康宁克通A对大鼠肾小球系膜细胞增生及单核细胞趋化蛋白—1表达的作用

目的：探讨康宁克通A（TA）抑制大鼠肾小球系膜细胞（GMCs)增生及单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）的表达影响及机制。方法：在体外培养的大鼠GCMs株中加入脂多糖（LPS）后,再分别加入不同浓度的TA,共设3组：①GMC组,②LPS组,即GMCs LPS,③TA组,即GMCs LPS TA。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）掺入法,于24h,48h观察3组中GMCs增生水平,选择药物的最佳GMCs增生抑制浓度及时间段。采用免疫组织化学方法观察3组GMCs涂片中MCP－1及核转录因子－κB(NF-κB)的表达,采用ELISA方法观察其培养的上清液中MCP－1的浓度。结果：①TA组GMCs增生水平明显低于LPS组及GMC组（均P＜0.01)。②TA组GMCs中MCP－1的表达明显低于LPS组和GMC组（均P＜0.01)。③TA组GMCs中NF－κB表达明显低于LPS组（P＜0.01),与GMC组差异无显著性（P＞0.05)。④TA组GMCs培养上清中MCP－1浓度明显低于LPS组（P＜0.01),与GMC组差异无显著性（P＞0.05)。结论：TA可能系通过抑制GMCs中NF－κB的激活而抑制大鼠GMCs增生,下调GMCs中MCP－1的异常表达及分泌。     

康宁克通A对大鼠肾小球系膜细胞增生及单核细胞趋化蛋白-1表达的作用

目的 :探讨康宁克通A(TA)抑制大鼠肾小球系膜细胞 (GMCs)增生及单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)的表达影响及机制。方法 :在体外培养的大鼠GMCs株中加入脂多糖 (LPS)后 ,再分别加入不同浓度的TA ,共设 3组 :①GMC组 ,②LPS组 ,即GMCs+LPS ,③TA组 ,即GMCs+LPS +TA。采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)掺入法 ,于 2 4h ,4 8h观察3组中GMCs增生水平 ,选择药物的最佳GMCs增生抑制浓度及时间段。采用免疫组织化学方法观察 3组GMCs涂片中MCP 1及核转录因子 κB(NF κB)的表达 ,采用ELISA方法观察其培养的上清液中MCP 1的浓度。结果 :①TA组GMCs增生水平明显低于LPS组及GMC组 (均P <0 .0 1)。②TA组GMCs中MCP 1的表达明显低于LPS组和GMC组(均P <0 .0 1)。③TA组GMCs中NF κB表达明显低于LPS组 (P <0 .0 1) ,与GMC组差异无显著性 (P >0 .0 5 )。④TA组GMCs培养上清中MCP 1浓度明显低于LPS组 (P <0 .0 1) ,与GMC组差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :TA可能系通过抑制GMCs中NF κB的激活而抑制大鼠GMCs增生 ,下调GMCs中MCP 1的异常表达及分泌     

L-EGCG对脂多糖诱导的大鼠系膜细胞增生影响

目的 :探讨L ( ) 表没食子基儿茶素没食子酸酯 (L epigallocatechinsgallicacidester,L EGCG)对大鼠肾小球系膜细胞 (glomerularmesangialcells ,GMCs)增生影响及可能的机制。方法 :首先应用不同剂量 (1 0 0 ,2 0 0 ,5 0 0mg/L)EGCG观察其在不同时间 (2 4 ,4 8,72h)对GMCs增生的影响 ,筛选出EGCG对GMCs增生影响的最佳剂量与最佳时间 ;在此基础上 ,将GMCs分为LPS组、对照组、EGCG组、激素组与激素 +EGCG组分瓶培养 ,实验末收集培养细胞 ,涂片 ,应用免疫组化法检测GMCs的增生细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)阳性表达率 ,TUNEL(terminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)法检测GMCs有效凋亡率 ;应用生化法对培养上清进行 OH ,MDA(malonydialdehyde ,MDA)及SOD (superoxideDismutase ,SOD)活性测定。结果 :2 0 0mg/LEGCG对GMCs增生的抑制效果在 4 8h最佳 ;EGCG组细胞上清中 OH ,MDA较LPS组降低 (P <0 .0 1 ) ,SOD活性较LPS组增高 (均P <0 .0 1 ) ;EGCG组培养细胞PCNA阳性率低于脂多糖组 ,有效凋亡率高于脂多糖组 (P <0 .0 1 )。PCNA阳性率与 OH ,MDA呈正相关 ,与SOD活性呈负相关 (P <0 .0 1 )。结论 :EGCG可能通过减轻 OH对SOD的活性抑制 ,降低MDA的过     

