截断逆挽方对慢加急性肝衰竭大鼠线粒体凋亡途径的影响

目的动态观察截断逆挽方对慢加急性肝衰竭(ACLF)大鼠线粒体凋亡途径的影响,探讨其作用机制。方法 SPF级Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和截断逆挽方组,猪血清腹腔注射13周联合D-氨基半乳糖、脂多糖急性攻击建立ACLF模型。截断逆挽方组在急性攻击前予截断逆挽方灌胃3 d。各组大鼠于急性攻击后4、8、12 h平行取材。电镜观察肝细胞超微结构,免疫组化检测肝组织细胞色素C(Cyt C)表达,Western blot检测肝组织Bid蛋白表达。结果与正常组比较,模型组4、8 h Cyt C和Bid表达量增加、12 h表达量减少(P0.05);与模型组比较,截断逆挽方组4、8 h Cyt C和Bid表达量减少、12 h表达量增加(P0.05)。电镜观察显示,模型组大鼠肝细胞超微结构严重破坏,且程度逐渐加深,而各时间点截断逆挽方组大鼠肝细胞超微结构损伤程度较模型组均有所减轻。结论截断逆挽方可有效降低ACLF大鼠肝细胞的损伤程度,其作用机制可能与阻断肝细胞线粒体凋亡途径有关。     

参芪抑瘤方含药血清对BGC-823胃癌细胞增殖和周期的影响

目的:探讨参芪抑瘤方含药血清对胃癌细胞BGC-823增殖和周期的影响,并探讨其作用机制。方法:以参芪抑瘤方3%,5%,10%含药血清干预BGC-823细胞后,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测其对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期变化;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclindependent kinase inhibitor,CDKN)1B,CDKN1C mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p27,p57蛋白表达情况。结果:不同浓度含药血清作用于BGC-823细胞24,48,72 h后,细胞存活率显著降低(P0.01),且与时间和浓度呈依赖关系;不同浓度含药血清作用于BGC-823细胞24 h后,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少;Real-time PCR结果表明,与溶剂组和空白血清组比较,参芪抑瘤方各组CDKN1B,CDKN1C mRNA表达上调(P0.05,P0.01);Western blot结果显示,与溶剂组比较,参芪抑瘤方各组p27,p57蛋白表达上调(P0.05,P0.01)。结论:参芪抑瘤方含药血清可以抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,其机制可能通过调节CDKN1B,CDKN1C mRNA及p27,p57蛋白表达,进而干预细胞周期有关。     

截断逆挽方对慢加急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡指数及caspase8、caspase3表达的影响

目的研究截断逆挽方对慢加急性肝衰竭大鼠肝细胞caspase8、caspase3表达量以及凋亡指数(AI)的影响。方法SPF级Wistar大鼠150只,人血白蛋白建立大鼠肝硬化模型后,急性攻击以D-GalN400 mg/Kg和LPS100μg/Kg一次性腹腔联合注射。中药组在急性攻击前给予截断逆挽方连续灌胃3天。急性攻击后4、8、12 h分别麻醉处死大鼠,取肝组织。原位细胞凋亡技术检测肝细胞AI,WB法检测肝细胞中caspase8和caspase3的含量变化。结果与正常组比较,模型组大鼠4、8、12 hAI均显著增强,差异有统计学意义(P0.01),caspase8和caspase3表达量均显著增加;中药组较模型组各相应时间点AI明显降低,差异有统计学意义(P0.01或P0.05),caspase8和caspase3表达量也有降低。结论截断逆挽方可降低肝细胞caspase8、caspase3表达量和AI,减轻肝细胞的凋亡和坏死。     

西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞生长的影响

目的研究西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞系(MCF-7)生长及其细胞周期分布的影响。方法应用MTT比色法检测肿瘤细胞活性,流式细胞仪分析细胞周期相对分布。结果西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞系(MCF-7)有较强的抑制作用,其抑制率与含药血清浓度呈直线相关。流式细胞仪周期分析结果显示含药血清处理24 h,S期细胞比例增加,G2/M期细胞减少;处理48 h后,G0/1期细胞增多,S期细胞减少。结论西黄丸含药血清可抑制人乳癌细胞系(MCF-7)细胞生长,并可干扰其细胞周期。     

