旋毛虫幼虫排泄分泌抗原用于诊断人旋毛虫病的可行性探讨

作者将自行分离制备的旋毛虫肌肉期幼虫２４小时排泄分泌抗原，用间接ＥＬＩＳＡ共检测３４份旋毛虫病人血清，３２份为阳性，阳性率９４％．而８２份正常人血清均为阴性反应。且不与蛔虫病人、囊虫病人血清发生交叉反应，但与肺吸虫及血吸虫病人血清发生交叉反应。经用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及铵银染色后显示，该抗原含有１１种蛋白组份，分子量介于９６ｋＤ－１７．６ｋＤ之间。有３条主带，分子量分别为４０、４８、５３ｋＤ。酶联免疫印迹试验表明旋毛虫病人血清能特异识别分子量为４８ｋＤ蛋白。而肺吸虫及血吸虫病人血清所能识别的区带均小于４０ｋＤ。该结果表明４８ｋＤ蛋白抗原组分在人旋毛虫病上具有潜在诊断价值，而酶联免疫印迹试验不失为一种可行的人旋毛虫病的诊断方法。     

旋毛虫肌幼虫排泄分泌物中特异性诊断抗原的研究

目的　寻找旋毛虫肌幼虫排泄分泌(ES)物中的特异性诊断抗原。　方法　应用SDSPAGE和Western印迹对旋毛虫肌幼虫体外培养18、30h后的ES抗原中的蛋白组分进行研究。　结果　旋毛虫肌幼虫培养18、30h后得到的ES抗原组分大致相同,两种ES抗原中主要蛋白带的分子量为112、110、108、97、53、49、45、42、35、23和16kDa。18hES抗原中的102、97、95和53kDa以及30hES抗原中的53、49、45和43kDa均与并殖吸虫病、华支睾吸虫病、日本血吸虫病及囊尾蚴病患者血清发生明显的交叉反应。ES抗原中的23kDa蛋白组分只与旋毛虫感染的大鼠、小鼠及患者血清反应,而不与上述其它寄生虫感染者、正常大鼠和小鼠及正常人血清发生交叉反应。　结论　旋毛虫肌幼虫ES抗原中的23kDa蛋白组分为旋毛虫肌幼虫的特异性抗原,可用于旋毛虫病的血清学诊断及血清流行病学调查。     

旋毛虫成囊前期幼虫排泄分泌抗原的研究进展

在旋毛虫感染过程中,成囊前期幼虫（PEL）是旋毛虫侵入宿主肌肉的侵入期。旋毛虫PEL比成囊期幼虫（EL）在宿主体内约早2周出现。成囊前期幼虫抗原（PELA）对旋毛虫病的早期免疫学诊断具有较高的敏感性。而旋毛虫排泄分泌抗原具双重免疫功能,即有良好的抗原性和免疫原性。因此,本文就旋毛虫成囊前期幼虫ES抗原研究进展做一综述。     

旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原诱导的肠道免疫保护作用研究

目的 研究旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原(Trichinella spiralis muscle larvae excretory-secretory, Ts-Es)诱导小鼠肠道保护性免疫能力以及免疫调节作用。方法 54只BALB/c小鼠随机分为3组,空白对照组、旋毛虫感染组(Ts)、旋毛虫Ts-Es抗原免疫组(Ts-Es)。空白组小鼠腹腔注射PBS;抗原免疫组小鼠腹腔注射0.1 mL的Ts-Es抗原与等量弗氏完全佐剂;旋毛虫感染组腹腔注射PBS和弗氏完全佐剂,每隔7 d注射1次,共3次,末次注射后7 d旋毛虫感染组和Ts-Es抗原免疫组用400条/mL旋毛虫感染性幼虫灌胃攻击感染。解剖取材,检查肠道成虫及肌肉幼虫减虫率,用HE染色法观察肠道病理变化,RT-qPCR法检测小肠中目的基因mRNA表达水平。结果 与旋毛虫感染组相比Ts-Es抗原免疫组成虫和肌幼虫减虫率分别为49%(t=8.109,P<0.05)和67%(t=8.090,P<0.05);与空白对照组相比旋毛虫感染组小肠T-bet(t=5.25,P<0.05)、GATA3(t=2.50,P<0.05)、ROR...     

