用多聚酶链式反应检测献血员巨细胞病毒感染

采用多聚酶链反应，检测了７６份血库献血员的巨细胞病毒感染情况，结果显示：３９份表现阳性，阳性率为５１．３５，同时还检测了其敏感性和特异性，结果可检测的巨细胞病毒ＤＮＡ最低限为５ｆｇ．μｌ＾－１，本方法简单，快速，特异性较好。灵敏度高，可适用于临床巨细胞病毒感染的检测。     

聚合酶链反应测定巨细胞病毒在移植术后的临床价值

目的用聚合酶链反应（PCR）诊断移植受着术后巨细胞病毒（CMV）的感染状况，建立一种新的快速诊断巨细胞病毒感染的方法并初步用于移植爱着。方法应用酶链免疫吸附法（ELISA）及PCR法分别测定230例移植术患者血清中巨细胞抗体（CMV-Ab）及巨细胞抗原（CMV-Ag）。结果ELISA法测得IgG和IgM阳性率分别为99.35％和15．42％，而PCR测得抗原阳性率为9．45％，两组在统计学上无显著性差异（P〉0．05）。结论移植术后存在不同程度的CMV感染，临床上应用PCR技术检测对早期诊断移植术后受者CMV感染具有重要意义。     

造血干细胞移植后患者血浆巨细胞病毒DNA拷贝数与巨细胞病毒病的关系

目的 评价实时定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)法监测造血干细胞移植后患者血浆巨细胞病毒(CMV)DNA水平的临床意义.方法 对2005年1月至2007年1月之间进行异基因造血干细胞移植的318例患者,自移植应采用RQ-PCR每周监测血浆CMV-DNA水平,6×102拷贝/ml视为CMV-PCR阳性.结果 共136例患者(42.8%)检测出1025例次血浆CMV-DNA阳性,首次阳性出现的中位时间为42 d,最高拷贝数及初始拷贝数中位值分别为1.5×104拷贝/ml和4.5×103拷贝/ml.318例患者中共发生CMV肺炎及肠炎23例,累积发病率为7.2%.14例患者在发生CMV病之前出现CMV血症,4例在出现临床表现后方检测出病毒阳性,另有5例CMV血症阴性的患者诊断为CMV疾病.发生CMV病的患者其CMV-DNA最高拷贝数高于未发生组患者(4.3×104拷贝/ml比1.3×104拷贝/ml,P=0.009),但初始拷贝数差异无统计学意义(3.7×103拷贝/ml比4.7×103拷贝/ml,P=0.63).CMV-DNA最高拷贝数随着发生CMV感染的次数增加而增高,在发生CMV感染1～4次的患者中,中位数值分别为82.6×102、261.3×102、440.8×102和10 659.0×102拷贝/ml(P<0.01),且CMV肺炎及CMV肠炎发病率也从2.7%(5/182)明显上升至50%(2/4)(P=0.001).结论 采用RQ-PCR法监测造血干细胞移植后患者血浆CMV-DNA水平对CMV病的发生有一定的预测意义,高CMV-DNA拷贝数及多次感染者预示着CMV病发生概率升高.     

聚合酶链反应检测新生儿巨细胞病毒

聚合酶链反应检测新生儿巨细胞病毒肇庆市第一医院（５２６０２０）蔡定邦，郭亮，李誉成，张传顺，陈享，陈伟红巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染后引起巨细胞包涵体病（ＣＩＤ），致全身多个器官损害并出现临床症状，使受损器官组织内出现巨细胞包涵体改变，多见于小婴儿。人巨...     

人巨细胞病毒的PCR检测

①目的 寻找早期快速检测人类巨细胞病毒（HCMV）感染的敏感方法。②方法 用HCMV即刻早期（IE）基因和晚期（LA）基因的7对待异性引物分别进行普通聚合酶链的反应（PCR），套式PCR（nPCR)和双重PCR，检测血清中的HCMV DNA，比较不同引物及不同PCR方法的灵敏度。③结果 同一基因的不同引物扩增HCMV DNA灵敏度差别无显著意义；LA基因的引物扩增灵敏度高于IE基因的引物；3种方法中以nPCR灵敏度最高，其次为双重PCR，普通PCR最低。④结论 用LA基因的特异性引物进行nPCR是早期快速检测HCMV感染的敏感方法。     

多重半巢式聚合酶链反应检测巨细胞病毒DNA多聚酶基因

目的：探讨多重半巢式聚合酶链反应（msnPCR)在研究巨细胞病毒（CMV）DNA多聚酶基因（UL-54）中的应用价值。方法：从8例心肺移植患者血标本中提取DNA,以CMV-UL54为模板,自行设计6条特异性引物,建立msnPCR扩增系统。扩增产物在DNA测序仪上自动测序。结果：msnPCR能扩增出427bp和1052bp两条目的片段,扩增产物测序表面存在导致氨基酸改变的碱基有义突变。结论：msnPCR扩增结合测序,可检测CMV-UL54的7个功能区目片段中的碱基突变,msnPCR比普通PCR更加省时和经济。     