截断逆挽方降低慢加急性肝衰竭大鼠死亡率的机制探讨

目的：探讨截断逆挽方降低慢加急性肝衰竭大鼠24 h死亡率,增加生存时间的作用机制。方法：SPF级Wistar大鼠150只,分为正常组、模型组、中药组。人血清白蛋白建立大鼠肝硬化模型后,中药组给予截断逆挽方灌胃3 d。再给予中药组和模型组D-GalN 400 mg/Kg加LPS 100μg/Kg一次性腹腔联合注射。注药后模型组和中药组各分为4组：4、8、12 h后各麻醉后处死1组,取肝组织进行HE染色和原位细胞凋亡检测（TUNEL）技术,并计算肝细胞的凋亡指数（AI）;余观察24 h死亡率并记录生存时间。结果：与正常组比较,模型组各时间点HE染色可见肝内假小叶广泛形成,再生结节内肝细胞坏死、炎性浸润及出血明显,12 h最为显著,表现为大块或亚大块坏死;TUNEL检测见大量的凋亡小体、凋亡细胞,AI均显著增高（P〈0.01）;与模型组比较,中药组各对应时间点HE染色可见坏死和出血明显减轻,炎性细胞浸润减少;TUNEL检测中药组4 h、8 h凋亡细胞减少,12h坏死面积缩小,AI均降低（P〈0.05）。中药组较模型组24 h死亡率降低,生存时间延长。结论：截断逆挽方降低ACLF大鼠24 h死亡率,延长其存活时间的机制可能与阻断肝凋亡细胞过程,或延缓肝细胞凋亡向死亡转化有关。     

截断逆挽方对慢加急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡指数及caspase8、 caspase3表达的影响

目的研究截断逆挽方对慢加急性肝衰竭大鼠肝细胞caspase8、caspase3表达量以及凋亡指数(AI)的影响。方法SPF级Wistar大鼠150只,人血白蛋白建立大鼠肝硬化模型后,急性攻击以D-GalN400 mg/Kg和LPS100μg/Kg一次性腹腔联合注射。中药组在急性攻击前给予截断逆挽方连续灌胃3天。急性攻击后4、8、12 h分别麻醉处死大鼠,取肝组织。原位细胞凋亡技术检测肝细胞AI,WB法检测肝细胞中caspase8和caspase3的含量变化。结果与正常组比较,模型组大鼠4、8、12 hAI均显著增强,差异有统计学意义(P<0.01),caspase8和caspase3表达量均显著增加;中药组较模型组各相应时间点AI明显降低,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),caspase8和caspase3表达量也有降低。结论截断逆挽方可降低肝细胞caspase8、caspase3表达量和AI,减轻肝细胞的凋亡和坏死。     

截断逆挽方降低慢加急性肝衰竭大鼠死亡率的机制探讨

目的:探讨截断逆挽方降低慢加急性肝衰竭大鼠24 h死亡率,增加生存时间的作用机制.方法:SPF级Wistar大鼠150只,分为正常组、模型组、中药组.人血清白蛋白建立大鼠肝硬化模型后,中药组给予截断逆挽方灌胃3 d.再给予中药组和模型组D-GalN 400 mg/Kg加LPS 100 μg/Kg一次性腹腔联合注射.注药后模型组和中药组各分为4组:4、8、12 h后各麻醉后处死1组,取肝组织进行HE染色和原位细胞凋亡检测(TUNEL)技术,并计算肝细胞的凋亡指数(AI);余观察24 h死亡率并记录生存时间.结果:与正常组比较,模型组各时间点HE染色可见肝内假小叶广泛形成,再生结节内肝细胞坏死、炎性浸润及出血明显,12 h最为显著,表现为大块或亚大块坏死;TUNEL检测见大量的凋亡小体、凋亡细胞,AI均显著增高(P<0.01);与模型组比较,中药组各对应时间点HE染色可见坏死和出血明显减轻,炎性细胞浸润减少;TUNEL检测中药组4 h、8 h凋亡细胞减少,12h坏死面积缩小,AI均降低(P<0.05).中药组较模型组24 h死亡率降低,生存时间延长.结论:截断逆挽方降低ACLF大鼠24 h死亡率,延长其存活时间的机制可能与阻断肝凋亡细胞过程,或延缓肝细胞凋亡向死亡转化有关.     

