NF-κB抑制齐PDTC对大肠癌体外血管生成因子表达的影响

目的 探讨NF-κB抑制剂PDTC对大肠癌Lovo细胞系体外血管生成因子表达的影响.方法 采用NF-κB抑制剂PDTC处理Lovo细胞,以未作处理Lovo细胞作为对照组,以PDTC处理后的Lovo细胞作为实验组.Western blot检测各组细胞NF-κB、p-IκBα、VEGF和b-FGF蛋白表达情况;Transwell细胞迁移实验检测HUVEC迁移能力;收集各组Lovo细胞上清液,分别加入到培养液中培养HUVEC,并采用CCK-8细胞增殖实验检测HUVEC增殖能力.结果 Western blot结果提示实验组NF-κB、p-IκBα、VEGF和b-FGF表达量均明显低于对照组(P＜0.05);Transwell细胞迁移结果显示,实验组HUVEC迁移穿过微孔膜的细胞数量较对照组明显减少(P＜0.05),其迁移抑制率为49.2％;CCK-8细胞增殖实验结果显示,实验组HUVEC增殖数量较对照组明显减少(P＜0.05),其增殖抑制率为73.2％.结论 在大肠癌细胞中,NF-κB抑制剂PDTC可能通过下调NF-κB的活性而降低其体外血管生成能力.     

NF-κB抑制剂PDTC对人骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨NF-κB特异性抑制剂PDTC对多发性骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法:采用不同浓度PDTC(25、50、100和200μmol/L)处理U266细胞,CCK-8法和活细胞计数检测U266细胞的增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期;RT-qPCR及Western blot检测PDTC处理前后DNA甲基转移酶1(DNMT1)mRNA和蛋白的表达;Western blot检测NF-κB(P65)、DNMT1、Bcl-2、cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8的蛋白水平。结果:PDTC处理U266细胞48 h后,NF-κB(P65)的蛋白水平被抑制;PDTC抑制U266细胞增殖,作用呈浓度及时间依赖性;PDTC作用48 h后,与对照组比较,细胞凋亡率呈浓度依赖性增高(P0.05),细胞被阻滞在G2期;DNMT1的mRNA及蛋白水平均降低;Western blot结果显示PDTC可通过抑制NF-κB下调Bcl-2的表达,使cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8蛋白水平增加。结论:PDTC抑制NF-κB信号通路,通过诱导U266细胞凋亡从而抑制细胞增殖,其机制可能与抑制DNMT1的表达、阻滞细胞周期和启动凋亡途径有关。     

NF-κB抑制剂PDTC抗白血病细胞增殖的实验研究

目的： 观察核转录因子NF-κB活性特异性抑制剂PDTC(吡咯烷二硫代氨基甲酸盐)对急性白血病细胞系K562细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法: 利用Trans AMTM NF-κB/p65活性测定试剂盒,检测PDTC作用K562细胞12 h、24 h后NF-κB亚基p65活性的变化;采用WST-1细胞增殖试验观察不同浓度PDTC作用24 h、48 h、72 h对细胞增殖的影响;用单细胞凝胶电泳(彗星检测)方法检测PDTC对K562细胞DNA损伤的影响;利用免疫印迹法(Western blotting)检测PDTC对K562细胞中pro-caspase-3和活化型caspase-3蛋白表达的影响。结果: 与对照组相比,经PDTC处理的实验组K562细胞NF-κB/P65的活性受到明显抑制(P＜0.01);且PDTC能以时间和剂量依赖方式抑制K562细胞的增殖(P＜0.05);单细胞凝胶电泳显示实验组细胞DNA受损,浓度为25 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/LPDTC处理后,实验组细胞DNA总损伤细胞百分率分别为43.50％、84.00％、95.63％,明显高于对照组(9.75％),P＜0.05,且存在明显的剂量依赖关系;Western blotting结果显示经PDTC处理后的K562细胞胞质中可检测到pro-caspase-3和活化型caspase-3蛋白的表达。结论: NF-κB参与白血病细胞的增殖与凋亡调控,PDTC抗肿瘤机制可能与抑制NF-κB活性,上调caspase-3表达,从而诱导细胞凋亡有关。     

siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的:探究siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1(CHD1L)对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移及相关分子如核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:将si-CHD1L、si-NC质粒转染至卵巢癌HO-8910PM细胞,命名为si-CHD1L组、si-NC组,以未经转染细胞作为对照组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞CHD1L mRNA表达; CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室系统检测细胞迁移、侵袭能力;蛋白免疫印迹(WB)检测NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:与对照组、si-NC组比较,si-CHD1L组细胞CHD1L mRNA表达降低(P0.05),细胞增殖抑制率升高,细胞迁移能力降低,迁移、侵袭数量降低(P0.05)。与对照组、si-NC组相比,si-CHD1L组NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P0.05)。结论:siRNA沉默CHD1L能够抑制卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移,并能抑制NF-κB、MMP蛋白的表达,为卵巢癌的靶向治疗提供一定的理论依据。     

应激高渗环境对人结肠癌Lovo细胞增殖和迁移的影响

目的观察体外模拟应激条件下的高渗环境,对人结肠癌Lovo细胞增殖和转移的影响,并探讨其调控机制。方法用氯化钠和糖皮质激素模拟肿瘤所处的应激条件下的高渗环境,四噻唑蓝(MTT)法检测细胞体外增殖活力,Western blot法检测NFAT5、NF-κB p65蛋白的表达,划痕实验检测细胞的迁移能力。结果糖皮质激素(20ng/L)可以减轻高渗刺激(NaCl 100mmol/L)对结肠癌Lovo细胞生长的抑制作用(P0.01),抑制高渗刺激引起的NFAT5、NF-κB p65高表达(P0.01)。高渗刺激对结肠癌Lovo细胞迁移有明显的抑制作用,但是和有无糖皮质激素没有直接关系。结论糖皮质激素减轻高渗引起的Lovo细胞增殖的抑制可能与降低NFAT5和NF-κB p65的表达相关。     

核因子κB在蛋白激酶C诱导哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的： 探讨核因子κB（NF-κB）在蛋白激酶C（PKC）致哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖中的作用。方法： 16只Wistar大鼠随机分为哮喘组（8只）和对照组（8只）。应用PKC激动剂PMA和NF-κB抑制剂PDTC干预哮喘组和对照组大鼠ASMCs。采用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原（PCNA）免疫荧光技术等方法检测ASMCs增殖；免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NF-κB活性。 结果： PMA干预哮喘组ASMCs 后S期细胞比例、A值、PCNA表达率、NF-κBp65阳性率及结合带的灰度值均显著高于未干预的哮喘组ASMCs (均P<0.05)，PDTC预处理后再给予PMA上述指标均低于仅用PMA干预及未干预者(均P<0.05)。仅用PDTC处理的哮喘组ASMCs上述指标均低于未干预的ASMCs (均P<0.05)。结论： NF-κB参与哮喘大鼠ASMCs增殖，在其增殖中存在着PKC－NF-κB信号途径。     

NET-1活化NF-κB信号途径促进子宫颈鳞癌微血管生成

目的 探讨NET-1表达与子宫颈癌微血管生成的关系及其分子机制。方法 采用免疫组化Max Vision法检测80例子宫颈鳞癌、10例慢性子宫颈炎组织中NET-1、NF-κB p65、VEGF蛋白表达。采用CD34内皮标记,结合Weinner计数法检测子宫颈鳞癌组织的微血管密度(microvascular density,MVD)。通过阳离子脂质体将真核表达质粒p CMV6-NET-1转染子宫颈鳞癌细胞以获得NET-1基因过表达;利用NF-κB特异抑制剂PDTC处理子宫颈鳞癌细胞以抑制NF-κB的激活;应用Western blot法检测细胞蛋白的表达。结果 子宫颈鳞癌组织中NET-1呈高表达,NET-1表达与子宫颈鳞癌MVD、NF-κB p65和VEGF蛋白表达呈正相关。NET-1基因转染引起子宫颈鳞癌Si Ha细胞胞核NF-κB p65和胞质VEGF水平上高,应用NF-κB抑制剂PDTC预处理Si Ha细胞能显著抑制NET-1引起的VEGF表达上调。结论 NET-1促进子宫颈鳞癌微血管生成,其机制与NET-1激活子宫颈鳞癌NF-κB信号途径上调VEGF表达有关。     

