苹果果肉总蛋白提取及双向电泳分析

以苹果果肉为试材,通过比较总蛋白不同提取方法 (TCA-丙酮沉淀法、匀浆法以及改良酚抽提法),建立适于苹果果肉总蛋白提取技术。从所得双向电泳图谱分离效果来看,改良酚抽提法所得蛋白点个数最多、图谱背景清晰,分离效果好,明显优于TCA-丙酮沉淀法和匀浆法。同时,通过对各图谱分离效果的综合比较,认为在现有研究条件下,苹果果肉总蛋白双向电泳分析的理想上样量为250μg。     

苹果叶片叶绿体分离及其蛋白提取、双向电泳方法的优化

【目的】筛选苹果叶片叶绿体及其蛋白的提取方法,建立叶绿体蛋白双向电泳分离技术体系。【方法】以苹果叶片为试材,采用4种Percoll密度梯度离心法提取苹果叶片叶绿体,检测提取叶绿体的完整度、纯度及提取率。采用酚抽提法、改良酚抽提法提取叶绿体蛋白,检测蛋白样品的质量。优化胶条长度、上样量、等电聚焦程序、分离胶浓度等双向电泳条件。【结果】Percoll密度梯度离心法D提取的叶绿体纯度高、提取率高,优于其他3种方法;改良酚抽提法提取的叶绿体蛋白,经2-DE分离所得蛋白点数多、分离效果好,优于酚抽提法。蛋白样品经优化后的双向电泳体系分离,获得了较为理想的2-DE图谱。【结论】Percoll密度梯度离心法D、改良酚提法适于苹果叶片叶绿体及其蛋白的提取。苹果叶片叶绿体蛋白使用优化后的双向电泳体系进行分离,可以获得比较理想的2-DE图谱。     

苹果果实表皮总蛋白提取及双向电泳方法的优化

以苹果果实表皮为试材,采用3种方法提取果实表皮总蛋白,并对双向电泳(2-DE)操作体系进行优化。结果表明:改良酚提法适于苹果果实表皮总蛋白的提取,优化后的2-DE分离体系为预制IPG胶条18cm pH 4~7,上样量600μg,改进后的等电聚焦程序,浓度16%的分离胶,适于苹果果实表皮总蛋白的2-DE分离。     

桃叶片总蛋白双向电泳技术的研究

采用改进的O'Farrell双向电泳系统,研究适于桃树叶片蛋白质组分析的双向电泳方法。通过对不同蛋白样品提取方法、不同pH梯度范围、不同上样量的比较,探索出一套适合桃树叶片总蛋白分析的双向电泳方法,即以TCA/丙酮沉淀法提取叶片蛋白质样品,采用两性电解质配比pH3～10︰pH5～7为1∶4的IEF胶条,按90μg蛋白上样量,并结合适宜的双向电泳参数,可获得背景清晰、重复性较好、蛋白分辨率高的双向电泳图谱。经此方法分离的桃叶片蛋白质经串联质谱分析(MS/MS)得到了较好的鉴定。     

新红星苹果花芽蛋白质提取及双向电泳的改良方法

以新红星苹果花芽为材料,探索适合蛋白质的提取方法及其双向电泳的条件。采用物理和化学2种方法充分裂解植物组织细胞,并用低温操作加入PVP等去除植物大量的酚类物质,最后离心去除不溶性杂质的苹果蛋白质组双向电泳(2-DE)样品制备方法,第1向为ISO-DALT等电聚焦,第2向为垂直平板SDS-PAGE。通过对样品制备、双向电泳参数的选择及染色等方面进行优化,电泳图谱可分辨出蛋白质斑点数在519个以上,蛋白质相对分子质量约为14.0～97.0ku,主要分布为14.0～67.0ku;等电点约为3.5～9.0,主要分布在4.0～7.0。     