人参皂甙对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子的作用及机制探讨

目的：研究人参皂甙Rg1和Rb1对脂多糖（LPS）诱导小鼠肺泡巨噬细胞（AM）过度分泌肿瘤坏死因子（TNF－α）的影响,并探讨人参皂甙的作用机制。方法;体外培养小鼠AM,分为对照组、LPS组、RG1 LPS组、Rg1组和Rb1 LPS组,Rb1组。分别收集培养细胞及上清液,测定上清TNF－α水平、上清LPS水平以及细胞中1－κB表达情况。结果：LPS可使AM分泌大量TNF－α（P＜0．01）,并使I－κB表达明显减少（P＜0．01）。Rg1 LPS组与LPS组相比,上清TNF－α水平显著下降（P＜0．01）,细胞内I－κB表达明显增加（P＜0．01）。Rgl LPS组上清游离LPS水平明显高于LPS组（P＜0．05）。Rb1的作用结果与Rg1相似。结论：人参皂甙Rg1和Rb1在体外能抑制AM过量分泌TNF－α,其可能作用机制为通过阻断LPS与AM膜的结合,抑制LPS诱导的细胞内I－κB的低表达,从而使TNF－α的分泌水平下降。     

通络保肾复方对LPS刺激的肾小球系膜细胞表达TGF-β、FN、LN的影响

目的探讨通络保肾复方对肾小球系膜细胞(GMCs)表达转化生长因子-β(TGF-β)、纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)的影响。方法通络保肾复方灌胃大鼠后,制备药物血清,将5%含药血清培养基加入体外培养的GMCs,脂多糖(LPS)作为刺激因子,将细胞分为空白组、LPS组、缬沙坦组及通络保肾复方小、中、大剂量组,刺激GMCs48h后,应用细胞免疫组化方法检测各组GMCs表达TGF-β、FN、LN的情况。结果通络保肾复方能够抑制GMCs表达TGF-β、FN、LN,其中以通络保肾复方大剂量组和中剂量组效果显著,与LPS组比较差异显著(P0.05)。结论通络保肾复方可以抑制LPS诱导的GMCs表达TGF-β、FN、LN,从而延缓肾小球硬化的进程。     

EPA、DHA对脂多糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

摘要：目的观察二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)对正常及在脂多糖(LPS)诱导下的肾小球系膜细胞(GMCs)增殖和凋亡的影响。方法EPA和DHA各设两个终浓度(10μmol／L和100μmol／L),LPS终浓度为10μg／mL,培养时间为24、48和72h,采用MTT法测定细胞增殖;EPA和DHA终浓度为100μmol／L,培养48h后,采用双染色流式细胞术检测细胞凋亡。结果EPA和DHA对正常GMCs无明显影响;对LPS诱导的GMCs增殖有明显抑制作用(P＜0.01),在同等浓度下,DHA的作用强于EPA(P＜0.01);EPA、DHA可明显促进GMCs凋亡。结论EPA和DHA明显抑制LPS诱导的GMCs增殖并促进其凋亡。     

EGCG对肾小球系膜细胞MMP-9和细胞外基质合成的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对脂多糖（LPS）诱导的肾小球系膜细胞（GMCs）基质金属蛋白酶系统和细胞外基质合成的影响。方法以大鼠GMCs为实验对象,分为正常对照组、LPS组、LPS＋EGCG组。CCK细胞计数法检测EGCG作用下大鼠GMCs的OD值,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及抑制物金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）蛋白表达,并检测细胞外基质成分纤维连接蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）及层粘连蛋白（LN）的含量。结果LPS诱导TIMP-1蛋白和细胞外基质合成增加,与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）,EGCG能抑制升高TIMP-1蛋白表达和细胞外基质合成。而各组MMP-9蛋白表达变化不明显。结论EGCG可抑制LPS诱导的大鼠GMCs增殖和细胞外基质的合成,为EGCG的肾脏保护作用提供理论依据。     

