重楼根茎与须根中四种重楼皂苷含量比较

摘 要 目的： 比较重楼根茎与须根中四种重楼皂苷含量,考察皂苷类次生代谢产物在重楼不同生长部位的分布情况,为重楼药材综合开发利用提供参考。方法: 采集武当山区及神农架林区的重楼药材样本,采用高效液相色谱法测定重楼根茎及其须根中主要次生代谢产物重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量。 结果: 须根中四种重楼皂苷总量明显高于根茎;薯蓣皂苷类成分在两个部位差异不显著,而偏诺皂苷类成分含量在须根中明显高于根茎。结论:从所含主要化学成分的角度分析,须根与根茎具有化学等同性,可以考虑入药用;但从重楼皂苷含量的角度分析,须根与根茎中分布有明显差异,有可能在须根中合成后转移至根茎中贮存。     

重楼皂苷化学成分及抗肿瘤作用研究进展

重楼是我国常用的抗肿瘤药物,资源丰富,主要分布于四川、云南等地。大量研究发现,重楼的主要活性成分为皂苷类,包括50多种化合物,其中具有抗肿瘤作用的成分为重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ等,对肝癌、肺癌、膀胱癌、骨肉瘤、神经胶质瘤等多种恶性肿瘤均具有抑制作用。本文梳理了重楼皂苷的主要活性成分、抗肿瘤作用以及分子作用机制,以期为重楼皂苷类药物的开发和利用提供参考依据,并为其在抗肿瘤临床治疗中的应用提供基础来源。     

20批重楼药材皂苷类成分分析与其TLC鉴别方法探讨

目的：对不同品种、不同产地的重楼药材中的皂苷类成分进行测定,以探讨其标准中TLC鉴别指标成分设定的合理性。方法：按《中国药典》2015年版一部重楼标准项下的TLC法和HPLC法分别检测皂苷类成分的组成和含量。结果：20批重楼药材中只有10批同时检出重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ和Ⅶ 4种皂苷成分,其余10批只检出其中的3种成分。结论：建议修订重楼标准项下相关内容：只要总皂苷含量符合规定,TLC鉴别检出其中两种以上皂苷即可。     

重楼皂苷抗肿瘤作用机制研究进展

摘 要 重楼是百合科植物云南重楼干燥根茎,皂苷类化合物是其主要的化学成分和药理活性成分。皂苷类化合物主要通过抑制肿瘤细胞有丝分裂,诱导细胞周期停滞,抑制癌基因或促进抑癌基因及蛋白的表达,抑制肿瘤血管生长,调节机体免疫功能等作用产生很强的抗肿瘤活性,同时能够逆转肿瘤细胞的多药耐药性。本文对重楼皂苷类成分抗肿瘤作用机制进行综述,为重楼皂苷抗肿瘤活性深入研究提供依据。     

2种重楼中皂苷成分的特征图谱研究和统计分析

目的:建立特征图谱以比较云南重楼与七叶一枝花偏诺皂苷类与薯蓣皂苷类成分的差别。方法:采用Waters UPLC超高效液相色谱仪,ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,203 nm检测,分别建立云南重楼与七叶一枝花的特征图谱,采用统计学的方法分析比较这2种重楼在成分上的差别。结果:2种重楼中的偏诺皂苷类与薯蓣皂苷类成分存在着较明显的差异。结论:云南重楼中以薯蓣皂苷类成分为主,七叶一枝花中以偏诺皂苷类成分为主,可采用特征图谱进行鉴别,并可以通过判别函数来区分这2种重楼。     

华重楼皂苷含量测定及累积规律研究

目的 测定华重楼不同栽培年限、龄段、栽培模式及产地主要重楼皂苷的含量,分析重楼皂苷在华重楼生长过程中的累积规律。方法 采用HPLC同时测定华重楼5种重楼皂苷(I、II、VI、VII、H)的含量。结果 华重楼总皂苷成分以重楼皂苷VII和H为主,重楼皂苷VI、II和I为辅。不同栽培年限华重楼根部皂苷(I、II、VII)含量差异具有统计学意义,6年生以上的含量可达到中国药典2020年版的标准,8年生的含量最高;根茎4a龄段和5a龄段的皂苷(I、II、VII)含量较高,显著高于其他龄段;不同栽培模式下皂苷(I、II、VII)含量范围在0.354%～0.765%,从高到低排列为针叶林>竹林>阔叶林>大棚;不同产地的皂苷(I、II、VII)含量在0.592%～0.741%,庆元百坎最高,仅福建三明的含量略低于中国药典2020年版的标准。结论 栽培年限、不同龄节、不同栽培模式及不同产地对华重楼皂苷的累积有明显影响,可为华重楼的人工栽培提供参考。     

