没食子酸抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖作用研究

目的 探讨没食子酸对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）增殖的抑制作用.方法 MTT比色法检测没食子酸对HUVECs增殖的抑制作用;用AO/EB荧光双染色法检测细胞凋亡和坏死;激光共聚焦显微镜检测没食子酸对F-actin和细胞核的影响.结果 浓度为40、60、80和100 μg/mL的没食子酸明显抑制了HUVECs细胞增殖,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）;荧光双染色法结果显示没食子酸诱导HUVECs发生凋亡和坏死,且随没食子酸浓度的增加,死亡细胞的比例显著增多;荧光染色显示细胞骨架蛋白F-actin的细丝发生断裂或重排,细胞核发生边集.结论 没食子酸具有显著抑制HUVECs增殖,诱导其凋亡和坏死的作用;此外,没食子酸还能破坏细胞骨架蛋白F-actin,这与抑制细胞迁移密切相关.     

没食子酸抑制人舌鳞癌SCC-9细胞增殖、凋亡及可能机制研究

目的 观察没食子酸(GA)对人舌鳞癌细胞SCC-9增殖、凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法 将SCC-9细胞分为对照组和低、中、高浓度没食子酸组(30、60、90μM GA组)。采用MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测SCC-9细胞周期及凋亡率;TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot检测SCC-9细胞中Cleaved-caspase9、Cleaved-caspase8、Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP、p-ERK1/2、p-JNK1/2和p-P38蛋白表达。结果 与对照组比较,低、中、高浓度没食子酸组SCC-9细胞增殖率逐渐下降,而sub G1期DNA含量、细胞凋亡率以及阳性凋亡细胞数逐渐增加,呈剂量依赖性;与对照组比较,没食子酸组Cleaved-caspase9、Cleaved-caspase8、Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP、p-ERK1/2、p-JNK1/2和p-P38蛋白表达均逐渐增加(P<0.05),呈剂量依赖性。结论 没食子酸具有抑制SCC-9细胞增殖、诱导凋亡作用,其机制可能与激活MAPK/ERK信号...     

神经母细胞瘤中N-myc的作用机制研究进展

神经母细胞瘤(NB)是儿童期最常见的颅外实体肿瘤,来源于交感神经系统。MYCN基因扩增是目前公认的NB不良预后的标志,该基因在约20%的NB患者中发生扩增或过表达。MYCN基因编码的转录因子N-myc通过调控NB细胞中p53、S期相关蛋白激酶2、鸟氨酸脱羧酶1、双微体2等多种分子的表达以及非编码RNA,调节细胞周期、分化以及凋亡等,进而促进NB演进。对N-myc作用机制的研究将有助于开发治疗NB的新药,以期给患者的治疗带来希望。     

Beta-淀粉样蛋白对体外培养人神经母细胞瘤细胞的毒性作用

目的 观察Beta-淀粉样蛋白(beta-amyloid,Aβ)对体外培养人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的毒性作用.方法 将体外培养的人神经母细胞瘤细胞,分为BSA对照组(0.5 mg/mL)、Aβ组(Aβ1-42寡聚体,50 μg/mL)和Aβ+p75-FC组(50μg/mL Aβ1-42+100 μg/mL p75-FC,p75-FC为p75NTR胞外段与人IgG FC段的融合蛋白,能够竞争性阻断p75NTR),分别干预72 h,采用结晶紫染色法观测SH-SY5Y细胞轴突的生长长度,采用MTT法检测SH-SY5Y细胞存活率.结果 干预结束后,Aβ组SH-SY5Y细胞轴突长度(42.83±14.98) μm明显短于BSA对照组[(69.76±19.24) μm,P=0.003];在同时给予p75-FC干预后,其轴突长度(65.37±17.52) μμm与BSA对照组轴突长度比较差异无统计学意义(P =0.600).Aβ组SH-SY5Y细胞D(490)值(0.203±0.068)明显低于BSA对照组(0.428±0.094,P=0.002);在同时给予p75-FC干预后,其D(490)值(0.447 ±0.103)与BSA对照组比较差异无统计学意义(P=0.768).结论 Aβ对人神经母细胞瘤细胞具有毒性作用,且通过p75NTR介导实现.     