肺表面活性蛋白A、B在内毒素性急性肺损伤时变化的研究

目的：探讨内毒素性急性肺损伤(ALI)肺表面活性蛋白A和B(SP—A，SP—B)表达的变化及其机制。方法：用内毒素脂多糖(LPS)制备Wistar大鼠ALI模型，分加采用ELISA、免疫组化和反转录聚合酶链反应(RT—PCR)方法动态观察LPS致伤后不同时间点肺组织TNF-α，SP—A和SP—B蛋白和mRNA表达的变化。结果：肺组织TNF—α蛋白含量和髓过氯化物酶(MPO)活性分别于LPS致大鼠ALI后0．5h和1h时显著高于对照组(P＜0．01，2h时达高峰；肺内SP—B阳性Ⅱ型肺泡上皮细胞数量减少，染色变浅，SP—B蛋白表达逐渐减弱，其灰度值于LPS致伤后2h时显著高于对照组(P＜0．01)；肺组织SP—A和SP—BmRNA的表达不同程度减弱，2h时明显弱于对照组(P＜0．05)，分别于8h和4h时达最低水平。结论：LPS致大鼠ALI时沸组织SP—A和SP—BmRNA的表达减弱，SP—B蛋白含量减少，这可能与多形核粒细胞在肺内的聚集和TNF—α水平的增加有关。     

黄芪对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的：探索黄芪对大鼠急性心肌炔血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法：采用结扎大鼠左冠状动脉法制备心肌缺血再灌注(IR)模型，分别以地高辛随机引物法及免疫组化法检测心肌凋亡细胞、心肌细胞bax、bcl—2基因的蛋白表达情况。结果：缺血再灌注心肌细胞凋亡数量显著高于假手术组(P＜0．01)，黄芪治疗组心肌细胞凋亡(P＜0．05)明显受到抑制。IR组和黄芪组bax和bcl--2基因蛋白表达均明显增加(P均＜0．01)，黄芪明显抑制bax基因表达(P＜0．05)，但对bcl—2基因表达无明显影响。结论：急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡加剧，bax、bcl—2参与了缺血再灌注时心肌细胞凋亡凋控，黄芪可抑制凋亡加速基因bax的表达，因而在缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的保护方面有一定价值。     

高迁移率族蛋白1在内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能改变中的作用

目的探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）在内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能改变中的作用。方法脂多糖（LPS）注射复制大鼠急性肺损伤模型，在LPS致伤后不同时相点（有或无正丁酸钠SB干预时）获取肺组织及肺泡巨噬细胞（AM）。RT—PCR检测肺组织HMGB1 mRNA表达，应用鸡红细胞吞噬实验检测AM的吞噬功能，并对二者做平行比较。结果与对照组比较，LPS致伤后6、12、24h时相点AM吞噬率及吞噬指数明显降低；SB干预组AM吞噬功能于24h时相点出现较明显下降。与LPS组比较，6～12h时相点AM吞噬功能无明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）；LPS致伤后6～24h肺组织HMGB1 mRNA表达明显增高。正丁酸钠（SB）处理组动物肺组织于伤后6～12h肺组织HMGB1 mRNA表达均显著抑制，与LPS组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）；相关性分析显示，肺泡巨噬细胞吞噬率及吞噬指数与肺组织HMGB1表达水平呈显著负相关。结论HMGB1高表达可能参与AM吞噬功能改变；AM吞噬功能减低可能是HMGB1参与急性肺损伤发生、发展的机制之一。     

