孕烷X受体介导佐米曲坦对大鼠肝细胞色素P450 CYP 3A的诱导作用

目的：考察佐米曲坦对大鼠肝细胞色素P450 CYP3A1/2的诱导是否由孕烷X受体（PXR）介导。方法：在构建的基于PXR的荧光素酶报告基因上,观察不同浓度佐米曲坦（10、50、100μmol.L^-1）对大鼠肝细胞色素P450 CYP3A1/2的诱导作用。以经典的诱导剂16α-氰基孕烯醇酮（PCN）作为阳性对照,空白溶剂（DMSO）作为阴性对照。结果：与阴性对照组相比,阳性对照组、佐米曲坦在100μmol.L^-1浓度时,对CYP3A1有明显的诱导作用,活性分别增加了1.93、1.96倍（P〈0.05）;阳性对照组、佐米曲坦10μmol.L^-1、50μmol.L^-1浓度组对CYP3A2也有明显的诱导作用,其活性分别增加了2.51、2.10、1.63倍（P〈0.01、〈0.05）。结论：PXR通路是佐米曲坦诱导大鼠CYP3A1/2的一个重要途径。     

几种植物化学物对人孕烷X受体介导的细胞色素P450 3A4转录调节作用

目的：观察几种植物化学物是否能通过活化孕烷X受体（PXR）诱导细胞色素P450 3A4（CyP3A4）的转录表达。方法：在人肝肿瘤细胞株HepG2细胞中，用瞬时共转染报告基因实验进行异鼠李素、大豆异黄酮、木犀草素、姜黄素和芦丁素共5种植物化学物在不同浓度和不同处理时间下对PXR介导的CYP3A4的转录调节作用研究。结果：5种植物化学物分别作用于HepG2细胞24h后，大豆异黄酮、木犀草素、姜黄素均能诱导PXR介导的CYP3A4基因的转录表达，诱导能力随浓度增强，而异鼠李素和芦丁素无类似作用。大豆异黄酮、木犀草素、姜黄素均能在1～50μmol／L浓度之间诱导CYP3A4的转录表达，这3种植物化学物在50μmol／L浓度时，诱导倍数分别为0．1％DMSO处理细胞的5．46倍、2．87倍和2．07倍。在不同处理时间的研究中，10μmol／L和50μmol／L大豆异黄酮、木犀草素和姜黄素均能在12h～48h内增强CYP3A4的转录表达，诱导能力随时间延长呈增强趋势。50μmol／L大豆异黄酮、木犀草素和姜黄素作用HepG2细胞48h后，诱导倍数分别为0．1％DMSO处理细胞的6．72倍、3．24倍和2．13倍。结论：植物化学物大豆异黄酮、木犀草素和姜黄素能通过活化PXR诱导CYP3A4的转录表达，异鼠李素和芦丁素则没有类似作用。     

孕烷X-受体对细胞色素P450 3A调控机制的研究进展

细胞色素P450 3A（CYP3A）是参与临床药物代谢的主要CYP同工酶之一。孕烷X受体（PXR）属于核受体超家族（NR）的NR1Ⅰ亚家族。该受体作为药物代谢的关键转录调控因子,参与CYP3A的诱导表达。药物可通过多种途径激活PXR受体调控cyp3a基因的表达,其中包括PXR与其他核受体、转录因子及细胞信号转导通路间的相互作用等多种途径。目前,基于PXR的筛选方法已广泛应用于早期新药研发。     

