p16INK4α重表达对人食管癌细胞系EC109生长的抑制作用

目的探讨用腺病毒介导野生型的p16基因在食管癌细胞系表达,研究重表达野生型p16基因对食管癌细胞系EC109生长的抑制作用,为寻找食管癌致癌机制的研究及其基因治疗提供理论基础.方法用基因重组技术,将pcDNA3-p16中的野生型p16基因用Kpn I/BamH I进行双酶切,克隆入腺病毒表达载体pAdCMV中,将重组质粒pad-CMV-p16与腺病毒质粒JM17用Lipofectamime 2000共转染293细胞,产生重组腺病毒.用重组腺病毒感染人食管癌细胞系EC109,在感染后的不同时段,用免疫荧光、打点杂交方法检测p16基因在细胞中的表达用MTT法及流式细胞仪观察p16基因的表达对食管癌细胞株生长的影响.结果经酶切鉴定野生型p16基因克隆入腺病毒表达载体中,与JM17共转染293细胞后,可产生具有感染活性的重组腺病毒,用重组腺病毒感染食管癌细胞株EC109细胞后,可抑制食管癌细胞的生长,同对照组相比其最大抑制率可达52.7%.Multipcycle分析软件分析对细胞周期影响表明,处于G0～G1期的细胞为41%～63%感染后的细胞经Dot blot和Westernblot杂交证实,有外源的p16mRNA及蛋白的表达.结论重组腺病毒可将野生型p16基因导入人食管癌细胞系EC109中,野生型p16基因在p16基因功能缺失的细胞中重表达能抑制癌细胞恶性生长.p16基因功能缺失是食管癌致癌因素之一     

p16对HHCC细胞生长的抑制作用

多肿瘤抑制基因(Multiple Tumor SuppressorI,MTSI)是一个能直接作用于细胞周期的新型抑癌基因,其编码蛋白为Mr16 000,故又称p16基因.由于P16已经逐步发展成为抗肿瘤的一种新的方法,因此我们采用p16基因的真核表达载体,转染入人肝细胞癌(HHCC)细胞株,用杂交、免疫组化及流式细胞仪方法对HHCC细胞生长进行观察.     

食管癌p16基因缺失分析

目的观察抑癌基因ｐ１６在不同病程食管癌患者癌组织中的缺失情况．方法采用ＰＣＲ方法检测２６例食管癌患者癌组织标本及邻近正常食管上皮组织标本ｐ１６基因的缺失情况．结果在２６例食管癌组织中检出１４例标本有ｐ１６基因第２外显子缺失，缺失率５３８％，而癌旁正常食管组织均无缺失．在Ⅱ期至Ⅳ期食管癌（Ｔ２Ｎ０Ｍ０至Ｔ４Ｎ１Ｍ１）均检测到ｐ１６基因缺失．结论ｐ１６基因缺失可能在食管癌发生及发展中起较重要作用     

胃癌组织p16及p18基因变异

p16基因又名多肿瘤抑制基因(MTS1),1994年首先由Kamb et al克隆成功。此基因包含3个外显子及2个内含子,位于人9号染色体短臂2区1带(9p21),编码P16蛋白,在人类多种肿瘤中存在纯合性缺失及突变等变异,但胃癌中的改变情况国内外报道较少。p18基因是一个新近发现的与p15,p16基因同属一个基因家庭的抑癌基因,在结构和功能上与p15,p16基因具有高度同源性,但在多种人类癌肿中其变异少见,它在胃癌中的改变情况目前国内外尚未见报道。本研究通过PCR及银染PCR-SSCP技术检测胃癌组织p16基因外显子E1a,E1β,E2及p18基因外显子E1的纯合性缺失及突变情况。 1 材料和方法 1.1材料 43例胃癌患者的新鲜癌手术标本、相应的癌旁正常组织置-70℃冰箱中保存备用。本组病例中男27例,女16     

胃粘膜上皮癌变过程中p53,p16基因的表达及其相关性研究

本文分析肿瘤抑制基因ｐ５３和ｐ１６在胃粘膜癌变过程中的表达，并探讨其意义．１材料和方法１．１材料全部１５０例标本为１９９４／１９９７收集的胃粘膜活检组织和部分手术切除的癌组织．肿瘤患者术前未接受放疗和化疗．组织做常规组织学脱水，石蜡包埋和连续切片．切...     

肝细胞癌p16p15基因纯合性缺失

目的研究p16,p15基因缺失状态与原发性肝细胞癌(HCC)发生、发展的关系.方法提取HCC新鲜组织中基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)技术,分别对30例HCC进行p16基因第二外显子(p16E2)和p15基因第二外显子(p15E2)纯合缺失研究.并与其癌旁组织进行对照.结果检测p16E2纯合缺失率为16.7%(5/30),p15E2纯合缺失率为13.3%(4/30),p16E2、p15E2共同缺失率为6.7%(2/30).而癌旁组织p16E2,p15E2均无缺失.结论p16E2纯合缺失与p15E2纯合缺失以及二者共同缺失是HCC的遗传易感因素,可能在HCC的发生、发展中起一定作用.     