核因子-κB对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡及TGF-β1表达的影响

目的: 探讨核因子-κB(NF-κB)对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖、凋亡和转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达的影响。方法: 体外培养ASMCs，以肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)作为工具药,将ASMCs分为对照组、TNF-α组和TNF-α+PDTC组。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β₁ mRNA表达，Western blotting检测NF-κB、TGF-β₁的表达，免疫细胞化学染色法检测PCNA、Bcl-2蛋白表达及定位，四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定ASMCs增殖，Annexin V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡。结果: （1）TNF-α组ASMCs的NF-κB活性显著高于对照组(P<0.01),TNF-α+PDTC组NF-κB活性显著低于TNF-α组 (P<0.01)。（2）TNF-α组ASMCs增殖显著高于对照组(P<0.01),TNF-α＋PDTC组的增殖反应显著低于TNF-α组(P<0.01)；TNF-α+PDTC组细胞凋亡率显著高于TNF-α组及对照组(P<0.01)。（3）TNF-α组ASMCs的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.01)，TNF-α+PDTC组的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著低于TNF-α组(P<0.01)。（4）TNF-α组ASMCs的TGF-β₁的mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组及TNF-α＋PDTC组（P<0.01）。结论: NF-κB活化可能参与调控TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞的增殖、凋亡及TGF-β₁的表达和分泌。     

C反应蛋白促进离体SHR大鼠血管平滑肌细胞的增殖

目的： 探讨C反应蛋白（CRP）对SHR大鼠主动脉平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。方法： SHR大鼠VSMC培养，取3-4代细胞进行药物干预。先加入CRP和CRP受体CD32的抗体，测定NF-κB和抑制蛋白I-κB在VSMC中的表达；再使用NF-κB活化抑制剂PDTC，观察对血管紧张素Ⅱ诱发VSMC增殖的影响。结果： 使用CRP后，SHR大鼠VSMC的NF-κB和抑制蛋白I-κB的表达增强；使用CD32抗体可以抑制这种增强； PDTC可以抑制血管紧张素Ⅱ促进平滑肌细胞的增殖作用。结论： CRP可以通过直接激活SHR大鼠VSMC的 NF-κB，促进其VSMC增殖。     

RNA干扰ATF5基因下调NF-κB信号诱导脑胶质瘤细胞凋亡

目的:探讨RNA干扰转录激活因子5(ATF5)基因表达对脑胶质瘤细胞活力、凋亡率及NF-κB信号通路的影响。方法:将设计合成的ATF5特异性siRNA(siATF5组)和阴性对照siRNA(NC组)分别转染人脑胶质瘤U251细胞,采用NF-κB信号通路抑制剂PDTC处理细胞,MTT法、流式细胞术及Western blot法分别检测细胞活力、凋亡率及ATF5、血管内皮生长因子(VEGF)、环氧化酶2(COX-2)、 p-p65、p-IκB和Bax的蛋白水平。结果:转染siATF5的U251细胞中ATF5的蛋白表达显著低于空白对照组(P0.05)。与空白对照组比较,siATF5组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,VEGF、COX-2、 p-p65和p-IκB的蛋白水平明显降低,Bax的蛋白水平明显升高(P0.05)。与siATF5组相比,siATF5和PDTC同时处理的U251细胞活力显著降低,凋亡率显著升高(P0.05)。结论:下调ATF5基因表达可降低脑胶质瘤细胞的活力,诱导细胞凋亡,降低免疫抑制因子VEGF和COX-2表达,其机制可能与下调NF-κB信号通路有关。     

