Bloodletting Puncture at Hand Twelve Jing-Well Points Relieves Brain Edema after Severe Traumatic Brain Injury in Rats via Inhibiting MAPK Signaling Pathway

Objective:To investigate whether blood-brain barrier(BBB)served a key role in the edema-relief effect of bloodletting puncture at hand twelve Jing-well points(HTWP)in traumatic brain injury(TBI)and the potential molecular signaling pathways.Methods:Adult male Sprague-Dawley rats were assigned to the shamoperated(sham),TBI,and bloodletting puncture(bloodletting)groups(n=24 per group)using a randomized number table.The TBI model rats were induced by cortical contusion and then bloodletting puncture were performed at HTWP twice a day for 2 days.The neurological function and cerebral edema were evaluated by modified neurological severity score(mNSS),cerebral water content,magnetic resonance imaging and hematoxylin and eosin staining.Cerebral blood flow was measured by laser speckles.The protein levels of aquaporin 4(AQP4),matrix metalloproteinases 9(MMP9)and mitogen-activated protein kinase pathway(MAPK)signaling were detected by immunofluorescence staining and Western blot.Results:Compared with TBI group,bloodletting puncture improved neurological function at 24 and 48 h,alleviated cerebral edema at 48 h,and reduced the permeability of BBB induced by TBI(all P<0.05).The AQP4 and MMP9 which would disrupt the integrity of BBB were downregulated by bloodletting puncture(P<0.05 or P<0.01).In addition,the extracellular signal-regulated kinase(ERK)and p38 signaling pathways were inhibited by bloodletting puncture(P<0.05).Conclusions:Bloodletting puncture at HTWP might play a significant role in protecting BBB through regulating the expressions of MMP9 and AQP4 as well as corresponding regulatory upstream ERK and p38 signaling pathways.Therefore,bloodletting puncture at HTWP may be a promising therapeutic strategy for TBI-induced cerebral edema.     

如何学好药理学

药理学是研究药物与机体相互作用、作用机制及规律的科学,是连接基础医学与临床医学、医学与药学的一门重要课程.许多学生在初次学习药理学时,认为药理学不好学,内容复杂、抽象,药物种类较多,抓不住重点,难以记忆,不知道怎样学习药理学,现就这些问题谈谈学习药理学的方法.     

昆虫抗冻蛋白及其在医学领域中的应用

抗冻蛋白(antifreeze protein,AFP)是一类结构多样的蛋白质,具有热滞效应(thermal hysteresis,TH,降低冰点而不改变熔点)和重结晶抑制效应(recrystalization inhabition,RI).通过非共价吸附抑制机制吸附到冰核表面,限制冰晶生长和抑制冰晶重结晶,从而保护有机体免受结冰引起的伤害.由于抗冻蛋白具有阻止冰晶生长而不破坏细胞的特点,因而利用抗冻蛋白在低温中长期保存各种细胞、组织和器官,特别在器官移植中可能具有很好的应用前景.     

Sternal Reconstruction of Deep Sternal Wound Infections Following Median Sternotomy by Single-stage Muscle Flaps Transposition

Objective To assess clinical effectiveness of using bilateral pectoralis major or plus rectus abdominis muscle flaps in treating deep sternal wound infection （DSWI） following median sternotomy. Methods Between January 2009 and December 2013, 19 patients with DSWI after median sternotomy for cardiac surgery were admitted to our hospital, including 14 males （73.7%） and 5 females （26.3%）, aged 55±13 （18-78） years. According to the Pairolero classification of infected median sternotomies, 3 （15.8%） patients were type II, and the other 16 （84.2%） were type III. Surgical procedure consisted of adequate debridement of infected sternum, costal cartilage, granulation, steel wires, suture residues and other foreign substances. Sternal reconstruction used the bilateral pectoralis major or plus rectus abdominis muscle flaps to obliterate dead space. The drainage tubes were placed and connected to a negative pressure generator for adequate drainage. Results There were no intraoperative deaths. In 15 patients （78.9%）, bilateral pectoral muscle flaps were mobilized sufficiently to cover and stabilize the defect created by wound debridement. 4 patients （21.0%） needed bilateral pectoral muscle flaps plus rectus abdominis muscle flaps because their pectoralis major muscle flaps could not reach the lowest portion of the wound. 2 patients （10.5%） presented with subcutaneous infection, and 3 patients （15.8%） had hematoma. They recovered following local debridement and medication. 17 patients （89.5%） were examined at follow-up 12 months later, all healed and having stable sternum. No patients showed infection recurrence during the follow-up period over 12 months. Conclusion DSWI following median sternotomy may be effectively managed with adequate debridement of infected tissues and reconstruction with bilateral pectoralis major muscle or plus rectus abdominis muscle flap transposition.     

