慢性牙周炎病人外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的检测和免疫抑制功能分析

目的：探讨慢性牙周炎病人外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与牙周炎病变程度的相关性，并进一步分析CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的免疫抑制功能。方法：应用流式细胞仪检测牙龈炎、慢性牙周炎病人和健康对照者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^＋T细胞的比例；以体外淋巴细胞混合培养法检测CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对同源CD4^＋CD25^-T细胞增殖的抑制效应，ELISA法检测培养体系中转化生长因子一B、白细胞介素一10的分泌水平。结果：轻度和中度慢性牙周炎组外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^＋T细胞的比例分别为（19．33±7．04）％和（18．56±5．79）％，显著高于健康对照组和牙龈炎组（P〈0．05）；重度慢性牙周炎组为（9．31±3．04）％，显著低于健康对照组、牙龈炎组、轻度和中度慢性牙周炎组（P〈0．05）。当与CD4^＋CD25^-T细胞1：1混合培养时，重度慢性牙周炎者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的抑制率较健康对照组、牙龈炎组、轻度和中度慢性牙周炎组降低（P〈0．05），各培养组之间转化生长因子-β、白细胞介素-10的分泌水平无显著差异。结论：轻度和中度慢性牙周炎病人外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的表达上调，而重度慢性牙周炎病人则显著下降；重度慢性牙周炎病人CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的抑制功能存在异常，可能与其接触抑制途径缺陷有关。     

T细胞免疫和细胞凋亡在口腔扁平苔藓发病中的作用

目的通过探讨口腔扁平苔藓（OLP）中细胞凋亡情况及CD4＋、CD8＋T细胞和CD4/CD8比例的变化分析细胞免疫与细胞凋亡的关系,进一步了解OLP的发病机制。方法应用免疫组化SP法检测27例OLP组织中CD4＋、CD8＋T细胞的表达水平,并用原位末端转移酶标记法（TUNEL）定位检测17例OLP中细胞凋亡情况。结果OLP组固有层中CD4＋、CD8＋T细胞明显高于对照组（P＜0.05）,CD4/CD8值降低。OLP组中上皮内细胞凋亡指数高于对照组,固有层淋巴细胞凋亡指数明显低于对照组。结论OLP组固有层中CD4＋、CD8＋T细胞浸润的增加、CD4/CD8比值的变化及OLP中上皮细胞和固有层淋巴细胞凋亡异常,说明细胞免疫功能紊乱和细胞凋亡异常在OLP发病中起重要作用。     

CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞及其在口腔中的研究现况

长期以来,由于缺乏确切的细胞表面标志和发挥抑制作用的分子基础,免疫学家对体内是否存在以抑制自身T细胞活化等免疫反应为主要功能的T细胞亚群观点各异;1995年Sakaguchi等人的实验证实了CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞具有免疫抑制作用,并将这类具有免疫抑制（或调节）功能的T细胞群统称为调节性T细胞（regulatory T cells）,     

CD25~＋ Foxp3~＋调节性T细胞和Th17细胞在口腔白斑组织中的表达

目的：通过观察CD25＋Foxp3＋和IL-17阳性细胞在口腔黏膜白斑（oral leukoplakia,OLK）和口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）组织中的表达情况,探讨Treg细胞和Th17细胞在口腔癌发生发展过程中的变化。方法：采用免疫组织化学方法检测CD25＋Foxp3＋、IL-17阳性细胞在10例单纯增生性白斑、32例异常增生性白斑、13例OSCC和10例正常口腔黏膜中的变化情况。结果：正常口腔黏膜组、单纯增生性白斑组、异常增生性白斑组和OSCC组CD25＋Foxp3＋Treg细胞数量逐渐增高（P〈0.05）,依次为（2.5±0.65）、（5.22±1.19）、（31.4±16.8）和（42.8±12.67）个/每高倍镜视野。重度异常增生白斑组织中,CD25＋Foxp3＋Treg细胞的数量高于轻、中度异常增生白斑组织（P〈0.05）。此外,正常口腔黏膜组、单纯增生性白斑组、异常增生性白斑组和OSCC组中表达IL-17的阳性细胞虽有递增趋势,但差异无统计学意义。CD25＋Foxp3＋Treg细胞和Th17细胞数量改变在口腔白斑和OSCC组织中呈正相关（r=0.318,P〈0.05）。结论：Treg细胞的数量在白斑和OSCC组织中增多,Th17细胞协同Treg细胞,在口腔癌发生发展过程中发挥了一定的作用。     