L—EGCG对脂多糖诱导的大鼠系膜细胞增生影响

OBJECTIVE: To determine the effect of L-epigallocatechins gallic acid ester (L-EGCG) on glomerular mesangial cells (GMCs) proliferation, and to make clear the possible mechanism. METHODS: We investigated the effect of different doses of L-EGCG on GMCs proliferation at 24 h, 48 h and 72 h respectively, and screened the best dosage and time point. GMCs were divided into 5 groups: control, L-EGCG group, LPS group, dexamethasone group, and L-EGCG plus dexamethasone group. At the end of the experiments, the cultured GMCs and its suspension were collected, the positive rate of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) was taken count of by immunohistochemical assay, the rate of effective apoptosis of GMCs by terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick endlabeling (TUNEL) assay, and -OH, malonydialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD) by biochemical assay. RESULTS: L-EGCG of 200 mg/L had the most strong inhibitory effect on GMCs at 48 h. The levels of -OH, and MDA in the L-EGCG group was significantly lower than those in the LPS group (P < 0.01), while the level of SOD in the L-EGCG group was significantly higher than that in the LPS group (P < 0.01); the PCNA positive rate of GMCs in the L-EGCG group was significantly lower than that in the LPS group (P < 0.01), and the effective apoptosis of GMCs in the L-EGCG group were significantly higher than that in the LPS group (P < 0.01). The PCNA positive rate of GMCs was positively correlated with the level of -OH and MDA, while negatively correlated with the level of SOD. CONCLUSION: The suppressive effect of L-EGCG on the abnormal proliferation of GMCs might be that L-EGCG could weaken the suppressive effect of -OH on the SOD activity, decrease the accumulation of MDA, and increase the apoptosis of GMCs.     

GRβ对肾小球系膜细胞糖皮质激素效应的影响

目的:构建糖皮质激素受体β(GRβ)不同表达水平的肾小球系膜细胞株,研究GRβ对肾小球系膜细胞糖皮质激素效应的影响.方法:利用逆转录病毒载体pLXSN将重组GRβ正义和反义基因转入肾小球系膜细胞,经细胞培养、逆转录聚合酶链反应、基因测序和蛋白质印迹分析鉴定所构建的细胞株,应用MTT法和流式细胞术检测细胞内不同表达水平的GRβ对地塞米松的细胞增殖抑制效应和细胞周期变化的影响.结果:构建的肾小球系膜细胞分别有正确的GRβ正义和反义基因整合,转染了GRβ正义基因的肾小球系膜细胞内GRβ蛋白质表达水平明显高于转染了GRβ反义基因者(109.74±10.63 vs.19.08±1.01,P＜0.05);地塞米松对GRβ高表达的肾小球系膜细胞的增殖抑制效率显著低于GRβ低表达的肾小球系膜细胞(18.47%±2.12% vs.60.33%±5.29%,P＜0.05).在地塞米松的抑制下,转染了正义GRβ基因的细胞中,其S期细胞降低程度和G1期细胞升高的程度均明显低于未转染的细胞.结论:肾小球系膜细胞内高表达的GRβ具有拮抗糖皮质激素效应的作用,细胞内GRβ表达水平是决定细胞对激素敏感或抵抗的重要因素.     

氧化型脂蛋白（a）对大鼠GMCs增生及ICAM-1表达的影响

目的探讨氧化型脂蛋白（a）[Ox-Lp（a）]对大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增生及细胞闻粘附因子-1（ICAM-1）表达的影响。方法分离Lp（a）并氧化修饰，培养GMCs，分别加入终浓度2、5、5、10、20nmol／L的Ox-Lp（a）作用12h，终浓度5nmol／L的OX-Lp（a）作用12h、24h、48h、60h。采用MTT法测定GMCs增生率，免疫组化法检测GMCs的增生细胞核抗原（PCNA）阳性表达率，酶联免疫法检测培养液上清的ICAM-1浓度。并与加入终浓度5nmoL／L的天然Lp（a）[n-Lp（a）]作用12h的Lp（a）组及不加任何刺激因素的空白对照组比较。结果与对照组比较，Lp（a）组GMCs的MTr增生率、PCNA阳性率、培养上清ICAM-1含量明显增高，差异有统计学意义（P〈0．01）。与Lp（a）比较，Ox-LD（a）刺激后的GMCs MTT增生率、PCNA阳性率、培养上清ICAM-1含量明显增高，且Ox—Lp（a）2．5nmoL／L作用高于终浓度5nmoL／L的Lp（a）组（P〈0．01）。随着Ox—Lp（a）浓度的增加，GMCs的MTT增生率、PCNA阳性率、培养上清ICAM-1含量呈明显变化，Ox—LF（a）5nmol／L时达高峰，在Ox-Lp（a）10nmoL／L组出现下降，20nmoL／L明显下降，差异有统计学意义（P〈0．01）。随着处理时间的延长，GMCs的MTT增生率、PCNA阳性率、培养上清ICAM-1含量呈上升趋势，48h达到高峰，60h出现下降（P〈0.01）。GMCs上清的ICAM-1浓度与MTT和PCNA阳性表达率呈正相关（P〈0．01）。结论Lp（a）、Ox—Lp（a）能明显影响GMCs的增生，Ox-Lp（a）生物学作用强于Lp（a）。Ox—Lp（a）对GMCs的作用呈剂量依赖性和时间依赖性，小剂量时刺激GMCs的增生，大剂量则表现为细胞毒作用。Ox—Lp（a）明显影响大鼠GMCs的ICAM-1表达，GMCs上清的ICAM-1浓度与MTT和PCNA阳性表达率呈正相关。提示Ox—Lp（a）对肾小球系膜细胞的作用可能与ICAM-1有关。     