对症喝汤好处多

夏季多喝汤不仅能调节口味,补充体液,增强食欲,而且能防病抗病,对健康有益. 日常人们常喝的汤有荤、素两大类.荤汤有鸡汤、肉汤、骨头汤、鱼汤、蛋花汤等,素汤有海带汤、豆腐汤、紫菜汤、番茄汤、冬瓜汤和米汤等.无论是荤汤还是素汤,都应根据各人的喜好与口味来选料烹制,加之"对症喝汤",就可达到抗衰治病、清热解毒的"汤疗"效果.     

植皮区域局限性皮肤松弛症1例

病人,女,81岁.40年前在工作时双上肢不慎被火烧伤,当年在大连化工厂医院烧伤科给予取自体腹部皮肤行前臂植皮术,术后植皮区域皮肤成活修复良好.4年前无明显诱因双侧前臂植皮区域肤色逐渐变深,无意中发现皮肤明显松弛,无不适感.近3个月自觉植皮区域疼痛不适,局部无红肿等,轻微牵拉皮肤时疼痛明显.自发病起4年皮损未见扩大.患者既往体健,否认家族有类似病患者.     

POCT的信息管理

POCT是在医疗条件下,由非实验室的卫生保健人员,在实验室的质控指导下,于病人身边进行的检验。它广泛适用于医院(如外科,儿科)、监护病房、急救单位、保险公司、社区医疗、家庭保健网络等领域。当今,POCT在全球方兴未艾,据调查,现今已有10%的诊断实验是在POCT仪器上完成的,究其原因,无非是POCT兼具医学上的有效性及经济两个方面的优势。当然,随着POCT设备的投放不断增加,使用范围不断拓展,POCT的管理问题也日益凸现,本文将对POCT实施中的信息管理的若干问题进行初步探讨。     

第16届欧洲呼吸学会年会会议纪要

第16届欧洲呼吸学会年会(The European Respiratory Society 16th Annual Congress)于2006年9月1日～6日在德国慕尼黑市国际会议中心(ICM)召开,来自100多个国家和地区的16 888名代表参加了会议,大会共收到论文5277篇,接收论文4221篇,其中来自中国(包括香港、澳门和台湾)84篇(图1).现将会议内容扼要介绍如下.     

维生素B1和维生素B12肌注致过敏性休克1例报告

1 临床资料 患者,男,23岁,因左下肢疼痛20 d来医院就诊.询问病史:患者2 d前在上级医院诊断为坐骨神经痛.既往健康,无药物过敏史.门诊当日给予维生素B1 100 mg,维生素B12 250靏肌注,用药约5 min时患者感到头晕、胸闷、呼吸困难、寒战,面色苍白,脉搏105次·min-1,血压80/50 mmHg,考虑为药物所致过敏性休克,立即给予平卧,氧气吸入,肾上腺素1 mg肌注,地塞米松10 mg静注,5 min后患者恢复正常.     

