含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞株凋亡的机制

目的:探讨含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞株凋亡的机制.方法:用血清药理学方法,把含不同浓度蟾酥胶囊的血清加入体外培养的人肝癌BEL-7402细胞,分别孵育24、48 h,显微镜下观察细胞形态学改变;MTT比色检测细胞的存活率;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;琼脂糖凝胶电泳测定DNA条带;免疫细胞化学显色检测Bcl-2蛋白的表达.结果:实验组部分细胞凋亡,形态学改变;细胞存活率降低,增殖受到抑制;流式细胞仪检测,可见凋亡峰;孵育48 h,琼脂糖凝胶电泳呈梯状条带(DNA Ladder);免疫细胞化学检测,Bcl-2表达明显降低.结论:蟾酥胶囊诱导人肝癌细胞BEL-7402株凋亡的作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关.     

碱性成纤维细胞生长因子对人肝癌Bel-7402细胞Skp2和p27^Kip表达的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对肝癌Bel-7402细胞Skp2、p27Kip表达的影响,探讨bFGF调控肝癌细胞增殖的信号转导机制.方法:分为对照组、bFGF组、bFGF+Wortmannin组,MTT法分析细胞增殖程度;流式细胞术分析细胞周期;RT-PCR法检测Skp2的mRNA表达;免疫印迹法检测Skp2、p27Kip蛋白的表达.结果:bFGF组细胞增殖比显著增加;bFGF可诱导细胞由G1期进入S期,而且上调Skp2的mRNA和蛋白表达、下调p27Kip蛋白表达;PI3K的抑制剂Wortmannin可部分抑制bFGF的上述作用.结论:bFGF可能通过激活PI3K/PKB途径调节Skp2、p27Kip表达,促进肝癌Bel-7402细胞增殖.     

含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡并下调Bcl-2的表达

目的 探讨含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的作用机制.方法 用中药血清药理学方法,不同浓度含药血清加入体外培养的人肝癌BEL-7402细胞,分别孵育24h、48h,显微镜下观察细胞形态学变化,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状条带,免疫细胞化学染色检测Bc...     

大蒜素诱导人肝癌BEL—7402细胞凋亡

目的　探讨大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡作用。　方法　MTT法检测大蒜素对BEL 740 2细胞的生长抑制作用 ,光镜、电镜、流式细胞术观察大蒜素诱导BLE 740 2细胞凋亡作用。　结果　 10、2 0、40ml L大蒜素皆能抑制BEL 740 2细胞生长 ,其抑制作用与剂量、作用时间呈正相关。 6 0mg L大蒜素作用 3h ,BEL 740 2细胞出现典型凋亡形态学变化 :细胞体积缩小 ,微绒毛消失 ,染色质浓聚、边集、裂解 ,细胞表面凸起多个小泡或小球状小体 ,凋亡细胞拒染台盼蓝等。台盼蓝染色计数对照组凋亡率 2 0 2± 0 37% ,诱导组凋亡率 78 48± 3 15 % ;流式细胞分析对照组凋亡率 1 78± 0 48% ,诱导组凋亡率 74 0 7± 3 94% ,对照组诱导前时G0 /G1 、S、G2 /M期细胞分别为47 6 6± 2 72 % ,2 2 0 6± 2 0 4% ,30 2 5± 3 78% ,皆低于 74 0 7± 3 94%。　结论　大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡 ,其诱导凋亡效果明显 ,并推测大蒜素诱导BEL 740 2细胞可能自细胞周期不同分期多点启动凋亡     

华蟾素对肝癌Bel-7402细胞放疗敏感性的影响及其作用机制的研究

目的 探讨华蟾素对肝癌Bel-7402细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法 分别使用浓度为0.125、 0.250、 0.500、1.000 μg/mL华蟾素处理肝癌Bel-7402细胞24 h、48 h、72 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的影响,根据半数抑制浓度(IC₅₀)选择华蟾素浓度及作用时间。用0 μg/mL(对照组)和0.4 μg/mL华蟾素处理肝癌Bel-7402细胞,同时用剂量为0、2、4、6、8 Gy的6 MV X线进行照射,克隆形成实验检测细胞放疗敏感性。用IC₅₀为0.4 μg/mL华蟾素、6 Gy的X线分别单独或联合处理肝癌Bel-7402细胞,48 h后流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot检测细胞中p50、p65、Bcl-2、cyclin D1蛋白表达情况。结果 华蟾素能够显著抑制肝癌Bel-7402细胞增殖,随着作用浓度的增加及作用时间的延长,细胞抑制率逐渐升高。华蟾素能够抑制经照射后的肝癌Bel-7402细胞克隆形成能力,细胞存活率显著低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,华蟾素组、放疗组及联合组肝癌Bel-7402细胞G0/G1期细胞比例增多,S期细胞减少,细胞凋亡率升高,p50、p65、Bcl-2和cyclin D1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);联合组与华蟾素组和放疗组相比,细胞周期、细胞凋亡率及蛋白表达差异均有统计学意义(P值均<0.01)。结论 华蟾素能够增强肝癌Bel-7402细胞的放疗敏感性;其作用机制可能与华蟾素能够通过抑制核因子-κB信号通路及下调Bcl-2和cyclin D1蛋白表达,进而抑制细胞增殖、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡相关。     