补肾益精方含药血清对人精子离体质量的影响

目的 研究补肾益精方含药血清体外对人精子运动能力和受精 能力的影响。方法通过人精子与补肾益精方含药血清共培养，观察补肾益精方对人精子运动能力（精子运动CASA分析）、精子爬高试验的影响。结果 含药血清加入共培养可显著提高人精子运动速度[精子运动路径速度（VAP）、精子轨迹速度（VCL）、精子前向运动速度（VSL）]（P〈0．01）、精子头部侧置振幅（ALH）和鞭毛摆动频率（BCF）及前向运动精子密度（P〈0．05），提高精子爬高试验（P〈0．01）。结论 补肾益精方具有提高人精子离体质量的作用。     

基于TLR4/NF-κB/iNOS通路的截断逆挽方药物血清对L02细胞氧化应激损伤的影响

目的 观察截断逆挽方药物血清对D-氨基半乳糖（D-GaLN）诱导的L02细胞氧化应激损伤的影响,从TLR4/NF-κB/iNOS通路探讨其作用机制。方法 体外培养L02细胞,D-GaLN诱导L02细胞损伤模型,将细胞分为正常组、模型组、截断逆挽方药物血清组、N-乙酰半胱氨酸组。CCK-8法检测细胞存活率,丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）检测试剂盒检测细胞MDA和GSH含量,流式细胞术检测细胞活性氧（ROS）含量,Western blot检测Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB p65(NF-κB p65)、一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组L02细胞存活率明显降低（P<0.01）,ROS、MDA含量明显增加,GSH含量明显减少,TLR4、NF-κB p65、iNOS蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,截断逆挽方药物血清组L02细胞存活率明显升高（P<0.01）,ROS、MDA含量明显减少,GSH含量明显增加,TLR4、NF-κBp65、iNOS蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义（P<0.01）...     

健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响

目的:探讨健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响。方法:①应用MTT法检测健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo的增殖抑制作用;②运用TUNEL法和AnnexinV/PI法检测LoVo细胞的凋亡率。结果:①健脾化瘀方含药血清高浓度(20%)可抑制LoVo细胞的增殖(P<0.01);②健脾化瘀方含药血清作用细胞48h后可以诱导细胞凋亡。结论:健脾化瘀方含药血清能抑制结肠癌细胞LoVo的增殖能力,并诱导细胞凋亡。     

截断逆挽方对慢加急性肝衰竭大鼠cyclin D-E2F1信号通路及转录因子活化的机制研究

目的 探寻"截断逆挽方"对cyclin D-E2F1信号通路上相关转录因子的作用及该通路对慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)模型大鼠的作用机制.方法 将105只Wistar大鼠随机分为正常组5只(生理盐水注射)、造模组100只予人血清白蛋白诱导肝纤维化联合D-氨基半...     

Efficacy of decoction from Jieduan Niwan formula on rat model of acute-on-chronic liver failure induced by porcine serum

OBJECTIVE: To dynamically observe the efficacy of Jieduan Niwan formula(JDNW) on a rat model of acute-on-chronic liver failure(ACLF).METHODS: Seventy Wistar rats were divided into control group(6 rats), model group(22 rats), JDNW group(21 rats), and SP600125 group(21 rats).13 weeks' porcine serum injection followed with D-galactosamine and lipopolysaccharide joint acute attack was used to establish ACLF model.Rats in JDNW group were orally given JDNW formula for 3 days before acute attack; rats in SP600125 group were injected with SP600125 30 min ahead of acute attack. Rats were sacrificed respectively at4, 8 and 12 h after model established. Alanine aminotransferase(ALT), aspartate aminotransferase(AST), total bilirubin(TBIL), Creatinine(CR), blood urea nitrogen(BUN), prothrombin activity(PTA)were examined by biochemical process, Tumor necrosis factor-alpha(TNF-α), interleukin-1β(IL-1β),interleukin-6(IL-6), interleukin-10(IL-10), transformed growth factor-beta 1(TGF-β1), High mobility group box-1(HMGB-1), CD3, CD4, CD8 were analyzed by enzyme-linked immunosorbent assay, apoptotic index(AI) was detected by terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling staining, expression of Bad, phosphorylated Jun N-terminal kinases(p-JNK) and Cytochrome C(Cyt C) were detected by immunohistochemical analysis, Bax and Bid were detected by Western blot analysis.RESULTS: In model group, the levels of ALT, AST,TBIL, CR, BUN, IL-1β, IL-6, IL-10, TGF-β1 and HMGB-1 remarkably increased and PTA decreased compared with control group(P 0.05), as time goes on, ALT, AST, TBIL, CR, BUN, continued to grow,while IL-1β, IL-6, IL-10, HMGB-1, TGF-β1 and PTA gradually decreased; massive necrosis could be seen; the levels of TNF-α, CD3, CD4, CD8, AI, p-JNK,Bax, Bad, Bid and Cyt C increased at 4 h and peaked at 8 h, but decreased at 12 h(P 0.05). JDNW group, by contrast, showed less pathological injury,increased PTA level, and reduced ALT, AST, TBIL,TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10, TGF-β1, HMGB-1, CD3, CD4 and CD8 levels(P 0.05), moreover, the AI and expression of p-JNK, Bax, Bad, Bid and Cyt C were lower than model group at 4 and 8 h but were higher at 12 h(P 0.05). Similar results were observed in SP600125 group.CONCLUSION: An ACLF rat model with low mortality can be established by porcine serum joint with D-galactosamine + lipopolysaccharide induction;JDNW decoction can effectively suppress the inflammatory reaction, improve the immune system,and protect the liver of ACLF rats, the mechanism might involve the inhibition of the JNK-induced mitochondrial apoptotic pathway.     

