日本血吸虫31/32kDa抗体的检测及其在诊断中的作用

目的：探讨纯化日本血吸虫３１／３２３ｋＤａ抗原（Ｓｊ３１／３２）诊断的特异性、敏感性及疗效考核价值。方法：利用纯化Ｓｊ３１／３２与可深性虫卵抗原（ＳＥＡ）ＥＬＩＳＡ方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清。结果：急、慢性血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体检出率为１００％和９５％，与正常人、肝吸虫和肺吸虫病患者血清未出现交叉反应；抗ＳＥＡ抗体检出率为９７．４％和９０％，与正常人和肠道吸虫病患者有不同程     

日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3的免疫诊断价值评估

目的探讨重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3（rSj14-3-3）间接ELISA用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法表达并利用纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA法，比较其与可溶性虫卵抗原（SEA）ELISA和间接血凝试验（IHA）检测急慢性日本血吸虫病患者的阳性率及其它寄生虫患者和正常人血清的交叉反应。结果rSj14-3-3-ELISA、SEA-ELISA和IHA3种方法的敏感性分别为90．8％、94．2％和90．0％，特异性分别为87．0％，84．8％和84．8％，差异无显著性（P〉0．05）。结论rSj14-3-3抗原间接ELISA法具有可用于日本血吸虫病免疫诊断的价值。     

日本血吸虫成虫67kDa分子抗原的纯化及其对血吸虫病的诊断和疗效考核

目的 为检测日本血吸虫成虫67kDa分子抗原(SjAWA67)对血吸虫病的诊断及疗效考核价值。方法 通过SDS-PAGE和电渗方法,从日本血吸虫成虫抗原中分离纯化出67kDa分子抗原,并用该抗原包被酶标反应板微孔,进行ELISA检测。结果 SjAWA67的纯度已达到电泳纯和免疫纯,对急、慢性血吸虫病患血清的捡出率分别为100％和95％,与正常人血清、肝吸虫病和肺吸虫病患血清均未出现明显的交叉反应,44例血吸虫病患治疗后3、6和12个月后的阴转率分别达45．5％、75．0％和90,9％。结论 SjAWA67分子抗原具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。     

抗Sj14-3-3特异性IgY的制备及其诊断日本血吸虫病循环抗原的价值

目的制备抗重组日本血吸虫信号转导蛋白14-3-3(Sj14-3-3)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立双抗体夹心ELISA诊断体系(IgY-ELISA),探讨用于日本血吸虫病的诊断价值。方法利用Sj14-3-3制备并纯化卵黄抗体IgY和兔多克隆IgG抗体;以IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体建立双抗体夹心ELISA诊断方法,检测72例急性血吸虫病患者、128例慢性血吸虫病患者、132例正常人、42例肺吸虫患者、60例华支睾吸虫患者和46例钩虫感染者血清。探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值。结果成功制备并鉴定了抗Sj14-3-3特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为73.6%和48.4%,正常人血清的阴性率为94.7%;与肺吸虫患者、华支睾吸虫患者、钩虫感染者血清的交叉反应分别为7.1%、6.7%、6.5%。结论建立了基于IgY的双抗体夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫病患者血清的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于日本血吸虫病的辅助诊断。     

日本血吸虫成虫67kDa分子抗原的诊断价值

为检测日本血吸虫成虫67kDa分子抗原（sjAWA67）对血吸虫病的诊断价值,本研究通过SDS-PAGE和电渗方法,从日本血吸虫成虫抗原中分离纯化出67kDa分子抗原,并用该抗原包被酶标反应板微孔,进行常规ELSA检测。结果对急、慢性血吸虫病患者血清的检出率分别为100％和95％,与正常人血清、肝吸虫病和肺吸虫病患者血清均未出现明显的交叉反应,44例血吸虫病患者治疗后3、6和12个月后的阴转率分别达45.5％、75.0％和90.9％。表明SjAWA67蛋白具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。     

