参麦液对培养心肌细胞钙矛盾损伤的保护作用

以细胞搏动和乳酸脱氢酶为指标,观察了参麦液对培养乳大鼠心肌细胞钙矛盾损伤的影响,无钙后补钙可导致心肌细胞搏动停止,乳酸脱氢酶活性显著降低的矛盾性损伤;无钙后补钙并加参麦液培养后、心肌细胞仍然维持其搏动,但频率减慢,细胞乳酸脱氢酶活性明显增加,提示参麦液有防止培养心肌细胞钙矛盾损伤发生的保护作用。     

硫化氢预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨硫化氢预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法:健康成年SD雄性大鼠40只,随机分成4组,每组10只.假手术组(S组)仅开胸并分离冠状动脉左前降支,不阻断血流150 min;缺血再灌注组(IR组)行冠状动脉左前降支阻断30 min,再灌注120 min;硫化氢预处理组(H组)予以静脉注射硫化氢钠0.05 mg/kg,给药后24h同IR组处理;硫化氢预处理+线粒体KATP通道阻断剂(5-羟葵酸,5-HD)组(D组)缺血前15 min静脉注射5-HD 5 mg/kg,其它同H组处理.再灌注结束后抽血测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,测心梗面积,免疫印迹法测心肌S-腺苷蛋氨酸合成酶( S-adenosylmethionine synthetase,SAM-s)的表达.结果:心肌梗死面积与IR组(38.27％±5.64％)比,H组(25.40％±3.54％)减小(P＜0.05),D组(40.53％±5.24％)无明显差异(P＞0.05).心肌SAM-s表达与S组比,IR组、H组和D组均升高(P＜0.05);与IR组比,H组降低(P＜0.05),D组无明显差异(P＞0.05).与IR组比,H组血清SOD的活性含量增高、MDA的降低(P＜0.05),D组无明显差异(P＞0.05).结论:硫化氢预处理对大鼠心肌具有保护作用,其机制可能是通过抑制心肌SAM-s表达,减少氧自由基的生成,增强心肌抗氧化能力有关.     

药物损伤心肌细胞线粒体致心脏毒性的分析

线粒体是真核细胞中最重要的细胞器,它是细胞有氧呼吸的主要场所,心肌细胞中存在着丰富的线粒体,线粒体的正常功能对于维持心肌细胞功能具有至关重要的作用[1]。近年来研究发现心肌线粒体是药物心脏毒性作用的主要靶标之一,药物可通过多种途径致线粒体毒性,线粒体损伤是许多药物心脏毒性反应早期的重要特征。我们主要讨论药物损伤心肌线粒体的机制和线粒体损伤如何促使心脏毒性的发生。     

复氧前后抑制线粒体通透性转换对心肌细胞低氧/复氧损伤的影响

目的观察复氧前后抑制线粒体通透性转换（MPT）对心肌细胞低氧/复氧损伤的影响。方法新生SD大鼠心肌细胞原代培养48h后按孔随机分为空白对照组、低氧/复氧组、复氧前处理组和复氧后处理组,分别在复氧前、后10min给予1μmol/L环胞菌素A,复氧50min后用激光共聚焦显微镜观察MPT,复氧120min后采用流式细胞术和western blotting法分别观察心肌细胞凋亡和线粒体Cyt C释放。结果与低氧/复氧组比较,复氧前处理组细胞MPT明显减弱,细胞凋亡程度明显减轻,线粒体Cyt C释放显著减少。而复氧后处理组与低氧/复氧组比较差异无统计学意义。结论复氧前抑制线粒体通透性转换可以减轻心肌细胞低氧/复氧损伤,复氧后抑制线粒体通透性转换不能产生细胞保护作用。     