调节性T细胞和Th17细胞在OLP中的表达

目的：通过观察调节性T细胞（regulatory Tcells,Treg）和Thl7细胞（helper Tcells17,Th17）在口腔扁平苔藓（OLP）组织中的表达情况,探讨其在OLP发生发展过程中的变化。方法：应用免疫组织化学双标记技术检测35例OLP患者和19例对照组口腔黏膜组织中CD25＋Foxp3＋、CD4＋IL-17＋细胞的表达。结果：OLP组病损组织中有大量CD25＋Foxp3＋细胞浸润,较对照组显著增多,两者差异非常显著（P〈0．01）。CD4＋IL-17＋细胞在OLP组织中的表达较正常口腔黏膜组织有增加趋势,但差异无统计学意义（P〉0．05）。经进一步统计学分析,CD25＋Foxp3＋细胞和CD4＋IL-17＋细胞数量改变在OLP组织中表达呈正相关（P〈0．05）。结论：Treg细胞的数量在OLP组织中增多,Thl7细胞可能协同Treg细胞,在OLP发生发展过程中发挥了一定的作用。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在口腔鳞状细胞癌中的变化及临床意义

目的 观察CD4+CD25+调节性T细胞特异性转录因子FOXP3在口腔鳞状细胞癌(鳞癌)中的表达情况,以探讨其在口腔鳞癌发生发展中的临床意义。方法 通过免疫组化SP法检测10例正常口腔黏膜组织和36例口腔鳞状细胞癌中FOXP3的表达。结果 FOXP3阳性的CD4+CD25+调节性T细胞在高分化组中的阳性率为26.4%、中分化组为42.7%、低分化组为63.5%,与正常组2.81%相比,差异有统计学意义(P<0.05),且其阳性率与与肿瘤分化程度密切相关(P<0.05)。结论 FOXP3阳性的CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平的增加与机体免疫功能低下密切相关,其在口腔鳞癌的发生发展中可能起着重要的作用。     

口腔扁平苔藓患者CD4+T细胞中miR-155功能调控对CD4+T细胞和角质形成细胞的影响

目的 探讨糜烂型口腔扁平苔藓(erosive oral lichen planus,EOLP)患者 CD4+T 细胞中miR-155功能调控对CD4+T 细胞及角质形成细胞的影响.方法 选择EOLP 患者和健康志愿者各6名,用磁珠分离技术从外周血单个核细胞中分离 CD4 + T 细胞.以 Lipofectamin2000为载体,通过人 miR-155 agomir 和人 miR-155 antagomir及其相应阴性对照的修饰作用,实现CD4+T细胞中miR-155的功能性调控,使用ELISA检测上清中IFN-γ水平,同时用CCK8检测CD4+T细胞和角质形成细胞增殖活性.结果 EOLP患者CD4+T细胞中miR-155分别经agomir和antagomir修饰后,上清中IFN-γ含量较其阴性对照组下降(P<0.05);CD4+T细胞中miR-155功能无论上调或下调,均可以提高角质形成细胞的增殖活性,而共培养体系中角质形成细胞的细胞形态和增殖活性都会发生改变.结论 miR-155功能上调会使EOLP CD4+T细胞和角质形成细胞的增殖活性增加,而miR-155功能下调则会使EOLP CD4+T细胞增殖活性下降而角质形成细胞的增殖活性增加.     

