骨髓间质干细胞联合脑源性神经营养因子用于大鼠脑出血的实验研究

目的观察骨髓间质干细胞(MSCs)联合脑源性神经营养因子(BDNF)治疗大鼠脑出血(ICH)的疗效。方法建立大鼠ICH模型,体外培养标记纯化的MSCs,经侧脑室植入脑部,同时局部注入BDNF。记录对照组、BDNF组、MSCs组和MSCs+BDNF组7d、14d、21d大鼠神经功能改善程度;免疫组化法检测MSCs脑内迁移及分化;电子显微镜观察神经凋亡细胞。结果 MSCs组大鼠运动功能有明显改善,MSCs+BDNF组对ICH损伤的修复作用最明显。MSCs+BDNF组各时间点MSCs阳性细胞数及NEUN、GFAP、CNP免疫阳性细胞数均高于MSCs组(P<0.01),且MSCs+BDNF组神经细胞凋亡程度最轻。结论 MSCs脑部移植可促进大鼠ICH损伤部位结构和功能修复,BDNF对其修复具有协同作用。     

脑源性神经营养因子诱导的骨髓间质干细胞治疗脑缺血再灌注大鼠后的形态学改变

目的 观察脑源性神经营养因子(BDNF)诱导的骨髓间质干细胞(MSCs)移植治疗大鼠脑缺血冉灌注模型后的形态学改变。以探讨BDNF诱导的MSCs移植治疗脑缺血的可行性。方法以BDNF诱导或末诱导的MSCs移植治疗大鼠脑缺血再灌注模型2周及4周后。用患侧脑重量与对侧脑重量的比值来比较各组脑萎缩程度，电子显微镜下观察各组脑梗死灶边缘超微结构。结果移植诱导或未诱导MSCs的患侧脑／对侧脑重量比值均较未移植组高。但诱导组和未诱导组间比较无显著差异。移植BDNF诱导或未诱导MSCs可显著减少腑梗死灶边缘神经元坏死和凋亡，移植BDNF诱导MSCs还可减少血管内皮细胞凋亡。结论BDNF诱导或未诱导的MSCs移植治疗脑缺血再灌注可减轻脑萎缩程度，减少神经元和血管内皮细胞凋亡、坏死，具有潜在的临床应用价值。     

脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞移植对痴呆大鼠记忆功能的影响

背景：一些研究已显示，重组脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞具有向神经样细胞分化的潜能，且能提高脑缺血模型鼠的神经缺失功能。 目的：拟进一步观察脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞移植对阿尔茨海默病鼠学习记忆能力的改善。 设计、时间及地点：随机对照动物观察，于2006-01/2007-06在中山大学一附院神经病学实验室完成。 材料：清洁级8周龄雄性SD大鼠48只，随机分为正常对照组、损伤模型组、基因修饰细胞组、未修饰细胞组，12只/组。另取出生3 d的清洁级SD大鼠10只，用于骨髓间质干细胞的分离培养。 方法：取传至第6代的骨髓间质干细胞，双酶切后亚克隆至pcDNA3质粒，行增强型绿色荧光蛋白基因转染，采用电穿孔法得到重组腺病毒Ad-BDNF，转染293细胞进行病毒包装。除正常对照组外，其余3组大鼠均建立阿尔茨海默病模型。造模后12 d，基因修饰细胞组取重组腺病毒脑源性神经营养因子基因修饰的不含血清骨髓间质干细胞悬液，于伤侧侧脑室坐标前囟后1.6 mm、外侧1.5 mm、腹侧4.0 mm注入8 μL；未修饰细胞组移植等量的单纯骨髓间质干细胞悬液。 主要观察指标：Western blotting法鉴定重组病毒在骨髓间质干细胞中表达，流式细胞仪检测基因感染效率。细胞移植后2周采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力。 结果：Ad-BDNF感染的骨髓间质干细胞存在Mr14 000的脑源性神经营养因子蛋白条带，2 d后约34%骨髓间质干细胞被感染。基因修饰细胞组、未修饰细胞组大鼠平均逃避潜伏期均明显低于损伤模型组（P < 0.01），且前者基本达到正常水平。与损伤模型组寻找平台的运动策略比较，基因修饰细胞组与未修饰细胞组趋向式、直线式显著增多（P < 0.01），边缘式、随机式明显减少（P < 0.01），且前者基本达到正常水平。 结论：移植的骨髓间质干细胞经脑源性神经营养因子基因修饰后，可明显改善阿尔茨海默病模型鼠的记忆能力。     

神经干细胞-脑源性神经营养因子基因工程细胞移植对大鼠缺血性脑损伤的治疗作用

目的 将脑源性神经营养因子(BDNF)基因转入大鼠海马原代培养的神经干细胞(NSCs)中,获得NSCs-BDNF基因工程干细胞并移植治疗大鼠缺血性脑损伤.方法 分离培养新生大鼠海马区NSCs,检测其增殖、分化等特性;构建逆转录病毒载体pLXSN-BDNF,转染NSCs,获得NSCs-BDNF基因工程干细胞,检测其BDNF的表达和活性;建立大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型,通过立体定向技术将NSCs-BDNF移植入模型缺血侧海马,进行组织学和行为学检测.结果 NSCs-BDNF移植后可以观察到动物行为学的改善,术后4周Longa评分1.343±0.293,脑切片可以观察到海马齿状回神经元数目的增加,术后4周存活率87.5%±6.6%,较对照有统计学意义(P＜0.05).结论 NSCs-BDNF移植对实验性大鼠缺血性脑损伤有修复作用.     