武当山区市售重楼药材皂苷含量分析

目的通过分析市售中药重楼饮片中重楼皂苷类成分的含量,评价中药市场上重楼饮片质量,为中药重楼的生产、经销、使用和监管提供参考依据。方法收集武当山区(以湖北省十堰市为主)医院、药店中重楼饮片样品,采用高效液相色谱法测定样品中重楼皂苷的含量。色谱柱为Waters Atlantis T3(150 mm×4.6 mm,3μm);检测波长:203 nm;流动相:水-乙腈,梯度洗脱;进样量:10μL;流速:1 mL·min~(-1);柱温:30℃。结果市售重楼饮片中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ总含量差异明显;23个样本中有6个含量未达到2015年版中国药典规定标准,合格率为73.9%。结论重楼药材质量参差不齐,需要对中药重楼的生产、经销进行严格监管。     

星点设计-效应面法优化重楼皂苷类成分的提取工艺

目的:优化重楼皂苷类成分的提取工艺。方法:以重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ及重楼总皂苷的提取率为因变量,以乙醇体积分数、提取时间、溶剂倍量为自变量,进行多元线性回归及二项式拟合,用效应面法优选最佳工艺,并进行预测。结果:重楼皂苷类成分最优提取工艺为加入80%乙醇10倍量,回流提取2次,每次100 min。采用该提取工艺,重楼皂苷Ⅰ提取率分别为85.4%、82.7%、87.1%,重楼皂苷Ⅱ提取率分别为85.9%、81.3%、83.6%,重楼总皂苷提取率分别为89.5%、92.1%、90.3%(RSD均小于2.0%);总评价指标实测值为0.964 9,预测值为0.986 0,偏差率为2.14%。结论:星点设计-效应面法优选重楼皂苷类成分提取工艺,方法简单,结果可靠。     

不同产地丫蕊花不同部位中3种皂苷成分含量测定及差异分析

目的:建立测定丫蕊花中重楼皂苷Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ含量的方法,比较不同产地丫蕊花不同部位中这3种皂苷成分的含量差异。方法:采用高效液相色谱法测定10个产地丫蕊花的全草部位和地下部位中重楼皂苷Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量,色谱柱为Kromasil C_(18),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,柱温为35℃,检测波长为203 nm,进样量为10μL。以3种皂苷成分的含量为指标,对20批次丫蕊花进行聚类分析和偏最小二乘判别分析,对样品进行聚类区分,并确定其主要差异性成分。结果:重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ的检测质量线性范围分别为0.051～2.04、0.007～0.28、0.168～6.72μg(r≥0.999 5);检测限分别为1.92、1.75、1.87 ng,定量限分别为6.40、5.87、6.23 ng;精密度、重复性、稳定性(24 h)的RSD均小于2%(n=6);平均回收率分别为99.29%、101.38%、99.64%,RSD分别为1.17%、2.64%、0.75%(n=6)。20批次样品的重楼皂苷Ⅱ含量为0.615～1.875 mg/g,重楼皂苷Ⅵ含量为0～0.095 mg/g,重楼皂苷Ⅶ含量为3.158～12.354 mg/g。聚类分析结果显示,20批次样品被聚为两类,批次S9～S12为一类,其余16批次样品被聚为一类;偏最小二乘判别分析结果显示,20批次样品分为3个区,批次S1、S2、S8、S14、S16、S20被分为Ⅰ区,批次S9～S12被分为Ⅱ区,其余样品被分为Ⅲ区。不同产地的丫蕊花存在品质差异,且全草和地下部位中3种皂苷成分无差异性。权重排序结果显示,重楼皂苷Ⅶ为丫蕊花药材中主要差异性成分,其中彭州和大邑县产丫蕊花药材中重楼皂苷Ⅶ最高。结论:本方法简单方便、灵敏度高,可用于丫蕊花中3种皂苷成分的含量测定。以彭州和大邑县产丫蕊花活性成分含量较高、质量较好。     