脾虚证胃肠粘膜线粒体研究及其临床意义

本文报道用透射电镜观察脾虚证消化道粘膜主、壁、柱状细胞线粒体的变化,结果显示,胃脘痛脾虚型患者壁细胞线粒体数目比肝胃不和型和正常人明显减少;慢性结肠炎脾虚型患者结肠柱状细胞线柱体数也明显少于肝脾不调型和正常人;慢性胃炎脾虚者壁细胞、主细胞线粒体的体密度、数密度与胃热型和正常人比较明显降低,用健脾方药治疗后可以回升。提示脾虚证与消化道粘膜主、壁、柱状细胞的线粒体改变有密切关系。     

胡芦巴碱对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞的保护作用

目的：探究胡芦巴碱（T RG ）对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞的保护作用及其机制。方法原代培养SD乳鼠心肌细胞,随机分成3组：正常对照（Control组）、缺氧／复氧组（H／R组）和TRG加缺氧／复氧组（TRG＋ H／R组）;采用流式细胞术分别检测TRG对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞凋亡和线粒体膜电位的影响;采用超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）试剂盒检测SOD活性和MDA水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测procaspase‐9、cleaved caspase‐9、procaspase‐3和cleaved caspase‐3蛋白水平。结果 TRG能够显著降低缺氧／复氧乳鼠心肌细胞凋亡率（P＜0．05）,增强SOD活性（P＜0．05）,减少MDA的生成（P＜0．05）,稳定线粒体膜电位（ P＜0．05）,促进caspase‐9和caspase‐3的活化。结论 T RG可减轻缺氧／复氧对乳鼠心肌细胞的损伤,其机制可能与抗脂质过氧化和稳定线粒体膜电位有关。     

丹红注射液通过改善线粒体功能障碍减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

[目的]研究丹红注射液(DHI)对缺氧/复氧(H/R)损伤心肌细胞线粒体功能的调节作用机制。[方法]建立原代心肌细胞H/R损伤模型。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)/MAPK激酶(MEK)抑制剂LY294002与PD98059干预后,DHI对H/R损伤心肌细胞存活的影响。采用荧光探针Rh123检测DHI对H/R损伤心肌细胞线粒体膜电位(Δφm)的影响。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测LY294002和PD98059干预后DHI对H/R损伤的心肌细胞PI3K及MEK下游丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)和ERK1/2蛋白表达及活性水平的影响。应用海马生物能量检测仪测定正常与H/R损伤条件下DHI对线粒体能量代谢的影响。[结果] DHI能够明显逆转H/R引起的细胞活力和线粒体膜电位下降。阻断剂LY294002和PD98059干预后,DHI对心肌细胞活力和线粒体膜电位的改善作用明显减弱。DHI能够显著增加H/R损伤的心肌细胞Akt和ERK蛋白磷酸化水平,且这种促进作用能够被抑制剂LY294002和PD98059抑制。常氧条件下,DHI不影响心肌细胞线粒体能量代谢。H/R条件下,DHI能够显著抑制心肌细胞线粒体基础耗氧率与最大耗氧率下降,增加线粒体能量储备能力。[结论] DHI能够激活Akt和ERK1/2,抑制H/R造成的线粒体能量代谢障碍,维持线粒体储备能力,缓解H/R诱导的心肌细胞损伤。     

金属硫蛋白对大鼠肝脏线粒体氧自由基损伤的保护作用

目的：研究金属硫蛋白（ＭＴ）对氧自由基损伤线粒体的保护作用以探讨其细胞保护机制。方法：采用ＦｅＳＯ４／抗坏血酸自由基发生系统直接损伤线粒体，测定Ｃａ（２＋）－Ｍｇ（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活性和Ｃａ（２＋）摄入的变化。结果：ＭＴ能够直接拮抗氧自由基对线粒体Ｃａ（２＋）－Ｍｇ（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活性和Ｃａ（２＋）摄入的抑制作用（Ｐ＜０．０１）。结论：ＭＴ对氧自由基损伤线粒体有明显保护作用，ＭＴ对细胞器线粒体的保护作用可能是细胞保护机制之一。     

