5、10、20、40 μmol/L黄芩素处理A431细胞48 h后,黄芩素呈浓度依赖性地抑制A431细胞埃兹蛋白/磷酸化埃兹蛋白及埃兹蛋白mRNA表达,埃兹蛋白mRNA与β-肌动蛋白mRNA灰度值之比值与阴性对照组比较,P值均 < 0.01;而与siRNA组比较,P > 0.05;埃兹蛋白、磷酸化埃兹蛋白在A431细胞中的表达量（与β-肌动蛋白灰度值之比）与阴性对照组比较,P值均 < 0.01;而40 μmol/L黄芩素处理组与siRNA处理组比较,P > 0.05。扫描电镜显示,48 h后20 μmol/L黄芩素组A431细胞伪足数量为（5.3 ± 1.9）个,长度明显缩短,与阴性对照组（22.6 ± 2.8个）比较,P < 0.01;siRNA组为（4.5 ± 2.8）个,与阴性对照组比较,P > 0.05。结论 黄芩素可能通过直接或间接抑制埃兹蛋白表达及其磷酸化而抑制A431细胞的增殖、爬行,从而达到抗肿瘤增殖及浸润转移的目的。     

Fractionated aminolevulinic acid–photodynamic therapy provides additional evidence for the use of PDT for non-melanoma skin cancer

Background Photodynamic therapy (PDT) is an accepted treatment for superficial basal cel carcinoma (sBCC) and Bowens disease. In Rotterdam, extensive preclinical research has lead to an optimized twofold illumination scheme for aminolevulinic acid–PDT (ALA‐PDT). Objective To provide additional evidence of ALA‐PDT for sBCC, Bowens disease (BD), nodular BCC (nBCC) and actinic keratosis (AK) using a 2‐fold illumination scheme after a single application of ALA. Methods Five hundred fifty‐two lesions (430 sBCC, 20 nBCC, 32 BD, 70 AK) were treated with ALA‐PDT using a twofold illumination scheme. ALA was applied topically for 4 h. Lesions were treated with two light fractions of 20 and 80 J/cm² separated by a 2‐h dark interval. Results After a minimum follow‐up of 12 months, in average follow‐up of 2 years, an overall complete response of 95% was seen for all lesions. For sBCC, the complete response at 2 years was 97% (for AK 98%, for BD 84% and for nBCC 80% after 2 years). A sub‐analysis of the results of lesions larger than 2 cm showed CR at 2 years of 89% for all lesions (n = 57). Cosmetic outcome was good to excellent in 95% of the treated lesions. Conclusion ALA‐PDT using a twofold illumination scheme of 20 plus 80 J/cm² separated by a 2‐h dark interval leads to high complete response rates at 2 years and can be regarded as an evidence‐based treatment modality for superficial growing non‐melanoma skin cancer and the (pre)malignant AK. The Rotterdam fractionated approach should be included in future guidelines.     

Topical Aminolevulinic Acid HCl Photodynamic Therapy

? Photodynamic therapy (PDT) is the treatment of tumors or dysplasic tissue with drugs that produce cytotoxic metabolites when exposed to light. ? Aminolevulinic acid HCl (5-aminolevulinic acid HCl; ALA) is a prodrug that is metabolized intracellularly to form the photosensitizing molecule protoporphyrin (PpIX). When PpIX is activated by light, cytotoxic reactive oxygen species and free radicals are generated. ? ALA can diffuse through skin and preferentially localizes in tumors and dysplasic tissue; subsequent exposure of PpIX-loaded tumor cells to light can destroy the tumor. ? After application of a 20% solution of ALA to actinic keratosis lesions of the head, PpIX (as measured by skin fluorescence) peaked 11 hours after treatment and the mean clearance half-life was 30 hours. ? In phase II trials 10 J/cm2 of blue light (wavelength = 417nm) delivered at 10 mW/cm2 for 1000 seconds was found to provide maximal therapeutic effect on lesions of the head after treatment with 20% ALA. ? In phase III trials of ALA PDT in 241 patients with lesions of the head 72% of patients had a complete response to treatment at 12 weeks versus 20% of those treated with vehicle and light alone. Some of these patients had been re-treated at 8 weeks. ? In these trials 12% of ALA-treated patients and 37.5% of those receiving vehicle whose lesions had cleared at 8 weeks had relapsed at 12 weeks. When the total number of lesions were considered the recurrence rate was 5 and 27.9% for ALA- and vehicle-treated lesions, respectively. ? All patients reported some degree of burning or stinging during PDT but this usually subsided after irradiation was completed and was rarely treatment-limiting. Localized erythema and edema were also common. No other significant adverse effects were noted and treatment was generally well tolerated. ? A well designed dermal applicator ensured perilesional skin was spared collateral damage.     