长链非编码RNA UPK1A-AS1通过稳定HIF-1α的表达促进肝癌细胞的糖酵解

目的探讨长链非编码RNA UPK1A-AS1对肝癌细胞糖酵解的影响及其分子机制。方法通过慢病毒过表达系统构建UPK1A-AS1稳定过表达组（UPK1A-AS1）和慢病毒阴性对照组肝癌细胞株，两组细胞均分别置于常氧（21% O₂）及乏氧（1% O₂）条件下培养24 h，获得不同氧气条件下的UPK1A-AS1过表达组和阴性对照组肝癌细胞，利用葡萄糖及乳酸试剂盒检测过表达UPK1A-AS1对肝癌细胞糖酵解的影响。利用qRT-PCR法检测糖酵解相关基因HIF1A、GLUT1、HK1、HK2及PGK1的表达，采用双荧光素酶报告实验检测过表达UPK1A-AS1对HRE活性的影响。用放线菌酮处理肝癌细胞，检测过表达UPK1A-AS1对HIF-1α蛋白质稳定性的影响。利用泛素化蛋白质免疫共沉淀法明确UPK1A-AS1对HIF-1α蛋白泛素化修饰的影响。将肝癌细胞分为对照组、UPK1A-AS1稳定过表达组（UPK1A-AS1）、HIF-1α敲除组（si-HIF-1α）、UPK1A-AS1稳定过表达联合HIF-1α敲除组（UPK1A-AS1+si-HIF-1α），检测在过表达UPK1A-AS1的基础上干扰HIF-1α的表达后，肝癌细胞葡萄糖消耗及乳酸生成，HRE活性和糖酵解相关基因HK1、HK2及PGK1的表达情况，明确UPK1A-AS1是否通过上调HIF-1α的表达促进肝癌细胞的糖酵解水平。结果与对照组相比，不论在常氧还是乏氧的条件下，过表达UPK1A-AS1均能促进肝癌细胞葡萄糖的消耗水平，并促进肝癌细胞生成乳酸，差异具有统计学意义（P < 0.05）；过表达UPK1A-AS1能明显上调糖酵解相关基因HIF1A、GLUT1、HK1、HK2及PGK1的表达，且过表达UPK1A-AS1能促进HRE的转录活性（P < 0.05）；Western blot显示，过表达UPK1A-AS1能增加HIF-1α蛋白的稳定性，并显著减少HIF-1α的泛素化修饰。葡萄糖消耗及乳酸生成实验表明，敲除HIF-1α能逆转过表达UPK1A-AS1对葡萄糖消耗及乳酸生成的促进作用（P < 0.05）；干扰HIF-1α能恢复过表达UPK1A-AS1对HRE活性的上调作用。结论长链非编码RNA UPK1A-AS1通过稳定HIF-1α的表达上调糖酵解相关基因的表达，进而促进肝癌细胞的糖酵解水平。     

piRNA NU13对肾母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探讨piwil2诱导的肿瘤样干细胞（piwil2-iCSCs）来源的差异piRNA NU13对肾母细胞瘤细胞（G401）生物学行为的影响。方法RT-qPCR检测G401中piRNA NU13及NOP56的表达情况；通过脂质体转染技术，在肾母细胞瘤细胞株G401中过表达及抑制piRNA NU13，并用RT-qPCR技术验证转染后G401细胞中piRNA NU13的表达量；通过CCK8检测转染后G401细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡能力，划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的改变；通过双荧光素酶实验检测NOP56与piRNA NU13的结合情况；通过Western blot检测MMP2、MMP9、BAX、Bcl2、NOP56蛋白表达情况。结果在人肾母细胞瘤细胞G401中piRNA NU13表达水平低于肾小管上皮细胞HK2（P < 0.05）；NOP56在G401及肾母细胞瘤组织均高表达（P < 0.05）；在G401中上调piRNA NU13表达能够抑制肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭，并促进肿瘤细胞凋亡（P < 0.05）；过表达piRNA NU13可抑制MMP2、MMP9及Bcl2的表达水平，促进BAX表达（P < 0.05）；piRNA NU13与预测靶基因NOP56非直接结合，但可间接调控NOP56的表达。结论piRNA NU13在肾母细胞瘤中低表达，NOP56在肾母细胞瘤中高表达，piNU13可能间接调控NOP56表达从而抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭，促进其凋亡。     