套式聚合酶链反应及限制酶分析检测婴儿巨细胞病毒感染

人类巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)感染极为普遍 ,多数是隐性感染 ,但在免疫功能尚未健全的新生儿感染后可引起严重的巨细胞包涵体病 (ＣＩＤ) ,早期诊断对指导临床治疗及预后判断很重要。我们应用ｎＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ方法 ,对 2 15例临床疑有巨细胞病毒感染的婴儿进行检测 ,现将结果报告如下。1　对象与方法1 1　对象　选自 1998年 10月～ 1999年 12月我院门诊及住院病人中早产儿、小于胎龄儿、黄疸、肝脾肿大、先天性巨结肠、先心、脑发育不良的患儿 2 15例 ,男 12 6例 ,女 89例 ,年龄为出生 2小时～ 3个月 ,测血清ＨＣＭＶ -ＩｇＭ、ＩｇＧ抗体…     

巢式多聚酶链反应检测肺炎支原体

巢式多聚酶链反应检测肺炎支原体①郭纪全②唐英春张天托张扣兴（中山医科大学附属第三医院内科；广州，５１０６３０）主题词聚合酶链反应；肺炎支原体／分析中图号Ｒ３７５；Ｑ５２３肺炎支原体（ＭＰ）感染的病原学诊断过去主要依靠培养法，血清学试验或基因探针等方法...     

套式聚合酶链反应及限制酶分析对孕早期孕妇巨细胞病毒感染的研究

在人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）－ＡＤ１６９株直接早期基因的ＥｃｏＲＩＪ片段内，自行设计二对引物，建立套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）加限制酶分析检测ＨＣＭＶＤＮＡ，经实验证明有高度的特异性与敏感性，对其它疱疹类病毒及正常人基因组ＤＮＡ无交叉反应，一次性ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株基因组的最小检出量为１００ｆｇ，而套式ＰＣＲ可达１０ｆｇ，经ＰｓｔＩ酶切后，得到的片段与设计相符，对５８名孕早期孕妇外周静脉血     

造血干细胞移植患者巨细胞病毒感染危险因素和疗效分析

目的 :了解造血干细胞移植 (hematopoieticstemcelltransplantation ,HSCT)后巨细胞病毒 (Cy tomegalovirus,CMV)感染的发生率、相关危险因素及抗病毒药物疗效。 方法 :选择 1 998年 1月至 2 0 0 0年 1 2月在我所行HSCT的 2 0 2例患者进行回顾性分析。移植前预处理采用化疗联合全身照射或马利兰联合环磷酰胺方案。多数异基因HSCT移植后移植物抗宿主病 (graft versushostdisease,GVHD)预防采用环孢菌素A联合短程甲氨喋呤。CMV感染预防采用更昔洛韦 (ganciclovir,DHPG) 1 0mg·kg-1 ·d-1 ,分两次静点 ,移植前第 9天至移植前第 2天连续 8d。移植后应用多聚酶链反应 (PCR)定期进行病毒DNA监测 ,CMV阳性或发生CMV病的患者应用DH PG或 /和膦甲酸钠或联合这两种制剂进行治疗。结果 :HSCT后CMV活动性感染率为 35 .6 % (72 /2 0 2 ) ;间质性肺炎最常见占感染人数的 4 4 .4 % (32 /72 ) ,单纯病毒血症占 33.3% (2 4 /72 ) ,CMV肠炎占 1 3.9% (1 0 /72 )。感染的高峰时间为移植后第 6 0～ 90天。DHPG或 /和膦甲酸钠治疗的总有效率约为 6 0 %。经单因素分析证明异基因HSCT ,急、慢GVHD是HSCT后CMV感染的重要危险因素 ,而年龄、性别、疾病种类、移植前CMV血清学状态、预处理方案与CMV感染无显著相关性。结论 :CMV感     

PCR法直接筛选重组阳性克隆

目的　建立一个简便、可靠的重组阳性克隆的筛选方法。方法　应用扩增小鼠生精细胞凋亡相关基因时使用的引物 ,以基因重组扩增后得到的菌落为模板 ,直接进行PCR扩增。结果　在筛选的阳性菌落中可扩增到与小鼠凋亡相关基因片段大小一致的阳性条带 ;以阳性克隆提取质粒进一步进行PCR和酶切鉴定及序列分析 ,证明结果正确。结论　菌落PCR是一种简便、快速、可靠、有效的筛选重组阳性克隆的方法。     

用PCR检测乙型肝炎患者血清巨细胞病毒活动性感染

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１２５例乙型肝炎患者血清中巨细胞病毒脱氧核糖核酸（ＣＭＶ－ＤＮＡ）诊断ＣＭＶ活动性感染、同时与酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测血清中ＣＭＶ－ＩｇＭ的结果相比较。结果显示：ＣＶＭ－ＤＮＡ阳性率为３２．８０％，同于ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率１５．０２％，各型肝炎中，急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化血清ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率分别为１９．０５％，３５．２９％。血清ＣＭＶ－ＤＮＡ阴性的乙     