P38MAPK、Caspase-8在Fas—AD诱导Bel-7402细胞凋亡中的作用

目的通过P38MAPK抑制剂SB203580及caspase-8抑制剂Ac-IEFD-cho的作用,确定P38MAPK、caspase-8的相互作用关系,进一步揭示Fas—AD诱导Bel-7402细胞凋亡的信号转导机制。方法通过RT—PCR法检测培养的Bel-7402细胞中P38MAPK mRNA、caspase．8 mRNA在Fas．AD、SB203580及Ac—IEFD—cho作用下的表达情况。结果在Fas-AD诱导Bel-7402细胞凋亡中,SB203580和Ac—IEFD—cho能分别抑制p38MAPK mRNA、caspase-8 mRNA的表达。结论在Bel-7402细胞凋亡中,P38MAPK与easpase-8参与Fas—AD凋亡途径,并且在mRNA水平进行相互调节。     

蟾酥胶囊含药血清诱导人肝癌细胞凋亡的检测

目的观察蟾酥胶囊含药血清对人肝癌BEL-7402细胞凋亡的诱导作用。方法采用中药血清药理学方法,选择不同浓度含药血清作为实验组,分别与人肝癌BEL-7402细胞共同孵育24h、48h,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期变化及Ap02．7蛋白的阳性表达率;琼脂糖凝胶电泳测定DNA Ladder;均与10％无药血清组做对照。结果流式细胞仪检测可见,各实验组细胞G、S期下降,Q／M期升高,产生凋亡峰(sub-G1期),Apo2．7蛋白表达的阳性峰明显增高,细胞凋亡率与作用时间、含药血清浓度有一定的时效和量效关系;孵育48h,可见DNA Ladder出现。结论蟾酥胶囊含药血清可以诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡,提示蟾酥胶囊是一种有潜力的治疗肝癌药物。     

人羊膜上皮细胞上清液对人肝癌BEL-7402细胞的体外抗肿瘤作用

目的探讨人羊膜上皮细胞(h AECs)上清液对体外培养的肝癌细胞系BEL-7402细胞迁移、增殖与凋亡的影响。方法 BEL-7402细胞随机分为5组,其中对照组不加h AECs上清液,其余4组加入体积分数分别为6.25%、12.5%、25%和50%的h AECs上清液作用24 h后,通过划痕实验、MTT试验和流式细胞术检测BEL-7402细胞迁移、增殖和凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达量。结果 h AECs上清液能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞迁移、增殖并诱导凋亡(P0.05);25%和50%h AECs上清液组BEL-7402细胞caspase-3和caspase-8蛋白的切割片断蛋白定量明显高于对照组(P0.05)。结论 h AECs上清液对体外培养的BEL-7402细胞具有一定的抗肿瘤作用。     

丁酸钠对人肝癌细胞诱导分化作用的实验研究

目的：探讨丁酸钠对人肝癌细胞的诱导分化作用。方法：用丁酸钠（SB）作用于人肝癌Bel-7402细胞株，观察形态、增殖情况、酶学及生化改变。结果：细胞形态向正常肝细胞转变，增殖速度明显被抑制，其甲胎蛋白（AFP）分泌量明显低于对照组细胞（P<0.05或P<0.01）；反映肝细胞分化的碱性磷酸酶（AP）的比活性明显高于对照组细胞（P<0.05或P<0.01），而反映肝细胞恶变或损伤的醛缩酶（ALD）比活性明显低于对照组细胞（P<0.05或P<0.01）。结论：SB具有诱导人肝癌细胞分化的作用。     

蟾酥胶囊诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的观察蟾酥胶囊对人肝癌细胞凋亡的诱导作用.方法采用中药血清药理学方法,选择不同浓度含药血清作为实验组,分别与人肝癌BEL-7402细胞共同孵育24h、48h,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期变化及Apo2.7蛋白的阳性表达率;均与10%无药血清组做对照.结果流式细胞仪检测可见,各实验组细胞G1、S期下降,G2/M期升高,产生凋亡峰（sub-G1期）,细胞凋亡率与作用时间、含药血清浓度有一定的时效和量效关系.结论蟾酥胶囊含药血清可以诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡,提示蟾酥胶囊是一种有潜力的治疗肝癌药物.     