河南食管癌高发区居民食管癌组织p15INK4b和p16INK4a基因变化的研究

基因丢失导致ｐ１６ＩＮＫ４ａ和（或）ｐ１５ＩＮＫ４ｂ对ＣＤＫ激酶的抑制作用丧失,从而导致细胞增生调节失控［１－３］,目前在多种肿瘤中已发现存在ｐ１５ＩＮＫ４ｂ和ｐ１６ＩＮＫ４ａ的失活现象［４－６］．作者近年对河南食管癌高发区林州市居民的研究证实,肿瘤...     

温石棉及其代用纤维对V79细胞p16和p53表达的影响

目的研究温石棉及其代用纤维对中国仓鼠肺细胞（V79细胞）p16及p53表达的影响,探讨温石棉及其代用纤维的致癌机制。方法将不同种类（四川新康温石棉、陕西陕南温石棉、玻璃纤维、陶瓷纤维、硅灰石、岩棉）及不同浓度（1-10 mg/L）的温石棉及其代用纤维暴露于V79细胞中,并设阴性对照。采用免疫组化SABC法检测V79细胞p16及p53的表达,并进行比较。结果与阴性对照比较,各染毒V79细胞中的抑癌基因p16和p53表达下调,P均〈0.05;随着温石棉及其代用纤维暴露浓度的增加,V79细胞p16和p53的表达减弱,其OD值也呈下降趋势（P均〈0.05）。结论温石棉及其代用纤维均有不同程度的致癌性;其诱导癌症发生的机制可能与下调抑癌基因p16和p53表达有关。     

胃癌p16和APC基因突变的意义

我们收集80例内镜活检胃粘膜组织标本,分析其p16,APC基因突变情况,结果如下.     

人γ-干扰素基因修饰的结肠癌细胞株的建立

目的建立人γ-干扰素(IFN-γ)基因修饰的结肠癌细胞株方法用逆转录病毒质粒pL(IFN-γ)SN将人IFN-γ基因转导入人结肠癌细胞株Lovo中,用G418进行筛选结果筛选得到抗性克隆Lovo/IFN-γ,能在0 6 g.L1GG418中稳定生长;Lovo/IFN-γ生长曲线与野生型Lovo无异;RT-PCR证实IFN-γ基因在Lovo/IFN-γ中表达;Lovo/IFN-γ能分泌人IFN-γ,细胞内水平为3.0fg.d-1.结论成功建立了人IFN-γ基因修饰的结肠癌细胞株,为进一步研究奠定了基础.     

p16基因表达与胃癌生物学行为的关系

目的探讨P16蛋白表达与胃癌生物行为的关系．方法采取S－P免疫组织化学方法，检测51例胃癌组织中P16蛋白的表达，并与正常胃组织进行对比．结果正常胃组织和胃癌组织中P16蛋白的阳性表达率分别为100．0％（12／12）和39．2％（20／51），两组比较有非常显著性差异（P＜0．001）．P16蛋白的阳性表达与胃癌分化程度，浸润深度无明显关系（P＞0．05），但在有淋巴结转移的胃癌中，P16蛋白的阳性表达率仅25．8％（8／31），而无淋巴结转移组P16蛋白的阳性表达率为60．0％（12／20），两组间有显著性差异（P＜0．05）．结论P16蛋白表达缺失与胃癌的发生及淋巴结转移有密切关系．检测P16蛋白表达可作为诊断胃癌及判断患者预后的参考指标．     