骨髓间质干细胞移植治疗大鼠脑出血的实验研究

近 2年来发现了骨髓间质干细胞 (MSC)可以分化为外胚层起源的神经细胞 ,我们就MSCs移植对脑出血大鼠的治疗效果及机制进行探讨和研究。材料和方法 :雌雄各半成年Wistar大鼠 ,体重 2 0 0～ 2 5 0g ,R PE标记的抗大鼠CD10 6 ,小鼠抗大鼠胶质纤维酸性蛋白单抗 6、5 溴 2 脱氧尿苷兔单克隆抗体 2。无菌条件下用培养基冲洗大鼠股骨和胫骨的骨髓 ,进行分离、培养 ;用第10代的MSCs进行流式细胞仪检测 ;脑出血大鼠模型采用Ⅶ胶原酶法 ;行为学采用爬行计分法 ;85只大鼠随机分为 5组 ,健康组、对照组、颈动脉组 (造模后经颈动脉移植治疗 )…     

阳离子聚合物载体介导脑源性神经营养因子基因转染大鼠骨髓间充质干细胞

BACKGROUND： Gene therapy is an effective expression of genes within target cells after transferring exogenous target genes. Both vector selection and transfection method are important factors for gene transfection. An ideal gene vector is required for a high transfusion of target gene and an exact introduction of target gene into specific target cells so as to express gene products.
OBJECTIVE： To study the expression of mRNA and protein after transfecting rat bone marrow mesenchymal stem cells （BMSCs） with brain-derived neurotrophic factor （BDNF） genes based on cationic polymer vector.
DESIGN, TIME AND SETTING： A randomized, controlled in vitro study using gene engineering, performed at the Neurobiology Laboratory, Xuzhou Medical College between October 2007 and April 2008.
MATERIALS： PcDNA3.1 BDNF was obtained from Youbiai Biotechnological Company, Beijing and cationic polymer vector used was the SofastTM gene transfection reagent that was made by Taiyangma Biotechnological Co., Ltd., Xiamen.
METHODS： BMSCs extracted from six Sprague Dawley （SD） rats aged 1 month were isolated and cultured in vitro. Third passage BMSCs were inoculated on a 6-well culture plate at the density of 1×106 cells/L. At about 80% confluence, BMSCs were transfected with PcDNA3.1-BDNF （2 μg） combined with SofastTM gene transfection reagent （6 μg） （BDNF group） or with PcDNA3.1 （2 μg） combined with SofastTM gene transfection reagent （6 μg） （blank vector group）. Cells that were not transfected with any reagents but still cultured under primary culture conditions were used as a non-transfection group.
MAIN OUTCOME MEASURES： Enzyme linked immunosorbent assay was used to measure time efficiency of BMSC-secreted BDNF protein. Twenty-four hours after gene transfection, RT-PCR was used to detect expression of BDNF mRNA in the BMSCs. Immunohistochemistry was used to determine expression of BDNF protein in the BMSCs.
RESULTS： BDNF protein expression was detected at day 1 after gene transfection, rapidly increased after 5–9 days and gradually increased after 11–15 days in the BDNF group; moreover, BDNF protein expression was higher than that in the non-transfection group and the blank vector group at different time points （P 〈 0.01）. Additionally, BDNF mRNA expression in the BDNF group was higher than that in the blank vector group and the non-transfection group （P 〈 0.01）.
CONCLUSION： A cationic polymer vector can effectively mediate the BDNF gene to transfect BMSCs; genetically modified BMSCs can express BDNF protein effectively for a long term.     

脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间充质干细胞治疗坐骨神经损伤

背景：对周围神经损伤的治疗,目前希望能提高损伤局部的脑源性神经营养因子浓度来促进神经的修复再生。 目的：观察坐骨神经损伤大鼠体内植入脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间充质干细胞后神经纤维的再通及运动功能的恢复情况。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-05/2008-05在福建省神经病学研究所完成。 材料：无菌条件下取2月龄F344雄性大鼠股骨、胫骨制备骨髓间充质干细胞。利用构建好的慢病毒载体PNL-BDNF-IRES2-EGFP制备脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞。 方法：将60只成年SD大鼠经钳夹制作成右坐骨神经损伤模型,随机分为磷酸盐缓冲液组,骨髓间质干细胞组,脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞组。在损伤处分别注射磷酸盐缓冲液2 μL,骨髓间质干细胞混悬液2 μL和脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞混悬液2 μL。 主要观察指标：在术后2,4周,通过辣根过氧化物酶示踪观察损伤侧L4,5脊髓前角存活的神经细胞数目,通过测量坐骨神经功能指数值观察大鼠损伤侧肢体运动功能恢复情况,同时应用荧光激发及免疫组化技术检测骨髓间质干细胞存活和脑源性神经营养因子表达情况。 结果：脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞组损伤侧L4,5脊髓前角细胞的存活数目多于磷酸盐缓冲液组和骨髓间质干细胞组,并且神经功能恢复也比其他两组好。骨髓间质干细胞组和脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞组可观察到神经损伤处有较多的骨髓间质干细胞存活,并且脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞组脑源性神经营养因子表达明显比骨髓间质干细胞组多。 结论：脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞对周围神经损伤后神经纤维的再通及功能恢复有促进作用。     