103Pd粒子对人肝癌细胞-7402细胞毒作用的实验研究

目的探讨103Pd粒子对人肝癌细胞-7402的细胞毒作用. 方法以体外培养的人肝癌细胞-7402为研究对象,采用对照分组、体外细胞毒试验(MTT)、方差分析,观察103Pd粒子放疗对肝癌细胞-7402的生长抑制作用.结果 103Pd粒子对肝癌细胞-7402的细胞毒作用与照射时间、照射剂量有关,照射时间越长、照射剂量越大,细胞毒作用越强. 结论人肝癌细胞-7402对103Pd粒子放疗敏感.     

二甲亚砜对人肝癌BEL—7402细胞的影响

二甲亚砜对人肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞的影响空军广州医院肝病研究中心（广州５１０６０２）李茹冰邹清雁孔祥平自Ｆｒｉｅｎｄ首次体外观察到二甲亚砜（ＤＭＳＯ）可诱导小鼠红白血病分化为正常网织红细胞，增殖停止并合成血红蛋白后，各实验室相继报道其对恶性肿瘤细胞...     

肝损伤组织萃取物对人肝癌细胞株BEL-7402诱导分化作用初探

目的: 观察肝损伤组织萃取物对人肝癌细胞株BEL-7402的影响,探讨肿瘤诱导分化治疗的新途径。方法: 以肝损伤模型动物的肝组织萃取物为诱导剂对人肝癌细胞株BEL-7402进行诱导分化,动态观察肝癌细胞形态特点、MTT生长曲线以及细胞周期分布等生物学特征的变化规律。结果: 在肝损伤组织萃取物的影响下,肝癌细胞增殖及生长速度减慢,G₀/G₁期细胞数增加,S期细胞数下降,增殖指数(PI)降低。结论: 肝损伤组织萃取物可以影响肝癌细胞BEL-7402的分化状态,促进细胞分化,降低肿瘤特性,显示出作为肿瘤诱导分化剂的重要潜质,值得进一步研究和探讨。     

雷公藤甲素抑制肝癌BEL-7402细胞增殖的作用机制

目的:探讨雷公藤甲素抑制肝癌BEL-7402细胞增殖的作用机制.方法:磺酰罗丹明B比色法检测细胞增殖抑制率;Hochest 33258荧光染色观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞DNA含量;免疫印迹检测细胞Bcl-2蛋白表达情况.结果:不同浓度的雷公藤甲素对肝癌细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性;荧光染色后观察到雷公藤甲素作用后细胞核染色质致密浓染,呈凋亡形态学改变;流式细胞术检测到细胞出现较高的亚二倍体峰;雷公藤甲素可使细胞Bcl-2蛋白表达水平降低.结论:雷公藤甲素对肝癌细胞的增殖抑制具有药物浓度依赖性,并可通过下调Bcl-2的表达诱导细胞凋亡.     

^103Pd粒子对人肝癌细胞—7402细胞毒作用的实验研究

目的 探讨^103Pb粒子对人肝癌细胞-7402的细胞毒作用。方法 以体外培养的人肝癌细胞-7402为研究对象，采用对照分组，体外细胞毒试验（MTT），方差分析，观察^103Pb粒子放疗对肝癌细胞-7402的生长抑制作用。结果 ^103Pd粒子对肝癌细胞-7402的细胞毒作用与照射时间，照射剂量有关，照射时间越长，照射剂量越大，细胞毒作用越强，结论 人肝癌细胞-7402对^103Pd粒子放疗敏感。     

二甲双胍对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响

目的:研究二甲双胍抑制人肝癌细胞Bel-7402增殖及调亡的影响,并初步探讨其机制。方法:体外培养人肝癌细胞株Bel-7402,以不同浓度的二甲双胍(10mM、20mM、40mM)干预细胞48h。采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞术检测细胞凋亡;Real-time PCR检测caspase-3、bax和bcl-2的mRNA水平表达。结果:与对照组相比,不同浓度的二甲双胍作用于Bel-7402细胞48h后,MTT结果显示对细胞增殖有明显抑制作用(P0.05);Hoechst 33258荧光染色法显示凋亡细胞明显增多;流式细胞术分析显示二甲双胍可明显诱导Bel-7402细胞凋亡,晚期凋亡率分别为3.76%,8.96%和18.67%;caspase-3、bax和bcl-2的mRNA表达水平均上调(P0.05);以上结果均具有浓度依赖性。结论:二甲双胍能抑制Bel-7402细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与caspase-3、bax和bcl-2的mRNA表达水平改变有关。     