口腔扁平苔藓患者外周血调节性T细胞水平的变化

目的:研究口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血调节性T细胞(Treg)水平的改变.方法:收集口腔扁平苔藓(普通型)患者和健康人外周血.采用流式细胞术分析其中CD4+ CD25+T细胞、CD4+ CD25highT细胞、CD4+ Foxp3+ T细胞、CD4+CD25+ Foxp3+ T细胞比例的改变.结果:OLP患者外周血中CD4+ CD25high T 细胞、CD4+ Foxp3+ T细胞水平较正常对照组明显升高(P<0.05);CD4+ CD25hight细胞与CD4+ Foxp3+ T细胞水平存在正相关性(r=0.349,P<0.05),CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞与CD4+ Foxp3+ T细胞水平存在明显正相关性(r:0.802,P<0.01).结论:OLP患者外周血调节性T细胞水平发生了改变.     

口腔扁平苔藓患者外周血iTr35细胞的分布比例及意义

目的:研究外周血诱导型调节性T细胞35(iTr35)和调节性T细胞(Treg)及白介素35(IL-35)的表达,探讨其在口腔扁平苔藓(OLP)发病机制中的作用.方法:选取2016年4月～2017年11月贵州医科大学附属医院确诊的OLP患者35例,同期25例年龄、性别匹配的健康志愿者为正常对照组,ELISA法检测外周血中...     

白细胞介素35对口腔扁平苔藓患者外周血辅助性T细胞17与调节性T细胞平衡的影响

目的探讨外源性白细胞介素(interleukin,IL)35对口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)患者外周血中辅助性T细胞17(helper T cell 17,Th17)与调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)平衡的影响。方法选取2016年10至12月就诊于贵州医科大学附属医院口腔内科黏膜专科门诊的12例OLP患者外周血(OLP组)(男性1例,女性11例,26~68岁;其中非糜烂型OLP4例,糜烂型OLP 8例),同期收集贵州医科大学附属医院体检中心的13名健康人外周血(健康对照组)(男性1名,女性12名,20~68岁),无菌提取两组外周血单个核细胞,流式细胞术(flow cytometry,FCM)分选外周血CD4+T细胞,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测两组外周血CD4+T细胞中Th17、Treg细胞特异转录因子维甲酸相关孤核受体γt(retinoic acid receptor-related orphan receptorγt,RORγt)、叉头状转录因子(forkhead box3,Foxp3)mRNA表达水平;将OLP患者外周血分选出的CD4+T细胞分为实验组与对照组,实验组加入重组人IL-35蛋白(recombinant human IL-35,rhIL-35),对照组加入等体积磷酸盐缓冲液,分别进行细胞体外培养,收集培养结束后的细胞,qPCR检测上述因子的表达水平。结果OLP组CD4+T细胞中Foxp3、RORγt mRNA的相对表达量[M(Q25,Q75)分别为0.15(0.09,0.30)和1.04(0.45,2.15)]均显著大于健康对照组[分别为0.04(0.02,0.06)和0.10(0.05,0.11)](Z=-4.134,P<0.01;Z=-3.699,P<0.01)。OLP组RORγt/Foxp3 mRNA比值[6.22(3.67,15.34)]显著大于健康对照组[2.50(1.24,5.23)](Z=-2.665,P=0.007)。OLP患者外周血实验组CD4+T细胞Foxp3 mRNA相对表达量[0.40(0.21,1.22)]显著大于对照组[0.15(0.11,0.26)](Z=-2.510,P=0.012),两组RORγt mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),实验组RORγt/Foxp3 mRNA比值[3.44(1.55,8.16)]显著小于对照组[6.22(4.43,12.21)](Z=-2.746,P=0.006)。结论OLP患者外周血中存在Th17细胞占优势的Th17/Treg平衡异常,外源性IL-35可通过促进Treg细胞扩增,实现对OLP患者外周血中Th17/Treg平衡的调节。     

