龙葵碱对HepG2细胞线粒体膜电位及细胞内[Ca^2＋]i的影响

目的：观察龙葵碱对HepG2细胞线粒体膜电位及细胞内[Ca^2＋]i的影响，揭示龙葵碱诱导细胞凋亡的机制。方法：采用AO／EB双染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞形态学改变；TMRE单染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞线粒体膜电位的改变；Fluo-3／AM单染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞内[Ca^2＋]i的改变；TMRE和Fluo-3／AM双染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca^2＋]i的改变。结果：形态学实验表明0．0032μg／mL、0．016μg／mL龙葵碱使细胞外周呈微弱皱缩状改变，0．08、0．4、2μg／mL龙葵碱使HepG2细胞出现大量碎片及凋亡小体等典型的细胞凋亡形态，即龙葵碱能够诱导HepG2细胞凋亡；TMRE单染激光共聚焦测定表明龙葵碱能够降低HepG2细胞膜电位；Fluo-3／AM单染激光共聚焦测定表明龙葵碱能够升高肿瘤细胞内[Ca^2＋]。浓度；TMRE和Fluo-3／AM双染激光共聚焦观察表明龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca^2＋]i浓度。结论：龙葵碱能够诱导HepG2细胞凋亡，其机制为降低HepG2细胞膜电位，开放细胞膜PT通道，使细胞内Ca^2＋顺浓度梯度转运，从而升高细胞内Ca^2＋浓度启动细胞凋亡机制。     

成年大鼠心肌细胞高效激光共聚焦显微镜钙成像方法

目的建立高效易行的测定心肌细胞钙成像方法。方法Langendorff灌流获取成年大鼠心室肌细胞。大鼠心肌细胞经Fluo-4染色后分别加入玻璃底的6孔培养板中,连接Ion C-Pace EP刺激器,于激光共聚焦显微镜下测定胞内钙离子浓度的动态变化。结果约80％的细胞跟随所设频率规律的收缩。激光共聚焦显微镜记录到与刺激器频率相同的有规则的细胞钙瞬变。加入咖啡因后钙释放增加,提示此为钙库的钙释放。结论利用新型的刺激装置,结合激光共聚焦显微技术,我们成功地获得了高效易行的成年大鼠心肌细胞Ca^＋成像方法。此法也可用于其他实验动物心肌细胞,易于记录细胞内钙离子浓度的动态变化。     

β-榄香烯海藻酸钙-壳聚糖微囊的制备

采用乳化-内部凝胶化技术制得载β-榄香烯的海藻酸钙凝胶微球,然后与壳聚糖反应制得β-榄香烯海藻酸钙-壳聚糖微囊.利用激光共聚焦扫描显微镜和激光粒度仪观测所得微囊的形态、粒径及分布,通过气相色谱法考察体外释放性能.结果表明制品球形度好、膜层均匀,粒径呈正态分布,体外释放曲线符合Higuchi方程.     

共聚焦激光扫描显微镜在反向银屑病诊断中的应用研究

目的探讨共聚焦激光扫描显微镜在反向银屑病诊断和鉴别诊断中的应用价值。方法选取临床疑诊反向银屑病的患者20例,比较共聚焦激光扫描显微镜扫描检查和常规组织病理检查的结果。结果20例患者共聚焦激光扫描和组织病理检查结果经统计学分析,无显著性差异。结论共聚焦激光扫描为反向银屑病提供了有价值的、无创的、新的诊断方法。     

氧化苦参碱诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的实验研究

目的　研究氧化苦参碱对MCF 7细胞的诱导凋亡作用机制。方法　用光学显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳等技术观察细胞凋亡。结果　实验显示氧化苦参碱作用于体外培养的MCF 7细胞可诱导发生凋亡 ,凋亡细胞表现为细胞固缩 ,核染色质聚集或碎裂、胞质空泡化等 ;DNA电泳可见DNA梯形条带 ;激光共聚焦显微镜示DNA含量下降 ,流式细胞仪检测sub G1峰在G1期前出现 ,S期细胞比例增高。结论　氧化苦参碱对体外培养MCF 7细胞生长有抑制作用 ,机制与通过阻止细胞周期的进程 ,启动细胞自身调控程序 ,诱导肿瘤细胞凋亡有关     