小儿神经母细胞瘤13例分析

本文分析了13例神经母细胞瘤年龄、性别规律、主耍临床表现、原发部位、转移情况以及治疗、转归,并在讨论中指出铁蛋白增高、儿茶酚胺代谢异常、1号染色体短臂缺陷、骨髓中典型菊花团改变在本病早期诊断中的重要意义。     

粉防己碱对人视网膜母细胞瘤细胞株S0-Rb50 增殖凋亡影响的可能机制研究

目的 观察粉防己碱(tetrandrine,Tet)通过磷脂酰肌醇-3激酶(PI₃K)/蛋白激酶B(Akt)通路对人视网膜母细胞瘤细胞株S0-Rb50增殖及凋亡的影响。方法 对数期生长S0-Rb50细胞分为4组,即对照组、Tet低、中、高剂量组,分别用0、2.5、5.0、10.0μmol/L Tet处理,观察干预24h细胞形态学变化;MTT法检测干预24、48、72h时各组吸光度(A)值;流式细胞术检测干预24h各组细胞周期及细胞凋亡率;实时荧光定量PCR及Western blot法检测干预24h各组细胞PI₃K、Akt、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA和蛋白表达量及裂解的含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达量。结果 倒置相差显微镜观察发现,对照组细胞形态规则、融合成片,不同干预组细胞随Tet浓度升高细胞体积逐渐减小、核质比例减小,不能融合成片,视野内漂浮细胞或细胞崩解碎片增多。与对照组比较,Tet高剂量组干预24h时A值较低,差异有统计学意义(P＜0.05),Tet各剂量组干预48、72h时A值均较低,且随干预剂量升高呈降低趋势,差异均有统计学意义(P＜0.05)。对照组MTT试验A值随干预时间的延长呈升高趋势(P＜0.05),Tet高剂量组MTT试验A值随干预时间的延长无明显变化(P＞0.05)。与对照组比较,Tet各剂量组G₀/G₁、S期细胞占比、PI₃K、Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量及pAkt/Akt较低,且随干预剂量升高呈降低趋势,差异均有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,Tet各剂量组G₂/M期细胞占比、凋亡率、Bax mRNA和蛋白相对表达量及cleaved caspase-3蛋白相对表达量较高,且随干预剂量升高呈降低趋势,差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 Tet可抑制人视网膜母细胞瘤细胞株S0-Rb50增殖、促进凋亡,可能与抑制PI₃K/Akt信号通路、下调Bcl-2 mRNA和蛋白、上调Bax mRNA和蛋白及cleaved caspase-3蛋白表达相关。     

蜂斗菜素抑制人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH增殖作用机制研究

目的：探讨蜂斗菜素对人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH增殖抑制作用的机制。方法：采用SRB法检测蜂斗菜素对肿瘤细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术观察蜂斗菜素对SK-N-SH细胞周期和凋亡的影响;采用Hochest 33258染色法观察蜂斗菜素对SK-N-SH凋亡的影响;蛋白免疫印迹法( Western Blotting ) 检测蜂斗菜素对SK-N-SH细胞ERK1/2蛋白磷酸化的影响。结果：蜂斗菜素对SK-N-SH,SGC7901,SPC-A-1,SMMC 7721,Ec9706,SK-N-BE(2)和U251细胞有不同程度的抑制作用。蜂斗菜素使SK-N-SH细胞的周期阻滞于G0/G1期,但不诱导其凋亡,且下调ERK1/2蛋白的磷酸化水平。结论：蜂斗菜素是一种潜在的抗肿瘤天然化合物,其机制为抑制细胞增殖,但不诱导其凋亡。其分子机制可能包括下调ERK1/2蛋白的磷酸化水平。     

儿童神经母细胞瘤实验诊断学的研究进展

神经母细胞瘤(NB)是婴幼儿常见的外周神经系统恶性实体肿瘤,其临床表现复杂,恶性程度高,有自然消退的趋势。NB的诊断主要依据影像学检查和实验室检查,其中影像学检查受病灶大小、位置影响难以早期发现,而实验室检查特别是儿茶酚胺代谢产物的检测已成为NB早期诊断的重要方法之一。近年来随着人们对NB研究的不断深入,其诊疗已经进入分子生物学时代,从分子水平揭示NB的起源、发生、发展已成为当前的研究热点。未来,应促进人们对NB在实验诊断学中作用的认识,从而提高临床诊断水平。     

