纳米钙补肾中药对骨质疏松症大鼠肠黏膜中CaBP-D9K的mRNA和蛋白表达的影响

目的 研究骨质疏松症大鼠肠黏膜中钙结合蛋白CaBP—D9K的mRNA和蛋白表达，揭示骨质疏松症的发病机理，阐述纳米钙补肾中药的调节作用机制。方法用切除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型，用纳米钙及具有益肾填精、补钙壮骨作用的纳米钙补肾中药大、中、小剂量对实验大鼠治疗12周，以骨疏康颗粒剂、雌二醇（E2）及钙尔奇D600作为阳性对照组，正常大鼠和模型空白组为空白对照组。用PCR法、Western印迹法检测骨质疏松症大鼠肠黏膜中CaBP-D9K的mRNA和蛋白表达。结果正常大鼠肠黏膜组织可以在基因、蛋白水平表达钙结合蛋白CaBP-D9K，而且在肠钙吸收中可能起到重要作用。大鼠骨质疏松症的发生与肠黏膜组织中钙结合蛋白CaBP—D9K mRNA和蛋白表达的变化有关，从而影响肠钙的吸收。结论纳米钙补肾中药通过调控大鼠肠黏膜钙结合蛋白CaBP—D9K mRNA和蛋白表达，促进肠钙的吸收，对于骨质疏松症有一定的防治作用。     

补肾中药对去势大鼠肾组织中钙结合蛋白-D9K中mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究补肾中药对去势大鼠肾中钙结合蛋白-D9K(CaBP-D9K)基因和蛋白表达的影响.方法:将雌性Wistar大鼠随机分为7组:正常组、模型组、补肾中药低剂量组、中剂量组、高剂量组、骨疏康组、牡蛎碳酸钙组.采用大鼠去势的方法复制骨质疏松症模型,应用补肾中药防治12周后取材,并用RT-PCR法和West-ern杂交法检测大鼠肾组织CaBP-D9K基因和蛋白表达.结果:大鼠肾组织可以在基因、蛋白水平表达钙结合蛋白CaBP-D9K;大鼠骨质疏松症的发生与肾组织中CaBP-D9K的基因和蛋白表达的变化有关.结论:补肾中药通过调节大鼠肾组织中钙结合蛋白CaBP-D9K基因和蛋白表达,促进钙的吸收,防治骨质疏松症.     

肾虚骨质疏松症大鼠小肠黏膜、肾组织CaBP-D9k、CaBP-D28k的mRNA及蛋白表达

目的 观察去卵巢所致肾虚骨质疏松症大鼠模型对小肠黏膜、肾组织CaBP—D9k、CaBP-D28k的mRNA及蛋白表达的影响，以及纳米钙补肾中药的疗效及其调控作用。方法复制去卵巢所致肾虚骨质疏松症大鼠实验动物模型，按体重分层随机分为正常组、模型空白组、纳米钙补肾中药高、中、低剂量组、牡蛎碳酸钙阳性药物对照组、骨疏康阳性药对照组。灌胃给药12周。应用XR-36型双能X线骨密度仪测定股骨骨密度，DU640核酸蛋白分析仪检测骨吸收指标-血清抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP），全自动生化分析仪检测骨形成指标-血清碱性磷酸酶（ALP），以评价动物模型的成立及药物疗效。检测小肠黏膜、肾组织CaBP-D9k,CaBP-D28k的mRNA和蛋白表达，以探讨绝经后骨质疏松症发病机制及纳米钙补肾中药的疗效机理。结果成功复制去卵巢所致肾虚骨质疏松症大鼠实验动物模型，模型空白组骨密度明显降低（P〈0．01），血清TRAP、ALP活性均显著增高（P〈0．01），符合高转换型骨质疏松症特点。模型空白组小肠黏膜CaBP-D9k mRNA、CaBP-D28k,mRNA表达水平明显下降，CaBP—D28k的蛋白表达亦有同样趋势，而肾组织CaBP-D9k mRNA、CaBP—D28k mRNA及其蛋白表达明显升高。结论提示绝经后骨质疏松症肠钙吸收减少，骨转化率增高，尿钙流失增加。应用纳米钙补肾中药具有明显防治效果，对钙代谢具有双向调节作用：明显上调小肠黏膜CaBP-D9k mRNA、CaBP-D28k mRNA及其的蛋白表达水平，即促进肠钙吸收增加；而肾组织CaBP-D9k mRNA、CaBP-D28kmRNA、CaBP-D28k的蛋白表达则有下调趋势，其作用机制与调整钙代谢平衡有密切关系。     