旋毛虫排泄分泌抗原对小鼠的保护性免疫

目的比较旋毛虫成虫排泄分泌抗原(ES抗原)、肌幼虫ES抗原、成虫和肌幼虫ES混合抗原对小鼠的免疫保护作用。方法用生理盐水培养法从培养液中提取成虫ES抗原、肌幼虫ES抗原,分别用成虫ES抗原、肌幼虫ES抗原、成虫和肌幼虫ES混合抗原免疫小鼠,同时设佐剂组和对照组,间隔7d共免疫3次。末次免疫后7天,每只小鼠用200条旋毛虫感染期幼虫经口进行攻击感染。感染后7天和30天检查各组小鼠肠道成虫数和肌幼虫数。结果旋毛虫成虫ES抗原组、肌幼虫ES抗原组、成虫和肌幼虫ES混合抗原组的成虫减虫率分别为87.95%、69.48%、84.34%,肌幼虫减虫率分别为74.79%、87.97%、86.87%。成虫ES抗原组、成虫与肌幼虫ES抗原混合组的成虫减虫率均高于肌幼虫ES抗原组(P均<0.05)。肌幼虫ES抗原组、成虫与肌幼虫ES抗原混合组的肌幼虫减虫率均高于成虫ES抗原组(P均<0.01)。结论旋毛虫成虫和肌幼虫ES混合抗原均能诱导小鼠产生抗成虫及肌幼虫较强的免疫力。     

旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄少中46—58kD蛋白的纯化

评实了以转移于硝酸纤维膜（ＮＣ．ｐａｐｅｒ）的标准蛋白为参照标准（Ｍａｒｋｅｒ）用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结合电洗脱技术，分离纯化靶蛋白的可行性。用该技术分离并纯化了旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物（ＴｓＬ１－ＥＳ）中具免疫原性的抗原组份－４６￣５８ｋＤ蛋白，获得近２ｍｇ具有明显免疫反应性的高纯度的靶蛋白组份。为进一步研究该特异性抗原组份的诊断价值和保护性免疫作用提供了先决条件。     

旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原诊断早期旋毛虫病的研究

目的评价旋毛虫肌幼虫排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原诊断早期旋毛虫病的价值。方法应用旋毛虫肌幼虫ES抗原Western blot对旋毛虫感染后6~11d的小鼠血清及19d的早期旋毛虫病人血清进行检测,并与感染后35d的晚期旋毛虫病人和其他寄生虫病人血清的检测结果进行比较。结果 Western blot分析显示,肌幼虫ES蛋白中的2条蛋白带(41.5、55kDa)可被旋毛虫感染后7~11d的小鼠血清识别,6条蛋白带(41.5、44.1、45、55、61和65.2kDa)能被早期和晚期旋毛虫病人血清识别,阳性反应率均为100%(15/15);这6条蛋白带与裂头蚴病人和健康人血清无交叉反应,但与其他寄生虫病(血吸虫病、并殖吸虫病、华支睾吸虫病、棘球蚴病及囊尾蚴病)患者血清具有明显的交叉反应(19.12%~38.23%)。结论旋毛虫肌幼虫ES抗原中的41.5kDa~65.2kDa蛋白带可与旋毛虫感染早期血清反应,但与其他蠕虫病患者有明显的交叉反应。     

旋毛虫肌幼虫三种抗原的免疫印迹分析

应用酶联免疫印迹分析旋毛虫肌幼虫的表面抗原、S_3 抗原和虫体粗抗原,结果显示上述三种抗原的多肽组成存在一定的差异。与同源感染兔血清反应,显示表面抗原有4个免疫反应区带,分子量范围在 102～44KD之间。S_3 抗原和虫体粗抗原分别有 8和10个主要区带,分子量范围在 73～16 KD之间。与异源感染兔血清反应,显示上述抗原的低分子量多肽有较强的特异性。家兔感染旋毛虫后,血清抗体对表面抗原的识别,在不同感染时期具有相同的反应图谱,而对其他两种抗原的识别则具有阶段性的改变。     

旋毛虫新生幼虫抗原的免疫印迹分析

利用免疫印迹法分析了旋毛虫的新生幼虫(NBL)抗原,并与旋毛虫的成虫和肌肉期幼虫抗原加以比较。NBL虫体组分经SDS-PAGE分离出约40条区带,与成虫和肌肉期幼虫的电泳图谱明显不同。免疫印迹表明,用NBL作免疫原可诱导家兔产生具有期特异性的免疫反应,其有抗原性的分子量分别为129、120、89、87、79、72、64、58、43、40、38、34、32和20kDa。但在自然感染过程中,宿主体内未检测到抗NBL的抗体。     