激光共聚焦扫描显微镜技术在大鼠皮层神经元细胞内钙离子浓度动态测定中的应用

目的探讨激光共聚焦扫描显微镜(LCSM)技术在动态测定神经元细胞内钙离子浓度中的应用。方法采用原代培养大鼠皮层神经元,用LCSM测定给KCl前后细胞内钙离子浓度的动态变化。结果培养神经元状态良好,用LCSM准确、稳定、可靠地测出细胞内钙离子浓度的动态变化。结论LCSM在动态测定神经元细胞内钙离子浓度中具有明显优势。     

萤光显微技术及其进展

自1976年在美国和1978年在西德召开了第五次和第六次国际自动细胞学工程基础会议以来,细胞学自动分析技术所显示的成就日益显著。由于电子计算机、激光和新型光电器件的进展,在光学显微镜特别是萤光显微技术和分光光度技术基础上发展了细胞自动分析系统,它基本上有两种类型:高分辨系统即扫描显微光度计和低分辨系统即多参数流动细胞自动分析系统。生物科学和医学分析技术从繁琐的显微描述,小样品分析和试管试验进入快速自动定量分析体系。当代物理科学、化学、数学等     

FABP3基因荧光载体构建及其蛋白的亚细胞定位

目的构建脂肪酸结合蛋白3(FABP3)基因的荧光表达载体FABP3-pEGFP-N2,并应用绿荧光融合蛋白技术检测FABP3蛋白的亚细胞定位。方法 RT-PCR法获得FABP3基因编码框,克隆到pEGFP-N2载体中,利用脂质体将构建的表达载体转染P19细胞后,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察细胞内FABP3蛋白定位。结果成功克隆FABP3基因片段,并将其重组到pEGFP-N2载体中。荧光显微镜和激光共聚焦显微镜显示,FABP3蛋白主要分布于P19细胞的胞浆和胞核中。结论成功构建了FABP3-pEGFP-N2真核表达载体,FABP3在P19细胞的胞浆和胞核中呈弥漫分布特点。     

激光针灸的作用机制与光源的选择依据

激光针灸是现代激光技术与传统经络穴位理论相结合的产物,利用聚焦激光作为"针",扩束激光进行"灸",传承了传统的针灸技术,但其作用的机制及效果与输入激光的波长及流量等密切相关。为了同时具备"针"与"灸"的作用效果,需要使用复合光源,即使用0.6~2μm范围的激光作为"针",使用5~13.5μm范围的激光进行"灸"。采用普通半导体与量子级联激光器的组合,为激光针灸仪器小型、轻便、节能方向发展提供可能。     

补肾生血中药治疗β地中海贫血的临床研究和免疫功能测定

目的：进一步观察补肾生血中药治疗β地中海贫血的疗效和对免疫功能的影响。方法：从１９９８年１０月至１９９９年１月和中药治疗地中海贫血１７例。中药方剂以生地、熟地、太子参和当归等１２味中药组成，并辩证加味，煎服，每日１剂，分３次内服，３个月为一疗程。用流式细胞计和激光共聚焦扫描显微镜测定免疫功能。结果：１６例症状改善，肝脾缩小，Ｈｂ增加１０－２３ｇ／Ｌ，平均增加１６．７ｇ／ＬＨｂＦ增加０．０２￣０．３     

骨髓来源成骨细胞体外成骨表达的研究

目的探索在体外诱导兔骨髓基质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)向成骨细胞分化及成骨表达的特性。方法抽取兔骨髓,通过离心法获取单个核细胞,在体外经条件培养基培养21d,通过倒置显微镜及激光共聚焦显微镜观察成骨细胞的形态学特点;应用MTT法测定成骨细胞活性;并检测成骨细胞分泌碱性磷酸酶活性及形成矿化结节情况。结果体外BMSCs可在成骨条件培养液下诱导培养后可向成骨细胞分化,经倒置显微镜和激光共聚焦显微镜观察证实,诱导后BMSCs由长梭形转变为短胖形的成骨细胞,MTT检测成骨细胞活性良好,分泌碱性磷酸酶并形成矿化结节。结论骨髓基质干细胞在体外可定向诱导为成骨细胞,并具有成骨细胞功能,有希望成为理想的种子细胞应用于临床。     

