三种国产乙型肝炎病毒基因荧光定量试剂检测结果分析

乙型肝炎病毒基因(HBVDNA)检测是反映HBV复制的最直接、可靠的指标,它对乙型肝炎临床诊断、治疗监测以及预后判断有着至关重要的作用.检测HBVDNA的方法有很多种,每种方法都有其各自的优点、缺点.因此导致不同医院之间的检测结果难以进行横向比较.笔者选用国内试剂厂家中的三种HBVDNA FQPCR试剂盒,对23例已知的慢性乙型肝炎患者血清、3例已知的正常血清进行HBVDNA定量检测,以横向比较三种试剂检测结果之间是否存在差异.     

三种乙型肝炎病毒基因检测方法的比较与评价

目的:探讨广州达安、上海复兴、上海之江三种国产乙型肝炎病毒基因(HBV-DNA)实时荧光定量PCR试剂盒的临床检测结果间的差异性。方法:选取138例已知的慢性乙型肝炎患者血浆标本,5例已知正常血浆标本每个标本均用三种国产HBV-DNA实时荧光定量PCR试剂盒进行HBV-DNA定量测定,然后再比对检测结果并分析相互之间是否存在差异。结果:分别用上述三种试剂盒进行HBV-DNA定量检测,结果显示三种国产试剂盒HBV-DNA定量检测结果相差在半个数量级以内的占73.9%(102/138),相互之间小于一个数量级的占94.9%(131/138),大于一个数量级而小于两个数量级的占5.07%(7/138),经统计学分析结果无显著性差异(P>0.05)。结论:上述三种国产HBV-DNA实时荧光定量PCR试剂盒在同一台仪器上的检测结果相互之间差异很小,有很好的准确度,它们的检测结果可以相互进行比较。     

乙型肝炎病毒（HBV）荧光定量检测与免疫学标志物检测的比较与分析

目的了解马鞍山地区HBV-DNA荧光定量检测与HBV血清标志物检测结果之间的关系。方法运用荧光定量PCR（FQ-PCR）检测患者血清中的HBV—DNA,同时运用ELISA法检测HBV血清标志物,并对结果进行对比研究。结果HBsAg（＋）HBeAg（＋）HBcAb（＋）组患者血清HBV-DNA检出率最高为95.16％,HBsAg（＋）HBeAg（-）HBcAg（＋）组患者血清HBV-DNA检出率为41.46％,HBsAg（＋）HBeAb（＋）HBcAb（＋）组患者血清HBV—DNA检出率为24.52％,HBsAg（＋）HBeAg（＋）HBcAb（＋）组HBV—DNA检出率显著高于其它各组（P〈0.05）。结论HBV—DNA检测水平与血清学标志物HBeAg高度相关,两种方法联合检测对临床诊断与抗病毒药物治疗具有重要指导意义。     

乙肝HBV DNA荧光定量检测与血清标志物结果相关性分析

目的 研究乙肝血清学标志物（HBV-M）结果与HBV-DNA水平的关系，分析HBV DNA阳性率在各年龄组的分布情况。方法对深圳市部分服务行业人员血清应用荧光定量PCR检测和ELISA法检测并对结果进行分析。结果1781例乙肝血清学标志物阳性血清中有1102例HBV-DNA阳性。其中883例1．3．5阳性（俗称“大三阳”）血清中HBV-DNA的阳性率为96．15％；722例1．4．5阳性（俗称“小三阳”）血清中HBV-DNA的阳性率为24．38％；138例1．5阳性血清中HBV-DNA的阳性率为38．41％；22例1．3阳性血清中HBV-DNA的阳性率为90．91％；11例HBsAg阳性血清中HBV-DNA阳性率为36．36％。结论两种方法检测乙肝标志物有密切的相关性。荧光定量PCR是检测HBV-DNA含量较精确的方法，能正确反映乙肝病毒的复制水平和活跃程度；HBsAg和HBeAg与HBV-DNA含量有着明显的相关关系。     

荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒

聚合酶链反应 (PCR)是目前检测血清中 HBV- DNA的最敏感方法 ,但 PCR只能定性分析 ,无法给出临床需要的定量结果 ,其最终产物需用电泳法检测 ,易引起 PCR产物的交叉污染 ,且操作繁琐 ,不利于进行大规模样品分析。本文采用实时荧光定量 PCR方法 (PCR,FQ- PCR) [1 ] 测试了 2 0 1份血清标本 ,并同时采用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)进行对照 ,现报告如下。1　材料和方法1.1　标本来源 :收集本院病房及门诊确诊或怀疑乙肝患者血清 171份 ,健康献血员血清 30份。1.2　仪器 :PE770 0自动荧光 PCR仪 (美国 Perkin Elmer公司 )和日立…     