氧对5-氨基酮戊酸光动力疗法诱导HaCaT细胞凋亡和死亡的影响

目的 探讨基态氧和单线态氧对5-氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）诱导HaCaT细胞凋亡和死亡的影响。方法 取对数生长期的HaCaT细胞，分别与不同浓度的ALA避光孵育4 h，随后给予相应剂量的He-Ne激光照射，照射后12 h以MTT法检测细胞存活率；PI单染法检测细胞凋亡率；二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）标记法测定细胞内活性氧基（ROS）水平。为了造成光动力反应前后细胞的化学缺氧以及淬灭产生的单线态氧基（1O2），将不同浓度的氯化钴（CoCl2）和叠氮钠（NaN3）分别加入培养基，比较ALA-PDT处理组与未处理组HaCaT细胞凋亡和死亡率以及细胞内ROS水平的变化。结果 MTT结果表明，ALA-PDT诱导HaCaT细胞的凋亡与死亡率与ALA浓度和He-Ne激光照射剂量呈正相关。经400 μmol/L CoCl2处理的细胞，胞内ROS水平显著降低，细胞死亡率未处理组为57.65% ± 2.88%，处理组降至16.68% ± 1.86%，细胞凋亡率则分别为43.80%和15.40%。10 mmol/L NaN3几乎能完全清除ALA-PDT诱导产生的ROS，增强HaCaT细胞对ALA-PDT诱导的细胞死亡或凋亡的抵抗。结论 改变光动力反应前后细胞内的基态氧与单线态氧含量，能调控ALA-PDT诱导的HaCaT细胞凋亡和死亡。     

Immunosuppressive effects of photodynamic therapy by topical aminolevulinic acid

Photodynamic therapy (PDT) has been used for inflammatory skin disorders as well as superficial skin cancers such as solar keratosis and Bowen's disease. Whether PDT with topical application of aminolevulinic acid (ALA) and exposure to visible light has a similar immunosuppressive action to ultraviolet phototherapy was investigated using a murine contact hypersensitivity (CHS) model. The number of epidermal Langerhans cells (LC) was decreased with their morphological changes 1 day after PDT with the minimal level at 5 days and gradual recovery thereafter. Conversely, the number of CD11c(+) I-A(+) cells was significantly increased in the draining lymph nodes after PDT. This suggests that LC moved from PDT-treated skin, resulting in the decrement of epidermal LC and migration to lymph nodes. CHS response to DNFB applied on the PDT-treated skin with 20% ALA and 40 J/cm(2) visible light was significantly suppressed (local immunosuppression). When mice were treated with 80 J/cm(2) of PDT, CHS response to the antigen applied on untreated distant skin was also significantly suppressed (systemic immunosuppression). The locally or systemically immunosuppressed mice by PDT were attempted to sensitize again with DNFB on non-treated skin, but elicitation responses were significantly suppressed. However, these mice were able to be sensitized with another hapten, oxasolone. Thus, a hapten-specific immunological unresponsiveness (tolerance) was induced in mice by topical ALA-PDT. These findings suggest that PDT has a potential immunological contribution to clinical efficacy for inflammatory diseases identical to ultraviolet phototherapies.