糖皮质激素诱导肾虚骨质疏松症大鼠骨组织中PPARγ2的mRNA及蛋白表达的影响

目的:研究糖皮质激素骨质疏松症大鼠骨组织中PPARγ2的mRNA和蛋白表达,揭示糖皮质激素骨质疏松症的发病机理,阐述纳米钙补肾中药的调节作用机制。方法:用糖皮质激素注射的方法复制骨质疏松症模型,用纳米钙及具有益肾填精、补钙壮骨作用的补肾中药高、低剂量对实验大鼠治疗8周,以骨疏康颗粒、盖天力钙片作为阳性对照组,正常大鼠和模型空白组为空白对照组。用PCR法、Western印迹法检测骨质疏松症大鼠骨组织中PPARγ2的mRNA和蛋白表达。结果:正常大鼠骨组织可以在基因、蛋白水平表达PPARγ2,而且在骨髓脂肪细胞分化中可能起到重要的作用,糖皮质激素对大鼠骨质疏松症的发生与骨组织中PPARγ2 mRNA和蛋白表达的变化有关,从而影响骨髓脂肪细胞形成。结论:纳米钙补肾中药通过调控大鼠骨组织中PPARγ2 mRNA和蛋白表达,抑制骨髓脂肪细胞的形成,从而对糖皮质激素性骨质疏松症有一定的防治作用。     

纳米钙补肾中药对骨质疏松症大鼠肠钙作用机制的研究

目的:揭示骨质疏松症的发病机理,阐述纳米钙补肾中药的调节作用机制。方法:制备大鼠骨质疏松症模型;以纳米钙及具有益肾填精、补钙壮骨作用的纳米钙补肾中药(大、中、小)剂量对实验大鼠治疗12 w,以骨疏康颗粒剂、雌二醇(E2)及钙尔奇D600作为阳性对照组,正常大鼠和模型空白组为空白对照组;检测离体骨密度,血清抗酒石酸酸性磷酸酶、骨钙素等指标,以及肠粘膜中ERK1/ERK2的蛋白表达。结果:给药12 w后,各用药组股骨、股骨头的骨密度值均明显增加;治疗组和阳性药物对照组均能显著降低去卵巢大鼠血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)值,但仍未达到正常组水平;用药后,虽能够提高骨钙素含量值,但与模空组比较仍无显著差异;大鼠肠粘膜组织可检测到丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)中ERK1/ERK2的蛋白表达,采用Western blot分析其表达及显影胶片扫描的吸光度值,与正常组比较,模型空白组的表达增强;纳米钙组、纳米钙补肾中药各剂量组用药后12 w,与模型空白组比较,均可明显下调ERK1及ERK2蛋白表达水平。结论:正常大鼠肠粘膜组织中存在信号转导MAPK通路中的ERK途径,表明其可能在肠钙吸收中起重要作用;大鼠骨质疏松症的发生与MAPK通路中ERK通路的异常变化密切相关,可能是大鼠骨质疏松症发生的重要发病机制之一;纳米钙补肾中药能够调控MAPK通路中ERK通路的信号转导。     

补肾中药复方对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠骨和肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达的影响

目的:观察糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)大鼠骨、肾组织同源异形盒基因5(Dlx5 mRNA)及蛋白表达,探讨GIOP的发病机制、补肾中药复方的疗效机制及其与健脾、活血中药复方及骨疏康颗粒的比较。方法:肌肉注射地塞米松复制GIOP大鼠模型,实验设正常组、模型组、补肾组、健脾组、活血组、阳性对照组。造模及灌胃给药9周。测定股骨骨密度,RT-PCR及Western Blot检测骨、肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组股骨骨密度明显降低(P0.01)、骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显降低(P0.01)、肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组比较,补肾组及阳性对照组股骨骨密度明显升高(P0.01)、骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显上调(P0.01)、肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达明显下调(P0.01)。结论:骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达降低、肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达升高可能是GIOP的发病机制之一;补肾中药复方可能通过上调骨组织Dlx5 mRNA及蛋白表达、下调肾组织Dlx5 mRNA及蛋白表达,有效防治GIOP。     