下调Galectin-3 对肺癌H460 细胞生长及NF-κB 信号通路和细胞免疫因子的影响

目的:研究下调半乳糖凝集素-3(Galectin-3)对肺癌H460细胞生长及NF-κB信号通路和细胞免疫因子表达影响。方法:以shRNA Galectin-3重组慢病毒感染肺癌H460细胞,qRT-PCR和Western blot检测下调效果。MTT测定细胞增殖,克隆形成实验测定细胞克隆能力,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9和NF-κBp65蛋白表达,qRT-PCR检测IL-6、VEGF、TGF-β1、IL-10 mRNA水平。结果:shRNA Galectin-3重组慢病毒感染后的H460细胞中Galectin-3转录和蛋白表达水平均下降,细胞增殖能力和克隆形成能力降低,细胞侵袭和迁移数目减少,细胞中MMP-2、MMP-9和NF-κBp65蛋白表达水平降低,IL-6、VEGF、TGF-β1、IL-10 mRNA水平也降低。结论:下调Galectin-3抑制肺癌H460细胞生长、侵袭、迁移,并且可以抑制NF-κB信号激活剂和细胞免疫因子的表达。     

miR-199a-5p下调NF-κB信号通路激活水平抑制宫颈癌细胞恶性生物学行为

目的探讨miR-199a-5p对宫颈癌细胞生长、侵袭和迁移的影响和机制。方法 Real-time PCR测定miR-199a-5p在宫颈癌HeLa、HCC94、Ca Ski细胞和正常宫颈Ect1/E6E7细胞中的表达差异。在宫颈癌细胞中转染miR-199a-5p mimics,real-time PCR检测过表达效果,MTT检测增殖,克隆形成实验测定克隆形成能力,Transwell小室测定侵袭和迁移能力,Westernblot检测细胞中p-p65、p-IκB蛋白表达变化。使用核因子-κB(NF-κB)激活剂PMA处理转染miR-199a-5p mimics后的宫颈癌细胞,同样使用上述方法测定细胞生长、克隆、侵袭和迁移能力变化。结果 miR-199a-5p在宫颈癌HeLa、HCC94、CaSki细胞中的表达水平低于正常宫颈Ect1/E6E7细胞。miR-199a-5p mimics提高宫颈癌细胞中miR-199a-5p表达水平,降低细胞增殖、克隆、侵袭和迁移能力,减少细胞中p-p65、p-IκB蛋白表达。NF-κB激活剂PMA可以逆转miR-199a-5p对宫颈癌细胞增殖、克隆、侵袭和迁移能力的抑制作用。结论 miR-199a-5p通过下调NF-κB信号通路激活水平抑制宫颈癌细胞生长、侵袭和迁移。     

抑制HMGB1表达促进血管瘤内皮细胞凋亡的机制研究

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对血管瘤内皮细胞(HemECs)活力和凋亡的影响及机制。方法:分离培养人HemECs,将设计并合成的HMGB1小干扰RNA(HMGB1-siRNA)转染HemECs。CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)含量;Western blot检测HMGB1、NF-κB p65、p-IκBα、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和survivin的蛋白表达。结果:与空白对照组比较,转染HMGB1-siRNA的HemECs中HMGB1的蛋白表达显著降低(P0.05)。与NC组比较,转染HMGB1-siRNA的HemECs活力显著降低,凋亡率显著升高,ROS含量显著升高,NF-κB p65、p-IκBα、cyclin D1和survivin的蛋白表达均显著降低(P0.05);且与si-HMGB1组比较,HemECs中加入NF-κB信号通路抑制剂PDTC后,细胞活力抑制、凋亡率和ROS诱导及NF-κB p65、p-IκBα、cyclin D1和survivin的蛋白表达下调更明显(P0.05)。结论:抑制HMGB1表达可降低人HemECs活力和诱导凋亡,机制可能是通过提高ROS含量及下调NF-κB信号通路。     

Anti-miRNA-155反义寡核苷酸(AMOs)对腹膜成纤维细胞(FB)增殖的影响

目的探讨anti-mi RNA-155反义寡核苷酸(AMOs)对腹膜成纤维细胞(FB)增殖的作用及可能机制。方法大鼠腹膜FB细胞分为:实验组(anti-mi RNA-155 AMOs 50nmol/L)、阴性对照组(错义链50nmol/L)和空白对照组(PBS)。采用Lipofec-tamine2000作为载体分别转染各组原代培养大鼠腹膜FB细胞,应用real time PCR方法测定转染后mi RNA155水平,CCK8法检测转染后腹膜FB细胞增殖,transwell法检测转染后腹膜FB细胞迁移程度,Western blot检测转染后腹膜FB细胞NF-κB p65与PCNA水平。结果转染48 h后,实验组腹膜FB细胞的mi RNA-155水平,增殖和迁移比例明显低于阴性对照组和空白对照组(0.01),NF-κB p65、PCNA蛋白表达水平下调(0.05)。结论 mi RNA-155增加NF-κB p65表达的同时,促进腹膜FB细胞的增殖和迁移。     