miR-300通过负向调控垂体肿瘤转化基因1抑制骨肉瘤细胞MG63的侵袭和转移

目的研究miR-300及垂体肿瘤转化基因1（PTTG1）对骨肉瘤侵袭转移的影响，探讨引起骨肉瘤侵袭转移的分子机制。方法Western blot检测人成骨细胞hFOB1.19及骨肉瘤细胞MG63中PTTG1的表达情况，并检测转染敲低PTTG1质粒后细胞的转染效率; Transwell侵袭实验和CCK8实验检测敲低PTTG1及过表达miR-300对骨肉瘤细胞MG63侵袭和增殖能力的影响; 网上预测并筛选与PTTG1互补结合的microRNAs（miRNAs）; qRT-PCR检测人成骨细胞hFOB1.19及骨肉瘤细胞MG63中miR- 300的表达情况; Western blot检测转染过表达miR-300质粒后PTTG1在骨肉瘤细胞MG63的表达情况; 双荧光素酶实验检测miR-300和PTTG1的靶向结合情况; Transwell侵袭实验和CCK8实验检测过表达miR-300和过表达PTTG1质粒共转后对骨肉瘤细胞MG63侵袭和增殖能力的影响。结果PTTG1在骨肉瘤细胞MG63中表达较高（P=0.0002）; 敲低PTTG1可抑制骨肉瘤细胞MG63的侵袭（P=0.0002）和增殖（P=0.0039）能力; 网上预测软件预测可能与PTTG1互补结合的miRNAs，NCBI数据库下载数据集分析确定研究对象为miR-300;qRT-PCR结果表明miR-300在骨肉瘤细胞MG63中表达降低（P=0.0004）; 采用过表达质粒过表达骨肉瘤细胞MG63中的miR-300，qRT-PCR结果提示转染成功（P < 0.0001）; Western blot发现过表达miR-300后PTTG1的表达明显降低（P=0.0007）; 双荧光素酶实验结果显示miR-300可与PTTG1靶向结合（P=0.0010）; 细胞共转实验显示过表达PTTG1可逆转miR-300对骨肉瘤细胞侵袭（P=0.0003）和增殖（P=0.0077）能力的影响。结论miR-300通过靶向结合PTTG1抑制骨肉瘤细胞MG63的侵袭转移能力。     

Fractalkine 通过激活 Wnt/β-catenin 信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化

目的 研究Fractalkine（CX3CL1,FKN）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞免疫应答的作用机制。方法 体外培养RAW264.7细胞,使用慢病毒技术构建过表达FKN的稳定细胞珠。细胞分为8组：（1）空白对照组;（2）LPS组,细胞给予脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（3）ICG-001组,细胞给与Wnt/β-catenin信号通路抑制剂ICG-001（10 μmol/mL,48 h）;（4）过表达FKN组;（5）ICG-001+LPS组,细胞给与ICG-001（10 μmol/mL预处理36 h）后,加入脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（6）过表达FKN+LPS组,过表达 FKN细胞给与脂多糖（1 μg/mL,12 h）;（7）过表达FKN+ICG-001组,过表达FKN细胞给予ICG-001（10 μmol/mL,48 h）;（8）过表达 FKN+ICG-001+LPS 组,过表达 FKN 细胞给与 ICG-001（10 μmol/mL 预处理 36 h）后,加入脂多糖（1 μg/mL,12 h）;应用 CCK-8细胞增殖实验检测ICG-001作用于巨噬细胞中的安全浓度;应用酶联免疫吸附（ELISA）实验检测巨噬细胞上清液中M1型极化因子TNF-α和IL-6的含量;应用蛋白质免疫印记（WB）实验检测巨噬细胞中FKN、Wnt/β-catenin通路关键因子Wnt-4和β-catenin、M1型极化因子iNOS、TNF-α和IL-6的蛋白表达水平;应用免疫荧光（IF）实验检测巨噬细胞中M1型极化因子IL-6蛋白的定位。结果 过表达FKN的RAW264.7细胞中FKN的蛋白水平较空白对照组明显升高（P<0.01）。CCK-8实验显示ICG-001作用于RAW264.7细胞48 h的IC50为10 μmol/mL。与LPS组相比,ICG-001+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均升高（P<0.05）,而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著降低（P<0.01）;EXFKN+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均显著降低（P<0.01）,而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著升高（P<0.01）。与LPS组相比,ICG-001+LPS组中IL-6在细胞质中的定位增强,而EXFKN+LPS组中IL-6在细胞质中的定位受到抑制。结论 过表达FKN通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化。     