Artemis对人肝癌细胞系BEL-7402/5FU DNA损伤的影响

目的探讨转染sh Artemis干扰质粒对人肝癌细胞BEL-7402/5FU DNA损伤的影响。方法将人肝癌细胞分为正常对照组、脂质体对照组、空质粒对照组和转染sh Artemis干扰质粒实验组(sh Artemis实验组);建立DNA损伤模型,分别用0.625、1.25、2.5、5.0和10.0μg/m L的丝裂霉素C作用BEL-7402/5FU细胞24和48 h,MTT法检测细胞活性,Western blot观察磷酸化组蛋白H_2AX(γ-H_2AX)的表达;转染Artemis干扰质粒,检测Artemis、γ-H_2AX表达;彗星实验检测DNA的损伤。结果 0.625、1.25、2.5、5.0和10.0μg/m L的丝裂霉素C作用48h后肝癌细胞活力明显下降(P0.05);丝裂霉素C刺激细胞48 h后,γ-H_2AX的表达量随着药物浓度的增加而增加;转染sh Artemis干扰质粒后,γ-H_2AX的表达量较正常对照组增加(P0.05);sh Artemis实验组较正常对照组拖尾DNA量增加(P0.05)。结论丝裂霉素C能够诱导肝癌细胞损伤;转染sh Artemis干扰质粒促进丝裂霉素C诱导的人肝癌细胞BEL-7402/5FU DNA损伤。     

肝癌中的细胞凋亡及其药物对它的诱发作用

肝癌的发生可能是由于其细胞凋亡被抑制,与凋亡有关的基因bcl-2,bax等表达情况各异,作用各不相同;用药物诱导凋亡治疗肝癌是当前最新的治疗方法,紫杉醇等药可达此目的,同时有凋亡相关等基因的表达变化。     

肝癌的细胞凋亡及其紫杉醇的诱导作用研究

目的研究肝癌发生过程中原位细胞凋亡活动以及紫杉醇对肝癌细胞系BEL-7404诱导细胞凋亡的作用。方法用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测了肝细胞癌的细胞凋亡,用紫杉醇处理培养细胞BEL-7404、显微镜下进行观察并且进行琼脂糖电泳。结果癌旁组织的原位凋亡细胞增多,紫杉醇处理肝癌细胞可以诱导细胞产生典型的细胞凋亡形态学变化。DNA发生断裂,琼脂糖电泳产生梯形条带。结论在体内肿瘤细胞凋亡降低,细胞分裂可能加快,肿瘤发生。在癌旁组织中细胞凋亡增多,在体外紫杉醇可以诱导肝癌细胞系BEL-7404凋亡。     

TRAIL诱导HBV转染肝癌细胞BEL-7402凋亡的作用及机制研究

目的　研究肝癌细胞BEL- 74 0 2感染HBV前后,TRAIL诱导其凋亡的敏感度变化及作用机制。方法　构建含1.1倍HBV全基因组的真核表达载体pcDNA3 1.1HBV ,转染人肝癌细胞BEL -74 0 2 ,G4 18稳定筛选,建立HBVadr亚型体外转染的细胞模型。原位末端标记(TUNEL)检测TRAIL诱导的凋亡反应,并通过设立TRAIL联合其可溶性受体sDR5 (sDR5与TRAIL结合后,可特异性阻断TRAIL诱导凋亡) ,以证实该凋亡是由TRAIL特异性诱导的。琼脂糖凝胶电泳(DNAladder)检测染色体DNA的断裂情况。流式细胞术、半定量逆转录聚合酶链反应检测HBV感染前后细胞表面TRAIL各受体的表达。双荧光素酶报告基因系统检测抑制凋亡的核转录因子NF κB的活性。结果　成功构建了包含HBV全基因组的真核表达载体pcDNA3 1.1HBV ,转染BEL 74 0 2、经G4 18稳定筛选后得到HBVadr亚型转染的细胞模型BEL 74 0 2 1.1HBV。TRAIL诱导BEL 74 0 2、BEL 74 0 2 pcDNA3及BEL 74 0 2 1.1HBV的凋亡率分别为30 .5 %、2 9.8%和76 % (P <0 .0 1) ;经sDR5特异性阻断后,凋亡率分别为0 .9%、0 .8%和0 .9% ,证明凋亡是由TRAIL特异性诱导的。TRAIL作用2 4h后,琼脂糖凝胶电泳可见BEL- 74 0 2 1.1H-BV较BEL- 74 0 2、BEL 74 0 2 pcDNA3染色体DNA断裂的现象更为明显。无论RNA水平还