围生期甲减对大鼠脑甲状腺激素受体基因表达的影响

目的探讨甲状腺激素缺乏对甲状腺激素受体基因表达的影响及其与甲减性脑损害的可能关系.方法以丙基硫氧嘧啶溶液灌胃造成大鼠围生期甲减模型,部分甲减仔鼠每日腹腔注射T4 2μg/100g体重.收集出生后5、15、25d的正常、甲减及T4-替代仔鼠脑组织,用竞争性RT-PCR法测定脑甲状腺激素受体α1(TRα1)和甲状腺激素受体β1(TRβ1)mRNA水平.结果与同日龄正常对照仔鼠相比,围生期甲减大鼠脑TRα1和TRβ1mRNA水平明显增加.T4-替代可使脑TRα1和TRβ1mRNA水平降低,但仍未降至正常对照水平.结论甲状腺激素对TRα1和TRβ1mRNA表达有降调节作用,甲状腺激素缺乏可引起发育期大鼠脑TRα1和TRβ1基因表达的增加.TRα1和TRβ1mRNA表达的增加可能增强特定的辅阻遏因子的作用,从而参与甲减性脑损害的形成.     

围生期甲减对大鼠脑甲状腺激素受体基因表达的影响

目的探讨甲状腺激素缺乏对甲状腺激素受体基因表达的影响及其与甲减性脑损害的可能关系.方法以丙基硫氧嘧啶溶液灌胃造成大鼠围生期甲减模型,部分甲减仔鼠每日腹腔注射T4 2μg/100g体重.收集出生后5、15、25d的正常、甲减及T4-替代仔鼠脑组织,用竞争性RT-PCR法测定脑甲状腺激素受体α1(TRα1)和甲状腺激素受体β1(TRβ1)mRNA水平.结果与同日龄正常对照仔鼠相比,围生期甲减大鼠脑TRα1和TRβ1mRNA水平明显增加.T4-替代可使脑TRα1和TRβ1mRNA水平降低,但仍未降至正常对照水平.结论甲状腺激素对TRα1和TRβ1mRNA表达有降调节作用,甲状腺激素缺乏可引起发育期大鼠脑TRα1和TRβ1基因表达的增加.TRα1和TRβ1mRNA表达的增加可能增强特定的辅阻遏因子的作用,从而参与甲减性脑损害的形成.     

甲减影响新生期鼠脑梨状皮质Goα及Gsα的基因表达

目的"研究甲状腺功能低下对新生期鼠脑梨状皮质Goα及Gsα mRNA表达的影响. 方法"采用地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交技术,对围生期正常及甲减Wistar大鼠动物模型梨状皮质Goα及Gsα mRNA的表达状况进行研究. 结果"14d龄甲减鼠脑梨状皮质Goα mRNA的表达明显升高,但其Gsα mRNA与对照组无显著差异.结论"在鼠脑发育过程中,甲状腺激素对梨状皮质Goα基因的表达具有负调作用,而对该区Gsα基因的表达则不具备调节功能.     

围生期甲减对鼠脑Goα基因表达的影响

目的：定量分析甲状腺激素缺乏对围生期大鼠脑ＧｏαｍＲＮＡ的影响。方法以ＰＴＵ溶液灌胃造成大鼠围生期甲减模型，部分甲减仔鼠每天腹腔注射Ｔ４ ２μＧ／１００Ｇ体重。收集５、１５、２５ｄ的正常、甲减及Ｔ４－替代仔鼠脑组织，用竞争性ＲＴ－ＰＣＲ法测定脑ＧｏαｍＲＮＡ。结果生５、１５、２５ｄ的甲减仔鼠脑ＧｏαｍＲＮＡ水平均较同日龄正常仔鼠明显升高，尤以１５ｄ时最为显著。Ｔ４－替代可明显减轻这种变化。结论甲状     

甲减影响新生期鼠脑梨状皮质Goα及Gsα的基因表达

目的研究甲状腺功能低下对新生期鼠脑梨状皮质Goα及GsαmRNA表达的影响。　方法采用地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交技术 ,对围生期正常及甲减Wistar大鼠动物模型梨状皮质Goα及GsαmRNA的表达状况进行研究。　结果 14d龄甲减鼠脑梨状皮质GoαmRNA的表达明显升高 ,但其GsαmRNA与对照组无显著差异。结论在鼠脑发育过程中 ,甲状腺激素对梨状皮质Goα基因的表达具有负调作用 ,而对该区Gsα基因的表达则不具备调节功能     