富心方通过调控c-Fos-NR4A1-p38通路改善人动脉血管内皮细胞缺氧引起的损伤

目的探讨富心方改善动脉内皮细胞损伤的分子机制。方法将13只雄性SPF级SD大鼠随机分为含药血清组（8只）与普通血清组（5只），通过灌药物、生理盐水分别制备血清。通过预实验采用体外培养的HAECs，分为21% O₂常氧培养细胞，2% O₂的缺氧培养细胞，两部分细胞都分别给予普通大鼠血清与低、高浓度富心方含药血清（1%，10%）；确定RNA高通量测序检测比较21% O₂培养对照组（普通血清10%）、2% O₂的缺氧模型组（普通血清10%）、2% O₂的缺氧模型组加载富心方含药血清(1%和10%)给药组之间的差异基因（DEGs），并从中筛选出本研究的目标基因：既因缺氧发生表达变化，且这些DEG又因富心方作用发生表达变化，同时也是动脉血管内皮细胞损伤相关基因。再结合AmiGO和String数据库筛选推测这些目标基因的相互关系，然后通过ELISA方法和Western blot法验证这些最终筛选出的目标因子在不同细胞模型中的蛋白表达水平和RNA高通量测序基因筛选结果的一致性。结果预实验结果显示，21% O₂培养对照组，2% O₂的缺氧模型组（两组各加入普通血清1%，10%），不因为不同血清浓度的加入影响细胞的形态和缺氧细胞模型验证因子（eNOS、ACE、ACE2、AGT、IL17、IL18）的表达差异。高通量测序结果显示，缺氧条件下的HAECs中共有7134个基因的表达和正常对照组细胞中的基因表达相比发生了显著变化（上调基因4205个，下调基因2929个），而在富心方作用后的缺氧HAEC中共有762个DEGs（上升305个，下调457个）的变化水平比缺氧模型组细胞中的相同基因变化有显著不同（P < 0.05）。最终根据在高通量变化中变化显著，从中选择了与抑制动脉粥样硬化和动脉血管内皮细胞损伤有关的基因，并结合AmiGO和String数据库通过Cytoscape软件构建蛋白质之间相互作用网络确认以下3个基因：原癌基因（c-Fos）、孤儿核受体（NR4A1）和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK），既在缺氧条件下相对表达升高，又在富心方加入后相对表达降低，故选择作为本研究的研究靶点基因。ELISA与Western blot结果显示，与21% O₂常氧处理的对照组HAEC细胞相比，缺氧模型组c-Fos、NR4A1、p38MAPK的水平在缺氧条件下升高（P < 0.05）；与缺氧模型组比较，富心方含药血清处理后的细胞HAEC中的c-Fos、NR4A1、p-p38MAPK的蛋白表达水平明显下降，并且是富心方浓度依赖性的（P < 0.05）。结论缺氧可导致动脉血管内皮细胞损伤有关的基因的表达水平发生变化，但是富心方含药血清可以浓度依赖性的逆转这些基因的表达，推测富心方通过下调缺氧条件下HEAC细胞中c-Fos基因的表达从而抑制NR4A1基因，并降低由于缺氧升高的p38的磷酸化起到改善动脉血管内皮细胞损伤引起的动脉粥样硬化的作用，该机制还需要进一步通过in vivo和in vitro的实验加以求证。     

miR-600通过抑制HIF-1α信号通路降低宫颈癌细胞的增殖能力

目的探讨miR-600是否可通过HIF-1α信号通路调控宫颈癌HeLa细胞的增殖及对Cyclin D1和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法采用miR-600 mimic和Plasmid-HIF-1α转染HeLa细胞增加和诱导miR-600和HIF-1α的表达。qPCR和Western blot检测转染6 h后Plasmid-HIF-1α对于HeLa细胞HIF-1α表达的影响。将HeLa细胞分为空白对照组（无特殊处理）、miR-600 mimic组（转染miR-600拟似物miR-600 mimic）、Plasmid-HIF-1α组（P-HIF-1α组，转染Plasmid-HIF-1α）和miR-600 mimic+Plasmid-HIF-1α组（miR-600 mimic+P-HIF-1α组，同时转染miR-600 mimic和Plasmid-HIF-1α）。在转染6 h后，使用MTT法检测细胞活性，采用qPCR和Western blot测定VEGF、Cyclin D1和HIF-1α mRNA和蛋白的表达水平。结果在转染6 h后，miR-600 mimic和Plasmid-HIF-1α对HeLa细胞活性无显著影响（P均 < 0.05）。但转染Plasmid-HIF-1α 6 h后，细胞HIF-1α表达水平显著增加。在转染24 h和48 h，与对照组相比较，miR-600 mimic组细胞活性呈时间依赖性下降，Plasmid-HIF-1α组和miR-600 mimic+Plasmid-HIF-1α组细胞活性呈时间依赖性增加，且Plasmid-HIF-1α组较miR-600 mimic+Plasmid-HIF-1α组细胞活性时间依赖性增加更加显著（P均 < 0.05）。转染6 h后，与对照组相比较，miR-600 mimic组VEGF、Cyclin D1和HIF-1α表达均明显下降，Plasmid-HIF-1α组和miR-600 mimic+Plasmid-HIF-1α组VEGF、Cyclin D1和HIF-1α表达均明显增加，且Plasmid-HIF-1α组较miR-600 mimic+Plasmid-HIF-1α组增加更明显（P均 < 0.05）。结论在HeLa细胞中miR-600可以通过抑制HIF-1α信号通路下调Cyclin D1和VEGF的表达，从而抑制肿瘤细胞的增殖和分化。     

