双重实时荧光PCR在手足口病快速检测中的应用

目的 探讨双重实时荧光PCR 技术检测手足口病肠道病毒的应用效果.方法 用单一实时荧光PCR先检测标本中的肠道病毒通用病毒核酸,肠道病毒通用病毒核酸阳性再分别用双重实时荧光PCR及单一实时荧光PCR检测CoxA16型和EV71型特异性核酸,比较两种方法检测结果.结果 240份标本中肠道病毒通用型核酸阳性157份,双重实时荧光PCR法CoxA16阳性111份,EV71阳性1份,其他肠道病毒45份,单一实时荧光PCR法CoxA16阳性109份,EV71阳性1份,CoxA16+EV71阳性2份,其他肠道病毒45份.EV71和其他肠道病毒符合率为100%.结论 双重实时荧光PCR 检测技术可以准确检测手足口病肠道病毒,且特异性强、灵敏度高,又可以快速得到检测结果,是一种快速检测手足口病病毒的方法.     

应用实时荧光PCR技术快速检测B群链球菌

目的 建立一种能够快速、准确、特异的检测B群链球菌的实时荧光PCR检测技术。方法 以B群链球菌cfb基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,然后优化反应条件和反应体系,建立检测B群链球菌的实时荧光PCR方法,通过检测实验菌株,对照菌株以及模拟血液,尿液标本对该方法的特异性、敏感性以及灵敏度进行评价。结果 实验结果表明实时荧光PCR方法检测7株B群链球菌均为阳性,其他对照实验菌株均为阴性,且当菌液浓度为 20cfu//ml时,也能获得阳性结果,说明荧光定量PCR法敏感性、特异性以及灵敏度均较高。对模拟尿液标本进行检测时,其敏感性为90%,特异性为100%,检测下限约为2cfu/反应体系。由于标本类型和处理方式的不同,对模拟血液标本进行检测时,其检测灵敏度约为100cfu/mL,低于模拟尿液标本的检测灵敏度。结论 建立的荧光定量PCR技术方法为GBS的快速诊断以及更加准确有效的进行抗生素预防提供了依据,也为在新生儿中进行早发型GBS感染的快速准确诊断提供了新的思路。     

实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义

目的对实时荧光定量PCR测定的472例HBV-DNA结果进行分析,以探讨其临床价值。方法对472份临床血清标本用ELISA法进行定性检测,并依据乙肝两对半定性结果进行归类分组,再用实时荧光PCR定量检测。结果92份HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)标本中有89份HBV-DNA为阳性,阳性率为96.7%,其PCR定量拷贝数为(3.23±1.45)×107/ml;168份HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)标本有118份HBV-DNA阳性,阳性率达到70.2%,PCR定量拷贝数为(4.65±2.10)×105/ml;32份HBsAg(+)、HBcAb(+)标本中有11份HBV-DNA为阳性,阳性率为34.4%,PCR定量拷贝数为(1.92±1.54)×104/ml;62份HBsAb(+)的标本HBV-DNA阳性2例,阳性率为3.2%,PCR定量拷贝数为(5.45±1.14)×103;60份全阴性的标本HBV-DNA阳性1例,阳性率为1.7%,PCR定量拷贝数为(2.36±1.12)×104/ml。结论PCR定量测定HBV-DNA可以真实反映体内乙肝病毒感染和复制及病毒载量情况,更有利于临床治疗和疗效观察。     

实时荧光定量PCR在肝炎检测中的应用

目的:探讨实时荧光定量PCR在肝炎尤其是乙型肝炎(乙肝)检测中的应用。方法:对450例急、慢性乙肝患者,采用经酶联免疫吸附试验检测血清,并按血清学标志分为三组,并对所用患者血清实时荧光定量PCR检测。结果:不同血清学标志模式的实时荧光定量PCR检测阳性率分别为95.95%、31.47%、52.20%,三组之间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:实时荧光栋梁PCR检测可以为乙肝病毒感染诊断、治疗及预后判断提供客观依据。但对于病毒非复制感染不能有效检测,不可在肝炎检测中完全替代血清标志物检测。     

实时荧光PCR技术在肠道沙门氏菌快速检测中的应用研究

目的探讨实时荧光PCR技术应用于肠道沙门氏菌快速检测中的可行性。方法随机采集从业人员健康体检肛拭子标本,用实时荧光PCR法进行检测,并以传统分离培养方法作为"金标准"进行对照实验,比较两者间的差异。结果在1 346份标本中,实时荧光PCR法检出沙门氏菌阳性13份,阳性率为9.66‰;培养法检出5份,阳性率为3.71‰。经统计学分析,两者对沙门氏菌检测的阳性数的差异有统计学意义(χ~2=6.125,P0.05);荧光PCR检测法灵敏度为100.00%,特异性为99.40%。结论实时荧光PCR法灵敏度高、操作简便,可降低工作强度,缩短检测时间,可作为快速检测肠道沙门氏菌的方法在从业人员健康检查中广泛推广应用。     

