褪黑素联合卡铂对卵巢癌SKOV3细胞体外增殖及凋亡的影响

目的: 探讨褪黑素(MLT)、卡铂(CBP)单独及联合应用在体外对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,阐明MLT和CBP的药物协同作用。 方法: 将体外培养的人卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组、MLT组(1和2 mmol·L^-1)、CBP组(12.5、25.0和50.0mg·L^-1)、联合用药组(不同浓度MLT及CBP联合用药)。应用MTT比色法、流式细胞术(FCM)测定各组SKOV3细胞的增殖抑制率及凋亡情况,并应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定各组SKOV3细胞中Bcl-2和Bax基因表达水平。 结果: MTT法检测,联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率高于MLT组,且高于 50.0mg·L^-1CBP组,差异有统计学意义(P<0.05), 2 mmol·L^-1MLT联合50mg·L^-1CBP 组效果最佳,增殖抑制率为(70.7±4.2)%;与双倍浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率明显增高(P<0.05)。流式细胞术检测,联合用药组SKOV3细胞凋亡率高于MLT组,且高于50.0mg·L^-1CBP组,差异有统计学意义(P<0.05), 2mmol·L^-1MLT 联合50mg·L^-1CBP组SKOV3细胞凋亡率为(58.9±2.0)%;与双倍浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。与同浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞中Bax基因表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2基因表达水平明显降低(P<0.05)。 结论: MLT可增强CBP在体外对卵巢癌SKOV-3细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用,通过增强Bax基因表达及下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。     

Avastin联合顺铂对VEGF高表达的荷卵巢癌裸鼠腹水的抑制作用

目的 建立血管内皮生长因子(VEGF)高表达的人卵巢癌细胞株OVCAR3裸鼠腹水移植瘤模型,探讨AvastinTM联合顺铂对荷卵巢癌裸鼠腹水生长的抑制作用,并探讨其作用机制.方法 利用VEGF高表达的卵巢癌细胞株OVCAR3建立裸鼠腹水瘤模型.用Avastin、顺铂、Avastin联合顺铂及PBS分别处理各组裸鼠,观察其对腹水形成、腹水中VEGF含量、腹膜渗透性、脉管密度和肿瘤细胞及红细胞的作用,并比较与化疗药物顺铂联合应用的疗效.结果 使用Avastin治疗组裸鼠的腹水量、腹膜渗透性受到明显抑制,腹水中的红细胞、癌细胞、VEGF及肿瘤组织内微血管密度明显减少,除腹膜渗透性外,Avastin与顺铂联合治疗进一步加强上述治疗效果.结论 Avastin联合细胞毒药物的生物化疗治疗模式有望成为治疗癌性腹水的一种新方法.     

褪黑素联合顺铂对肺腺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨褪黑素联合顺铂对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法:分别将不同浓度褪黑素(100、300、500、7001、000μmol/L)及顺铂(2.55、、10μg/mL)联合与肺腺癌A549细胞共培养48 h,MTT法检测细胞抑制率。结果:不同浓度顺铂(2.5、5、10μg/mL)与500μmol/L的褪黑素联合使用对肺腺癌细胞生长抑制率([71.25±5.01)%(、86.37±7.10)%(、97.63±8.65)%)]明显高于单独使用顺铂(P<0.05)。结论:褪黑素和顺铂均可抑制肺腺癌A549细胞增殖,二者联合可协同抑制肿瘤细胞增殖。     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞的抑制作用及其机制

目的:观察褪黑素(Mel)联合顺铂(DDP)对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用,并探讨相关的分子机制。方法:通过MTT实验检测Mel与DDP不同浓度分别单用或两药联合处理后食管癌Eca109细胞增殖情况;流式细胞仪检测用药后细胞凋亡情况;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:Mel与DDP联用对食管癌Eca109细胞增殖的抑制率均高于单用Mel与DDP时对食管癌Eca109细胞的抑制率(P<0.05);Mel单独诱导食管癌Eca109细胞凋亡作用不强,但可增强DDP诱导的食管癌细胞凋亡(P<0.01);Mel与DDP联用后食管癌Eca109细胞Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强。结论:Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并具有增强DDP诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的作用,其机制可能与上调Bax表达和下调Bcl-2的表达有关。     

顺铂联合γ射线对裸鼠卵巢癌腹腔播散的抑制作用

目的；观察顺铂联合γ射线对卵巢癌腹腔播散的抑制作用。方法；采用裸鼠卵巢癌腹腔播散模型，用顺铂和γ射线照射进行治疗。结果：低剂量顺铂单独和联合γ射线可部分抑制，而高剂量顺铂联合γ射线可完全抑制卵巢癌的腹腔播散。结论：顺铂联合γ射线有协同抗卵巢癌的作用。     