基于IgY的ELISA用于日本血吸虫病循环抗原的检测

目的 以鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)替代哺乳动物来源的IgG抗体,建立双抗体夹心ELISA用于日本血吸虫病的诊断.方法 制备并纯化抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的卵黄抗体IgY和抗SEA的兔多克隆IgG抗体;以抗SEA的IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体的双抗体夹心ELISA诊断方法,共检测血清443份,其中急性血吸虫病患者血清68例,慢性血吸虫病患者180例,正常人100例,肺吸虫感染者20例,华支睾吸虫感染者48例和钩虫感染者血清27例.探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值.结果 成功制备并鉴定了特异性IgY和lgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为79.4%和64.4%,最低灵敏度为9.3μg/L;正常人血清的阴性率为92%;与肺吸虫、华支睾吸虫、钩虫感染者血清的交叉反应分别为20%、20.8%、14.8%.结论 建立了基于lgY的双抗夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫SEA的检测具有一定特异性和较高的敏感性,可试用于日本血吸虫病的辅助诊断.     

循环抗原及血清抗体的联合检测诊断日本血吸虫病

目的探讨日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3)在血吸虫病免疫诊断中的价值。方法制备并纯化抗重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的单抗和多抗,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA);以纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA,分别比较该两种方法以及两种方法联合检测对于急、慢性血吸虫病患者免疫诊断的特异性和敏感性。结果利用双抗体夹心ELISA、间接ELISA和联合检测3种方法检测急性患者血清70例,敏感性分别为72.9%、75.7%和91.4%;检测慢性患者血清110例,敏感性分别为46.4%、61.8%和82.7%;检测正常人血清100例,特异性分别为96%、92%和92%;吡喹酮治疗后患者血清161份,其中急性治疗后1年以内转阴率分别为50%、38.9%和33.3%;慢性治疗后1年内分别是76.4%、55.6%和43.1%;慢性治疗后2年以上分别为93.0%、83.0%和78.9%。3种方法检测华支睾吸虫病、钩虫病的交叉反应性分别为0%、15.6%和15.6%,8.7%、19.6%和21.7%。3种方法的敏感性、与华支睾吸虫感染者血清交叉反应、慢性治疗1年内及慢性治疗2年以上患者血清的转阴率差异具有显著性(P<0.05),而特异性、与钩虫感染者血清交叉反应及其他化疗后患者血清的转阴率差异无显著性(P>0.05)。结论循环抗原Sj14-3-3和抗体联合检测在日本血吸虫病免疫诊断中具有潜在的临床应用价值。     

日本血吸虫感染者尿液中特异性IgG及亚类的检测

目的 研究日本血吸虫感染者尿液特异性循环抗体在日本血吸虫诊断上的应用。方法 采集类检确诊的日本血吸虫患者尿液，ELISA法测定尿液中抗日本血吸虫特异性IgG及亚类（IgG1，IgG2，IgG3）抗体；同时肝吸虫阳性患者尿液作为考核交叉反应样本，无寄生虫感染液作为阴性对照。结果 粪检阳性日本血吸虫患者尿液中抗日本血吸虫IgG抗体的检出率为81.0%（17/21），其中IgG1为81.0%（17/21），IgG2为19.0%（4/21），IgG3为23.8%（5/21），肝吸虫患者尿液中IgG1抗体与日本血吸虫抗原有25.0%（2/8）的交叉反应，IgG2和IgG3均未发生交叉反应。结论 日本血吸虫患者尿液中存在抗日本血吸虫的特异性循环抗体，肝吸虫患者尿液中的IgG1抗体与日本血吸虫抗原有一定的交叉反应；但IgG2和IgG3无交叉反应现象，提示尿液中的IgG抗体可以作为血吸虫感染的诊断，尿液中的IgG2和IgG3抗体可以作为日本血吸虫病的鉴别诊断。     