旋毛虫成虫抗原的免疫保护性研究

目的 比较旋毛虫成虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原对小鼠产生的免疫保护作用。 方法 检查免疫鼠和对照鼠肠道成虫、肌幼虫和血液中的嗜酸性粒细胞数;用ELISA测血清中抗旋毛虫肌幼虫IgG抗体滴度。 结果旋毛虫成虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原免疫组的成虫减虫率分别为84.48％、89.98％和85.16％;肌幼虫减虫率分别为69.82％、78.80％和73.94％。3种抗原免疫组小鼠血中的嗜酸性粒细胞(EOS)数明显增多,血清中IgG抗体滴度明显升高,IgG抗体的几何平均倒数滴度(GMRT)分别是未免疫组的6.96、7.99和6.06倍。 结论 旋毛虫成虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原均能诱导宿主产生较强的抗攻击感染保护力,且可激发特异性体液免疫和细胞免疫。成虫的排泄分泌抗原显示出更强的免疫原性。     

旋毛虫幼虫抗原的免疫组化定位及组织化学分析

运用免疫组化定位法及组织化学分析法对旋毛虫幼虫虫体抗原及相应部位化学成分进行了研究。旋毛虫幼虫抗原活性物质被定位于幼虫角皮层、杆状体细胞、咽管和肠道内。幼虫囊包液亦显示了较强的抗原活性。组织化学分析表明，抗原相应部位具有较强的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、乙酰胆碱醋酶等酶活性，并富含蛋白质、糖原及ＰＡＳ阳性物质和一定程度的中性脂肪。ＤＮＡ主要存在于生殖原基和肠细胞核；ＲＮＡ在多种细胞内可以查见。     

旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物中46-58kD抗原诱发小鼠保护性免疫的研究

为探讨旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物（ＴｓＬ１ＥＳ）中４６５８ｋＤ抗原的保护性免疫作用，本文用该纯化抗原组分加福氏完全佐剂（ＦＣＡ）腹腔注射免疫昆明小鼠３次，继以旋毛虫感染性幼虫３００条攻击感染，感染后第７天计数小鼠肠道成虫数、第３０天肌肉幼虫数和血清抗体ＩｇＧ滴度。结果：４６５８ｋＤ抗原免疫鼠的肠道成虫减虫率、肌肉幼虫减虫率和血清抗体ＩｇＧ的几何平均倒数滴度分别为４１８％、４６１％和２８４１２；与ＴｓＬ１ＥＳ诱导的保护性免疫力（４８３％、５０２％和３４５８６）水平接近；显著高于佐剂对照组（４８％、８３％和７４８６）。表明：ＴｓＬ１ＥＳ中４６５８ｋＤ抗原组分可产生明显的保护性免疫作用     

旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠免疫保护作用的比较研究

目的　比较旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠的免疫保护作用。方法　收集人工感染大鼠小肠内的成虫, 经研磨和冻融制备成虫可溶性抗原。采用体外培养的方法从培养液中提取旋毛虫成虫排泄分泌抗原。分别用两种抗原免疫小鼠, 间隔１ 周共免疫３ 次, 末次免疫后１ 周, 每只小鼠攻击感染１００ 条旋毛虫感染性肌肉幼虫。感染后１ 周检查小鼠小肠内成虫数量和雌虫生殖力, 感染后５ 周检查肌肉幼虫负荷。结果　成虫可溶性抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别为７９５５ ％ 、６２２５ ％ 和６５０ ％ 。成虫排泄分泌抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别是９７２７ ％ 、８６６０ ％ 和９００ ％ 。结论　实验结果表明旋毛虫成虫可溶性抗原和成虫排泄分泌抗原均能够诱导宿主产生较强的抗攻击感染的免疫力, 但后者的免疫原性更强。     