紫杉醇预防心肌细胞线粒体缺血再灌注损伤的机制研究

目的 探讨紫杉醇能否预防心肌细胞线粒体缺血再灌注损伤,并对其机制进行初步探讨。方法 将离体大鼠心脏分为对照组、缺血组、缺血+0.1μmol/L紫杉醇组、缺血+0.3μmol/L紫杉醇组和缺血+1μmol/L紫杉醇组(n=15)。每组先给予15 min平衡后,对照组继续给予150 min常氧灌注;缺血组给予30 min缺血处理(Langendorff灌流,结扎左前降支30 min)+120 min常氧再灌注;缺血+0.1μmol/L(或0.3μmol/L、1μmol/L)紫杉醇组给予30 min缺血处理+120 min常氧再灌注,整个过程中均给予0.1μmol/L(或0.3μmol/L、1μmol/L)紫杉醇灌流。灌流结束后,左心室心肌进行冰冻切片。采用免疫组织化学方法观察微管;DCFH-DA试剂盒用来检测活性氧物种的数量,同时通过荧光光度计和分光光度计检测氧化酶活性。结果 10.1μmol/L紫杉醇灌流能明显降低微管断裂评分。20.1μmol/L,0.3μmol/L和1μmol/L紫杉醇减少氧自由基水平分别为33%、46%和51%(P<0.05)。30.3μmol/L和1μmol/L紫杉醇增加线粒体电子传递链复合体Ⅰ的活性,而0.1μmol/L,0.3μmol/L和1μmol/L紫杉醇均增加线粒体电子传递链复合物Ⅲ的活性。结论 紫杉醇能预防心肌细胞线粒体缺血再灌注损伤。减少氧自由基生成、增加线粒体电子传递链复合体Ⅰ、Ⅲ的活性或许是其作用机制之一。     

蒲公英甾醇对氧化损伤心肌细胞保护作用研究

目的 在缺血-再灌注所致氧化损伤模型中观察蒲公英甾醇对小鼠心肌细胞(CSC)的保护作用及机制.方法 使用小鼠CSC细胞作为研究对象,分为正常对照组,缺血-再灌注损伤(I/R)组,蒲公英甾醇治疗缺血-再灌注损伤组(治疗浓度分别为5、10、30 μmol/L)及阳性对照组.通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定细胞活力,RT-PCR测定天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bel-2)基因水平,生化法测定超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MAD)水平,Western blot测定细胞外信号调节的蛋白激酶1/2 (ERK1/2)水平.结果 MTT测定显示30 μmol/L蒲公英甾醇组I/R损伤的CSC细胞活力增加(P＜0.05).RT-PCR研究结果表明:10、30 μmol/L的蒲公英甾醇组Caspase-3 mRNA表达减少,与I/R组比较差异有统计学意义(P＜0.05);30μmol/L的蒲公英甾醇组Bcl-2 mRNA表达回升,与I/R组比较差异有统计学意义(P＜0.05).生化法测定表明:30 μmol/L的蒲公英甾醇诱导的SOD水平提高,MAD水平降低,与I/R组比较差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot测定显示,30 μmol/L蒲公英甾醇使损伤的CSC细胞磷酸化ERK1/2与总ERK1/2比值增加(P＜0.05).结论 蒲公英甾醇可能是通过上调ERK1/2表达抑制I/R引起的SCS细胞氧化损伤.     

双黄连抗柯萨奇B3型病毒感染大鼠原代心肌细胞的效应

目的观察双黄连抗柯萨奇B3病毒感染原代大鼠心肌细胞的作用,并初步探讨其机制.方法选用出生1～3天的Sprague-Dawley大鼠,取其心室肌组织,制备原代大鼠心肌细胞,培养72 h后,用不同浓度的双黄连对抗100TCID50柯萨奇B3型病毒感染细胞,观察细胞病变,测定感染36 h后细胞上清液中的病毒滴度及肌酸磷酸激酶.结果 0.5、 0.25、0.125 g/L双黄连均可明显减轻心肌细胞病变,降低细胞上清液的病毒滴度, 减少感染心肌细胞肌酸磷酸激酶的释放(分别和病毒对照组相比,P<0.01).结论双黄连对柯萨奇病毒感染的新生大鼠原代心肌细胞有保护作用.     