补肾益髓中药复方对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠肾组织Osterix mRNA及蛋白表达的影响

目的观察糖皮质激素性骨质疏松症（GIOP）大鼠肾组织Osterix mRNA及蛋白表达,探讨GIOP的发病机制以及补肾益髓中药复方的疗效机理。方法肌注地塞米松复制GIOP大鼠模型,实验设正常组、模型空白组、补肾益髓中药复方组、补中益气颗粒组、血府逐瘀胶囊组、骨疏康颗粒阳性对照组。造模及灌胃给药9周。应用XR-26型双能X线骨密度仪测定股骨骨密度,实时定量RT-PCR及WesternBlot检测肾组织OsterixmRNA及蛋白表达。结果与正常组比较,模型空白组股骨骨密度明显降低（P〈0．01）、肾组织Osterix mRNA及蛋白表达明显升高（P〈0．01）;与模型空白组比较,补肾益髓中药复方组股骨骨密度明显升高（P〈0．01）、肾组织OsterixmRNA及蛋白表达明显下调（P〈0．01）。结论肾组织OsterixmRNA及蛋白表达升高可能是GIOP的发病机制之一;补肾益髓中药复方可能通过下调肾组织OsterixmRNA及蛋白表达,有效防治GIOP。     

电针对绝经后骨质疏松症模型大鼠肠黏膜钙结合蛋白-D9kmRNA和蛋白表达的影响

目的 观察电针对去卵巢大鼠模型肠黏膜钙结合蛋白-D9k（CaBP-D9K）mRNA和蛋白表达的影响,探讨针灸治疗绝经后骨质疏松症可能机制。方法 将60只3月龄SD健康雌性大鼠随机分为手术组和假手术组,3个月造模成功后将手术组随机分为模型组、假电针组、电针组、药物组。干预治疗12星期后,测定腰椎及股骨骨密度（BMD）,然后处死大鼠,提取小肠黏膜,采用荧光实时定量PCR和Western blotting检测CaBP-D9K mRNA和蛋白表达。结果 成功复制绝经后骨质疏松症模型,经电针组和药物组干预治疗12星期后,其大鼠骨密度与模型组相比均有明显提高,荧光实时定量PCR和Western blotting检测结果显示电针组和药物组大鼠小肠黏膜CaBP-D9K mRNA和蛋白表达上调,但电针组上调CaBP-D9K mRNA的水平不及药物组。结论 针灸治疗绝经后骨质疏松症机制之一可能与上调小肠黏膜CaBP-D9K mRNA和蛋白表达量,从而增强肠钙吸收有关。     

纳米钙补肾中药对激素诱导骨质疏松大鼠股骨生物力学及骨形态的影响

目的：观察纳米钙补肾中药对氢化可的松诱导骨质疏松大鼠股骨生物力学及骨形态的影响。方法：氢化可的松15mg·kg^-1肌注，隔日1次连续8周，诱导建立骨质疏松大鼠模型，纳米钙补肾中药每日上午灌胃1次，连续8周后检测股骨生物力学指标及骨形态计量学指标。结果：纳米钙补肾中药组与模型组相比股骨的最大载荷，抗压强度，轴向刚度，水平剪切刚度均明显增高（P〈0．01）；骨小梁面积百分数（％Tb·Ar），骨小梁厚度（Tb·Th），骨小梁数量（Tb·N）显著增加（P〈0．01）；骨小梁分离度（Tb·Sp）显著降低（P〈0．01）。结论：纳米钙补肾中药对氢化可的松所致的大鼠骨强度的降低和结构的改变有明显的对抗作用。     