雌二醇对内毒素诱导的骨髓巨噬细胞白介素-10的表达影响及机制研究

目的研究雌二醇对内毒素诱导的小鼠骨髓巨噬细胞白介素-10(IL-10)的表达调控作用及其相关机制,以期为临床更好地防治相关炎性疾病提供新思路。方法选用4周龄C57BL/6j雄性小鼠,体外培养骨髓巨噬细胞。收集细胞,用激光共聚焦扫描显微镜检测雌激素受体。将细胞与内毒素孵育的同时,分别加入雌二醇,他莫昔芬及雌二醇,24h后收集培养液,用ELISA法检测IL-10的含量,并提取细胞蛋白,用Western blotting法检测各处理组核转录因子κB(NF-κB)的激活情况。结果激光共聚焦扫描显微镜检测结果显示小鼠骨髓巨噬细胞表达雌激素受体。ELISA检测结果显示内毒素诱导细胞表达IL-10,雌二醇本身对IL-10的表达无影响,却可抑制内毒素诱导的IL-10表达,而此抑制作用被他莫昔芬拮抗。同时,Western blotting检测到内毒素激活细胞NF-κB通路,雌二醇抑制内毒素诱导的NF-κB活化,而此抑制作用可被他莫昔芬拮抗。结论雌二醇通过雌激素受体抑制内毒素诱导的小鼠骨髓巨噬细胞IL-10的表达,此抑制作用与雌激素抑制内毒素对细胞NF-κB通路的激活有关。     

基于光学相干断层扫描冻干显微镜的设计研究

根据化工设备设计的一般要求和技术规范设计冻干显微镜(FDM)装置,通过查阅文献和计算,确定相关的参数。主要从冻干箱与冷凝器的尺寸、抗压强度、传热性能等几个方面进行FDM结构设计,并与光学相干断层扫描技术(OCT)和可调谐二极管激光吸收光谱(TDLAS)相结合,尝试开发新型冻干显微镜装置,以期实现在线监测冻干小瓶内制品的显微结构、温度、真空度和水蒸气浓度。     

PKC对两种表达系统中内向整流性钾通道调节的不同及机制研究

目的分别在蛙卵细胞和COS-7细胞中表达Kir2.3通道,观察PKC的激动剂PMA对两种细胞中表达的Kir2.3通道电流调节的不同,并通过共聚焦显微镜扫描方法研究PIP2水解在PKC调节这两种细胞中Kir通道的作用。方法用显微注射方法和磷酸钙介导的质粒DNA细胞转染法分别将Kir2.3通道表达于蛙卵细胞和培养的COS-7细胞中,用双电极电压钳方法和全细胞电流膜片钳记录法检测PMA对两种细胞中表达的Kir2.3通道电流的作用。用共聚焦显微镜扫描法检测细胞膜PIP2水解。结果在蛙卵细胞的双电极电压钳实验中,PMA能够明显抑制蛙卵细胞中表达的Kir2.3通道的电流,而PMA不能抑制COS-7细胞中表达的Kir2.3通道的电流。激光共聚焦扫描的方法结果发现PMA不能使COS-7细胞膜上的PIP2水解,这一结果同细胞电生理的结果相一致。提示了PIP2的水解在PKC对Kir通道的调节过程中起重要的作用。结论PMA通过激活PKC抑制表达于蛙卵细胞中的Kir2.3电流而对表达于COS-7细胞中的Kir2.3电无作用;PMA可促进蛙卵细胞中的PIP2水解,而对COS-7细胞中的PIP2无影响;因此,PIP2的水解在PKC对Kir通道的调节中可能起着重要的作用。     

钛种植体表面原位包裹大鼠骨髓基质细胞的研究

目的探讨钛种植体表面对大鼠骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）进行原位包裹的方法,为钛种植体表面组织工程支架构建提供实验基础。方法采用层层自组装技术在钛种植体表面构建以壳聚糖/海藻酸钠为组分的聚电解质多层膜结构,同时对BMSCs进行原位分层包裹,并通过扫描电镜及激光共聚焦显微镜观察包裹细胞的生长状态。结果扫描电镜及激光共聚焦显微镜观察证实BMSCs被成功包裹于钛种植体表面,并保持良好的生物学活性。结论钛种植体表面可以实现对BMSCs的原位分层包裹。     

激光共聚焦显微镜观察铜绿假单胞菌生物膜的形成

目的采用激光共聚焦显微镜技术观察铜绿假单胞菌形成生物膜,进一步揭示了铜绿假单胞菌生物膜形成过程。方法使用盖玻片生物膜培养法,培养铜绿假单胞菌的生物膜,在培养2、4、8、12、16、24、48和72h后取出盖玻片,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的刀豆蛋白A(FITC-ConA)和碘化吡啶(PI)双重免疫荧光技术染色,用激光共聚焦显微镜(CLSM)观察铜绿假单胞菌生物膜形成过程与特点。结果获得生物膜形成过程不同时间点的CLSM图像,观察到铜绿假单胞菌一般在24h后开始逐渐形成生物膜,在72h形成稳定的生物膜。结论双重免疫荧光染色技术和CLSM是观察细菌生物膜形成过程的有效手段。     

浅谈激光扫描共聚焦显微镜的使用维护及保养

阐述激光扫描共聚焦显微镜的组成及工作原理,并根据使用共聚焦显微镜所积累的经验,提出激光扫描共聚焦显微镜的日常使用所遇见的问题,以及共聚焦显微镜主要部件的维护与保养方法.     