CTAB法高效提取苹果叶片DNA的研究

为研究CTAB法在正常条件和逆境条件下,从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的苹果树叶片中分离出高质量的基因组DNA,以抗旱能力较强的八棱海棠(Malus micromalusRehd. )和抗旱性较弱的平邑甜茶(Malus hupehensis pamp Reld.)幼苗为试验材料.用20%聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG6000)模拟干旱,采取CTAB提取缓冲液,按一定比例加入PVP和β-巯基乙醇,用Tris平衡酚-氯仿-异戊醇除去蛋白质及杂质,在粗提时用异丙醇沉淀DNA,并用DNA洗液(10 mmol/L醋酸铵,75%乙醇)洗涤DNA,在纯化时用乙醇沉淀DNA,且没有加入RNase去除RNA的方法,分别提取2个品种正常和干旱胁迫的苹果属叶片总DNA,并对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测.结果表明:此方法可有效去除次生物质对DNA的干扰,得到高质量、特征带形清晰的大量DNA.并就提取过程中遇到的问题,提出了相应的解决办法.     

番茄子叶总蛋白双向电泳体系的建立

通过对IPG胶条梯度、上样方式、上样量、聚焦条件等4方面条件的优化,建立了番茄子叶总蛋白双向电泳体系,即采用TCA丙酮沉淀法提取番茄子叶总蛋白,选用24cmpH3—7NL的IPG胶条,     

‘华月’苹果花器官蛋白提取及表达谱分析

蛋白质样品制备方法是蛋白质组学分析的关键。为建立适于苹果花器官总蛋白提取及分析方法,以10年生‘华月’苹果花序为试材,通过优化提取条件,确立了适于苹果花器官总蛋白提取的技术方法。基于此,开展了苹果花器官蛋白双向电泳分析,并对随机筛选的32个蛋白点进行质谱(MALDI-TOF-TOF/MS)鉴定,经数据库检索,32个蛋白点均得到成功鉴定,按照功能划分为代谢及能量产生相关、抗性相关、蛋白质合成相关、细胞结构相关、调节相关及未知功能蛋白等6类。该研究通过优化蛋白质样品制备方法,进而完成双向电泳分析及质谱鉴定,为进一步利用苹果花器官开展苹果抗病蛋白质组学研究奠定了基础。     

葡萄叶片中提取总RNA的三种方法比较

采用试剂盒法、热酚法和LiCl沉淀法3种方法提取葡萄叶片总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和Agilent 2100计检测总RNA的完整性和提取纯度.对红地球葡萄叶片总RNA提取方法做比较,以得到完整的、高质量的葡萄RNA.结果表明:LiCl沉淀法提取的RNA收率高,完整性好,OD260/OD280均在1.80～2.00,纯度高,28S、18S条带清晰完整.可以满足后续分子生物学的研究.     

枇杷叶片和果实总蛋白质提取及双向电泳的优化方法

以枇杷叶片和果实为材料,探索适于枇杷总蛋白质分析的双向电泳方法.比较2种不同蛋白质提取方法对双向电泳结果的影响,并对双向电泳蛋白质上样量、等电聚焦条件等进行了优化,探索出一种适于枇杷叶片和果实总蛋白质分析的高分辨率、高重复性双向电泳方法.采用酚抽法提取枇杷叶片和果实蛋白质,以24 cm、pH 4~7的IPG胶条,按15...     

树脂法吸附分离苹果汁中多酚物质的研究

通过树脂的筛选、吸附和解吸条件的优化等对树脂法分离提取苹果汁中多酚物质进行了研究。结果表明,XDA-5树脂为吸附分离苹果汁中多酚物质的优良材料,其吸附最适温度为40℃,适宜的洗脱剂为80%乙醇溶液。在此基础上结合苹果浓缩汁加工工艺提出了一条分离提取苹果多酚的新途径。根据该方法制备的苹果多酚提取物中总酚含量可达到96.72%。该方法既能提高苹果浓缩汁的品质和稳定性,又实现了资源的充分利用。     