油茶皂苷对LO2和HK-2细胞的毒性作用研究

目的:观察油茶皂苷(SQS)对人正常肝细胞(LO2)和肾小管上皮细胞(HK-2)的细胞毒性作用,并初步探讨其毒性作用机制。方法:体外培养LO2和HK-2细胞,采用MTT法评价SQS对LO2和HK-2细胞的增殖抑制作用,观察不同浓度药物对乳酸脱氢酶(LDH)释放率的影响,并检测细胞裂解上清液超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。结果:与阴性对照组比较,各浓度的SQS均可明显抑制LO2和HK-2细胞增殖(P<0.01),且呈浓度依赖性。在50.0~200.0 mg/L范围内,SQS能明显提高LO2和HK-2细胞培养上清液中LDH活力(P<0.05或P<0.01),显著降低SOD的活力和增加MDA的含量(P<0.01)。结论:SQS对LO2和HK-2细胞有一定的细胞毒性作用,其作用机制可能是通过增加对细胞膜通透性的影响及氧化损伤而实现。     

醋制降低甘遂对人正常肝细胞LO2毒性研究

目的:比较甘遂醋制前后对人正常肝细胞LO2的毒性差异,初步探讨甘遂醋制减毒机制。方法:以人正常肝细胞LO2细胞为研究对象,采用MTT法检测甘遂醋制前后对LO2细胞活性的影响,采用倒置显微镜观察细胞形态;并测定细胞培养上清液和裂解上清液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、Na+-K+-ATP酶,Ca2+-Mg2+-ATP酶等酶的活力和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量。结果:与阴性对照组比较,生甘遂可明显降低LO2细胞的活性(P<0.01)与形态,并显著提高LO2细胞培养上清液中ALT,AST,LDH活力(P<0.01)、显著降低SOD活力和GSH含量(P<0.01),显著增加MDA含量(P<0.01),显著降低LO2细胞裂解上清液中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力(P<0.01);醋制后,与生甘遂各剂量组比较,醋甘遂可显著降低生甘遂对LO2细胞的增殖抑制作用(P<0.01)和形态变差的趋势,可显著降低LO2细胞培养上清液中ALT,AST,LDH活力(P<0.01)、显著增加SOD活力和GSH含量(P<0.01)、显著降低MDA含量(P<0.01)、显著提高LO2细胞裂解上清液中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力(P<0.01),且呈一定的剂量相关性。结论:醋制可降低甘遂肝毒性,其可能机制为通过降低甘遂对肝细胞膜通透性的影响及减轻氧化损伤而实现。     

醋制降低京大戟对人正常肝细胞LO2的毒性及机制研究

目的:比较京大戟醋制前后对人正常肝细胞LO2的毒性作用,并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养LO2细胞,用不同浓度的京大戟生品和醋品对其进行处理,MTT法测定各样品对LO2细胞增殖的抑制作用;Hoeehst 33258荧光染色法观察细胞凋亡的形态学改变;AnnexinV/PI染色流式细胞术检测LO2细胞凋亡;PI染色流式细胞术分析其对细胞周期的影响;检测细胞培养液上清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活力,细胞裂解上清超氧化歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量.结果:与阴性对照组比较,京大戟生品各浓度组均可抑制LO2细胞增殖,诱导细胞凋亡,引起细胞S期阻滞(P＜0.05);能显著升高细胞培养液上清ALT,AST,LDH活力(P＜0.05),显著降低细胞裂解上清SOD活性和GSH含量、增加MDA含量.醋制后,与京大戟生品组比较,可显著降低细胞凋亡率、降低细胞周期阻滞,显著降低细胞培养液上清ALT,AST,LDH活力(P＜0.05),显著升高细胞裂解上清SOD活性和GSH含量、显著降低MDA含量.结论:醋制可降低京大戟对LO2细胞的毒性,其机制可能是减轻氧化损伤,从而降低细胞周期阻滞,减少细胞凋亡.     