糖皮质激素诱导肾虚骨质疏松症大鼠骨组织中BMP6/BMP7mRAN及蛋白表达的影响

目的:研究糖皮质激素性骨质疏松症大鼠骨组织中BMP6/BMP7的mRNA和蛋白表达,揭示糖皮质激素骨质疏松症的发病机理,阐述纳米钙补肾中药的调节作用机制。方法:用糖皮质激素注射的方法复制骨质疏松症模型,用纳米钙及具有益肾填精、补钙壮骨作用的补肾中药高、低剂量对实验大鼠治疗8周,以骨疏康颗粒、盖天力钙片作为阳性对照组,正常大鼠和模型空白组为空白对照组。用PCR法、Western印迹法检测骨质疏松症大鼠骨组织中BMP6/BMP7mRNA和蛋白表达。结果:正常大鼠骨组织可以在基因、蛋白水平表达BMP6及BMP7,模空组大鼠骨组织中的BMP6/BMP7 mRNA和蛋白表达水平明显的下降。纳米钙补肾中药高、低剂量组、盖天力组、骨疏康组,用药8周后,与模空组相比较,均可上调骨组织中BMP6/BMP7 mRNA和蛋白的表达水平。结论:纳米钙补肾中药通过调控大鼠骨组织中BMP6/BMP7 mRNA和蛋白表达,抑制骨吸收,促进骨形成,从而对糖皮质激素性骨质疏松症有一定的防治作用。     

补肾方药的不同组分对骨质疏松大鼠的影响

目的 :观察补肾方药的不同组分对骨质疏松大鼠多指标的影响。方法 :每周 2次肌肉注射地塞米松 0.1mg·100g^-1体重 ,加喂食低钙饲料 (钙含量 0.2% ) ,饮用蒸馏水 ,诱发大鼠骨质疏松。模型成功后 ,应用经不同浓度醇提处理的补肾方药的不同组分进行治疗 ,之后取血和骨组织 ,观察骨质疏松大鼠的血生化指标及骨形态计量学参数的变化。结果 :补肾方药的A ,B ,C ,D各组分对大鼠一般状况的改善程度 ,对血钙、磷、碱性磷酸酶 (ALP) ,甲状旁腺素 (PTH) ,降钙素 (CT) ,CT/PTH ,雌二醇 (E₂ ) ,睾酮 (T) ,T/E₂ 和骨组织形态计量学等多指标的影响 ,均不及总组分。结论 :补肾方药经处理后 ,可能破坏或损失了某些有效成分或是破坏了其整体集合作用 ,而使各组分的治疗效果均不如总组分为佳。     

补肾方药对地塞米松所致实验性骨质疏松大鼠卵巢功能的影响

目的 :探讨补肾中药对地塞米松 (DXM )所致实验性骨质疏松 (OP)大鼠卵巢功能的影响。方法 :采用放射免疫分析方法对正常对照组、病理对照组、中药治疗组大鼠生长激素 (GH)、黄体生成素(LH)、卵胞生成素 (FSH)、雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)、睾酮 (T)和泌乳素 (PRL)的水平进行比较。并对三组大鼠卵巢、子宫分别称湿重和进行组织形态学观察。结果 :病理对照组与正常对照组大鼠比较GH、LH、FSH、E2和P的水平明显降低 (P <0 0 5) ,子宫和卵巢重量减轻 (P <0 0 5)。中药治疗组与病理对照组相比GH、LH、FSH、E2 和P的水平显著增高 (P <0 0 5) ,子宫和卵巢重量增加 (P <0 0 5)。各组间T和PRL无显著性变化 (P >0 0 5)。组织形态学观察可见补肾中药能明显改善病理状态下大鼠卵巢和子宫的形态结构。结论 :补肾中药能提高大鼠体内GH、LH、FSH、E2 和P的水平 ,使子宫、卵巢重量增加 ,组织形态改善。说明补肾中药对DXM所致实验性骨质疏松大鼠有治疗作用。     

补肾中药对雄激素致不孕大鼠垂体、卵巢及肾上腺作用的实验研究

目的：探讨雄激素致不孕大鼠发病机理和中药治疗作用。方法：采用光镜、电镜、细胞培养、免疫组化、放免测定等方法，对补肾药治疗前后的ＡＳＲ的垂体，卵巢、肾上腺的形态学及内分泌功能进行同步观察。结果：ＡＳＲ的腺垂体细胞浆内有“脂滴”、“粒溶”、“空泡”、“自嗜”、卵巢呈无排卵；肾上腺皮质网状带增生，同时促卵泡激素、促黄体激素明显低下（Ｐ〈０．０５￣０．００５）；睾酮、脱氰表雄酮明显升高（Ｐ〈０．０１￣０．     