抗旋毛虫肌幼虫ES抗原单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备分泌抗旋毛虫肌幼虫排泄分泌(ES)抗原单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,并对其及分泌的McAb进行鉴定。方法用旋毛虫肌幼虫ES抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌特异性、高滴度McAb的杂交瘤细胞株,制备腹水,进行纯化。ELISA间接法、夹心法和竞争法分别测定McAb滴度、相对亲和力和相加效应,琼脂双扩散试验鉴定免疫球蛋白类型,检测McAb与其他寄生虫抗原的交叉反应。电镜观察杂交瘤细胞超微结构,计数染色体数目及观察杂交瘤细胞分泌McAb的稳定性。结果筛选出2株(B2C12和E11F11)分泌抗旋毛虫肌幼虫ES抗原McAb杂交瘤细胞株。电镜显示,杂交瘤细胞具有肿瘤细胞和浆细胞的特征,胞浆内可见大量分泌颗粒;杂交瘤细胞染色体数目平均为98.6条,均能稳定分泌McAb(属IgM)。B2C12株培养上清液和腹水McAb滴度分别为1∶1280和1∶2.048×104,E11F11株为1∶640和1∶1.024×104,其中前者的相对亲和力较后者稍高。2株McAb识别ES抗原不同的抗原决定簇;且不与其他寄生虫抗原发生交叉反应。结论获得2株抗旋毛虫肌幼虫ES抗原杂交瘤细胞株,均能稳定分泌高滴度、特异性的IgM类McAb,并识别不同的抗原决定簇,为研制旋毛虫病诊断试剂盒和制备基因工程抗体奠定了基础。     

日本血吸虫虫卵与旋毛虫肌蚴间相似抗原的研究

目的 :分析日本血吸虫虫卵与旋毛虫肌蚴间共同抗原的相似程度。方法 :应用 EITB和 ELISA技术对此 2种寄生虫可溶性抗原进行了血清学交叉反应分析。结果 :EITB显示 :在Ts ML A中 ,4 4、 53、 60、 64、 66/ 70 k Da和约 10 0 k Da的抗原为 Sj IRS识别 ,而 31、 4 2、 4 6、 51/53和 58/ 60 k Da成分为 α- Sj EARS识别 ;在 Sj EA中 ,4 6、58和 64k Da抗原为 Ts IRS识别 ,58、60、64和 70 k Da成分为α- Ts MLARS识别。EL ISA显示 :在 Sj IRS中抗 Ts抗体滴度显著高于在Ts IRS中所含抗血吸虫卵的抗体滴度。结论 :日本血吸虫卵与旋毛虫肌蚴间存有较多的共同抗原决定簇 ,但两者间的相似程度有明显差异。     

旋毛虫成囊前期幼虫抗原的分析与诊断价值的研究

目的研究旋毛虫成囊前期幼虫抗原（pre－encystedlarvaantigens,PELA）的组分和诊断价值。方法应用免疫印迹对比分析PELA和成囊幼虫抗原（ELA）的组分和它们对人及大民旋毛虫病诊断的敏感性和特异性。结果PELA有3条抗原带（分子量分别为：15、17和129kD）与ELA明显不同;对于感染旋毛虫的大鼠,PELA的首次血清阳性反应出现在感染后第10天,而ELA则在感染后第14天,大鼠抗PELA血清抗体出现较早（P＜0．01）;对22份旋毛虫病人血清,PELA的阳性率为100％,ELA为72．7％,差异具有显著性（P＜0．05）;除1例鞭虫病人外,其它寄生虫病入及健康人血清,两种抗原均呈阴性反应,两种抗原的特异性无显著性差异（P＞0．05）。结论PELA比ELA对早期旋毛虫病的诊断著有更大的价值。     

旋毛虫不同发育阶段同工酶的电泳分析

目的　通过对旋毛虫不同发育阶段同工酶酶谱变化的研究 ,以探讨其生物发育过程中的一些规律。　方法　应用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)和 UVP凝胶分析仪对猪型黑龙江株旋毛虫成虫、肌肉期幼虫和新生幼虫的酯酶同工酶(EST)、乳酸脱氢酶同工酶 (L DH)、苹果酸脱氢酶同工酶 (MDH)、延胡索酸酶同工酶 (MUF)进行分析。　结果　 3个发育时期的 MDH、EST酶谱基本相似 ;L DH的酶谱虽均有 1条带 ,但新生幼虫最深 ,肌肉期幼虫最浅 ;MUF酶谱新生幼虫最深 ,成虫较浅 ,肌肉期幼虫未见酶带。　结论　旋毛虫发育过程中 MDH、EST同工酶变化较小 ,但是 L DH、MUF同工酶存在较大差异