NF-κB在发育鼠戊四氮反复点燃癫痫形成中的作用

目的：用NF-κB阻滞剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)阻断NF-κB的表达，探讨核因子κB(NF-κB)在发育鼠戊四氮(PTZ)点燃癫痫形成过程中的作用。方法:生后10 d（P10）Wistar大鼠72只，随机分为PTZ组、PDTC＋PTZ组及生理盐水对照组3组，制备戊四氮反复点燃癫痫模型。观察各组大鼠行为学改变、海马各区细胞形态及细胞计数、NF-κB表达、5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞数和苔藓纤维发芽等指标。结果:(1)NF-κB表达，PTZ组显著高于对照组及PDTC+PTZ组（P<0.01）；(2)海马神经细胞计数，PTZ组齿状回（DG）区颗粒细胞较对照组显著增加(P<0.05)；PDTC+PTZ组CA1、CA3和门区神经元数较PTZ组均明显减少（P<0.05）；(3)DG区BrdU阳性细胞数，PTZ组和PDTC+PTZ组均较对照组显著增加（P<0.01）；PDTC＋PTZ组DG区BrdU阳性细胞数目明显较PTZ组少（P<0.01）；NF-κB吸光度值与BrdU阳性细胞数/颗粒细胞数相关性分析呈正相关，具有统计学意义（P<0.01）；（4）苔藓纤维发芽，PDTC＋PTZ组和PTZ组均有苔藓纤维发芽，两组比较没有显著差异。结论:NF-κB在发育鼠癫痫中发挥重要作用，促进海马神经元发生，保护海马神经细胞，但对苔藓纤维发芽无明显作用。     

吴茱萸碱通过TLR4/NF-κB通路抑制脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的观察吴茱萸碱对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的作用及机制。方法用HUVEC制备细胞炎症损伤模型,分为正常对照组、 DMSO对照组、 LPS模型组、吴茱萸低、高剂量组。采用CCK-8法检测细胞增殖能力, ELISA检测培养液上清中一氧化氮(NO)含量,反转录PCR检测细胞核因子κBp65(NF-κBp65)的mRNA水平, Western blot法检测细胞Toll样受体4(TLR4)、 NF-κBp65的蛋白水平。结果与正常对照组相比, LPS模型组细胞的增殖能力显著降低,培养液中NO的含量显著降低, TLR4、 NF-κBp65蛋白含量均明显增加。用吴茱萸碱预处理后,与模型组相比,细胞的增殖能力明显提高,培养液中NO的含量明显增加,同时细胞中TLR4、 NF-κBp65蛋白的表达受到抑制, NF-κBp65 mRNA表达显著降低。结论吴茱萸碱可减轻LPS所致的内皮细胞炎性损伤,促进NO的合成,可能其与调控TLR4/NF-κB通路有关。     

微小RNA-3651过表达通过介导核因子κB信号通路抑制人舌癌细胞CAL27的生长与侵袭

目的 探讨微小RNA(miR)-3651过表达通过介导核因子（NF）-κB信号通路抑制人舌癌细胞CAL27生长与侵袭的机制。方法 将对数生长期CAL27细胞分为miR-3651 mimic组、mimic-NC组和对照组。采用qRT-PCR检测转染后细胞miR-3651水平，CCK-8检测细胞活力，Transwell检测细胞侵袭能力，划痕实验检测细胞迁移能力，光学显微镜下观察细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的形成，Western blot检测E钙粘蛋白、N钙粘蛋白、波形蛋白、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白表达。结果 mimic-NC组与对照组细胞miR-3651水平、细胞活力、侵袭细胞数、细胞迁移率和细胞形态均无明显差异（P>0.05）,E钙粘蛋白、N钙粘蛋白、波形蛋白和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达均无明显差异（P>0.05）；与mimic-NC组相比，miR-3651 mimic组细胞miR-3651水平升高（P<0.05），培养的细胞第2、3、4天的活力降低（P<...     