甲状腺激素缺乏对发育期大鼠脑甲状腺激素受体表达的影响

目的:探讨甲状腺激素缺乏对发育期大鼠脑甲状腺激素受体α1(TRα1)和β1(TRβ1)表达的影响。方法:以丙基硫氧嘧啶溶液灌胃造成大鼠围产期甲减模型,部分甲减子鼠每天腹腔注射T42μg/100 g。收集出生后5、15、25 d的正常、甲减及T4替代子鼠脑组织,     

围生期甲状腺功能减退对新生仔鼠心肌细胞自噬的影响

目的探讨心肌细胞自噬在仔鼠围生期甲状腺功能减退（简称甲减）致心功能损害中的作用,并观察左旋甲状腺素（L-T4）替代治疗后自噬指标的改变。方法SD孕鼠自孕15d起每日予丙基硫氧嘧啶（PTU）50mg/d灌胃至仔鼠出生并持续整个哺乳期,制成围生期甲减模型,出生仔鼠为甲减组,其余孕鼠每日予0.9%氯化钠溶液灌胃,出生仔鼠为对照组,部分甲减仔鼠自出生当日起予以每日腹腔注射L-T42μg/100g,为治疗组,收集甲减组、治疗组及对照组（每组8只）出生7d龄仔鼠的心室肌组织,采用Westernblot法测定并比较心肌组织自噬相关蛋白LC3与cathepsinD的表达,同时测定并比较血清甲状腺激素水平及CK-MB、LDH与AST水平。结果甲减组仔鼠CK-MB、LDH及AST水平均高于对照组（均P＜0.01）,治疗组仔鼠3者水平均较甲减组下降（均P＜0.01）;甲减组仔鼠LC3II/LC3I及cathepsinD表达水平均高于对照组（均P＜0.01）,治疗组仔鼠2者的表达水平均较甲减组降低（均P＜0.01）。结论心肌细胞自噬在围生期甲减诱发新生仔鼠心功能损害中起重要作用。     

围生期甲状腺功能低下对仔鼠大脑皮质及海马ARmRNA影响的研究

目的:研究围生期甲状腺功能低下(甲低)对仔鼠大脑皮质及海马雄激素受体mRNA(ARmRNA)表达的影响.方法:对雌大鼠从孕15 d起每日以丙基硫氧嘧啶(PTU)溶液灌胃(50mg/d)至断奶,造成大鼠围生期甲低模型 , 部分甲低仔鼠每日腹腔注射左旋甲状腺素(L-T4)2μg/100g体重.收集出生后1、 5、10、15、20 d的正常、甲低及T4-替代仔鼠的大脑皮质及海马组织,用竞争性RT -PCR法测定ARmRNA水平.结果:正常组仔鼠生后ARmRNA水平随日龄增加而增高,海马高于大脑皮质,雄性组高于雌性组.与同日龄正常对照组相比,甲低组大脑皮质及海马ARmRNA水平明显降低.T4-替代组ARmRNA水平增加,但在10、20日龄的雄性组和15、20日龄的雌性组海马的表达仍未达正常对照组水平,大脑皮质各组与正常组已无显著性差异.结论:围生期甲状腺功能低下会引起发育期大鼠大脑皮质和海马的ARmRNA表达下降,及时替代治疗能恢复大脑皮质ARmRNA的正常表达,但海马的ARmRNA表达则未能达到正常水平.     