LAIR-1与 TGF-β在口腔扁平苔藓患者外周血中表达的相关性研究

目的：研究 LAIR-1和 TGF-β在口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血中的表达情况,探讨 LAIR-1和 TGF-β对 OLP 患者免疫功能的影响。方法：采用流式细胞术检测 LAIR-1在 OLP 患者（n ＝22）和健康人（n ＝22）外周血 Treg 上的表达水平, ELISA 检测外周血 TGF-β的水平。结果：OLP 患者外周血 CD4＋Foxp3＋Treg 上 LAIR-1阳性率高于健康人,TGF-β的水平亦高于健康人,LAIR-1在 CD4＋Foxp3＋Treg 上的表达水平和 TGF-β的水平呈正相关（r ＝0．43,P ＜0．05）。结论：LAIR-1和TGF-β在 OLP 患者外周血中表达上调,提示 LAIR-1和 TGF-β可能参与了 OLP 的发病。     

CD8~+CD28~-调节性T细胞在颞下颌关节紊乱病中的作用及其与雌激素的相关性

目的初步探讨CD8+CD28-调节性T细胞在颞下颌关节紊乱病(temporomandibular disorders,TMD)发病机制中的作用、其表达与雌激素的相关性以及临床意义。方法 TMD患者随机分为观察组与对照组各30例,对照组仅给予透明质酸钠关节腔注射治疗,观察组在对照组的基础上给予咬合板治疗;另外收集30例健康志愿者血样。采用流式细胞术检测纳入对象外周血、关节液内CD8+CD28-调节性T细胞以及白介素10与转化生长因子β1的含量;放射免疫法检测雌二醇的含量;评价治疗前后颞下颌开口指数及视觉模拟疼痛评分的变化。结果治疗前两组患者外周血雌二醇、CD8+CD28-T细胞、白介素10及转化生长因子β1的百分比均明显高于志愿者(P<0.05),外周血、关节液中以上4项指标在观察组与对照组之间的差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后两组以上指标均有不同程度下降,但观察组显著低于对照组(P<0.05)。治疗后观察组颞下颌开口指数及视觉模拟疼痛评分均低于对照组(P<0.05)。相关性分析显示CD8+CD28-T细胞及其细胞因子与雌激素及颞下颌开口指数、视觉模拟疼痛评分呈正相关性(P<0.05)。结论 TMD患者外周血及颞下颌关节液中CD8+CD28-T细胞的含量与雌激素水平呈正相关性,与其临床症状密切相关。     

调节性T细胞和白介素15在口腔扁平苔藓中的表达及意义

目的:研究外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)和白介素15 (IL-15)的表达在口腔扁平苔藓(OLP)发病机制中的作用.方法:采用免疫荧光染色技术,经流式细胞仪检测36例口腔扁平苔藓患者和20例正常人外周血Treg表达水平.应用ELISA技术检测外周血IL-15的表达水平,采用SPSS16.0软件包对其表达差异进行统计学分析.结果:口腔扁平苔藓患者外周血CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞数量较正常组显著上升,IL-15表达水平也显著高于正常组,但是口腔扁平苔藓糜烂型与非糜烂型之间的差异无显著性.Treg的表达与IL-15的水平呈正相关(P＜0.05).结论:Treg和IL-15的表达上升可能是OLP的发病机制之一.     