酸柚硼毒害蛋白质双向电泳技术体系的优化

以硼毒害下酸柚实生苗的根和叶为试验材料,对双向电泳技术中的样品制备方法、蛋白上样量、凝胶染色方法等条件进行了优化,建立了适用于柑橘蛋白质组研究的双向电泳技术体系。结果表明,使用改良后的酚抽法提取柑橘总蛋白效果较好,所获蛋白在2-DE图谱上获得的点数较多;当采用pH 4～7 IPG胶条、上样量为1.5 mg时,蛋白点分布广,点数最多;使用胶体考马斯亮蓝染色法,可得到背景清晰、重复性好、蛋白点分辨率较高的双向电泳图谱。该体系为开展柑橘硼胁迫的蛋白质组学研究提供了技术基础。     

改良热硼酸法高效提取苹果果实RNA

苹果果实、尤其是成熟期的果实中多糖和其他次生物质含量高,难以提取RNA。对此,在原热硼酸法的基础上进行了改进,通过添加提取辅助剂并根据辅助剂特性调整提取步骤,高效、稳定地从苹果果实、尤其是后期果实中提取到了高质量的RNA。所得RNA的A260/A230大于2.0,A260/A280为1.8-2.1,并且RNA产量高,其中前期果实RNA产率在13.40μg/g以上,后期果实RNA产率在7.02μg/g以上,完全可以满足RT-PCR、cDNA-AFLP等分子生物学实验的要求。     

锥栗叶片两种提取蛋白方法的比较

比较三氯乙酸/丙酮沉淀法、酚柚提法两种方法对锥栗叶片总蛋白的提取效果。结果表明:酚抽提法获得的蛋白质产率高、纯度高;且其提取蛋白质所得电泳图谱背景浅、拖尾轻、蛋白点分散且性状规则,适合锥栗叶片蛋白质的提取。试验为锥栗胚胎发育期蛋白质组学研究提供参考,也对其他干扰物质含量高的植物组织蛋白提取有一定的参考价值。     

从甜瓜子叶中提取总DNA

用分子标记方法检测甜瓜杂交种子纯度,如果从真叶中提取DNA,检测周期至少需要15d。为了缩短检测周期,我们分别以甜瓜的成熟干种子、吸胀水后“露白”种子、3d龄刚转绿子叶、6d龄子叶、9d龄子叶和12d龄子叶为材料,进行了提取总DNA的研究。结果表明:除了干种子和吸胀水后“露白”种子外,其他的材料都可以提取到DNA,但是DNA的质量因子叶日龄不同而存在很大的差异。不同日龄的子叶中,以3d龄子叶提取的DNA质量好。子叶6d龄时,提取的DNA质量次于3d龄,少量DNA开始出现降解,以后随着子叶日龄的增加,DNA降解加重。另外,与以真叶为材料提取的DNA样品相比较,子叶DNA样品中的蛋白质等杂质含量高,应增加氯仿抽提纯化次数。     

红富士苹果树冠枝(梢)叶分布与温度、湿度的关系

以12a生红富士苹果(Malus.domestica Borkhcv.Red Fuji)为试材,研究了北京地区树冠不同层次和部位温度、相对湿度的分布、动态变化与枝叶数量间的关系。结果表明,树冠不同层次温度从上到下逐渐降低,同一层次内温度从内膛到外围逐步增大,树冠不同层次相对湿度从上到下逐渐增大,同一层次内相对湿度从内膛到外围逐步减小;树冠温度日变化呈白天低-高-低的趋势,相对湿度的日变化呈白天高-低-高的趋势,夜晚树体温度、相对湿度趋于一致;7—8月份冠层温度、相对湿度高于5—6月份和9—10月份。应用多元统计分析的方法建立了树冠温度、相对湿度与枝(梢)叶量关系的回归方程,冠层内不同层次、部位的温度、相对湿度受冠层内枝(梢)叶数量和分布的影响,冠层内温湿度与累计长、中、短枝(梢)量和叶面积系数成线性负相关,而相对湿度与之成线性正相关。综合分析,冠层有良好温度和相对湿度的群体结构参数为生长季每hm2总枝(梢)量100万左右,叶面积系数控制在3.5～4.0,长、中、短枝(梢)比例分别为73～77、10～12和13～15。