甲状腺素对胎鼠脑bcl—2和bax基因表达的影响

目的　研究甲状腺素对胎鼠脑bcl 2和bax基因表达的影响。方法　采用丙基硫氧嘧啶灌胃制备甲减孕鼠模型 ,出生后小鼠即为先天性甲减鼠 ,另一组出生后即日起用腹腔注射T4,剂量为 2 μg/ 10 0g·d-1(替代组 ) ,采用逆转录 -聚合酶链反应检测胎鼠出生后 1、5、10d胎鼠bcl 2和bax基因的表达。结果　bax基因在甲减胎鼠脑第 1天表达最高 ,随着鼠龄增长 ,表达降低 ;正常第 1天胎鼠及替代组胎鼠脑未检测到bax表达 ;bcl 2基因在第 1天甲减胎鼠表达高于正常对照组 ;第 5天、第 10天降低 ;bcl 2在替代组鼠脑中表达较甲减组高。结论　甲状腺激素对bcl 2和bax基因表达的不同影响 ,在脑细胞凋亡中有重要的作用。     

甲状腺激素对仔鼠被膜下胸腺上皮细胞影响的超微结构观察

【目的】研究给予甲状腺激素后,仔鼠被膜下胸腺上皮细胞超微结构的变化。【方法】取300g左右的健康Wistar大鼠,交配后,雌性大鼠随机分为2组：对照组和实验组。各组均在发现阴栓后15d灌胃,直到仔鼠生后20d。实验组每只大鼠给予浓度为50g/L的甲状腺素混悬液1ml／d,对照组每天给予等量生理盐水。两组分别在仔鼠生后的1、10、20d处死,取胸腺,电镜观察被膜下胸腺上皮细胞的超微结构;采用放免法测定仔鼠血清FT3和FT4水平。【结果】与对照相比,实验组10d龄仔鼠的FT3显著升高,其余未见明显异常。实验组仔鼠胸腺上皮细胞发生了明显变化：细胞排列松散,间隙增宽;细胞水肿;凝固性坏死;胞膜溶解。【结论】在胸腺的发育过程中,过量的甲状腺激素会严重损伤胸腺上皮细胞。     

蛋白激酶C抑制剂对发育期甲状腺功能减退大鼠智力的改善作用

目的研究发育期甲状腺功能减退(甲减)的大鼠经蛋白激酶C(PKC)抑制剂bisindolylmaleimideⅪ处理后智力的变化,从信号转导途径进一步探讨甲减时鼠脑发育异常的机制。方法2只SD孕鼠自孕第15天起以丙基硫氧嘧啶溶液灌胃,出生的仔鼠即为甲减仔鼠。部分甲减仔鼠于出生当日起腹腔注射PKC抑制剂bisindolylmaleimideⅪ0.6μg.g-1.d-1。另外1只未灌注丙基硫氧嘧啶溶液的雌鼠所产仔鼠作为正常对照组。仔鼠龄达1个月时,对正常对照组(n=8)、甲减组(n=8)、PKC抑制剂处理组(n=8)仔鼠行水迷宫实验测试其智力水平。结果三组仔鼠学习记忆过程存在明显差异。PKC抑制剂组及甲减组皆较正常对照组逃避潜伏期长,找到终点的比率低,游速较正常对照组明显降低;且甲减组比PKC抑制剂组的逃避潜伏期更长,找到终点的比率更低,游速更慢,总体变化有显著性差异(P<0.01)。结论蛋白激酶C抑制剂bisindolylmaleimideⅪ对发育期甲状腺功能减退大鼠的智力有改善作用,PKC信号转导系统可能参与了甲减性脑发育障碍的发生。     

蛋白激酶C抑制剂对发育期甲状腺功能减退大鼠智力的改善作用

目的 研究发育期甲状腺功能减退(甲减)的大鼠经蛋白激酶C(PKC)抑制剂bisindolylmaleimide Ⅺ处理后智力的变化,从信号转导途径进一步探讨甲减时鼠脑发育异常的机制.方法 2只SD孕鼠自孕第15天起以丙基硫氧嘧啶溶液灌胃,出生的仔鼠即为甲减仔鼠.部分甲减仔鼠于出生当日起腹腔注射PKC抑制剂bigindolylmaleimide Ⅺ 0.6μg·g-1·d-1.另外1只未灌注丙基硫氧嘧啶溶液的雌鼠所产仔鼠作为正常对照组.仔鼠龄达1个月时,对正常对照组(n=8)、甲减组(n=8)、PKC抑制剂处理组(n=8)仔鼠行水迷宫实验测试其智力水平.结果 三组仔鼠学习记忆过程存在明显差异.PKC抑制剂组及甲减组皆较正常对照组逃避潜伏期长,找到终点的比率低,游速较正常对照组明显降低;且甲减组比PKC抑制剂组的逃避潜伏期更长,找到终点的比率更低,游速更慢,总体变化有显著性差异(P<0.01).结论 蛋白激酶C抑制剂bisindolylmaleimide Ⅺ对发育期甲状腺功能减退大鼠的智力有改善作用,PKC信号转导系统可能参与了甲减性脑发育障碍的发生.     