检测肺炎支原体的实时荧光PCR方法的建立

目的 采用Taqman探针技术,组建肺炎支原体荧光PCR基因检测方法.方法 对GenBank登录的肺炎支原体的基因序列进行生物信息学分析.针对16s核糖体蛋白基因的保守区域设计引物和探针,组建实时荧光PCR方法检测.采用流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒进行特异性评价.采用倍数稀释的方法进行灵敏度的评价.对来自南方医院的522份临床咽拭子样本进行检测.结果 用实时荧光PCR方法检测甲型流感病毒(甲型、乙型)、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒均无特异性反应.该方法可以检测出稀释浓度约为103/mL的肺炎支原体样本.对本院的临床样本检出39份.结论 实时荧光PCR检测肺炎支原体具有较高的特异性和灵敏度,可用于肺炎支原体感染的诊断.     

实时荧光PCR检测癌基因MDM2在急性白血病中的表达

目的应用实时荧光PCR技术,检测癌基因MDM2在急性粒细胞白血病(AML)中的表达并分析其与AML发生、分型及疗效的关系.方法以Sybr GreenI为荧光指示剂,β-actm作内参照,建立检测MDM2 mRNA表达的实时荧光PCR反应体系.PCR反应完毕作熔解曲线分析.分析MDM2 mRNA的表达与AML的发病、FAB分型及疗效的关系.结果①通过对实验参数的优化,适宜的反应条件为退火温度51℃,Mg2+浓度3 mmol/L,牛血清白蛋白(BSA)浓度0.1 mg/ml,循环次数45次.批内、批间变异系数分别为8.81%和15.39%.②AML组MDM2mRNA的表达明显高于正常对照组(P＜0.01);AML各亚型M1、M2与M3组MDM2mRNA表达量组间差异无显著性意义(P＞0.05);完全缓解组、部分缓解组、未缓解组3组之间MDM2mRNA表达差异有显著性意义(P＜0.01),且呈逐渐上升趋势.结论采用Sybr GreenI的Lightcycler实时荧光PCR方法检测MDM2 mRNA快速、简便、稳定性好.MDM2 mRNA的表达与AML的发生及临床疗效有重要关系.     

实时荧光PCR影响因素分析

实时荧光PCR检测仪一般都是采用从Eppendorf(EP)管管盖上射入激发光和检测荧光,因此EP管管盖透光性的好坏对检测荧光有很大的影响,从而影响检测结果。对于特定的荧光PCR试剂,在特定的实时荧光PCR检测仪上检测,变性时间和退出时间的改变,将会影响到扩增的效率,从而影响检测结果。1材料和方法1.1材料1.1.1研究对象有7份标本取自我院妇科门诊疑似尖锐湿疣的患者,其中2份标本为小块疣体组织,3份标本为疣体上擦拭的脱落细胞,2份标本为宫颈分泌物。1.1.2试剂和仪器人乳头瘤病毒(HPV6,11)荧光PCR试剂和透光薄膜由中山大学达安基因股份有限…     

实时荧光定量PCR检测白血病患者WT1基因表达及临床意义

目的 研究白血病患者WT1基因的表达水平及与临床预后的关系.方法 建立实时荧光定量PCR检测WT1基因表达技术,并分析65例白血病患者WT1基因的表达水平及与临床预后的关系.结果 建立的实时荧光定量PCR方法的标准曲线相关系数＞0.99.急性髓性白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者WT1基因表达水平较正常对照组均显著升高(P=0.001).慢性髓性白血病(CML)急变期患者WT1基因表达水平显著高于慢性期.WT1表达量与急性白血病发病时外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板无明显相关关系.AML和ALL患者中WT1基因高表达患者与低表达病例CR率差异无显著性.急性白血病患者治疗缓解后WT1的表达量较治疗前显著下降(P=0.032).随访显示WT1持续高表达或下降后又上升的患者呈现难治及复发.结论 实时荧光定量PCR技术检测急性白血病患者WT1基因表达量可预测难治复发及用于MRD的检测.     