真菌诱导子对滇重楼中次生代谢产物甾体皂苷的影响

为了研究比较接种和不接种丛枝菌根(AM)真菌对滇重楼根茎中甾体皂苷类成分的影响,通过室温盆栽接种试验,采用高效液相色谱法测定并比较收获滇重楼根茎中甾体皂苷类成分的差异。结果显示,不同AM真菌对滇重楼根茎中次生代谢产物甾体皂苷的影响存在差异。AM真菌诱导子处理后,没有改变滇重楼根茎的化学背景,但能部分提高其根茎中化学成分的含量。实验结果表明,AM真菌与滇重楼之间具有选择性,根内球囊霉是最适宜滇重楼接种的优良菌种。     

正交设计-超声提取重楼总皂苷

目的确定重楼总皂苷的最佳超声提取条件。方法以总皂苷得率为指标,正交设计法优化重楼皂苷的超声提取工艺。结果检测波长为410nm,薯蓣皂苷元在0.004～0.020mg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),最佳超声提取工艺:料液比1:70,超声温度65℃,超声功率90%。结论优选出的超声提取工艺合理、经济、可行。     

不同生长年限滇重楼中4种重楼皂苷的含量比较

目的:研究滇重楼中4种重楼皂苷的含量与其生长年限的关系。方法:采用高效液相色谱法测定不同生长年限滇重楼中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0mL·min-1,检测波长为203nm,柱温为35℃。结果:不同生长年限滇重楼中重楼皂苷的含量差异较明显,3年生药材重楼皂苷的含量比较低,4、5年生药材含量明显升高,5年以上药材含量有下降趋势。结论:重楼皂苷含量的变化规律可为确定滇重楼采收年限提供参考依据。     

RP-HPLC法测定重楼中四种甾体皂苷的含量

目的：建立反相高效液相色谱法同时测定重楼中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ4种皂苷的含量测定方法,考察重楼中4种皂苷的含量。方法：采用色谱柱：Agilent SB C18柱（4．6mm×150mm,5μm）;流动相：乙腈-水,梯度洗脱,流速0．8mL／min;紫外检测器,检测波长：210nm。结果：4种重楼皂苷的标准曲线线性良好（r〉0．9998,n=5）,回收率98．12％～104．3％,最低检测限11．8～21．0ng,最低定量限38．4-75．0ng。不同产地的重楼中4种甾体皂苷的含量差异较大。结论：该方法准确、简捷,可用于重楼中4种皂苷的定量分析．     

重楼总皂苷对胃癌细胞株MGC-803生长的抑制作用

目的研究重楼总皂苷对胃癌细胞株MGC-803生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测重楼总苷对MGC-803细胞生长的抑制作用,采用流式细胞术测定细胞周期变化及细胞凋亡率,并分析E-phA2、survivin及Caspase-3蛋白的表达变化。结果重楼总皂苷可显著抑制MGC-803细胞的生长,并且呈时间-剂量依赖关系;可阻滞细胞于S期,诱导细胞凋亡率的升高;可显著抑制EphA2、survivin蛋白的表达,同时上调Caspase-3蛋白的表达。结论其作用机制可能与下调EphA2和survivin的表达以及促进Caspase-3的表达有关。     

Antifungal saponins from Paris polyphylla Smith

Three steroidal saponins, including one new and two known compounds, were isolated from the rhizomes of Paris polyphylla Smith. One- and two-dimensional NMR, LC-MS, and interpretation of hydrolytic cleavage experiments led to the identification of the structure of the new saponin as ( 25R)-spirost-5-ene-3 beta,17 alpha-diol (pennogenin) 3- O-{ O- alpha- L-rhamnopyranosyl-(1-->2)- O-[ O- beta-xylopyranosyl-(1-->5)- alpha- L-arabinofuranosyl-(1-->4)]- beta- D-glucopyranoside}. The isolated saponins were evaluated for their antifungal activity against Cladosporium cladosporioides and Candida species and showed comparable activity to chemicals used in some commercial products.     