甲状腺激素对大鼠脑皮质发育期突触体素表达的影响

目的探讨甲状腺激素（TH）对发育关键期大鼠大脑皮质突触体素（syn）表达的作用和影响。方法选用甲巯咪唑（MM）复制甲状腺机能减退大鼠模型,实验分成正常对照组（n=42）和甲减组两组（n=36）,收集出生后第0,4,7,14,21,30,120天的正常、甲减组仔鼠脑组织。采用原位杂交组织化学法检测发育关键期仔鼠大脑皮质突触体素的表达变化情况。结果正常对照组syn mRNA在生后不同发育阶段的表达变化明显且具有层状分布的特点。生后第0天表达很低,在第4天表达最高。以后表达逐渐下降,至第30天表达水平基本接近于成年鼠水平（P120d）。甲减组synmRNA表达在各时点均明显低于正常对照组（P〈0.001）。甲减组syn mRNA表达高峰延迟3d,在出生后第7天达到高峰。结论在脑发育关键期,甲状腺激素水平的异常改变了大脑皮质突触体素的表达,进一步影响了其突触的发生及相关神经回路的建立,出现神经元的旷置或错误神经通路,阻碍了脑发育与其功能的成熟。     

T3调控氟他胺诱导大鼠隐睾生殖母细胞发育障碍及NCAM表达

目的 观察三碘甲腺原氨酸(T3)对氟他胺( Flu)诱导的SD大鼠隐睾生殖母细胞(Go)发育及神经细胞黏附分子(NCAM)表达的调控作用.方法 15μg/(kg·d)T3皮下注射Flu诱导出生后第1 d(PD1)仔鼠、PD20隐睾仔鼠,观察干预后隐睾发生率、组织学改变,免疫组化及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测N...     

甲状腺激素对新生鼠脑NOS基因表达的调节

目的"观察不同日龄新生鼠脑一氧化氮(NO)含量,一氧化氮合酶(NOS)活性的变化及甲状腺激素对nNOS基因表达的调节. 方法"采用丙基硫氧嘧啶(PTU)灌注孕母鼠造成甲减模型.采用NO、NOS的生化测定法以及半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR). 结果"生化测定法显示,不同年龄段大鼠随着年龄的增加NO含量上升(P＜0.01),NOS的活性上升(P＜0.01);同一年龄段仔鼠,甲减组较正常组NO含量下降(P＜0.01),NOS活性下降(P＜0.01);RT-PCR测定显示,幼鼠nNOS mRNA水平随着年龄的增加而上升;同一年龄组,甲减组较正常组nNOS mRNA表达下降. 结论"提示甲状腺激素对nNOS mRNA表达有上调作用;NO信号系统可能参与鼠脑发育阶段甲状腺激素缺乏所致的脑损害过程.     

甲状腺激素对大鼠脑海马发育期神经元烟碱受体α4亚单位表达的影响

目的探讨甲状腺激素(TH)对发育关键期大鼠脑海马区域神经元烟碱受体α4亚单位(nAChRα4)表达的作用和影响。方法实验分成正常对照组(n=42)和甲减组(n=36)。选用甲巯咪唑(MM)复制甲状腺机能减退大鼠模型,收集出生后第0,4,7,14,21,30,120天的正常、甲减仔鼠脑组织,每组6只。采用原位杂交组织化学法检测发育关键期仔鼠大脑海马区域神经元烟碱受体α4亚单位(nAChRα4)的表达变化情况。结果①正常对照组nAChRα4 mRNA在生后不同发育阶段的表达变化明显且具有层状分布的特点。生后第0天表达很低,在生后第14-21天nAChRα4 mRNA表达最高,然后下降,直至成年鼠水平(生后第120天)。②正常对照组nAChRα4 mRNA海马CA1区阳性信号表达高峰(生后第21天)是成年鼠的4-5倍,海马CA2、CA3区阳性信号表达高峰(生后第21天)是成年鼠的8倍左右,海马齿状回(DG)区阳性信号表达高峰(生后第14天)是成年鼠的5倍左右。③甲减组nAChRα4 mRNA表达在各时点均明显低于正常对照组(P<0.001)。甲减组表达的高峰时间与正常对照组的高峰时间相一致,无高峰延迟。结论在脑发育关键期,甲状腺激素水平的减少改变了大鼠脑海马神经元烟碱受体α4亚单位的表达,进一步影响了该区域突触的发生及相关神经回路的建立,出现神经元的旷置或错误神经通路,这可能阻碍了脑发育与其功能的成熟。     