光动力脂质体凝胶协同曲妥珠单抗体外杀伤耐药性乳腺癌细胞的效果

目的制备负载光敏剂二氢卟吩（Ce6）和肿瘤靶向药曲妥珠单抗（Tmab）的脂质体凝胶（Ce6-PC-Tmab@A-Gel），实现对耐药性HER2+乳腺癌的光动力治疗（PDT）和靶向治疗。方法采用旋蒸薄膜水化法制备Ce6-PC-Tmab脂质体，检测其纳米载体一般特性、包封率及近红外光响应性，同时采用冷冻干燥法及搅拌交联法，制备具有剪切响应性脂质体凝胶Ce6-PC-Tmab@A-Gel，通过扫描电镜(SEM)观察其微观结构，通过流变仪评价凝胶的剪切响应性。细胞毒性试验（MTT）检测Ce6-PC-Tmab@A-Gel联合近红外光对于SK-BR-3细胞株的抑制效果。结果制备的Ce6-PC-Tmab粒径为239.7±9.7 nm，电位为-2.03±0.09 mV，Ce6-PCTmab脂质体中Tmab的包封率为（40.22±0.73）%；形成脂质体凝胶后剪切响应性良好；具有优良的近红外光响应释放特性，随近红外光刺激强度增加和时间延长，Tmab释放均增多；Ce6-PC-Tmab@A-Gel在室温下性质稳定，在模拟肿瘤微环境中（pH 6.25）仍然具有稳定的结构；细胞毒性试验中，对耐药性HER2+人源乳腺癌细胞SK-BR-3的增殖有明显抑制作用，Ce6-PC-Tmab@AGel联合近红外光治疗组的SK-BR-3细胞生存率为（31.37±1.73）%，与未治疗组及其他实验组比较差异有统计学意义（P < 0.01），同时具备较高的活性氧（ROS）产生效率，Ce6-PC-Tmab@A-Gel治疗组ROS释放量在光照2 min后达到（22.36±0.11）%；对于耐药性乳腺癌细胞的杀伤具有显著效果（P < 0.01）。结论本研究制备的Ce6-PC-Tmab@A-Gel粒径小，均一性好，有良好的近红外光响应释放特性，保证了Ce6-PC-Tmab@A-Gel中Tmab的高效靶向治疗性，可注射凝胶体系为肿瘤局部的长时释药提供了可能。     

MiR-4719通过靶向调控ARHGAP36抑制人乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的检测miR-4719在乳腺癌组织和细胞中的表达，研究其对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响及其分子机制。方法采用实时荧光定量PCR检测30对人乳腺癌组织和癌旁组织，乳腺癌细胞株（BT549和MDA-MB-231）以及正常乳腺上皮细胞（MCF- 10A）中miR-4719和ARHGAP36的表达水平。生物信息手段分析miR-4719对乳腺癌患者生存率的影响，并预测miR-4719的潜在靶基因。将miR-4719模拟物，靶向ARHGAP36的shRNA、ARHGAP36过表达质粒分别转染乳腺癌细胞。Western blot和免疫组化实验检测ARHGAP36的蛋白水平；细胞划痕实验和Transwell实验检测癌细胞的迁移和侵袭能力；双荧光素酶报告实验验证miR-4719与ARHGAP36的mRNA 3''-非翻译区（3''-UTR）直接结合。结果与癌旁组织、正常乳腺上皮细胞相比，miR- 4719和ARHGAP36分别在乳腺癌组织(P < 0.001)和乳腺癌细胞（P < 0.01）中显著降低和增高。miR-4719低表达与乳腺癌患者不良预后密切相关（P < 0.01）。过表达miR-4719或敲低ARHGAP36可明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移（P < 0.01）。乳腺癌组织中miR-4719和ARHGAP36表达水平呈负相关（P < 0.01），双荧光素酶报告实验显示miR-4719可靶向调控ARHGAP36的表达（P < 0.01），向癌细胞外源性导入miR-4719可明显抑制ARHGAP36的表达（P < 0.01）。此外，过表达ARHGAP36可逆转miR- 4719模拟物对癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用（P < 0.01）。结论乳腺癌组织和癌细胞中miR-4719的丧失，导致靶基因ARHGAP36的异常高表达，促进了人乳腺癌细胞的迁移和侵袭。     

