猪链球菌2型的研究进展

猪链球菌2型(SS2)是一种人兽共患的传染病病原菌。在我国和其他养猪业发达的国家,SS2已多次流行,给各国的养猪业带来极大的经济损失,并且危及人类健康。本文对SS2的流行病学特点、培养鉴定方法、毒力因子及其致病机制的研究进展作一综述。     

猪链球菌2型主要毒力因子研究进展

猪链球菌2型的毒力因子主要包括荚膜多糖(CPS)、溶菌酶释放蛋白(MRP)、细胞外因子(EF)、溶血素(HLY)以及多种具有毒性作用的蛋白片段。荚膜多糖是猪链球菌2型抵抗巨噬细胞吞噬的重要物质,也是猪链球菌进行分型的标志。溶菌酶释放蛋白和细胞外因子多出现于高致病力的毒株中,MRP和EF阳性菌株一般具有较高的毒力。溶血素具有较强的细胞毒性作用,其对微血管内皮细胞的破坏作用有利于细菌在组织内的扩散。其他多种毒力因子虽也具有致病作用和免疫原性,但还有待于进一步研究。由于猪链球菌2型致病机理复杂,毒株表型多样,尚未发现可区分毒力株、弱毒力株和无毒力株的标志性因子。对猪链球菌2型的毒力因子进行深入研究,对于阐明猪链球菌2型的致病机理,寻找到快速有效的诊断治疗方法以及疫苗的构建都有重要意义。     

猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白功能性片段的原核表达及其免疫保护性

目的表达猪链球菌2型(SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)的功能性片段(tmrp),并检测其对小鼠的免疫保护性。方法将构建的重组克隆载体pMD-tmrp经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切,将切下的目的基因tmrp亚克隆至原核表达载体pGEX-3X中,转化E.coliBL21(DE3),鉴定正确后,用IPTG诱导,谷胱甘肽亲和层析纯化GST-tmrp,免疫BALB/c小鼠,测定其免疫保护率。结果阳性工程菌经IPTG诱导,表达了可溶性目的蛋白,相对分子质量约为73000。0.8mmol/LIPTG,37℃,pH7.2诱导4h,表达量最高,为25.36%。经亲和层析纯化,融合蛋白纯度达93.7%。免疫BALB/c小鼠后,免疫保护率可达60%。结论已成功获得了具有免疫活性的GST-tmrp。     

密封胶中多组分添加剂的分离与鉴定

<正> 胶制品一般都含有三种基本成分,即基料、有机添加剂和无机填料。密封用x胶样品是一种乳白色的水性胶,易成膜,其中对密封胶性能影响极大的有机添加剂组分的确定是十分重要的,但因其种类多、含量少,鉴定比较困难。     

原油组分分离与结构鉴定

原油组分复杂,如何进行有效组分分离与鉴定,对了解原油性质、油田有效开发、原油炼制及应用具有重要作用。本文选取中国典型油田原油（大庆、玉门）,通过柱层析法对原油组分进行了四组分分离,碱溶法对酸性组分进行了分离。采用红外光谱、元素分析等测试手段对分离的各个组分进行了鉴定。结果表明,柱层析法分离得到的四组分具有显著特征,饱和分,芳香份,胶质,沥青质特征官能团明显。原油组分的分离及鉴定,对深化认识原油性质具有重要意义。     

一种纸用香精成分的分离与鉴定

采用GC／FTIR联用技术对一种纸用香精的组成进行了定性鉴定。比较了不同色谱柱的分离效果。选择DB-23色谱柱对该香精进行分离。采用红外光谱对香精组成进行了鉴定，确定该香精由34种组分组成。其主要成分为酮类、酯类、醚类、醇类及烷烃类化合物，此外还含有少量的醛类化合物。     