提取没食子酸工艺改进的研究

对以酸水解法从五倍花原料中提取没食子酸的工艺进行改进。改进后的工艺具有生产周期短、省时、省工的特点。同时不需要制冷设备，减少设备投资，节省经费。提取率高达１４．８％以上。     

双氢青蒿素通过下调NICD-1抑制胶质瘤生长

目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinine,DHA)对人神经胶质瘤生长的影响及机制.方法 人胶质瘤U251细胞株传代培养,设置空白对照组、二甲基亚砜(DMSO)组、DAPT组和DHA(10、20、40、80 μmol/L)实验组,应用CCK-8和FCM检测细胞增殖、周期及凋亡,Western blot检测Notch1的胞内区域(NICD-1)及其下游靶蛋白Hes1的表达水平.建立裸鼠皮下胶质瘤模型(n=20),按随机数字表法分为DMSO组、DAPT组、DHA(50、100 mg/kg)治疗组,每组5只,根据时间体积曲线计算各组抑瘤率,免疫组化法检测裸鼠皮下移植瘤组织中NICD-1表达水平变化.结果 与空白对照组和DMSO组相比,实验组U251细胞增殖率显著下降,G1期细胞所占百分比显著上升,S期细胞所占百分比显著下降,早期凋亡率显著上升(P＜0.05),NICD-1及Hes1蛋白表达水平显著低于空白对照组(P＜0.05),均呈浓度依赖关系;DHA各治疗组的裸鼠皮下移植瘤生长速率及移植瘤组织内NICD-1表达显著低于DMSO对照组(P＜0.05).结论 DHA有效抑制人神经胶质瘤的生长,其作用机制可能与通过下调NICD-1表达抑制Notch信号通路有关.     

叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的保护作用

目的通过观察叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响,探讨叶酸和维生素B12对神经细胞的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,分为对照组、叶酸组(1.875 mg/L)、维生素B12组(800μg/L)、叶酸(1.875 mg/L)+维生素B12(800μg/L)组,进行细胞形态观察、细胞计数分析以及测定各组细胞的噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)代谢率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率。结果与对照组相比,叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组的细胞计数和MTT代谢率升高(P<0.05),LDH漏出率降低(P<0.05),在细胞形态上,叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组明显好于对照组,表现为细胞胞体饱满、存活细胞数目增多、贴壁良好、突起延长。结论叶酸、维生素B12能促进神经细胞生长,降低神经细胞死亡率,从而达到保护神经元的作用。     

Effect of all-trans retinoic acid on growth of xenograft tumor and its metastasis in nude mice

Ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｄｉｓｐｌａｙｓａｗｉｄｅｒａｎｇｅｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｎｃｅｌｌｕｌａｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ,ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ,ｖｉｓｉｏｎ,ｉｍｍｕｎｉｔｙａｎｄｍａｌｉｇｎａｎｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ,ａｎｄｈａｓｂｅｅｎｓｈｏｗｎｔｏｓｕｐｐｒｅｓｓｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｎｉｍａｌｓ.Ｉｔａｌｓｏｅｘｈｉｂｉｔｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｇｒｅｅｓｏｆｅｆｆｉｃａｃｙｉｎｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ…     

反义肽核酸阻断人神经母细胞瘤多药耐药相关蛋白P-糖蛋白的表达

目的探讨反义肽核酸(PNA)的细胞转染方法及其对体外培养的神经母细胞瘤多药耐药(MDR)相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法以人MDR-1基因mRNA为靶点设计合成两反义PNA序列,利用PNA-DNA杂交,阳离子脂质体介导转染神经母细胞瘤耐药细胞株SK-N-SH.采用流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和高效液相色谱等方法分别检测反义PNA的转染效率,转染前后细胞P-gp、MDR-1基因mRNA的表达及细胞内阿霉素(ADM)浓度.结果荧光标记的反义PNA转染肿瘤细胞后,细胞平均荧光强度显著增强,呈浓度依赖性.两反义PNA均使SK-N-SH细胞P-gp表达明显降低,MDR-1 mRNA表达轻度降低,细胞内ADM聚集浓度明显增加.结论PNA-DNA杂交阳离子脂质体转染法可有效增加细胞对PNA的摄取,特异序列的反义PNA可在一定程度上阻断神经母细胞瘤MDR相关蛋白P-gp的表达.     