通脉养心丸中心肌保护活性物质的筛选

目的基于细胞模型以及高效液相色谱—质谱联用技术对通脉养心丸中心肌保护活性物质进行筛选研究。方法利用高效液相制备技术对通脉养心丸进行制备分离,然后采用过氧化氢氧化损伤H9c2大鼠心肌细胞模型对通脉养心丸活性组分进行筛选。利用高效液相色谱—质谱联用技术对活性组分进行分析,通过查阅文献和根据化合物裂解规律,鉴定推断出可能的活性化合物。结果发现通脉养心丸中10个组分具有明显的心肌保护活性,考察了其中5个组分的半数有效浓度并发现其呈现良好的量效关系。从这5个组分中推断出11个可能的活性化合物,包含甘草酸、甘草香豆素、甘草利酮、Glyasperin A等。结论筛选出通脉养心丸中心肌保护活性物质,有望为中药复方制剂活性物质筛选研究提供借鉴。     

三氧化二砷抑制食管癌细胞侵袭能力的机制研究

目的：观察三氧化二砷（ As2 O3）对食管癌细胞侵袭能力的影响并探讨其分子机制。方法食管癌细胞经As2 O3处理后,MTT比色法检测细胞增殖能力,细胞黏附实验与侵袭实验检测细胞转移能力,Western blot检测转移相关蛋白金属基质蛋白酶（MMP）2、MMP9、E-cadherin及O型受体蛋白酪氨酸磷酸酶（PTPRO）表达水平。结果不同浓度As2O3处理显著抑制EC9706与EC109细胞增殖与侵袭能力,同未加药（0μmol/L）的对照组比较差异均有统计学意义（ P ＜0.01）;As2 O3处理可以减弱MMP2与MMP9的表达水平（ P ＜0.01）,增强E-cadherin 与PTPRO的表达水平（ P ＜0.01）。结论As2 O3对食管癌细胞的恶性转移能力有显著的抑制作用,下调MMP2与MMP9的表达、同时上调E-cadherin与PTPRO的表达,可能是其抑制转移的分子机制。     

FK866对非小细胞肺癌细胞迁移的影响

目的: 探讨低浓度烟酰胺磷酸核糖基转移酶（NAMPT）抑制剂FK866对人非小细胞肺癌细胞株（A549细胞）迁移的影响及作用机制。方法: MTT法检测不同浓度FK866对A549细胞增殖的影响;划痕实验检测1.0 nmol/L和10.0 nmol/L FK866对A549细胞迁移的影响;实时定量RT-PCR检测上皮间质转化相关蛋白上皮钙黏素和波形蛋白mRNA的表达量;蛋白质印迹法检测细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）和磷酸化ERK1/2蛋白的表达量。结果: FK866作用时间越长、浓度越高,对A549细胞增殖的抑制作用越明显。FK866作用72 h时的半抑制浓度（IC₅₀）为9.55 nmol/L。以1.0、10.0 nmol/L的FK866预处理细胞48 h,划痕后继续给药48 h,两种浓度的FK866均能抑制A549细胞迁移;如不进行预处理,仅10.0 nmol/L浓度的FK866对划痕愈合有一定的抑制作用;1.0 nmol/L的FK866处理细胞72 h可上调上皮钙黏素和波形蛋白mRNA表达,并激活ERK1/2;以1.0 mmol/L的烟酰胺单核苷酸（NMN）或10.0 μmol/L的ERK1/2抑制剂U0126预处理,能够逆转FK866引起的上皮钙黏素和波形蛋白表达上调。结论: 低浓度FK866能够通过减少细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和激活ERK1/2,增加上皮钙黏素表达,进而抑制细胞迁移,对肿瘤转移可能有一定的抑制作用;但其同时促进了波形蛋白的表达,不利于肿瘤的治疗。     