优良醋酸菌的分离鉴定

采用稀释平板分离法和划线分离法,从自然发酵苹果醋醪液中分离选出优良菌株P-7,并对该菌株的形态学及其生理生化学特征进行研究,该菌株在平板上菌体生长旺盛,菌落呈油脂状,米白色,表面平滑,边缘整齐,培养基内不产生色素,菌落周围产生透明圈,通过革兰氏染色试验和氧化发酵试验,确定该菌种为氧化性的革兰氏阴性杆菌,无鞭毛运动,具有氧化乙醇和乙酸等生化特征,通过《伯杰细菌鉴定手册》,菌株P-7初步鉴定为醋酸醋酸细菌醋酸亚种。     

进口三号胆盐的色谱法分离与鉴定

利用薄层层析(TLC)、氨基酸分析和高效液相(HPLC)联合色谱对进口三号胆盐进行了分离鉴定。三号胆盐的主要成分是胆酸(CA)、去氧胆酸(DCA)与 Na~+结合形成的盐。其中 CA 63.92%、DCA 18.89%。     

富油微藻分离鉴定技术研究进展

微藻是自然界中能够进行光能自养的微生物,种类繁多、适应能力强,微藻在新能源和污水处理等多行业取得惊人的成绩,而从自然环境中分离培养并筛选功能微藻是微藻研究的关键步骤。介绍了微藻采样、富集和分离培养技术流程,纯种微藻的常见鉴定方式,以及富油微藻的筛选技术,为微藻选育及开发研究提供技术指导。     

仙人掌超氧化物歧化酶的分离纯化及鉴定

介绍了分离纯化仙人掌SOD的工艺方法。鉴定用该法提取的SOD为Cu ,Zn -SOD。     

1株肠道高黏附性乳杆菌的分离鉴定

目的从人的肠道中分离具有高黏附性能的益生乳酸菌,为其应用于临床研究提供依据。方法采用改良的LAMVAB选择性培养基,取肠黏膜活检标本进行分级分离。对分离的乳酸菌进行生理、生化鉴定和16SrRNA序列测定,并对其耐酸、耐胆盐特性、黏附性能以及抑菌特性等进行分析。结果从人肠黏膜活检标本中分离出1株乳酸菌L2,该菌能在改良的LAMVAB选择性培养基上生长,并能抵抗pH2.5的酸性环境和0.3%的高胆盐环境;体外黏附试验显示,该菌株具有较好的黏附性能,对人肠上皮样细胞Caco-2和大鼠小肠上皮细胞IEC-6的黏附指数分别达(595±125.76)/100cells和(538±65.2)/100cells,且黏附具有Ca2+依赖性。对大肠杆菌、铜绿假单胞菌等具有较强的抑制作用,对益生菌鼠李糖乳杆菌LGG和嗜酸乳杆菌L05013-12无抑制作用。该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。结论植物乳杆菌L2具有较好的黏附性能,且耐酸、耐胆盐性能以及抑菌特性均较佳,具备作为益生菌使用的潜能。     

一株具有纤维蛋白溶解活性的海单胞菌的分离和鉴定

目的对从双齿围沙蚕消化道内分离的菌株Y5进行纤维蛋白溶解活性检测及系统分类鉴定。方法用纤维蛋白平板法检测Y5的纤维蛋白溶解活性,并从形态、生理、生化、DNA(G+C)含量、脂肪酸成分、16S rRNA基因序列及系统发生分析等方面进行分类鉴定。结果菌株Y5为革兰阴性杆菌;DNA(G+C)含量为47.5%;主要脂肪酸成分为C_(18:1)ω7c,C_(16:1)ω7c,C_(16:0),C_(10:0)3-OH;16S rRNA基因序列与9种已确定的海单胞菌一致性为93%～97%;在系统发生树中与其他海单胞菌位于同一类群中;该菌株在纤维蛋白平板上显示出明显的纤维蛋白溶解活性。结论菌株Y5属于海单胞菌属。该菌株具有纤维蛋白溶解活性,有望为开发溶栓药物提供又一重要资源。     