实时荧光定量PCR检测急性髓细胞白血病患者MDR1基因表达及临床意义

目的 定量分析急性髓细胞白血病(AML)患者MDR1基因的表达水平及其与临床特征及疗效的关系.方法 构建实时荧光定量PCR检测MDR1基因表达的技术,并定量检测43例AML患者MDR1基因的表达水平及分析其与血象、免疫分型及临床疗效的关系.结果 建立的实时荧光定量PCR方法的标准曲线相关系数＞0.99.AML患者MDR 1基因表达水平较正常对照组显著升高(P＜0.001),FAB分型中M2,M5型患者MDR1基因表达水平显著高于M3型患者(P＜0.05及P＜0.025).MDR 1基因的表达量与AML发病时外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板无相关关系;而伴有CD34表达阳性AML患者MDR1基因表达水平显著高于阴性患者(P＜0.01);MDR 1基因高表达的初治AML患者诱导化疗的CR率显著低于低表达病例(P＜0.01).结论 实时荧光定量PCR技术检测急性白血病患者MDR 1基因表达量可更准确判断AML患者的预后及早期预测难治和复发.     

痰热清注射液治疗急性上呼吸道感染临床观察

目的观察痰热清注射液治疗急性上呼吸道感染的疗效。方法将132例患者随机分为治疗组68例与对照组64例。治疗组给予痰热清注射液,对照组给予利巴韦林注射液静脉滴注．疗程6d。结果治疗组、对照组的痊愈率分别为61．8％、40．6％,总有效率分别为92．6％、81．2％,治疗组疗效明显优于对照组,两组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）;治疗组经治疗后发热、鼻塞流涕、咽痛、咳嗽症状改善时间明显短于对照组,无明显不良反应发生。结论痰热清注射液治疗急性上呼吸道感染安全可靠,疗效满意。     

热毒宁注射液治疗成人急性上呼吸道感染的Meta分析

目的利用Meta分析系统评价热毒宁注射液治疗成人急性上呼吸道感染的疗效和安全性。方法检索2006-2011年中国期刊全文数据库、万方数据库和中国生物医学文献数据库,利用Meta分析方法综合定量分析7篇关于热毒宁注射液治疗急性上呼吸道感染的研究文献。结果7篇纳入的文献中,共有721例患者。Meta分析显示,热毒宁注射液治疗急性上呼吸道感染试验组与对照组疗效的比值比（OR）为3．69,95％可信区间（CI）为（2．66,5．10）,试验组有效率优于对照组,差异有统计学意义（Z=7．87,P〈0．01）,提示热毒宁注射液治疗成人急性上呼吸道感染安全性高。结论现有临床证据表明,热毒宁注射液治疗成人急性上呼吸道感染疗效显著,但是由于中文发表的临床试验质量较低。尚需作进一步的验证,试验的设计及报告应按照国际规范执行。     

糖皮质激素在小儿急性上呼吸道感染中应用的疗效及不良反应

目的分析糖皮质激素在小儿急性上呼吸道感染中应用的疗效及不良反应。方法选择2009年8月～2010年8月我院收治的80例急性上呼吸道感染患儿,随机分为观察组与对照组各40例,观察组患儿接受糖皮质激素治疗,对照组患儿接受其他药物治疗,依照病情采取抗病毒药物或抗菌药物进行治疗,观察并分析患儿的退热时间、用药后的不良反应和并发症。结果观察组患儿与对照组相比表面体温下降,症状得到有效缓解(P<0.05),但不良反应严重,糖皮质激素延长了患儿的病程且使并发症增多,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论使用糖皮质激素治疗由急性上呼吸道感染引起的小儿发热弊大于利。     

不同方案治疗儿童急性上呼吸道感染疗效观察

目的比较不同方案对儿童急性呼吸道感染的临床疗效,探讨临床合理用药的方法。方法选择门诊急性上呼吸道感染患儿346例,随机分为抗生素组（全程应用抗生素组）、延后组（延后应用抗生素组）、对照组（不应用抗生素组）,分别统计其病程、并发症、不良反应发生率、复诊率及治疗费用。结果三组患儿发热、咳嗽时间差异无统计学意义（P〉0．05）;抗生素组咽痛时间短于延后组和对照组（P〈0．01）。三组患儿并发症发生率差异无统计学意义（P〉0．05）。抗生素组及延后组不良反应发生率高于对照组（P〈0．05）。抗生素组复诊率显著高于延后组和对照组（P〈0．05）。抗生素组治疗费用最高,而对照组最低（P〈0．05）。结论抗菌药物治疗儿童急性上呼吸道感染不能有效缩短病程及减少并发症的发生,且引起不良反应及治疗费用增加。     