黄芩汤通过调节ILC3s-Th细胞反应减轻小鼠的溃疡性结肠炎

目的探讨黄芩汤在治疗溃疡性结肠炎（UC）过程中对三型固有淋巴细胞（ILC3）及辅助性T细胞（Th）免疫反应的调控作用。方法将雄性Balb/c小鼠随机分为6组：正常组、模型组、美沙拉嗪组、黄芩汤低、中、高剂量组（HL，2.275 g/kg；HM，4.55 g/kg；HH，9.1 g/kg）。各组自由饮食，除正常组自由饮用蒸馏水外，其余各组小鼠自由饮用3%葡聚糖硫酸钠溶液，持续7d以建立UC模型，同时美沙拉嗪组和黄芩汤低、中、高剂量组小鼠每日分别给予美沙拉嗪及低、中、高剂量黄芩汤灌胃1次。流式细胞术分析结肠固有层淋巴细胞中ILC3s细胞比例及其表面主要组织相容性复合物Ⅱ类（MHCⅡ）分子表达变化以及Th细胞中Th1与调节性T细胞（Treg）的比例变化。采用Milliplex多因子测定方法检测结肠组织中多个细胞因子含量的变化。结果与模型组相比，黄芩汤各剂量组小鼠溃疡性结肠炎症状得以缓解，疾病活动指数评分及宏观评分下降（P < 0.001）。流式细胞术结果表明，黄芩汤各剂量组小鼠结肠中ILC3s细胞比例增加（P < 0.05）且MHCⅡ分子表达增多（P < 0.05），其中黄芩汤低、中剂量组Th1细胞比例降低（P < 0.05）而Treg细胞比例增加（P < 0.05）。Milliplex多因子测定结果表明，黄芩汤各剂量组小鼠结肠组织中Th细胞相关的促炎性细胞因子如白介素-2、白介素-17A、白介素-23、α肿瘤坏死因子、γ干扰素含量降低（P < 0.05）。结论黄芩汤通过增加ILC3s细胞数目及其MHCⅡ的表达，调节Th细胞免疫反应，从而缓解DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎。     

敲低EEFSEC可体外抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨硒代半胱氨酸tRNA特异性真核延伸因子（EEFSEC）对人前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用qRT-PCR法检测人正常前列腺细胞系RWPE1和人前列腺癌细胞系22Rv1、LNcap、Vcap、PC-3细胞中EEFSEC mRNA的表达；收集前列腺癌患者的癌组织和癌旁组织，采用Western blot法检测前列腺癌组织中EEFSEC的蛋白表达情况。慢病毒感染22Rv1细胞，Western blot检测敲低效率；XTT实验检测各组细胞的增殖能力；划痕实验和Transwell实验用来检测细胞迁移能力；Transwell试验检测细胞侵袭能力；流式细胞术检测细胞周期；qRT-PCR检测敲低EEFSEC后周期相关基因的mRNA水平的变化。结果与对照组相比，EEFSEC在前列腺癌中高表达（P < 0.05）；且EEFSEC高表达导致前列腺癌患者不良预后；感染敲低EEFSEC的慢病毒后，可明显降低22Rv1细胞中EEFSEC的蛋白表达水平；与对照组相比，敲低EEFSEC可显著抑制22Rv1细胞的增殖（P < 0.001），迁移（P < 0.001）和侵袭能力（P < 0.001）；敲低EEFSEC细胞周期主要阻滞在G₀/G₁期，qRT-PCR实验显示敲低EEFSEC可明显下调C-myc和CCNB1的表达，上调p15的表达。结论敲低EEFSEC可能通过降低C-myc表达来抑制前列腺癌细胞22Rv1的增殖、迁移和侵袭能力。