不同方法炮制甘遂对LO2细胞周期与凋亡的影响

目的:探讨不同方法炮制所得甘遂各样品对人正常肝细胞LO2细胞周期与凋亡的影响.方法:以人正常肝细胞LO2为研究对象,采用MTT法检测甘遂醋制前后各炮制品(生品、清炒品、酷润品、醋制品)对LO2细胞活性的影响,采用倒置显微镜观察细胞形态,采用流式细胞术研究甘遂醋制前后各炮制品对LO2细胞周期和凋亡的影响.结果:与阴性对照组比较,甘遂生品可明显降低LO2细胞的活性(P＜0.01)和形态,显著升高S期细胞百分率(P＜0.05),显著降低G2/M期细胞百分率(P＜0.01),显著增加人正常肝细胞LO2细胞的早期凋亡率、晚期凋亡坏死率、总凋亡率(P＜0.01);与甘遂生品组比较,甘遂各炮制品均能降低对人正常肝细胞L02的增殖抑制作用(P＜0.01)和形态变差的趋势,其降低增殖抑制作用的顺序为醋制品＞醋润品＞清炒品,且呈一定的量-效关系(r醋制=0.999,r醋润=0.913,r清炒=0.914,r生品=0.984);且均能显著增加G2/M期细胞百分率(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.01),显著减少人正常肝细胞LO2的早期凋亡率、晚期凋亡坏死率、总凋亡率(P＜0.01),其增加G2/M期细胞百分率的顺序和降低凋亡率的顺序均为醋制品＞醋润品＞清炒品.结论:甘遂炮制后可通过影响LO2细胞周期与凋亡降低其毒性,且甘遂醋制工艺中的炒与醋润2种操作在醋制降低甘遂的肝毒性中能够起到协同作用,从而为揭示上述2种操作在甘遂醋制减毒工艺中的合理性和醋制工艺优化提供了一定的依据.     

野西瓜总皂苷诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡的初步研究

[目的]探讨野西瓜总皂苷(CsS)对人肝癌HepG-2细胞的杀伤作用和诱导凋亡的作用.[方法]四甲基偶氮唑蓝(MTr)法研究CSS对HepG一2细胞的杀伤作用;荧光显微镜观察细胞凋亡形态;碘化吡啶(PI)单染经流式细胞仪检测CSS对HepG-2细胞周期及凋亡的影响.[结果]CSS对HepC-2细胞的生长增殖具有抑制作用;经CSS作用后.HepG-2细胞在出现特征性凋亡形态特征,并出现了G1期阻滞,G2期比例下降,高剂量组出现了G2期消失的现象,50 mg/L剂量作用48 h,凋亡细胞比率高达66.652%.[结论]CSS对人肝癌HepG-2有明显的杀伤和诱导凋亡作用,并出现细胞周期的改变.     

扶正健肝方对白蛋白所致免疫性肝纤维化大鼠的影响

目的：观察扶正健肝方对白蛋白诱导的大鼠肝纤维化形成的影响。方法：采用人血白蛋白（HSA）诱导大鼠肝纤维化并随机分为扶正健肝方高、低剂量组(生药39.4,9.85 g·kg^-1),秋水仙碱组(0.000 1 g·kg^-1),模型组,对照组5组。观察血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST) 活性、总蛋白( TP),白蛋白(Alb)含量球蛋白和白蛋白比值。放射免疫分析法测定层连蛋白 (LN)、透明质酸(HA)和Ⅳ型胶原(IV-C)的含量,化学法测定肝脏羟脯氨酸（Hyp）的含量。光镜观察肝细胞结构和肝纤维化程度。结果：扶正健肝方能明显降低人血白蛋白诱导的肝纤维化大鼠ALT, AST 活性( P＜0.05, P＜0.01) ,提高Alb, TP含量及A/G比值 ( P＜0.05, P＜0.01) ,降低血清LN, HA IV-C含量(P＜0.05, P＜0.01)。病理学观察结果, 扶正健肝方能使大鼠胶原纤维沉积明显减轻,假小叶结构明显减少。并明显降低纤维化计分(P＜0.05, P＜0.01)。结论：扶正健肝方可抑制人血白蛋白诱导的大鼠肝纤维化形成和发展。     

中药血清对体外培养脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的观察中药对内皮细胞增殖的抑制作用.方法制备含中药的大鼠血清,将其加入到培养的内皮细胞中,应用流式细胞仪观察细胞增殖与凋亡的情况.结果含中药血清对内皮细胞周期有明显影响,可使内皮细胞周期中G2-M期细胞比例减少,S期细胞相对增加,说明中药可阻滞内皮细胞由S期进入G2-M期,从而降低其有丝分裂能力,并可诱导内皮细胞凋亡.结论中药对内皮细胞的增殖有抑制作用,为临床治疗视网膜血管增生性病变提供实验依据.