纯化31/32kDa抗原诊断日本血吸虫病的价值

目的：探讨纯化31／32kDa抗原（Sj31／32）诊断日本血吸虫病的价值。方法：以纯化Sj31／32包板，与成虫粗抗原（AWA）相比较，ELISA法检测不同类型日本血吸虫病患者血清抗体滴度。结果：急性、慢性和晚期血吸虫病患者血清平均抗Sj31／32抗体滴度分别为2．77±0．25、2．67±0．30和2．46±0．19（P＜0．01），抗AWA抗体滴度分别为3．27±0．16、3．28±0．16和3．20±0．17（P＞0．05）。慢性血吸虫病患者血清抗Sj31／32抗体滴度与EPG有高度的相关性（r＝0．93），明显高于抗AWA抗体与EPG的相关性（r＝0．45）。结论：利用纯化Sj31／32诊断血吸虫病能较好地区分各种感染类型和不同感染度。     

Preparation of specific yolk immunoglobulin (IgY) of Anti-Sj14-3-3 in serological diagnosis of Schistosomiasis japonica

目的 制备抗重组日本血吸虫信号转导蛋白14-3-3(Sj14-3-3)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立双抗体夹心ELISA诊断体系(IgY-ELISA),探讨用于日本血吸虫病的诊断价值.方法 利用Sj14-3-3制备并纯化卵黄抗体IgY和兔多克隆IgG抗体;以IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体建立双抗体夹心ELISA诊断方法,检测72例急性血吸虫病患者、128例慢性血吸虫病患者、132例正常人、42例肺吸虫患者、60例华支睾吸虫患者和46例钩虫感染者血清.探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值.结果 成功制备并鉴定了抗Sj14-3-3特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为73.6 %和48.4 %,正常人血清的阴性率为94.7 %;与肺吸虫患者、华支睾吸虫患者、钩虫感染者血清的交叉反应分别为7.1%、6.7%、6.5%.结论 建立了基于IgY的双抗体夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫病患者血清的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于日本血吸虫病的辅助诊断.     

日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶在虫卵阶段的定位

目的探讨谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)在虫卵阶段的表达、定位和重组蛋白(rSj26GST)的免疫诊断价值。方法从感染日本血吸虫尾蚴6周的兔肝脏中分离虫卵,分别用RT-PCR和免疫印迹(Western blotting)法检测Sj26GST基因在虫卵阶段的转录和翻译;同时用兔肝做免疫组化观察Sj26GST在虫卵内的分布。利用纯化的rSj26GST和日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA),采用间接ELISA法检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清。结果RT-PCR从血吸虫虫卵中扩增670bp的基因片断,Western blotting证明在虫卵阶段Sj26GST的表达;同时免疫组化显示Sj26GST主要分布在虫卵内毛蚴两边的侧腺。rSj26GST检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清的阳性率分别为92%、80%和0;用SEA检测以上标本,阳性率分别为96%、84%和2%。结论Sj26GST是SEA的主要组分之一,能刺激机体产生高滴度的抗体;rSj26GST为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性,具有实用价值。     

4种抗原用于斑点免疫金银染色试验诊断日本血吸虫病的比较

采用斑点免疫金银染色(Dot-IGSS)试验对4种日本血吸虫抗原的敏感性及特异性进行比较。结果显示粗提成虫抗原(AWA)、尿素溶解性成虫抗原(JWU)、硫酸铵沉淀成虫抗原(AW)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测40例日本血吸虫病人血清抗体的敏感性均达100.0％,40例正常人血清的可疑阳性反应分别为2.5％、0、2.5％和0,40例肝吸虫病人血清的可疑交叉率分别为2.5％、0、2.5％和0,表明在高敏感的IGSS检测系统中,粗提成虫抗原的敏感性和特异性与部分纯化者和虫卵抗原无显著性差异(P>0.05)。     

抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原及疗效考核价值的初步研究

目的探讨抗重组日本血吸虫14-3-3(rSj14-3-3)的单克隆抗体检测血吸虫循环抗原对血吸虫病疗效考核的价值.方法制备纯化的抗日本血吸虫14-3-3的单克隆抗体,以纯化的兔抗rSj14-3-3多抗和酶标羊抗兔多抗为检测系统的酶联免疫吸附试验(P-M-ELISA)法,分别对同批治疗前及治疗后2、4、6、12个月的血吸虫病患者和感染兔血清进行检测,并与常规检测抗体的可溶性虫卵抗原-酶联免疫吸附试验(SEA-ELISA)法比较.结果 P-M-ELISA法对治疗前血吸虫病患者检测阳性率为98.2%,而检测抗体的SEA-ELISA为95.5%.P-M-ELISA法对治愈后2、4、6、12个月血清循环抗原检测阴转率分别为17.7%、41.9%、55%、85%,而检测抗体的SEA-ELISA法分别为3.2%、6.5%、12.5%、15%.结论该法既有较好的诊断价值,又有较好的疗效考核价值.     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子Dipstick快速诊断模式的初步建立