荧光定量聚合酶链反应与血清半乳甘露聚糖检测在侵袭性曲霉病诊断中的价值

目的 探讨联合荧光定量聚合酶链反应(PCR)与血清半乳甘露聚糖(GM)方法用于诊断血液恶性肿瘤/造血干细胞移植患者侵袭性曲霉病(IA)的价值.方法 对80例怀疑侵袭性真菌感染的血液恶性肿瘤/造血干细胞移植患者共计205份血清标本同时进行定量PCR和血清半乳甘露聚糖的检测,根据IA诊断标准,分析定量PCR方法与GM方法的符合率及两者联合用于IA诊断时的意义.结果 5例患者确诊IA,20例临床诊断IA,34例拟诊IA,21例除外IA.定量PCR方法与GM符合率为77.5%.当定量PCR和GM同时阴性时,诊断侵袭性曲霉感染阴性预测值可达90.9%;当二者同时阳性时,阳性预测值可达100%.结论 定量PCR方法与GM方法具有良好符合率,联合两种方法有助于提高IA诊断的准确性.     

荧光定量RT-PCR在轮状病毒检测中的应用

目的:建立轮状病毒的荧光定量RT-PCR检测方法,用于检测临床腹泻样本。方法:使用Taqman探针技术,建立轮状病毒VP6特异的荧光定量RT-PCR体系。与WHO推荐的轮状病毒检测方法ELISA平行检测,对该体系的检测范围、灵敏度、特异性等参数进行评价。并将该体系用于临床腹泻样本。结果:该荧光定量RT-PCR体系具有高度灵敏度和特异性,线性范围宽,最低可检出1TCID50/ml。对113份临床腹泻样本的平行检测结果显示,该荧光定量RT-PCR体系与ELISA的检出率差异无统计学意义(χ2=0.41,P>0.5),可同样用于临床样本检测。结论:成功建立了轮状病毒荧光定量RT-PCR体系,该体系灵敏、特异、重复性好,可用于临床检测。     

缬更昔洛韦治疗异基因造血干细胞移植受者巨细胞病毒血症的疗效和安全性

目的 分析缬更昔洛韦治疗造血干细胞移植(HSCT)后患者巨细胞病毒(CMV)血症的疗效和安全性.方法 选择2007年l至7月行HSCT的19例移植后CMV血症患者进行前瞻性研究.移植后应用定量多聚酶链反应(PCR)定期进行病毒DNA监测,CMV-DNA阳性,定量>6.0×102拷贝/ml的患者应用缬更昔洛韦900 mg 2次/d诱导治疗14 d,然后900 mg 1次/d维持治疗14 d.结果 HSCT后发生CMV血症的中位时间为移植后第40(20-83)天,诊断时CMV-DNA中位数3.346×103(9×102～4.2×103)拷贝/ml.缬更昔洛韦治疗的总有效率为94.7%,14 d转阴率84.2%.治疗前后CMV-DNA每日降低中位数0.084(0.045-0.25)10g 10拷贝·ml-1·d-1.常见不良反应为贫血、血小板下降和白细胞减少,且多为轻度;随访6个月无1例发展至CMV病.结论 缬更昔洛韦用于治疗HSCT后患者CMV血症安全有效.     

应用PCR方法扩增IS6110保守片段快速鉴定结核分支杆菌

目的：了解PCR方法快速鉴定结核分支杆菌的可靠性，探索快速诊断结核病的实验方法。方法：应用PCR方法扩增149株结核分支杆菌临床分离株的IS6110保守片段，并与结核分支杆菌H37Rv标准株进行比较。结果：149株临床分离株中，140株可以扩增出与结核分支杆菌H37Rv标准株相同的123bp DNA片段(敏感性达93．9％)，而阴性对照均不能扩增出该片段。结论：应用PCR方法扩增IS6110保守片段来鉴定结核分支杆菌，结果准确可靠，且具有方便和快速等优点，有较大的临床应用价值。     

PCR检测在真菌性角膜溃疡中的诊断价值

目的探讨聚合酶链反应(PCR)快速检测在真菌性角膜溃疡诊断中的价值。方法以源于医学条件致病性真菌18srRNA基因保守区的一对寡核苷酸序列为通用引物,对临床拟诊为真菌性角膜溃疡的36例标本进行PCR检测,并与培养方法进行对比。结果在400bp处出现DNA扩增带者为阳性。36份临床标本的真菌培养阳性率为58.3%,而经PCR扩增阳性率为86.1%,PCR扩增准确性为72.2%,敏感性为100.0%,特异性为33.3%。结论真菌通用引物进行PCR反应检测真菌性角膜溃疡速度快、阳性率高,有助于真菌性角膜溃疡的快速诊断。     

多聚酶链反应（PCR）直接检测临床标本中风疹病毒RNA的研究

用聚合酶链反应(PCR)技术检测16份同源的血清和咽拭子标本中风疹病毒，其中6份阳性。从Vero细胞中分离到2株风疹病毒。结果表明，PCR法是一种敏感性高，特异性强，快速的检测方法。