2-APB对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞内质网应激途径凋亡的影响

目的观察2-APB对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞内质网应激途径凋亡的影响。方法体外培养SKOV3细胞,分别加入3.5、7和14μg/ml顺铂作用12和24 h后,用MTT法检测顺铂对SKOV3细胞的抑制率,应用激光共聚焦显微镜观察细胞质内钙离子浓度变化;将SKOV3细胞随机分为空白对照组、顺铂组、2-APB组和顺铂+2-APB组,分别处理24 h后,用倒置相差显微镜观察顺铂对SKOV3细胞形态的影响,用激光共聚焦显微镜观察细胞质内钙离子浓度变化;分别处理12 h后,采用Western blot检测Caspase-3、CHOP和GRP78蛋白表达。结果 MTT结果显示,3.5、7和14μg/ml顺铂作用SKOV3细胞12和24 h,SKOV3细胞存活率明显降低,作用12和24 h的IC50分别为(14.7±0.1)μg/ml和(6.6±0.1)μg/ml。激光共聚焦显微镜检测发现,随顺铂浓度及作用时间的增加,SKOV3细胞质游离钙离子浓度逐渐增加。顺铂与2-APB联合作用后,经倒置相差显微镜观察,与顺铂组比较,顺铂+2-APB组细胞密度明显增多。MTT结果显示,与顺铂组比较,顺铂+2-APB组细胞存活率由56.8%±0.9%上升至74.4%±1.0%,激光共聚焦显微镜检测发现,游离钙荧光点数由(58.4±0.2)×10~3个降低至(23.8±0.3)×10~3个,差异有统计学意义(P0.01)。Western blot结果表明,与顺铂组比较,顺铂+2-APB组的Caspase-3、CHOP和GRP78蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论细胞内钙离子参与调控顺铂诱导的SKOV3细胞凋亡。     

共聚焦超分辨率成像与SIM超分辨率成像在蒿草生物组织样本荧光成像中的使用价值分析

目的 研究分析共聚焦超分辨率成像与SIM超分辨率成像在蒿草生物组织样本荧光成像中的使用价值。方法 使用激光扫描共聚焦显微镜对蒿草生物组织样本进行荧光成像和使用结构光照明显微镜对蒿草生物组织样本进行SIM超分辨率荧光成像。实验分为三组。(1)使用激光扫描共聚焦显微镜对蒿草组织样本共聚焦普通成像;(2)使用激光扫描共聚焦显微镜的超分辨率成像模块对蒿草组织样本超分辨率成像;(3)使用结构光照明显微镜对蒿草组织样本SIM超分辨率成像。结果 激光扫描共聚焦显微镜不仅可获取蒿草组织样本的不同倍数共聚焦普通图像,而且可获取蒿草组织样本的共聚焦超分辨率图像;结构光照明显微镜可获取蒿草组织样本的SIM超分辨率荧光图像。结论 激光扫描共聚焦显微镜和结构光照明显微镜均可对生物组织样本进行超分辨率成像。共聚焦超分辨率成像图像清晰度较高,色彩对比度明显,而SIM超分辨率成像具有显示组织样本局部的超微结构细节更加突出的特点。     

原花青素对大鼠离体肝细胞的影响

原花青素是近年来我国广泛用于保健食品的原料 ,它以其优越的抗氧化特性而倍受保健食品生产厂家的青睐[1] 。它的抗氧化作用机制主要是由于清除自由基的功能[2 ] 。为从亚细胞水平探讨其作用机制 ,我们利用特异性标记内质网荧光分子探针———D 2 73(DIOC6 ) ,在ACAS5 75型激光共聚焦显微镜上 ,采用离体实验方法 ,观察了不同浓度的原花青素水溶液对肝细胞内质网的影响。1　材料与方法1 1　材料　原花青素由深圳市邦乐生物技术有限公司提供 ,纯度 >98%。ACAS5 75型激光共聚焦显微镜。实验动物 :SD大鼠 ,清洁级 ,由北京维通利华实验动物…