侵袭性牙周炎患者外周血CD-4+CD-25+调节性T细胞的检测及功能分析

目的 探讨侵袭性牙周炎患者外周血中CD4+CD-25+调节性T细胞比例及其免疫抑制功能的变化,以期加深对侵袭性牙周炎免疫调节机制的认识.方法 应用流式细胞仪计数牙周健康者17例、慢性牙周炎患者17例和广泛型侵袭性牙周炎患者16例外周血中CD-4+CD-25+调节性T细胞的比例;免疫磁珠法分离受试者外周血中CD-4+CD-25+调节性T细胞和CD-4+CD-25-T细胞,体外淋巴细胞混合培养法检测CD-4+CD-25+调节性T细胞对同源CD-4+CD-25-T细胞增殖的抑制效应.结果 侵袭性牙周炎患者外周血中CD-4+CD-25+调节性T细胞占CD-4+T细胞的比例为(9.71±4.01)%,显著低于牙周健康者[(14.72±3.51)%]和慢性牙周炎患者[(17.01±5.16)%],差异有统计学意义(P<0.05);当CD-4+CD-25+调节性T细胞与CD-4+CD-25-T细胞的比例为2:1、1:1、1:2时,侵袭性牙周炎患者CD-4+CD-25+调节性T细胞的抑制率[分别为(31.37±5.12)%、(24.47±5.53)%及(19.36±3.58)%]较慢性牙周炎患者[分别为(54.14±8.23)%、(41.72±6.35)%及(28.21±5.31)%]和牙周健康者[分别为(58.02±9.62)%、(45.25 ±8.11)%及(29.56±4.23)%]显著降低(P<0.05).结论 侵袭性牙周炎患者外周血CD-4+CD-25+调节性T细胞在数量上存在异常,并可能伴有抑制功能缺陷.     

4-1BB、CD8在口腔扁平苔藓组织中的表达研究

目的 检测共刺激信号4-1BB及CD8在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)组织中的表达,探讨OLP病损中4-1BB介导CD8⁺ T细胞免疫应答的潜在机制。方法 选取31例OLP患者(糜烂型15例、非糜烂型16例),15例健康成人(对照组)为研究对象,收集其临床及病理资料,采用免疫组织化学法检测局部组织中4-1BB、CD8的表达情况。结果 OLP患者局部组织中4-1BB及CD8的表达高于对照组(P<0.05),且两者表达呈正相关(r=0.389,P<0.05),糜烂型OLP患者中CD8、4-1BB表达高于非糜烂型(P<0.05)。在OLP不同的临床亚组中,VAS评分、REU评分及基底细胞损伤程度均表现出差异(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,CD8与基底细胞损伤程度呈正比(P<0.05),CD8、4-1BB分别与VAS评分、REU评分存在正相关性(P<0.05)。结论 OLP患者局部组织中4-1BB表达升高,其与疾病活动进展程度呈正相关,4-1BB可能通过调控CD8⁺ T细胞参与OLP的发生发展。     

Treg与IL-17在复发性口腔溃疡中表达的相关性研究

目的:探讨Treg细胞和IL-17在复发性口腔溃疡(RAU)发病机制中的作用。方法:采用流式细胞术检测复发性口腔溃疡(n=21)和健康人(n=21)外周血中调节性T细胞比例的变化,采用流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+Treg在T淋巴细胞中的比例,ELISA检测外周血IL-17水平的变化。结果:复发性口腔溃疡的溃疡期CD4+CD25+Foxp3+Treg水平低于对照组,而IL-17的表达则高于对照组,CD4+CD25+Foxp3+Treg的比例和IL-17的表达呈负相关(r=-0.582,P0.05)。结论:调节性T细胞和IL-17在RAU患者的外周血中的表达异常,可能在RAU的发生发展中发挥了一定的作用。     

口腔扁平苔藓外周血中辅助性T细胞/调节性T细胞平衡与临床特征相关性分析

目的 了解口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血中辅助性T细胞17（Th17）与调节性T细胞（Treg）的平衡变化,探讨它们在OLP发病机制中的作用及意义。方法 选取17例正常组和33例OLP患者（网纹型15例,糜烂型18例）的外周血,应用流式细胞术（FCM）检测Th17、Treg细胞的表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测它们的转录因子维甲酸相关孤核受体γt（RORγt）和叉头状转录因子3（Foxp3）mRNA的表达。结果 OLP外周血中Th17、Treg细胞及RORγt、Foxp3 mRNA表达均升高（P<0.05）,但Treg细胞和Foxp3 mRNA表达在OLP两型间差异无统计学意义。Th17/Treg比值在OLP中升高（P<0.05）,其中糜烂型OLP显著高于正常组及网纹型OLP（P<0.01）,但网纹型OLP与正常组相比差异无统计学意义。Spearman相关分析显示Th17细胞和Th17/Treg比值与体征计分、RAE计分存在正相关关系（r=0.66,P=0.00;r=0.66,P=0.00;r=0.52,P=0.00;r=0.50,P=0.00）;同时Th17细胞与Treg细胞也存在正相关关系（r=0.39,P=0.03）。结论 OLP外周血中Th17和Treg细胞以及它们的比例均增高,Th17/Treg失衡在糜烂型OLP的发病过程中起了一定作用。     