红参发酵产物对高糖下大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质降解的影响

目的：探讨红参发酵产物（FRGE）对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖和细胞外基质（ECM）降解的影响,阐明FRGE对糖尿病肾病（DN）的防治作用及可能机制。方法：将GMCs分为正常对照（NG）组、高糖（HG）组、高糖＋不同浓度（3.75、7.50和15.00 mg·L^-1）FRGE组。四甲基偶氮唑盐（MTT）光吸收法观察各组GMCs的增殖率,酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养细胞上清中Ⅳ型胶原蛋白（Col Ⅳ）的水平,蛋白免疫印迹技术（Western blotting）检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶组织抑制物2（TIMP-2）蛋白表达水平。结果：与NG组比较,HG组GMCs增殖率升高（P<0.01）,Col Ⅳ水平升高（P<0.01）,TIMP-2蛋白表达水平上调（P<0.01）,MMP-2蛋白表达水平下调（P<0.01）;与HG组比较,高糖＋不同浓度FRGE组GMCs增殖率均降低（P<0.01）,Col Ⅳ水平降低（P<0.01）,TIMP-2蛋白表达水平下调（P<0.01）,MMP-2蛋白表达水平上调（P<0.01）。结论：FRGE可通过抑制高糖诱导的大鼠GMCs增殖,促进ECM的降解,延缓DN的发生发展。     

TNF-α、IL-1β和LPS诱导人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的研究

摘要：目的  体外观察眼表烧伤后早期的炎症因子,如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）,以及晚期的炎症因子脂多糖（LPS）对体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖和凋亡的影响,并为下一步探讨眼表烧伤后不同时期炎症致内皮损伤的机制提供理论基础。方法  本实验随机分为4组：正常组、TNF-α组、IL-1β组和LPS组。采用活细胞计数法试剂盒（CCK-8）法测定细胞的增殖活性,台盼蓝排除染色法检测细胞的增殖数量,吖啶橙/溴化乙锭（AO-EB）染色法检测细胞的凋亡,以及采用流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果  ①CCK-8法检测结果显示,正常组细胞的增殖活性增高,其余3组细胞的增殖活性下降,且LPS组细胞的增殖活性下降的趋势大于IL-1β组和TNF-α组,IL-1β组细胞增殖活性下降的趋势大于TNF-α组;②台盼蓝排除染色法的定量检测结果趋势类似于CCK-8法检测结果;③AO-EB染色结果显示,正常组细胞被吖啶橙（AO）染成绿色或黄绿色,细胞形态和结构正常,未见细胞核着橘红色荧光的凋亡细胞或死亡细胞,而其余3组均可见细胞核着橘红色荧光的凋亡细胞或死亡细胞。流式细胞仪检测4组细胞的凋亡率,同样TNF-α组、IL-1β组和LPS组细胞的凋亡率均高于正常组细胞,且LPS组细胞的凋亡率大于IL-1β组;IL-1β组细胞的凋亡率大于TNF-α组,差异有统计学意义（P <0.05）。结论  早、晚期的炎症介质TNF-α、IL-1β及LPS均可降低HUVEC的增殖活性,增加其凋亡率,但诱导的程度不同,这可能与不同炎症介质激活的主要分子信号通路不同有关。