非同位素mRNA差异显示方法的建立及应用

目的　建立非同位素mRNA差异显示技术，并用以分析鼠脑甲状腺激素的反应基因。方法　用9-10bp的随机但序列确定的引物扩增甲减和正常大鼠脑cDNA，用PAGE分析PCR产物，EB染色，切取差异条带，再扩增、测序并作同源性分析。结果　得到两个(226、279bp)受甲状腺激素上调、一个(278bp)受甲状腺激素下调的片段，前二者与任何已知基因的同源性都低于80％，提示为两个尚未报道的新基因，后者即大鼠G蛋白Go的α亚单位基因。结论　非同位素mRNA差异显示技术是一种快速、简便、灵敏的分离差异表达基因的方法　。     

不同碘营养摄入对哺乳期子代大鼠小脑浦肯野细胞蛋白-2的影响

【目的】探讨不同碘营养摄人对哺乳期子代大鼠小脑浦肯野细胞蛋白-2的影响。【方法】按体质量将4～6周龄健康Wistar雌性大鼠随机分为4组：重度缺碘组、轻度缺碘组、正常碘组和碘过量组。每组大鼠食用低碘鼠粮,饮用含不同IK浓度的自来水,雄鼠按正常组条件饲养,8周后交配,取哺乳期14和28d的仔鼠作为研究对象。砷铈催化分光光度法检测仔鼠的尿碘水平,竞争结合放射免疫分析方法检测甲状腺激素水平,实时荧光定量PCR检测浦肯野细胞蛋白-2mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹杂交和免疫组织化学方法检测其蛋白表达水平。【结果】2d龄的子鼠,在重度碘缺乏时,表现为低尿碘和甲状腺功能减退,血TF4水平明显低于正常组,浦肯野细胞蛋白-2的mRNA和蛋白表达也明显低于正常组（P〈0．05）;轻度碘缺乏和碘过量时,TT4水平接近于正常组,浦肯野细胞蛋白-2的mRNA和蛋白表达与正常组相比,有轻度落后趋势,但无显著差异。【结论】哺乳期母鼠严重碘缺乏时,严重影响仔鼠小脑浦肯野细胞蛋白-2的表达,轻度碘缺乏和碘过量影响程度较低,提示哺乳期妇女碘营养状况不可忽视。     

甲状腺机能减退性肌病激素替代治疗前后血清肌酶谱的变化

目的　探讨甲减肌病患者甲状腺激素替代治疗前后血清肌酶谱的变化。方法　分别检测 2 5例甲减肌病患者治疗前后血清肌酸激酶及其同工酶、乳酸脱氢酶、门冬氨酸氨基转移酶和α 羟丁酸脱氢酶水平 ,比较治疗前后肌酶水平的变化。结果　甲减肌病患者经甲状腺激素替代治疗甲状腺功能正常后 ,肌酶水平显著下降 (P <0 .0 0 1) ,并达正常范围。结论　甲减肌病患者肌酶明显升高 ,并随甲状腺激素替代治疗后代谢恢复正常而恢复正常 ,甲减肌病预后良好     

竞争性RT-PCR在基因表达定量分析中的应用

目的用竞争性RT-PCR测定鼠脑Goα mRNA水平. 方法通过RT-PCR制备内标和外标,将等量内标和倍比稀释的外标作竞争性共扩增,得到标准曲线.然后将等量内标与cDNA标本共扩增,通过标准曲线求出标本中靶序列的水平. 结果内标和外标在共扩增反应中表现出明显的竞争性.一鼠脑标本Goα mRNA的测定结果为17.62amol/μg总RNA. 结论竞争性RT-PCR是一种简便、快速、灵敏的测定基因表达(mRNA)水平的方法.