小儿推拿治疗小儿急性上呼吸道感染发热的临床疗效

目的 观察小儿推拿在治疗小儿急性上呼吸道感染发热的临床疗效。方法前瞻性分析2019年6月至2020年8月100例小儿急性上呼吸道感染发热患儿,按照随机数字表法分为观察组(小儿推拿治疗)与对照组(常规治疗),每组各50例。比较两组患儿中医证候积分在治疗前后的变化情况、临床症状(咳嗽、流涕、咽痛、发热)消失时间及总有效率。结果 治疗后观察组患者鼻塞、流涕、喷嚏、咳嗽中医证候积分分别为(1.08±0.54)分、(1.31±0.23)分、(1.13±0.48)分、(1.04±0.31)分,均低于治疗前和治疗后对照组,差异有统计学意义(P0.05)。观察组咳嗽、流涕、咽痛以及退热时间分别为(2.01±0.24)d、(2.38±0.21)d、(2.31±0.24)d、(1.24±0.24)d,均短于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。观察组总有效率为94.0%,明显高于对照组的80.0%,差异有统计学意义(P0.05)。结论 小儿推拿治疗小儿急性上呼吸道感染发热,在改善中医证候、缩短症状消失时间作用突出,疗效确切,可在临床广泛推广。     

急性上呼吸道感染患者用药情况调查分析

目的：探讨急性上呼吸道感染患者抗菌药物应用的合理性。方法：对本院2010年7月份门急诊处方260例上呼吸道感染患者进行回顾性分析。结果：260张处方中,应用抗菌药物225例,使用率为86.5%,多为单一用药与静脉注射给药。上呼吸道感染抗菌药物使用率头孢菌素居首位,其次为青霉素类和大环内酯类,用药导致的不良反应稍多。结论：我院医师在治疗急性上呼吸道感染时,医院应加强对临床医师抗菌药物知识的培训与再教育,提高抗菌药物的临床合理应用水平。     

潘丁生治疗急性上呼吸道感染511例报告

作者分析了用潘生丁治疗511例急性上呼吸道感染的疗效,经对照组318例用抗生素加解热镇痛药物治疗观察表明,潘生丁疗效显著,明显优于对照组,经统计学处理二组显效率和总有效率有高度显著性差异(P<0.01),并简要讨论了潘生丁治疗急性上呼吸道感染的机理和注意事项。     

深圳地区2011～2012年急性上呼吸道感染鼻病毒检测分析

目的了解深圳地区急性上呼吸道感染患者中的鼻病毒感染状况及流行特征。方法采用实时荧光定量PCR法,对采集深圳市宝安区人民医院635份咽拭子样本进行鼻病毒检测。结果 2011～2012年急性上呼吸道感染患者鼻病毒的阳性率为18.27%（116/635）,HRV感染主要集中在7岁以下儿童,占64.66%（75/116）,其中幼儿检出率最高,其次婴儿和学龄前儿童。HRV主要在春、夏、秋季检出,冬季检出较少。结论鼻病毒是深圳地区急性上呼吸道感染患者的主要病原体,随着季节和年龄的不同而具有一定的流行规律。     

上感颗粒对病毒性上呼吸道感染的临床分析

目的分析上感颗粒对病毒性上呼吸道感染的临床疗效。方法选取2009年9月～2010年9月我院收治的病毒性上呼吸道感染患者100例,作为研究对象。随机分为服用上感颗粒的观察组和未服用上感颗粒的对照组。比较两组患者治疗1、2、3d后的体温和咳嗽症状的变化。比较两组患者治疗后的总有效率和体温、咳嗽的平均停止时间进行比较。结果两组患者经过1、2d治疗后,观察组有显著效果,差异有统计学意义,P均<0.05。两组患者经过3d治疗后,观察组总有效率明显高于的对照组,高烧、咳嗽的停止平均时间明显低于对照组,观察组和对照组两组比较差异有统计学意义,P<0.05。结论服用上感颗粒治疗病毒性上呼吸道感染的观察组的疗效明显比没有服用上感颗粒的对照组的效果要好。     

急性上呼吸道感染病人单核细胞ADCC效应的研究

目的：探讨急性上呼吸道感染病人单核细胞ADCC效应的变化。方法：利用细胞增殖检测单核／巨噬细胞周ADCC效应方法，测定急性上呼吸道感染病人单核细胞ADCC效应及非特异杀伤效应，并以健康人作为对照组。结果：急性上感伴发热病人单核细胞活化前ADCC（nADCC）效应高于健康对照组（P＜0．05），而活化后ADCC（sADCC）效应无明显变化；上感不伴发热病人nADCC效应低于健康对照组（P＜0．01）；上感病人无论发热与否其单核细胞非特异杀伤效应均高于健康对照组（P＜0．01）。结论：急性上呼吸道感染时发热者与无发热者ADCC效应不一致，单核细胞ApeC效应与非特异性杀伤效应功能状态可不一致。