LPS对小鼠肠上皮细胞孕烷X受体、维甲素X受体α和cyp3a11基因表达的下调作用

目的 研究细菌脂多糖（LPS）对小鼠肠上皮细胞孕烷x受体（PXR）、维甲素X受体α（RXRot）和cyp3a11的影响。方法该研究由2个实验组成：实验一,小鼠经腹腔注射给予不同剂量的LPS（0．1～5．0mg／kg）,LPS注射后12h处死小鼠;实验二,小鼠用CYP3A诱导剂地塞米松（DEX,50mg／kg,ig）预处理3d,第4天,同时给予DEX（50mg／kg,ig）和LPS（1．0mg／kg,ip）,LPS注射后24h处死小鼠。用RT-PCR技术检测肠上皮细胞的PXR、RXRot和cyp3a11 mRNA水平。用Nash法测定微粒体红霉素N脱甲基酶（ERND）的活性。结果LPS不仅抑制小鼠肠上皮细胞cyp3a11 mRNA表达,也显著下调小鼠肠上皮细胞PXR和RXRot mRNA的水平,并呈明显的剂量-效应关系。LPS显著抑制DEX对小鼠肠上皮细胞cyp3a11 mRNA表达和ERND活性的诱导作用。结论 LPS明显抑制小鼠肠上皮细胞cyp3a11表达;LPS对cyp3a11的下调作用与PXR和RXRot表达下降有关。     

细胞色素P450介导的补骨脂酚代谢减毒

目的:分析补骨脂酚代谢的细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)表型,并在体外研究人肝微粒体(hu-man liver microsomes,HLM)对补骨脂酚代谢减毒的机制。方法:用HLM与化学抑制剂合用法以及人源重组CYP酶法分析代谢补骨脂酚的CYP酶亚型。用HPLC-MS法分析CYP亚型酶特异底物的代谢产物生成量,研究CYP酶广谱抑制剂1-氨基苯并三唑(1-aminobenzotriazole,ABT)对HLM中CYP亚型酶活性的抑制作用。用HPLC法分析补骨脂酚在HLM孵育液中的浓度,研究ABT对其代谢的影响。应用MTT法检测人肾近曲小管上皮细胞(human kid-ney-2,HK-2)的存活率来评价补骨脂酚对HK-2的毒性作用以及HLM中CYP酶和ABT对其毒性的影响。结果:HLM中的CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4参与了补骨脂酚的代谢,其中以CYP2C19的代谢转化率最高;2.5 mmol/L ABT能明显抑制0.5 g/L HLM中上述4种CYP同工酶活性,抑制率达到90%以上;2.5 mmol/L ABT对补骨脂酚在HLM的代谢抑制率为83.24%±2.13%。在HK-2细胞存活率实验中,ABT能显著降低HLM对30～90μmol/L补骨脂酚的代谢减毒作用(P0.05)。结论:HLM减低补骨脂酚HK-2细胞毒性的作用与HLM中CYP酶将补骨脂酚代谢转化为无毒或毒性较小的代谢产物有关,应用CYP酶广谱抑制剂能逆转HLM对补骨脂酚的代谢解毒作用。     

延胡索乙素对映体对小鼠CYP450酶诱导和抑制作用研究

目的:考察延胡索乙素(tetrahydropalmatine,THP)对映体对小鼠肝脏主要CYP450酶的体外抑制及体内诱导作用,从而预测其在临床上可能发生的代谢性药物相互作用,为临床合理用药提供科学依据。方法:以探针底物法,考察左旋延胡索乙素[(-)-tetrahydropalmatine,(-)-THP]和右旋延胡索乙素[(+)-tetrahydropalmatine,(+)-THP]体外对小鼠肝微粒体主要Ⅰ相代谢酶CYP1A2、CYP2C、CYP2D22、CYP2E1、CYP3A11活性的影响;采用微粒体体外孵育鸡尾酒法(cocktail法),考察小鼠经高、低剂量(-)-THP和(+)-THP(240 mg/kg和60 mg/kg)连续灌胃7 d后,其肝微粒体中主要I相代谢酶活性的变化,以评价(-)-THP和(+)-THP对小鼠肝微粒体主要CYP450酶是否具诱导作用。结果:(-)-THP和(+)-THP体外对小鼠肝微粒体主要的CYP 450 I相代谢酶的抑制作用均不强,(+)-THP对CYP2C抑制的IC50为43.89μmol/L,两者对本研究考察的其它CYP亚型的IC50均大于100μmol/L;...     