HBV X蛋白对抑癌基因p16的表达和启动子甲基化的影响

目的探讨HBV X蛋白(HBx)对抑癌基因p16的表达、p16启动子甲基化的影响,从表观遗传学的角度探讨HBx参与HBV相关性HCC发生发展的相关机制。方法以人肝母细胞瘤细胞Hep G2、表达绿色荧光蛋白(GFP)的Hep G2/GFP、稳定表达HBx蛋白的Hep G2/GFP-HBx细胞为实验系统;采用Western Blot法检测Hep G2、Hep G2/GFP、Hep G2/GFP-HBx细胞中p16蛋白的表达水平。以DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂-2'脱氧胞苷(5-Aza-2'-DC)处理Hep G2/GFP-HBx细胞,采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测Hep G2、Hep G2/GFP细胞及药物处理和未处理的Hep G2/GFP-HBx细胞中抑癌基因p16启动子区域的甲基化情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析。结果 Western Blot分析示Hep G2/GFP-HBx细胞中p16蛋白相对灰度值(23.68±3.93)显著低于Hep G2(91.23±6.87)、Hep G2/GFP(94.55±8.40)细胞,差异均有统计学意义(P值分别为0.0007、0.0014),Hep G2/GFP与Hep G2细胞中p16蛋白相对灰度值差异无统计学意义(P0.05);MSP法检测示Hep G2/GFP-HBx细胞中存在p16基因启动子区域部分Cp G位点甲基化,Hep G2、Hep G2/GFP细胞中未检出其甲基化,DNMT抑制剂5-Aza-2'-DC处理的Hep G2/GFP-HBx细胞却能恢复p16基因启动子区域的未甲基化状态。结论在肝癌细胞系中,HBx通过诱导抑癌基因p16启动子甲基化而下调其表达,DNMT抑制剂5-Aza-2'-DC能恢复p16基因启动子区域的未甲基化状态,这种可逆性修饰可为HBV相关性HCC的治疗、预防提供新思路。     

大肠癌组织p16和pRb表达的意义

近年来研究发现,p16是细胞周期调控过程中一个重要的抑癌基因,其缺失或失活可导致肿瘤的发生.我们采用免疫组化S-P法检测大肠癌中p16,pRb的表达情况,旨在探讨二者在大肠癌中发生发展中的作用以及它们之间的相互关系.     

P16真核表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的抑制作用

目的构建pcDNA3/p16真核表达质粒并了解其对肝癌细胞BEL-7404生长的抑制作用.方法将p16 cDNA亚克隆至pcDNA3真核表达载体上,并经脂质体介导转染至BEL-7404细胞中.应用MTT法和流式细胞仪分析转染细胞生长情况和细胞周期.结果重组pcDNA3/p16表达质粒构建成功.经pcDNA3/p16转染的BEL-7404细胞生长速度受到明显抑制,且细胞多停滞于G0/G1期.结论重组pcDNA3/p16质粒能在BEL-7404细胞内表达,且能抑制BEL-7404细胞的生长.     

促胃液素及其受体拮抗剂丙谷胺对人胃癌细胞系生长的影响

目的观察和分析五肽促胃液素ＰＧ及其受体拮抗剂丙谷胺ＰＧＭ对人胃癌细胞系ＭＧＣ生长的影响,为临床应用促胃液素受体拮抗剂协助治疗胃癌提供依据．方法选用５ｍｇ／Ｌ,１０ｍｇ／Ｌ,１５ｍｇ／Ｌ,２０ｍｇ／Ｌ４种浓度的ＰＧ和３０ｍｇ／Ｌ的ＰＧＭ分别作用于体外培养的浓度为２５×１０８／Ｌ的ＭＧＣ,分别培养２４,４８,７２ｈ,于酶标仪上选用波长５４０ｎｍ测定吸光值Ａ,并对数据进行比较分析．结果４种浓度的ＰＧ作用于ＭＧＣ,ＭＧＣ连续３ｄ的生长状态与对照组无明显差异,而ＭＧＣ在ＰＧＭ作用下,其连续３ｄ的平均Ａ值分别为００２９,００４６和００８４,而未被ＰＧＭ作用的ＭＧＣ的平均Ａ值分别是０１０１,０１１５和０１８２,ＭＧＣ在ＰＧＭ作用下生长明显低于对照组（Ｐ＜００５）．结论外源性的ＰＧ对ＭＧＣ无营养促进作用,而ＰＧＭ能抑制ＭＧＣ的生长     

HIV-1感染对T淋巴细胞p16INK4A基因甲基化及其表达的影响

目的；p16^INK4A基因在与AIDS相关的疾病中的表达缺陷，DNA甲基化可使基因转录下调。本研究观察人类免疫缺陷病毒I型（HIV－1）感染对T淋巴细胞的p16^INK4A基因的表达影响及其途径。方法：建立感染有野生型和突变体HIV－1病毒的T淋巴细胞Hut78细胞系，以RT－PCR、定量PCR和Western blotting检测细胞感染后不同时间的DNA甲基化酶（DNMT）1、3a和3b的mRNA（提高40％以上）和蛋白质水平；并由甲基化特异PCR（MSP）了解p16^INK4A基因甲基化改变，及通过RT－PCR研究该基因的mRNA表达情况。结果：无论野生型抑或突变体HIV－1感染，都能使Hut78细胞中DNMT1表达增强，DNMT3a和DNMT3b无明显变化。HIV－1感染可引起p16^INK4A基因启动子区甲基化水平提高和基因转录水平下调。结论；HIV－1感染可使p16^INK4A甲基化水平升高和表达降低，且与该病毒有无复制无关。