抗轮状病毒LLR株G10血清型特异性单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗轮状病毒(RV)LLR株G10血清型特异性单克隆抗体,并鉴定其特性。方法以纯化的RVLLR株(血清型为G10)为抗原免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术筛选分泌G10血清型特异性单抗的杂交瘤细胞株。采用层析法纯化单抗,常规免疫学方法鉴定单抗的特性。结果经筛选获得5G5、1H1和7F6共3株可稳定分泌高效价且具有G10血清型特异性单抗的杂交瘤细胞株。3株细胞分泌的单抗分别为IgG2a/κ、IgG2a/κ和IgG1/κ型;腹水效价均可达1.024×106;分别识别两个抗原位点;相对亲和力依次为1H1﹥7F6﹥5G5;5G5和1H1(细胞上清)均与G1～G4和G6血清型RV抗原无交叉反应;3株杂交瘤细胞分泌的单抗均识别相对分子质量约为34000的VP7蛋白,且均有不同程度的中和活性。结论已成功制备了抗RVLLR株G10血清型特异性单抗,该单抗可用于G10血清型RV的分型检测或LLR毒株的鉴别。     

脱硫菌种的筛选和鉴定

本文进行了高温碱性脱硫菌包括好氧菌和厌氧菌的筛选,并对两种菌进行了鉴定。以细菌对硫代硫酸根的脱除作为主要研究对象,进行了脱硫试验。实验结果表明:好氧菌为硫杆菌属,厌氧菌为脱硫肠杆菌属。在脱硫残液中先加入厌氧菌,至脱硫率不再下降再接入好氧菌,脱硫率可达到28%。     

重组猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白的原核表达及鉴定

目的原核表达猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白,并对其反应原性进行分析。方法通过PCR从已构建的猪源戊型肝炎病毒全基因克隆扩增ORF2编码382~674位氨基酸序列的基因片段,将扩增产物插入到pMD18-T载体中,亚克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET28a-293表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA层析柱纯化后,进行SDS-PAGE、Western blot及ELISA鉴定。结果成功扩增到904bp的目的基因。重组载体pET28a-293经双酶切鉴定及序列测定,证实构建正确。SDS-PAGE分析表明表达产物的相对分子质量与预期相符,表达量可占菌体总蛋白的66.15%。Western blot分析表明目的蛋白具有较好的反应原性。ELISA试验证实目的蛋白能与阳性猪源和标准HEV血清发生反应。结论已成功构建了猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白的pET28a-293原核表达载体,并得到了有效表达,为进一步建立猪源戊型肝炎的诊断方法奠定基础。     

猪附红细胞体ORF2蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位的预测

目的预测猪附红细胞体[亦称猪嗜血支原体(Mycoplasma suis,M.suis)]ORF2基因编码蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位。方法应用生物信息学软件DNAstar的Editseq将M.suis中ORF2的基因核苷酸序列翻译成氨基酸序列,与GenBank中登录的氨基酸序列进行比对,通过Protean模块预测ORF2蛋白的二级结构及其亲水性区域、柔韧性区域、抗原指数、表面可及性等特性,并预测B细胞优势抗原表位。结果 ORF2蛋白具有规则的二级结构,多处于亲水性区域、柔韧性区域、表面可及性较大和抗原指数较高的区段,潜在的优势B细胞抗原表位为17²3、12123、121¹27、138127、138¹44、192144、192²00氨基酸区段。结论预测了ORF2蛋白二级结构和B细胞抗原表位,为M.suis表位疫苗的设计以及血清诊断试剂盒的研发奠定了理论基础。     

猪链球菌2型新毒力相关基因的研究进展

猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)是一种重要的人兽共患病原菌,其毒力因子在S.suis 2致病中的作用机制仍不明确,越来越多的学者开始寻找其他相关的毒力基因。本文对近几年来S.suis 2S.suis新毒力基因的研究进展作一综述。     

灵芝中三萜化合物的分离纯化及结构鉴定

采用反复硅胶柱色谱、薄层色谱和半制备高效液相色谱等方法对灵芝子实体中的醇溶酸性组分进行分离纯化得到化合物1-3,通过UV-vis、ESI 和1HNMR.对分离产物进行结构分析,结果表明:化合物1-3的紫外光谱的最大吸收波长分别为248 nm,254 nm,254 nm;ESI 测定其相对分子质量分别500,514,530;1HNMR谱图符合三萜类化合物结构特征,化合物1-3为三萜类化合物.