肝细胞色素P450 3A在衰老加速鼠中的作用

为探讨衰老与细胞色素Ｐ４５０３Ａ（ＣＹＰ３Ａ）的活性是否有关,本文用红霉素Ｎ－脱甲基酶活性测定法分别检测了ＳＡＭ－Ｒ１,ＳＡＭ－Ｐ１和ＳＡＭ－Ｐ８三组衰老加速鼠（ＳＡＭ）中肝微粒体细胞色素Ｐ４５０３Ａ的活性,每组动物分为７,１３,２６周龄组,结果发现ＳＡＭ－Ｐ１和ＳＡＭ－Ｐ８组中随年龄增长,ＣＹＰ３Ａ的活性均降低,１３周时,ＳＡＭ－Ｐ１组ＣＹＰ３Ａ活性下降３９．５％（ｔ＝２．５２５,Ｐ〈０．０５）     

CTPTD对大鼠肝细胞色素P－450的诱导作用

本研究用诊断性底物和针对Ｐ－４５０的多克隆抗体测定不同剂量ＣＴＰＴＤ对大鼠肝细胞色素Ｐ－４５０的影响。结果表明：①ＣＴＰＴＤ以剂量依赖性方式诱导肝细胞Ｐ－４５０总量；②高剂量可使本研究测定的单加氧酶活力增加；③ＣＴＰＴＤ主要诱导ｐ－４５０ＩＩＢ和Ｐ－４５０ＩＩＩＡ，并由这两个亚型代谢；④Ｐ－４５０ＩＡ和ＩＩＥ１在ＣＴＰＴＤ代谢中的作用需进一步确定。     

异莲心碱对大鼠CYP3A酶活性的影响

目的:探讨异莲心碱对CYP3A酶活性的影响,以了解异莲心碱与CYP3A酶底物合用药时可能产生的相互作用.方法:①建立体外肝微粒体混合酶代谢体系;②以睾酮作为底物探针,用HPLC建立检测CYP3A酶代谢活性的方法,考察体外代谢体系的最佳孵育条件;③将不同浓度异莲心碱分别与睾酮共同孵育于肝微粒体代谢体系中,测定在有或无异莲心碱存在下睾酮的减少量,以评估异莲心碱对CYP3A酶代谢的影响.结果:在肝微粒体孵育体系中,睾酮体外代谢的最佳孵育条件为底物浓度200μmol/L,代谢时间210 min.异莲心碱对CYP3A酶抑制作用较弱,IC50＞1 000 μmol/L.结论:异莲心碱对CYP3A酶无显著影响,可以与其底物联合用药.     

6种中药单体对人孕烷X受体介导细胞色素酶P450 3A4转录的调节作用

目的研究6种中药单体野黄芩苷、丹皮酚、芍药苷、甘草苷、黄芪甲苷以及黄芩素是否可以通过诱导孕烷X受体(PXR)介导细胞色素酶P4503A4(CYP3A4)转录表达。方法采用脂质体瞬时转染的方法,将人PXR表达质粒、CYP3A4报告质粒以及内参质粒转入LS174T细胞中,建立报告基因体系,与不同浓度及不同给药时间的中药单体共同孵育,检测细胞中荧光素酶的活性。结果黄芩素(20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L)分别诱导PXR介导CYP3A4表达(1.49±0.23)倍(P<0.05)、(2.45±0.56)倍(P<0.01)和(5.27±0.40)倍(P<0.01),野黄芩苷、丹皮酚、芍药苷、甘草苷和黄芪甲苷在实验的浓度范围内不能明显诱导LS174T细胞中PXR介导CYP3A4表达。在不同给药时间实验中,20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L的黄芩素在12～48h能诱导PXR介导CYP3A4表达,诱导能力随时间的延长而呈增强的趋势,各浓度的最大诱导倍数均在48h出现。结论黄芩素在LS174T细胞系中可以通过诱导PXR介导CYP3A4转录表达,而野黄芩苷、丹皮酚、芍药苷、甘草苷或黄芪甲苷无此作用。     