重楼皂苷的制备及其抗A型流感病毒活性

目的研究重楼皂苷的制备及体内外对A型流感病毒(IAV)活性的影响。方法 采用柱层析和反相液相色谱分离技术,从重楼中提取重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ,应用高效液相色谱法测定其纯度。采用MTT比色法测定重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ的细胞毒性,并检测其体外对IAV的直接灭活作用、对IAV吸附和侵入细胞的阻断作用及对IAV在靶细胞内增殖的抑制作用。用IAV滴鼻法制备IAV感染小鼠模型,模型制备4 h后分别每天ig给予重楼皂苷Ⅰ5和10 mg.kg-1及阳性对照药奥司他韦3 mg.kg-1,每天分2次给药,连续5 d,自给药后每天观察并记录小鼠发病情况和死亡数,共观察14 d,计算小鼠死亡率和生命延长率,评价其体内抗IAV作用。结果 提取分离得到的重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ的纯度分别为95.3%,90.2%,92.4%和86.8%。重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ浓度分别低于50,12.5,6.25和12.5 mg.L-1时,未见对靶细胞MDCK的细胞毒性。重楼皂苷Ⅰ6.25,12.5,25和50 mg.L-1,重楼皂苷Ⅱ6.25和12.5 mg.L-1,重楼皂苷Ⅵ3.13和6.25 mg.L-1,重楼皂苷Ⅶ6.25和12.5 mg.L-1及奥司他韦40 mg.L-1对IAV均有显著的直接灭活作用(P<0.01),对IAV吸附和侵入靶细胞亦具有一定的阻断作用(P<0.01),对IAV在靶细胞内的增殖具有抑制作用(P<0.01)。重楼皂苷Ⅰ5和10 mg.L-1可明显降低IAV感染小鼠的死亡率(P<0.01),由流感病毒感染组的8/10均下降到2/10;并可延长IAV感染小鼠的存活时间(P<0.01),存活时间由(8.5±0.3)d分别延长到12.7±0.4和(13.2±0.5)d(P<0.01),生命延长率分别为49.4%和55.3%,效果与奥司他韦近似。结论 从植物重楼中分离到高纯度的重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ,重楼皂苷Ⅱ,Ⅵ和Ⅶ在体外具有较好的抗IAV活性,重楼皂苷Ⅰ在体内外均具有较好的抗IAV活性。     

武当山区重楼红外指纹图谱研究

目的:建立不同品种重楼属植物红外指纹图谱,为重楼药材的快速鉴别提供理论依据。方法:采用傅里叶变换红外光谱仪(FFIR)测定不同品种的重楼属植物,运用Nicolet Omnic Ver 8.2红外光谱处理软件对所获指纹图谱进行特征峰指认和二阶导数图谱对比分析。结果:不同品种重楼属植物的指纹图谱间有一定差异,二阶导数图谱比较差异较明显,可作为不同品种重楼属植物的鉴别特征。结论:红外指纹图谱法可快速鉴别不同品种重楼属植物,且操作简便、易行,对其他中药材的品种鉴定具有参考价值。     

七叶一枝花酊提取工艺研究

目的：确定七叶一枝花酊的最佳提取工艺.方法：以重楼总皂苷得率为评价指标,采用单因素和正交试验设计确定七叶一枝花酊的最佳提取工艺.结果：最佳提取工艺为：采用浸渍法以100倍量的75%乙醇提取原药材饮片中的有效成分,并按优选工艺提取得七叶一枝花酊,测总皂苷得率为1.3%.结论：优选出的工艺合理、经济、可行.     

重楼皂苷类化合物体外抗生育功效研究

目的筛选并确证重楼皂苷类化合物的抗生育功效。方法以重楼分离纯化获得的偏诺皂苷（PHAC-A）和薯蓣皂苷（PHAC-B）为实验材料,运用体外孵育小鼠精子测定其活性,研究其对体外精子活性的影响。结果PHAC-A,PHAC-B体外均具抗生育活性,与阳性对照醋酸棉酚比较,能显著抑制精子活力和精子成活率,且PHAC-B抗生育效果优于PHAC-A,其抗生育活性存在剂量依存关系。结论PHAC-A,PHAC-B抑制精子活力和精子成活率的功效显著,为高活性抗生育物质,其中PHAC-B为重楼中具抗生育能力的主要活性物质。     

中药重楼活性成分抗肿瘤的作用机制

重楼是中医临床常用的中药,具有清热解毒,消肿止痛,凉肝定惊之功效,近年来随着中药提取技术的发展,对重楼的活性成分的药理研究逐渐增多,其抗肿瘤作用及其机理日益受到研究人员的重视。关于重楼中活性成分的抗肿瘤的机制的研究是未来研究的一个方向。