高频超声监测SD大鼠肾上腺区人神经母细胞瘤移植瘤模型

目的:探讨高频超声在SD大鼠肾上腺区人神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)移植瘤模型中的应用价值,分析超声测量结果与肿瘤实际生长情况的相关性.方法:建立SD大鼠荷瘤模型53只.肿瘤接种后分别于5d～6周,每4d随机选取5只SD大鼠行高频超声检查,观察肿瘤的形态、回声和边界,测量肿瘤大小,彩色多普勒超声观察肿...     

HPLC法测定芒果叶中没食子酸的含量

目的：采用HPLC法分析测定广西不同产地及不同品种芒果叶中没食子酸的含量,建立芒果叶中没食子酸含量的测定方法。方法：色谱柱采用Agilent Eclipse XDB—C18柱（4.6mm×150mm,5μm）,流动相：甲醇-0．1％磷酸（含0．1％三乙胺）（5：95）,流速：1．0mL／min,检测波长：270nm。结果：没食子酸在（0.00512～0．06144）μg/μL范围内进样量与峰面积成良好的线性关系（r=0．9997）,平均回收率为98．3％,RSD=1．7％（n=6）。不同产地及不同品种芒果叶中没食子酸的含量存在差异。结论：所建立的方法灵敏度高,准确,快速,专属性强,重现性好。     

丙戊酸长期给药对抑制PC3细胞系裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探讨丙戊酸(VPA)长期给药抑制人雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞裸鼠移植瘤生长的效应。方法 建立PC3细胞裸鼠移植瘤模型，实验组给予含0.4%丙戊酸钠饮用水，对照组给予纯的饮用水，给药4周，每隔2d测量肿瘤体积1次。取裸鼠移植瘤组织，免疫组化检测p21WAF/CIP和Ki67，Western blot检测p21WAF/CIP和乙酰化H3（Ac-H3）蛋白的表达，Tunnel法检测肿瘤细胞的凋亡。结果 对照组肿瘤体积大于实验组，肿瘤生长抑制率为77.27%。实验组p21WAF/CIP表达强于对照组(P＜0.01)，而Ki67表达弱于对照组。实验组Ac-H3表达增加(P＜0.01)。实验组平均每个视野中凋亡细胞数高于对照组（P＜0.01）。结论 VPA长期给药对PC3细胞移植瘤生长抑制作用明显，该作用是通过抑制细胞增殖、诱导凋亡实现的。     

人神经母细胞瘤免疫活性小鼠移植瘤模型的建立

目的:探讨建立C57BL/6j小鼠人神经母细胞瘤移植瘤模型可行性.方法:取含1×107个对数生长期SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞悬液0.2 ml,接种于C57BL/6j系小鼠右前肢腋窝皮下,观察小鼠成瘤率、相对肿瘤体积(Relative tumor volume,RTV)、相对肿瘤增长速率(K)、相对肿瘤倍增时间(Td)、存活时间及移植瘤病理学情况.结果:C57BL/6j小鼠在3、7d、3周、4、5、6、7周各年龄段持续成瘤率分别为:100%、100%、90%、70%、60%、0%、0%.成瘤后3～5周内,3周与4周及5周龄接种的肿瘤RTV、K、Td及C57BL/6j存活时间均有差异(P＜0.05).结论:在C57BL/6j小鼠体内成功建立人类异种移植瘤模型.不同年龄段接种的成瘤率有差异,可以根据后期研究目的选择接种建模时间.     

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的作用

探讨去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的作用,方法采用光镜和电镜观察移植瘤细胞的形态变化,用流式细胞仪进行细胞周期分析;用免疫组化检测肿瘤细胞中ＧＦＡＰ、ＰＣＮＡ的蛋白表达情况。结果（１）ＮＤＧＡ可明显降低裸鼠移植瘤的成瘤率;（２）ＮＤＧＡ能抑制移植瘤细胞的生长和诱导其分化,使细胞增殖受阻于Ｇ１→Ｓ期。结论：ＮＤＧＡ在体内与体外有相同的抗胶质瘤作用。