中草药对细胞色素P-450酶调控研究进展

对近5年国内外关于中草药对细胞色素P—450酶调控的文献进行检索、整理分析和归纳总结，综述了有关中草药及其单体化合物对细胞色素P—450酶调控方面的研究进展并评述了对P—450酶调控的研究策略。提出加强中草药对P—450酶作用的研究有重要意义，有助于指导中药的安全合理应用和发现新药。     

慢性乙型肝炎病毒感染对人肝细胞色素酶P450 3A4的影响

目的 探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染对人肝脏细胞色素酶3A4(CYP3A4)的影响,为慢性HBV感染患者安全用药提供指导.方法 收集慢性HBV感染患者和正常人的肝组织标本,匀浆后以差速离心法制备成微粒体.以睾丸酮为探针底物,用高效液相色谱(HPLC)方法建立体外检测CYP3A4酶代谢活性的技术平台,检测两组肝组织样本中CYP3A4的酶活性.以Western印迹法测定了两组肝组织样本中CYP3A4蛋白的表达差异.结果 HPLC检测显示,反映酶活力的指标Vmax慢性HBV感染组为(493±297)pmol·min-1·mg-1,正常对照组为(741±189)pmol·min-1·mg-1,两组差异有统计学意义(P=0.03),而酶系特征性常数Km值两组分别为(0.142±0.057)μmol/L,(0.121±0.024)μmol/L,差异无统计学意义(P=0.103).Western印迹测定CYP3A4蛋白表达两组差异有统计学意义(P=0.003),慢性HBV感染组CYP3A4蛋白表达为3.0±1.6,低于正常组的表达量(5.7±1.5).各样本酶活性和蛋白表达的相关系数为0.7683(P＜0.01),表明酶活性与蛋白表达呈现良好的相关性.结论 慢性HBV感染可降低肝脏CYP3A4酶蛋白的表达,导致酶活性下降,但是对酶的结构未产生影响.提示慢性HBV感染者在使用由CYP3A4代谢的药物时,要重视由于代谢变化导致的副作用.     

大鼠嗅粘膜内细胞色素P450 2A3的发育表达

目的：研究细胞色素P450 2A3(cytochrome P450 2A3，CYP2A3)在大鼠嗅粘膜表达变化的规律。方珐：应用免疫组化方法观察胎鼠、幼鼠及成年鼠嗅粘膜内CYP2A3的免疫表达。结果：大鼠嗅粘膜内CYP2A3的表达始于孕17d，随胎仔发育表达不断增强，生后3周达一峰值，并持续增长至成年期。固有层Bowman’s腺细胞内CYP2A3表达强度从出生后3周开始超出支持细胞。结论：嗅粘膜内CYP2A3酶表达与嗅感受神经元功能发育基本同步，二者可能存在共同的生长调控因子，而Bowman’s腺细胞是嗅粘膜内CYP2A3酶表达及发挥功能活性的主要部位。     

P450 3A亚型的测定

细胞色素P4503A是人体代谢许多内源性化合物、外源性底物及其前致癌物的一类最重要的肝脏药物氧化代谢酶。一个理想的表型测定方法应该是安全、快速、对同一个体的重复性好、预测药物的处置准确。由于表型测定更能反映患者个体间的差异，影响因素较多，临床的重要性更大，通过CYP3A表型的测定，以推动个体化给药在我国的发展。     

P450 3A亚型的测定

细胞色素P450 3A是人体代谢许多内源性化合物、外源性底物及其前致癌物的一类最重要的肝脏药物氧化代谢酶.一个理想的表型测定方法应该是安全、快速、对同一个体的重复性好、预测药物的处置准确.由于表型测定更能反映患者个体间的差异,影响因素较多,临床的重要性更大,通过CYP3A表型的测定,以推动个体化给药在我国的发展.