口腔扁平苔藓患者外周血单个核细胞中 PD-1和 PD-L1的表达及意义

目的：了解口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中 PD-1 mRNA、PD-L1 mRNA 的表达及意义。方法：分别采用流式细胞术和散射比浊法分析36例 OLP 患者外周血淋巴细胞亚群（CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD19＋、CD16＋＋56＋）状况和检测患者体液免疫指标（lgG、lgA、lgM、C3、C4）。采用荧光定量 PCR 法（qPCR）检测36例 OLP 患者及18例健康对照组 PB-MCs 中 PD-1 mRNA、PD-L1 mRNA 的表达情况并分析其与 OLP 患者免疫功能状况的相关性。结果：OLP 患者外周血中 CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD16＋＋56＋（NK）均低于正常值（P ＜0．05）,CD19＋（B）高于正常值（P ＜0．05）;血清补体 C3、C4较正常值降低（P ＜0．05）,免疫球蛋白 lgM较正常值增高（P ＜0．05）。OLP 患者 PBMCs 中 PD-1 mRNA 及 PD-L1 mRNA 的相对表达量均高于对照组（P ＜0．05）,且 PD-1 mRNA 与 PD-L1 mRNA 的相对表达量呈正相关。PD-1 mRNA 的相对表达量与 OLP 患者 CD4＋呈负相关,与 lgG 呈正相关;PD-L1 mRNA 的相对表达量与 CD19＋呈正相关。结论：OLP 患者 PBMCs 中 PD-1、PD-L1 mRNA 的表达上调与 OLP 患者免疫功能状况相关,提示 PD-1／PD-L1通路可能参与 OLP 的免疫发病机制。     

曲安奈德和帕夫林联合治疗老年糜烂型OLP疗效观察

目的：探讨局部注射曲安奈德配合口服帕夫林治疗老年人糜烂型OLP的疗效。方法：对34例老年糜烂型OLP患者用药治疗前后检测T淋巴细胞亚群的变化及观察临床疗效指标。结果：患者经治疗后临床有效率91.18%,T淋巴细胞亚群检测CD3＋、CD4＋T细胞升高（P〈0.01）,CD8＋T细胞下降（P〈0.01）,CD4＋/CD8＋治疗后上升（P〈0.01）。结论：口腔糜烂型OLP经治疗后,临床疗效肯定,血中T淋巴细胞亚群状态有明显改善。     

舌鳞状细胞癌中肿瘤干细胞对放疗敏感性体外研究

目的：探讨舌鳞状细胞癌中肿瘤干细胞对放疗的敏感性。方法：采用磁珠分选技术、细胞免疫荧光染色和细胞增殖活性试验等方法,研究经分选后得到的肿瘤干细胞和阴性细胞在放疗后细胞增殖活性方面的差异。结果：细胞免疫荧光结果显示,CD133和 CD44在分选出来的 CD133＋/CD44＋细胞高表达,而在 CD133-/CD44-细胞基本不表达。CCK8实验结果显示,分选出来的 CD133＋/CD44＋细胞较 CD133-/CD44-细胞在放疗的作用下具有更高的细胞相对增殖率。结论：经磁珠分选出来的舌癌肿瘤干细胞（CD133＋/CD44＋细胞）更能耐受放疗的作用。