缩泉丸对肾虚多尿大鼠垂体ACTH mRNA及蛋白表达的影响

目的 通过研究缩泉丸对肾虚多尿大鼠垂体ACTH mRNA及蛋白表达的影响,阐明其补肾缩尿的机制。方法 采用腺嘌呤造成大鼠肾虚多尿模型,利用酶联免疫分析法分别检测正常对照组、模型对照组、缩泉丸（高、中、低剂量）组、金锁固精丸组动物血中ACTH、ALD的含量;并采用RT-PCR、免疫组化的方法检测各组动物垂体ACTH mRNA及蛋白的表达。结果 与模型对照组比较,缩泉丸中、高剂量组可显著提高肾虚多尿大鼠血中ACTH、ALD含量(P＜0.05～0.01);缩泉丸高剂量组可使肾虚多尿大鼠垂体ACTH mRNA表达明显增高(P＜0.01);缩泉丸低中高剂量组均可使肾虚多尿大鼠垂体ACTH蛋白阳性产物的表达增强,表达区域广泛分布于前叶和中间叶。结论 缩泉丸可上调肾虚多尿大鼠垂体ACTH mRNA及蛋白的表达,增强ACTH的功能,从而促进ALD的合成,发挥调节水液代谢的作用。     

补肾活血外治法对肾虚血瘀型大鼠种植窗期子宫内膜组织形态学的影响

目的：探讨补肾活血外治法对肾虚血瘀模型大鼠子宫内膜组织形态学的影响。方法：采用阴道涂片法选取处于动情前期普通级健康未交配雌性SD大鼠50只,随机分为空白组、模型组、补肾活血方高、低剂量组、五子组。除空白组外,其余各组采用羟基脲灌胃建造肾虚模型,与此同时,空白组、模型组给予蒸馏水灌肠,高、低剂量组分别给予高、低剂量补肾活血方药灌肠,五子组给予五子衍宗丸灌胃。妊娠第4天,各组大鼠均于末次给药后1 h,尾静脉快速推注10%的高分子右旋糖苷造成血瘀模型后处死,取子宫组织切片苏木精-伊红（HE）染色观察。结果：①模型组子宫内膜被覆上皮厚度低于空白组（P<0.05）;补肾活血方药高、低剂量组和五子组子宫内膜被覆上皮厚度与模型组相比有显著性差异（P<0.01）。②模型组腺体数、腺体面积总和及最大直径/最小直径明显低于空白组（P<0.05或P<0.01）;形状因子最接近“1”,与空白组相比有显著性差异（P<0.01）。补肾活血方高、低剂量组腺体数及腺腔面积总和较模型组有不同程度的增多（P<0.05或P<0.01）。五子组腺体数、腺腔面积总和、形状因子及最大直径/最小直径与模型组相比有显著性差异（P<0.05或P<0.01）。③模型组间质细胞核面积总和、间质细胞核积分光密度及间质血管数均低于空白组（P<0.01）;补肾活血方高、低剂量组间质细胞核面积总和、间质细胞核积分光密度和间质血管数较模型组均明显增高（P<0.05或P<0.01）;五子组间质细胞核面积总和及间质细胞核积分光密度明显高于模型组（P<0.01）。结论：外用补肾活血法能够有效改善肾虚血瘀模型大鼠子宫内膜组织形态,促使子宫内膜腺体与间质同步发育,从而发挥改善子宫内膜容受性的作用。     

Effect of Reinforcing Kidney to Replenish Marrow Herbs Compound on mRNA and Protein Expression of Osterix in Kidney Tissues of Rats with Glucocorticoid-Induced Osteoporosis

目的 观察糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)大鼠肾组织Osterix mRNA及蛋白表达,探讨GIOP的发病机制以及补肾益髓中药复方的疗效机理.方法 肌注地塞米松复制GIOP大鼠模型,实验设正常组、模型空白组、补肾益髓中药复方组、补中益气颗粒组、血府逐瘀胶囊组、骨疏康颗粒阳性对照组.造模及灌胃给药9周.应用XR-26型双能X线骨密度仪测定股骨骨密度,实时定量RT-PCR及Western Blot检测肾组织Osterix mRNA及蛋白表达.结果 与正常组比较,模型空白组股骨骨密度明显降低(P＜0.01)、肾组织Osterix mRNA及蛋白表达明显升高(P＜0.01);与模型空白组比较,补肾益髓中药复方组股骨骨密度明显升高(P＜0.01)、肾组织Osterix mRNA及蛋白表达明显下调(P＜0.01).结论 肾组织Osterix mRNA及蛋白表达升高可能是GIOP的发病机制之一;补肾益髓中药复方可能通过下调肾组织Osterix mRNA及蛋白表达,有效防治GIOP.