心肌缺血再灌注损伤及白藜芦醇的保护作用研究

目的:研究白藜芦醇对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法:通过建立大鼠心肌缺血再灌注模型,以不同剂量的白藜芦醇对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠舌静脉注射,并观察心肌细胞内肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)代谢情况。结果:白藜芦醇呈剂量依赖性缩小大鼠缺血再灌注心肌梗死范围;减少缺血再灌注心肌细胞内CK和LDH的释放;降低心肌缺血再灌注诱发的ST-T段的抬高;改善缺血再灌注心肌光镜下的细胞损伤;可使缺血再灌注大鼠血清SOD活性升高、MDA含量减少。结论:白藜芦醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制也与脂质过氧化有关。     

马桑内酯致痫大鼠海马结构内SYN和GFAP的表达及其意义

目的:研究马桑内酯所致癫痫持续状态下海马结构内突触体素(SYN)及胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化规律,探讨癫痫的发生机制。方法:成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为模型组及对照组,采用马桑内酯(50μg/kg)侧脑室注射法建立急性癫痫动物模型,应用免疫组织化学方法观察癫痫持续状态下SYN和GFAP的表达。结果:①模型组海马结构各区突触体素阳性免疫反应产物的密度较对照组普遍增加,尤以CA3区苔藓纤维层和齿状回分子层内带为甚(P<0.05)。②模型组海马结构内GFAP免疫反应阳性的胶质细胞与对照组相比,其平均光密度、胞体截面积和周长均显著增强或增大(P<0.05),GFAP免疫反应性增强。结论:突触体素表达的增强可能易化了神经递质的装载和释放,与癫痫持续状态的维持和加重相关。活化的星形胶质细胞在癫痫持续状态中可能主要起保护作用。     

蒺藜皂苷对NaCN诱导大鼠乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及机制

目的：探讨蒺藜皂苷（GSTT）对NaCN诱导大鼠乳鼠心肌细胞凋亡的影响。 方法：采用NaCN建立心肌细胞内缺氧模型,GSTT干预后流式细胞术检测凋亡百分率及线粒体膜电位,激光共聚焦显微系统检测细胞内钙水平,Western blotting检测Bcl-2/Bax的蛋白表达。 结果：NaCN诱导的心肌细胞凋亡百分率GSTT组［（3.31±0.24）%］与模型组［(16.65±0.18)%］比较明显降低（P<0.01）;心肌细胞膜电位(mV)GSTT组(158.29±0.40)高于缺氧模型组(121.71±0.80)(P<0.01),低于正常对照组(167.10±0.70)(P<0.01);细胞内钙水平(色密度)GSTT组(323.73±68.19)低于缺氧模型组(496.65±80.10),高于正常对照组(280.18±48.10)(P<0.01)。Bcl-2蛋白表达强度上调, Bax蛋白表达强度下调。 结论：GSTT对NaCN诱导心肌细胞凋亡具有抑制作用,该作用与其调节Bcl-2/Bax蛋白表达、稳定线粒体膜电位以及改善细胞内钙超载有关。     

党参、黄芪、白术提取物配伍应用对小肠上皮细胞增殖的影响

[目的]观察党参，黄芪，白术有效组合 分配伍对小肠隐窝细胞株（IEC-6）细胞增殖的影响。[方法]IEC-6以每孔50μL^-1的密度接种200μL于96孔培养板，每组3孔，24h后加入不同剂量的各种有效组分及其配伍溶液10μL，空白组加等量Dulbecco's磷酸缓冲液，加药后24h用噻唑蓝（MTT）比色法观察细胞增殖情况。[结果]来源于不同药物或同一药物的两个有效组分配伍应用，对IEC-6细胞的增殖作用表现各异，有的协同促进，有的协同抑制，有的作用相互抵消，有的作用方向改变，有的作用无明显改变。[结论]党参、黄芪，白术不同提取部位配伍应用对IEC-6细胞增殖具有调控作用。