荧光定量PCR检测HBV-DNA与乙肝两对半检测结果的相关性探讨

目的:探讨HBV-DNA的检出情况与乙肝两对半结果之间的关系。方法:运用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测307例疑似乙肝患者血清中的HBV-DNA,同时运用ELISA方法进行两对半指标的检测,并对结果进行相关性探讨。结果:HBsAg( )HBeAg( )HBcAb( )组(大三阳组)患者血清HBV-DNA检出率为98.15%(53/54),平均拷贝数为7.56E 06/m l;HBsAg( )HBeAb( )HBcAb( )组(小三阳组)患者血清HBV-DNA检出率为27.78%(15/54),平均拷贝数为3.79E 05/m l;HBsAg( )HBcAb( )组血清HBV-DNA检出率为91.18%(31/34),平均拷贝数为2.85E 05/m l,小三阳组HBV-DNA阳性检出率及拷贝数均低于大三阳组,且与大三阳组比较均具有显著性差异(P<0.01,P<0.05);HBsAb( )组血清HBV-DNA检出率为1.6%(1/63),平均拷贝数为1.13E 08/m l;HBcAb( )组血清HBV-DNA检出率为16.67%(1/6),平均拷贝数为3.00E 04/m l;HBsAb( )HBeAb( )HBcAb( )组血清HBV-DNA检出率为12.50%(4/32),平均拷贝数为3.00E 05/m l;HBsAg( )组血清HBV-DNA检出率为0(0/2);HBV-M全阴性组HBV-DNA检出率为1.61%(1/62),平均拷贝数为2.75E 05/m l。结论:HBV-M阴性患者仍有HBV-DNA阳性者,因此在检测中应联合应用两种方法进行检测,提高检出率,避免漏诊,为临床HBV感染、复制及传染性的判断以及指导治疗提供更为可靠的判定依据。     

3种HBV DNA荧光定量PCR试剂检测结果比较

目的 比较及评价3种HBV-DNA荧光定量PCR试剂检测结果的差异.方法 同时用3种HBV-DNA荧光定量PCR试剂对已知结果的质控血清、标准品及本院79份HBsAg阳性的临床标本进行检测,并对检测结果进行比较分析.结果 试剂A、B、C检测阳性率分别为41.77%(33例)、45.57%(36例)和41.77%(33例).3种方法结果一致者66例,总符合率83.54%.试剂A、B与试剂C检测结果相比差异有统计学意义(P<0.05),试剂A与B检测结果相比差异无统计学意义(P>0.05).试剂A与C的灵敏度、特异性均为77.78%、88.37%;试剂B灵敏度为89.66%、特异性80.00%.结论 试剂A与B总体性能优于试剂C,适于临床检测与筛查.实验室必须选择质量好且符合自己实验室要求、与本实验室仪器相匹配的试剂以保证检验质量.     

荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义

目的：分析386例以荧光定量PCR法检测的HBV-DNA结果,以探讨其临床价值。方法：血清标本同时以酶免法检测乙肝两对半,以荧光定量PCR法检测HBV-DNA。结果：大三阳模式中HBV-DNA定量阳性率为95.5%,拷贝数为（4.32±1.63）×10^6/ml;小三阳模式中HBV-DNA定量阳性率为55.5%,拷贝数为（2.45±2.23）×10^5/ml;HBsAg、HBcAb阳性模式中HBV-DNA定量阳性率为35.7%,拷贝数为（6.74±1.18）×10^4/ml;HBsAg、HBeAg阴性模式中HBV-DNA定量阳性率为3.84%,拷贝数为（2.14±1.11）×10^4/ml。结论：荧光定量PCR法检测HBV-DNA可以直接反映体内乙肝病毒（HBV）感染状态及病毒载量情况,有利于判断疾病的严重程度和传染性,更有利于临床治疗的药物选择和疗效观察。     

165例乙型肝炎病毒携带产妇乳汁HBV-DNA检测及临床分析

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)携带产妇乳汁中HBV携带状况以及HBV携带母乳喂养的安全性。方法选择HBV携带产妇165例(肝功能均正常)及30例HBV标志物(HBVM)阴性产妇,分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测产妇血清HBVM和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测产妇初乳HBV-DNA,并对结果进行综合分析。结果(1)165例HBVM阳性组产妇乳汁HBV-DNA阳性53例(32.12%),对照组30例中无1例产妇乳汁HBV-DNA阳性;(2)165例HBV携带产妇中,母血HBsAg、HBeAg、抗-HBc(+)53例产妇乳汁中HBV-DNA阳性33例(62.3%),HBsAg、抗-HBe、抗-HBc(+)85例产妇乳汁中HBV-DNA阳性9例(10.6%),HBsAg、HBeAg(+)7例产妇乳汁中HBV-DNA阳性5例(71.4%),HBsAg、抗-HBc(+)13例产妇乳汁中HBV-DNA阳性4例(30.8%),HBsAg(+)7例产妇乳汁中HBV-DNA阳性2例(28.6%);(3)165例HBV携带产妇中,母血HBeAg(+)60例产妇乳汁中HBV-DNA阳性38例(63.3%),HBe...     