目的 建立简便的血吸虫病Dipstick快速诊断法。方法 以纯化的日本血吸虫虫卵可溶性抗原（SEA）38kDa分子为诊断抗原,以胶体金标记的鼠抗人IgG为二抗,建立Dipstick快速诊断体系;检测日本血吸虫病血清,急性期37例,慢性期30例,正常人52例,肝吸虫病人血清30例。结果 所测得的阳性率分别为94.6%,86.7%,1.9%,0%。结论 以SEA38kDa纯化分子建立的血吸虫病Dipstick快速诊断法具有较好的敏感性和特异性,且简便快捷,有较好现场应用前景。     

日本血吸虫重组32kD抗原的纯化和诊断应用

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结合电渗洗脱的方法分离，纯化日本血吸虫重组３２ｋＤ抗原；用酶联免疫印迹技术分析纯化抗原的免疫活性。用纯化抗原，日本血吸虫成虫抗原和可溶性虫卵抗原分别检测慢性血吸虫病人肺吸虫病，肝吸虫病人，钩虫和健康人血清抗体。     

重组日本血吸虫14-3-3蛋白的纯化和免疫特性分析

目的：纯化日本血吸虫信号蛋白质14-3-3编码基因的原核表达产物。分析纯化产物的免疫学特性。方法：SDS-PAGE鉴定重组日本血吸虫14-3-3（rSj14-3-3)蛋白包涵体，超声破碎细胞收集包涵体。尿素溶解包涵体，NiSO4平衡层析柱，亲和层析纯化rSj14-3-3,Western-blot鉴定纯化产物的免疫学特性。结果：rSj14-3-3是以包涵体形式在大肠埃希菌中表达。通过亲和层析在32.5kDa附近得到单一蛋白条带，Western-blot证实纯化产物为rSj14-3-3，且具有与天然Sj14-3-3相同的抗原表位。结论：成功纯化了rSj14-3-3蛋白，为研究14-3-3在血吸虫信号转导中的作用奠定了基础。     

Non-invasive immunodiagnosis of Schistosomiasis japonica: the detection of specific antibodies in saliva

研究唾液作为日本血吸虫病诊断与筛查标本的可行性。方法　建立日本血吸虫兔感染模型 ,收集兔和慢性血吸虫病人成对的唾液与血清标本 ,以间接ELISA检测唾液、血清标本中的抗血吸虫特异性抗体。结果　①兔唾液与血清样本抗体检测的特异性分别为 93 3 3 % ( 2 8/ 3 0 )和 96 67% ( 2 9/ 3 0 ) ,感染兔血清与唾液样本的抗体检测敏感性分别为 1 0 0 % ( 2 4/ 2 4)和 87 5% ( 2 1 / 2 4)。血清与唾液中的抗SEA (可溶性虫卵抗原 )IgG水平具显著相关性 (r=0 53 0 7,P =0 0 0 3 8<0 0 5) ,与血清标本相同 ,唾液中抗SEAIgG水平可反映兔感染和治疗状况。②病人唾液抗体检测的敏感性为 90 62 % ( 2 9/ 3 2 ) ,血清抗体检测的敏感性为 1 0 0 % ( 3 2 / 3 2 )。正常人唾液1 4 0份 ,阳性 8份 (即假阳性率 5 75% ) ,正常人血清 1 56份 ,阳性 6份 (假阳性率 3 84% )。病人唾液与血清中的特异性抗体含量具显著相关性 (r=0 42 2 7,P =0 0 0 8<0 0 5)。结论　唾液中的抗日本血吸虫特异性抗体的检测可作为非损伤性的血吸虫病免疫诊断和筛查方法