茶多酚对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖及顺铂敏感性的影响

目的 探讨茶多酚(TP)对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖及顺铂(DDP)敏感性的影响.方法 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测单独使用不同浓度TP、DDP及低毒剂量TP联合DDP对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖抑制作用,分别计算抑制率、半数抑制浓度(IC50)及增敏倍数.结果 TP、DDP单药均以剂量依赖的方式抑制卵巢癌细胞株SKOV3的增殖.低毒剂量的TP联合DDP作用于细胞后,增殖抑制率明显增加,IC50由单用DDP时的6.555 mg/L下降到3.021 mg/L,敏感性提高到单用DDP的2.17倍.结论 TP对人卵巢癌细胞株SKOV3有生长抑制作用,低毒剂量TP与DDP联合应用可提高SKOV3细胞对DDP的敏感性,减少DDP的用量.     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞株的增殖抑制作用研究

目的：观察褪黑素（Mel）联合顺铂（DDP）对人食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响.方法：以DDP 2.5 mg/L、不同浓度Mel及两药联合作用于食管癌Eca109细胞.通过MTT实验检测用药后对食管癌Eca109细胞增殖的影响,并计算抑制率;通过集落克隆形成实验观察用药后对细胞集落克隆形成的影响;通过流式细胞仪检测用药后细胞凋亡率的变化.结果：DDP 2.5 mg/L与不同浓度Mel联合用药组对食管癌Eca109细胞生长抑制率均明显高于单独使用DDP或Mel组（P＜0.01）;10-5 mol/L Mel诱导人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为7.8%,10-5 mol/L Mel与2.5 mg/L DDP联合刺激人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为32.0%,高于DDP本身诱导的24 h凋亡率9.7%（P＜0.01）.结论：Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并增强其诱导凋亡作用,为临床食管癌的治疗提供了一定的实验研究基础.     

顺铂诱导人卵巢癌细胞凋亡的形态学观察

顺钱在孵巢肿瘤化疗中疗效肯定,为进一步探讨其作用机制,本实验采用ＡＯ１０／１７细胞为标本,通过光镜、电镜观察顺铂作用后细胞的形态改变,流式细胞仪（ＦＣＭ）分析其ＤＮＡ含量及二苯胺法测定其ＤＮＡ降解。结果发现２０ｕｍｏｌ／Ｌ顺铂作用后２４～３６ｈ,发生细胞凋亡,其细胞形态学改变包括体积缩小;核染色质浓缩,并沿核膜周围聚集,最后形成有膜包绕的凋亡小体,并被邻近细胞吞噬;还有一些细胞胞浆中出现空泡。２０ｕｍｏｌ／Ｌ顺铂作用后１２ｈ,ＦＣＭ显示Ｇ１峰前出现凋亡峰,其ＤＮＡ含量为Ｇ１期细胞的３０％～７０％…     

抑制ClC-3表达对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡的促进作用

目的：探讨抑制氯离子通道-3(ClC-3)基因表达对顺铂(DDP)诱导的人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡的促进作用,为卵巢癌的治疗提供实验依据。方法：转染pSH1-siRNA-ClC-3 重组质粒至人卵巢癌SKOV3/DDP细胞,Western blotting方法检测转染重组质粒对ClC-3蛋白表达的影响;MTT法检测细胞增殖率;Western blotting方法检测凋亡相关蛋白细胞色素C（Cyt-c）及Caspase-3活化片段蛋白表达。结果：与SKOV3细胞比较,SKOV3/ DDP细胞中ClC-3蛋白表达水平增加( P<0.05);转染pSH1-siRNA-ClC-3 重组质粒后,SKOV3/DDP细胞ClC蛋白表达水平明显降低;ClC-3-siRNA联合DDP作用后,SKOV3/DDP细胞增殖率下降( P<0.05),Cyt-c和Caspase-3活化片段蛋白表达水平增加( P<0.05) 。结论：pSH1-siRNA-ClC-3可有效抑制SKOV3/DDP细胞ClC-3蛋白的表达,并促进DDP诱导SKOV3/DDP细胞凋亡。     

20例晚期卵巢癌顺铂联合化疗

卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤,尤其是晚期病人死亡率很高。因此,如何提高这些患者的疗效已成为当前妇科肿瘤治疗中的重要课题。近年不少报道用顺铂联合化疗治疗卵巢癌取得一定疗效。我们对20例晚期卵巢癌采用顺铂联合化疗,初步总结如下。     

雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞株凋亡和周期的影响

目的:探讨雷帕霉素单独及联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞凋亡、周期的影响及可能的分子机制。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞,流式细胞术检测雷帕霉素单独及联合顺铂对细胞凋亡及周期分布的影响;实时RT-PCR检测对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA表达的影响。结果:雷帕霉素单独作用可抑制细胞生长增殖,引起G1期阻滞,S期及G2-M期细胞明显减少,使得大部分细胞处于有丝分裂间期,进而促进细胞凋亡,呈现明显的时间依从性,72 h效果最明显;联合顺铂凋亡率明显高于单独用药组(P0.01)。实时RT-PCR结果显示,雷帕霉素作用24 h可引起mTOR mRNA表达下调,72 h抑制表达低于24 h(P0.05)。结论:雷帕霉素作用于PI3K/AKT/mTOR信号传导通路的mTOR位点,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,与传统化疗药顺铂有协同效应,可增强肿瘤细胞对于顺铂的化疗敏感性。     

外源性表达VEGF165b对顺铂诱导人膀胱癌T24细胞损伤的影响及其机制

目的:观察人膀胱癌T24细胞中外源性表达血管内皮生长因子(VEGF)变构体VEGF165b对顺铂(DDP)诱导人膀胱癌T24细胞损伤的作用,并探讨相关机制。方法:构建VEGF165b表达载体pcDNA-VEGF165b;T24细胞分为对照组、VEGF165b组(转染VEGF165b表达载体)、DDP组和VEGF165b+DDP组(DDP联合转染VEGF165b表达载体)。MTT法检测各组细胞存活率;Western blotting法检测各组T24细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和caspase3表达;TUNEL法检测细胞凋亡数。结果:MTT法检测,与对照组比较, VEGF165b组24和48 h时T24细胞存活率无明显变化(P>0.05);与DDP组比较,VEGF165b+DDP组24和48 h时细胞存活率均明显降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,DDP组细胞中cleaved-caspase3/pro-caspase3比值升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05);与DDP组比较,VEGF165b+DDP组细胞中cleaved-caspase3/pro-caspase3比值升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05)。TUNEL法检测,与对照组(5.1±2.7)和VEGF165b组(7.4±3.2)比较,DDP组的凋亡细胞数(26.3±8.2)的凋亡细胞数增加(P<0.05)。与DDP组比较,VEGF165b+DDP组的凋亡细胞数(41.3±6.9)增加(P<0.05)。结论:外源性表达VEGF165b能通过增加细胞凋亡促进DDP对T24细胞的损伤,其机制与VEGF信号通路受抑制有关联。     

PD98059联合顺铂对卵巢癌细胞增殖的影响

目的   观察MEK1/2特异性抑制剂PD98059联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。 方法   按不同处理因素对卵巢癌SKOV3细胞分组：空白对照组、单纯PD98059组、单纯顺铂组、联合用药组。CCK-8法检测各组细胞的增殖抑制率。实时定量PCR检测各组细胞含有WW结构域的氧化还原酶(WWOX)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)在基因水平的表达。Western-blot检测各组细胞磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白的表达。光镜下观察各组细胞的生长状态及形态学改变。流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。结果   联合用药组细胞增殖抑制率明显高于其他各组（P＜0.05）;单纯顺铂组及联合用药组WWOX mRNA表达量较空白对照组明显增加（P＜0.05）,单纯PD98059组WWOX表达量无明显改变（P＞0.05）;ERK mRNA在各组间的表达无明显变化（P＞0.05）;与空白对照组相比,p-ERK1/2表达量在单纯PD98059组及联合用药组中明显降低(P＜0.05),在单纯顺铂组的表达无明显变化。光镜下可观察到空白对照组及单纯PD98059组细胞生长状态好,细胞密集,无明显形态学改变;单纯顺铂组及联合用药组贴壁细胞少,细胞稀疏,联合用药组部分细胞出现胞浆溶解样改变。结论   PD98059联合顺铂可能通过调控WWOX基因表达及ERK通路,对卵巢癌细胞增殖产生较强的抑制作用。     

hTERT基因反义cDNA转染对卵巢癌细胞系SKOV3生物学行为的影响

目的: 研究反义hTERT基因对卵巢癌细胞系SKOV3生物学行为的影响.方法: 构建反义hTERT基因的真核表达载体,采用LIPOFCTAMINETM Reagent转染卵巢癌细胞系SKOV3,通过RT-PCR、Trap-ELASA、生长曲线、裸鼠体内致瘤能力等方法比较转染前后细胞hTERT基因表达、端粒酶活性、细胞生长、致瘤性等方面的变化.结果:转化细胞系细胞hTERT基因的表达受到抑制,端粒酶活性下调,肿瘤细胞的增殖与生长速度明显降低,细胞的克隆形成能力及裸鼠体内的成瘤能力下降,肿瘤的恶性表型部分逆转.结论:应用反义技术下调hTERT基因表达可有效降低端粒酶活性并部分逆转卵巢癌细胞的恶性表型,hTERT基因可望成为卵巢癌基因治疗的新靶点.     