乙型肝炎病毒荧光定量聚和酶链反应检测结果分析

乙肝病毒长期以来一直危害着人们的健康 ,乙肝患者血清病毒水平并非衡定不变 ,而是随肝脏炎症情况波动 ,乙肝病毒含量在病程中的变化规律一直为人们所关注 ,ＦＱ -ＰＣＲ结合ＰＣＲ和探针杂交荧光标记的优点 ,能够及时准确的反映患者所处的临床阶段及药物的疗效。1　材料和方法1.1. 　检测对象　收集表面抗原阳性血清 111例 ,其中ＨＢ ｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢＣ阳性血清 4 7例 ,ＨＢｓＡｇ、ＨＢｓＡｂ、抗ＨＢＣ阳性血清 30例 ,ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢＣ阳性血清 34例 ,同时收集ＨＢｓ、抗ＨＢＣ阳性血清 2 0例 ,抗ＨＢｓ阳性血清 2 9例 ,…     

荧光定量分型PCR法与直接测序法检测HBV-DNA水平的应用价值比较

目的比较荧光定量分型PCR法与直接测序法检测HBV-DNA水平的应用价值。方法选取该院2012年1月—2013年12月收治的126例符合入选标准的HBV患者,分别采用荧光定量分型PCR法与直接测序法检测HBV-DNA水平,对HBV-DNA基因分型结果进行比较分析。结果 126份样本只检测出3种基因分型（B型、C型、B/C混合型）,其中B型占明显优势。荧光定量分型PCR法B/C混合型检出率明显高于直接测序法（P〈0.001）;一致性检验表明两种检测方法的一致性较好（Kappa〉0.75）;TA克隆结果与荧光定量分型PCR法一致。结论荧光定量分型PCR法检测HBV-DNA水平应用价值较直接测序法高,值得临床推广应用。     

实时荧光定量PCR检测限的统计推断

检测限是检测方法的重要性能指标,用Poisson分布的概率函数分式计算一次抽样检测出现的结果推论总体出现该结果的概率。以实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒DNA结果为例,计算可知,一次抽样反应管的检测结果≥4时,才可推论总体与0(空白)差异有显著性(P<0.05)。因而检测血清中病原体时扩增反应管中的检测限是4拷贝/ul计算也可知,1拷贝/ul表示一次抽样的结果为0的概率可达0.368,结果在0拷贝/ul～4拷贝/ul的概率为0.996,而1000拷贝/ml表示一次抽样结果为0的概率为0。结果在905拷贝/ml～1095拷贝/ml的概率为0.997;而100000拷贝/L表示一次抽样结果在997000拷贝/L～1003000拷贝/L的概率为0.997。抽样单位ul不能随意放大为ml甚至L。     

国产荧光定量PCR与COBAS Amplicor检测HBV DNA的结果比较

目的比较国产实时荧光定量PCR（FQ PCR）试剂与罗氏COBAS Amplicor方法检测乙型肝炎病毒（HBV）DNA的结果。方法据COBAS Amplicor 的FQ PCR试剂（A）的检测结果,抽取151份慢性乙型肝炎（慢乙肝）血清标本,采用两种国产实时FQ PCR试剂B、C对血清标本进行HBV DNA平行检测,以分析国产试剂的敏感度、特异度及与试剂A的相关性。结果试剂A、B、C测得的HBV DNA结果分别为（5.87±1.64）、（5.11±1.34）、（4.93±1.35）log10?copies/mL,试剂B、C与试剂A的相关系数分别为0.947、0.937。3种试剂检测结果总体差异有统计学意义（P＜0.05）,试剂B、C与试剂A检测结果相比差异有统计学意义（P＜0.05）。低HBV载量标本,试剂B、C与试剂A相关性较低。以试剂A为准,总体灵敏度、特异度分别为试剂B 90.4％、56.3%,试剂C 77.0%、100%。结论试剂B、C与试剂A在检测HBV DNA方面有较好一致性,但在低HBV载量时可靠性较低。试剂B灵敏度高,试剂C特异度高。     