过表达APMAP减轻阿霉素肾病肾小球足细胞损伤

目的 探讨脂肪细胞膜相关蛋白质(APMAP)过表达对阿霉素(ADR)肾病肾小球足细胞损伤的影响。方法 采用尾静脉注射ADR构建阿霉素肾病大鼠模型，免疫组化观察肾组织中APMAP、NF-κB p65蛋白表达情况。构建APMAP基因过表达的鼠源肾小球足细胞MPC-5细胞株，并以0.5μmol/L ADR体外诱导构建足细胞损伤模型，再联合NF-κB信号通路激活剂CU-T12-9进行处理。CCK-8检测细胞增殖活性；ELISA检测乳酸脱氢酶(LDH)活性；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65、TNF-α等蛋白表达。结果 APMAP在阿霉素肾病大鼠肾组织中低表达，而NF-κB p65高表达(P<0.05)。APMAP过表达可提高ADR暴露下MPC-5细胞增殖活性，降低LDH活性及细胞凋亡率，下调NF-κB p65、p-NF-κB p65、TNF-α等蛋白表达(P<0.05);联合CU-T12-9处理可显著抑制APMAP过表达对ADR暴露下MPC-5细胞损伤的改善作用。结论 过表达APMAP可抑制ADR诱导的肾小球足细胞损伤，...     

小窝蛋白1 对气道上皮细胞黏液高分泌的影响

目的:探讨小窝蛋白1(Cav-1)对脂多糖(LPS)诱导的气道黏液高分泌的影响。方法:体外培养人气道上皮细胞(16HBE),用LPS刺激细胞构建黏液高分泌模型,以Toll样受体4(TLR4)抑制剂E5564、核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂PDTC、转染Cav-1质粒和siRNA为干预因素,将细胞随机分为对照组、LPS刺激组、LPS+Cav-1质粒组、LPS+Cav-1 siRNA组、LPS+阴性siRNA组、LPS+空质粒组、LPS+E5564组及LPS+PDTC组。四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测各组细胞的活力;RT-PCR检测黏蛋白(MUC)5AC的转录水平;Western blot检测Cav-1、TLR4、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白的相对含量;ELISA检测MUC5AC的分泌水平;激光共聚焦技术检测细胞内MUC5AC蛋白的分布和含量。结果:LPS刺激组细胞内TLR4、p-IκBα、NF-κB、MUC5AC转录及蛋白水平显著高于对照组(P值均0.05),过表达Cav-1可进一步增加上述指标的表达量,而下调Cav-1及给予E5564、PDTC可以抑制LPS引起的上述效应(P0.05)。结论:Cav-1可通过上调TLR4/NF-κB信号通路而加重LPS诱导的MUC5AC的表达量。     

NF-κB p65 siRNA抑制人脐静脉内皮细胞迁移的研究

目的:观察RNA干扰技术(RNAi)特异性抑制人脐带静脉血管内皮细胞( EAhy926)内NF-κB p65基因效果及对细胞迁移力的影响.方法:10 μg/L血管内皮生长因子(VEGF)刺激培养EAhy926细胞,给予转染NF-κB p65 siRNA,同时设立对照组,分别是阴性对照siRNA转染组、空白脂质体组及正常对照组(不给予其他任何处理),48 h后分别采用RT-PCR、 Western blot检测细胞内NF-κB p65 mRNA及蛋白的表达水平,并计算细胞迁移抑制率.结果:与正常对照组比较,NF-κB p65 siRNA组的细胞内NF-κB p65 mRNA及蛋白的表达量均明显减少( P <0.05);而阴性对照siRNA转染组及空白脂质体组的细胞内相应的表达量则无统计学意义.同时,siRNA转染后对细胞的迁移抑制率达64.5%,空白脂质体组和阴性对照siRNA组则仅为7.5%和11.3%.结论:siRNA能通过抑制血管内皮细胞内NF-κB p65的信号通路,抑制细胞的迁移能力,这为今后抗血管生成治疗研究打下了基础.