米非司酮对卵巢癌细胞系SKOV3增殖和CEACAM6表达的影响

目的  观察米非司酮对卵巢癌细胞系SKOV3增殖和癌胚抗原相关黏附分子6（CEACAM6）表达的影响。方法  不同浓度米非司酮（空白对照、1×10-7、1×10-6、1×10-5、5×10-5mol/L）干预卵巢癌细胞系SKOV3 24、48、72h;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测米非司酮对SKOV3的抑制作用;逆转录聚合酶链反应（RT PCR）和蛋白印记（Western blot）检测不同浓度米非司酮干预下CEACAM6 mRNA和蛋白表达水平的差异,并进行半定量分析。结果  与空白对照组比较,1×10-7和1×10-6mol/L米非司酮对SKOV3的生长没有明显的抑制作用（P＞0.05）;5×10-5mol/L米非司酮显著抑制SKOV3的生长（P＜0.01）,并降调SKOV3细胞中CEACAM6 mRNA和蛋白的表达水平（P＜0.05）。结论  米非司酮可明显抑制SKOV3的体外增殖,其作用机制可能与抑制CEACAM6的表达有关。     

丙戊酸对体外培养的卵巢癌细胞上皮性钙粘附素表达的影响

目的：探讨丙戊酸(valproic acid,VPA)对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞上皮性钙粘附素（E cadherin）表达的影响。方法：将VPA以不同浓度(0、1、2、3、4、5?mmol/L)不同作用时间(24、48、72?h)作用于SKOV3细胞,相差显微镜下观察细胞形态的变化；用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖；用流式细胞仪测定细胞周期动力学变化；用免疫细胞化学方法检测E cadherin蛋白表达情况；用流式细胞术测定SKOV3细胞E cadherin蛋白含量。结果：①3?mmol/L作用48?h后SKOV3细胞形态出现明显变化；②不同浓度(0、1、2、3、4、5?mmol/L)VPA作用不同时间(24、48、72?h)后, SKOV3细胞增殖活性比较,差异有统计学意义(P<0.05) ；不同浓度(0、1、2、3、4、5?mmol/L)VPA作用不同时间(48、72?h)后,首先引起细胞周期分布的改变,随剂量的加大和用药时间的延长,凋亡率逐渐升高；③3?mmol/L VPA作用48?h后,与对照相比，SKOV3细胞浆中的棕色颗粒明显增多；④VPA作用48?h后, SKOV3细胞E cadherin蛋白含量明显增多(P<0.05)。结论：VPA可以抑制SKOV3的生长，并且在蛋白水平上调卵巢癌细胞分泌E cadherin。     

金雀异黄素联合顺铂对SK-OV-3人卵巢腺癌细胞生物学行为影响的研究

目的 观察金雀异黄素联合顺铂对SK-OV-3人卵巢腺癌细胞生物学行为的影响,探讨其可能的作用机制.方法 培养SK-OV-3人卵巢腺癌细胞,分别给予金雀异黄素(20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L、200μmol/L)、顺铂(1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16...     

舒林酸对卵巢癌SKOV3细胞作用的初步研究

目的:研究舒林酸对卵巢癌SKOV3细胞的生长和细胞运动的影响以及对基质金属蛋白酶2(MMP2)、环氧合酶-2(COX-2)表达的影响:方法:将不同浓度的舒林酸加入培养液中观察其对SKOV3细胞形态的影响,采用MTT法观察舒林酸对SKOV3细胞生长的影响,通过划痕试验观察舒林酸对SKOV3细胞运动的影响,利用免疫细胞化学方法研究舒林酸对SKOV3细胞MMP2、COX-2表达的影响。结果:舒林酸与SKOV3细胞体外培养可使肿瘤细胞伪足回缩、细胞变圆,MTT试验提示舒林酸可抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长,划痕试验提示舒林酸可抑制SKOV3细胞的运动,免疫细胞化学实验提示舒林酸显著抑制SKOV3细胞MMP2、COX-2的表达,有时间和剂量依赖效应。结论:舒林酸可能通过抑制MMP2、COX-2的表达而抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长和运动。