阳春砂实时荧光定量PCR内参基因的筛选

【目的】筛选稳定表达的内参基因,用于阳春砂不同发育时期的果皮和种子团中基因表达量实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测的校正。【方法】以阳春砂3个不同发育时期的果实(分为果皮和种子团)为材料,根据高通量测序得到的转录组和表达谱数据,选择5个表达稳定的常用内参基因β-actin、EF-1α、GAPDH、PGK和TUA作为候选基因,并利用qPCR技术检测它们在不同样品中表达水平的变化,使用GeNorm和NormFinder软件对基因的稳定性进行分析。【结果】5个内参基因在不同发育时期的果皮和种子团中的表达稳定性有明显的差异,其中GeNorm分析得到的内参基因的稳定顺序为:EF-1α=TUAPGKGAPDHβ-actin,NormFinder的分析结果中稳定性最好的是EF-1α,其次为TUA,其他3个内参基因稳定性的排列顺序与GeNorm软件的结果一致。【结论】可选用EF-1α和TUA作为阳春砂果实发育过程中基因表达量差异分析的双内参基因。     

Roche定量试剂和国产PCR试剂检测HBV-DNA的比较分析

目的探讨Roche定量试剂和国产PCR试剂检测慢性HBV感染者血清HBV-DNA的差异。方法收集慢性HBV感染患者366例,包括慢性乙型肝炎患者247例,乙肝肝硬化失代偿患者72例,乙肝相关性肝癌患者28例,乙型慢加急性肝衰竭患者19例;采用Roche定量试剂(试剂A)和和国产PCR试剂(试剂B)检测患者血清HBV-DNA,比较检测结果的差异、相关性及影响因素。结果试剂B 124例(33.88%)低于检测下限而试剂A高于检测下限(包括24例超过1.00×10~3IU/m L,考虑试剂B为假阴性);试剂A的阳性率(70.49%)显著高于试剂B(36.61%)(P0.01)。试剂A的HBV-DNA检测均值高于试剂B(P0.05),HBe Ag滴度低者、终末期患者更容易出现COBAS系统的血清HBV-DNA检测值高于国产试剂的情况。Spearman相关分析显示,两种试剂在1.00×10~3IU/m LHBV-DNA1.00×10~7IU/m L时的相关性较好(r=0.74,P0.01)。结论国产PCR试剂可以满足慢性HBV感染患者抗病毒治疗随访、监测的需求;但针对那些怀疑有低病毒复制状态或病毒变异导致HBV-DNA检测结果假阴性的患者,有必要用COBAS系统予以复核。     

200例慢性乙型病毒性肝炎患者血清标志物和HBV-DNA联合检测结果的分析

目的探讨慢性乙型肝炎血清标志物与血清HBV-DNA之间的相关性,评价血清标志物和HBV-DNA联合检测的应用价值。方法采用荧光定量聚合酶链反应检测我院收治的200例乙型肝炎患者的血清标志物和HBV-DNA。结果重度组HBV-DNA检出率为92.14%,中度组检出率为56.02%,轻度组未检出,且重度组高拷贝数所占的百分率远高于中度组。结论荧光定量聚合酶链反应检测血清HBV-DNA可检测HBV的复制状态和真实感染程度,可补充慢性乙肝病毒的血清标志物检测,同时检测HBV-DNA和血清标志物,对慢性乙肝的诊断及预后判断具有较大的价值。     

比较分析痰涂片及荧光定量PCR在诊断肺结核中的作用

目的探讨建立更快速、准确的痰结核分枝杆菌检测方法。方法采用痰涂片抗酸染色法和荧光定量PCR技术对痰结核分枝杆菌进行检。结果荧光定量PCR技术的阳性检出率是63.7%（571/897）,明显高于抗酸染色法的43.4%（389/897）。2种方法检测对照组的结果均为阴性,特异度为100%（103/103）。结论荧光定量PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,具有重要的应用价值。     

两种HBV-DNA荧光定量PCR检测比较

目的优化HBV—DNA特异性定量检测方法。方法采用荧光定量PCR检测法，用10份正常血清、10份HBV高滴度（10^6 IU／mL）血清和梯度稀释的HBV克隆质粒标准品，验证两种检测方法的重复性、特异性和灵敏度；并将结果进行配对检验。结果10份正常血清标本均无假阳性HBV—DNA检测结果，特异性极好；10份HBV高滴度血清中检出1份YMDD变异，灵敏度均可达到10^3 IU／mL，重复性和灵敏度两者之间无显著性差异（t=0．702，P〉0．05）。结论该方法特异性和灵敏度高，可用于HBV的临床检测和科学研究。