脑源性神经营养因子诱导大鼠骨髓基质细胞成为神经干细胞及其分化作用的实验研究

目的探讨脑源性神经营养因子（BDNF）诱导大鼠骨髓基质细胞（BMSCs）成为神经干细胞及其分化作用。方法取大鼠BMSCs。分别以BDNF和BDNF＋RA（维甲酸）作为诱导物诱导,于诱导3d、7d后行巢蛋白（Nestin）、神经元特异烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白免疫细胞化学染色。结果后BDNF和BDNF＋RA诱导组均有大量Nestin染色阳性细胞,BDNF＋RA组阳性率高于BDNF组（P〈0．01）。NSE、GFAP免疫阳性细胞在诱导3d后也有少量表达。诱导7d后BDNF和BDNF＋RA诱导组Nestin阳性细胞明显减少．与诱导3d后比较差异有显著性（P〈0．01）,而NSE、GFAP阳性细胞敷增多,与诱导3b比较差异有显著性（P〈0．01）,且BDNF＋RA组阳性率高于BDNF组（P〈0．01）。结论联合应用BDNF与RA可提高BMscs神经转化．并促进其向神经元及星形胶质细胞细胞分化。     

脑源性神经营养因子诱导大鼠骨髓基质细胞成为神经干细胞及其分化作用的实验研究

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)诱导大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)成为神经干细胞及其分化作用。方法取成年大鼠BMSCs,分别以BDNF和BDNF+RA(维甲酸)作为诱导物诱导,于诱导3d、7d后行巢蛋白(Nestin)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白免疫细胞化学染色。结果诱导3天后BDNF和BDNF+RA诱导组均有大量Nestin染色阳性细胞,BDNF+RA组阳性率高于BDNF组(P<0.01)。NSE、GFAP免疫阳性细胞在诱导3d后也有少量表达。诱导7天后BDNF和BDNF+RA诱导组Nestin阳性细胞明显减少,与诱导3天后比较差异有显著性(P<0.01),而NSE、GFAP阳性细胞数增多,与诱导3天后相比差异有显著性(P<0.01),且BDNF+RA组阳性率高于BDNF组(P<0.01)。结论联合应用BDNF与RA可提高BMSCs神经转化,并促进其向神经元及星形胶质细胞细胞分化。     

骨髓间质干细胞源性早期神经元与控释神经营养因子移植治疗猴脊髓损伤的研究

对于脊髓损伤（spinal cord injury，SCI），目前临床上仍无有效的治疗方法。研究发现，应用外源性神经营养因子（neurotrophic factors，NTFs）可以促进神经元修复、轴突再生。骨髓间质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是骨髓中的一种非造血类成体干细胞，易于获取和增殖，可诱导分化为神经元细胞。本实验以恒河猴为研究对象，将自体MSC在体外诱导为早期神经元细胞，并应用可降解生物材料单甲氧基聚乙二醇聚乳酸嵌共聚体（mPEG—b—PLA）作为胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line—derived neurotrophic factor，GDNF）的控释载体，将两者联合移植到脊髓损伤处，探讨其修复脊髓结构、恢复猴下肢运动功能的作用。     

BDNF基因重组慢病毒转染MSCs诱导分化神经样细胞的实验研究

目的 将BNDF基因重组慢病毒转染MSCs,观察其体外诱导及脑内移植后分化神经样细胞的情况。方法 分离培养大鼠MSCs; 将携带有BDNF的慢病毒转染MSCs; 镜下观察诱导后MSCs的形态变化; 制备大鼠脑出血模型,并随机分为PBS组、MSCs组、MSCs-EGFP组、MSCs-EGFP-BDNF组,记录各组细胞移植7、14、21 d神经功能缺损评分、脑组织切片免疫荧光单标检测MSCs的脑内迁移、免疫荧光双标检测MSCs脑内分化神经样细胞的情况。结果 镜下观察经BDNF基因重组慢病毒诱导的MSCs由均匀一致的长梭形逐渐呈现出有单极、双极甚至多极的类神经样细胞,而空病毒组及未转染组MSCs细胞形态无明显变化; 移植入脑出血模型脑内后MSCs组、MSCs-EGFP组及MSCs-EGFP-BDNF组大鼠的神经功能评分与PBS组比较均有不同程度改善,其中MSCs-EGFP-BDNF组改善最为显著(P<0.05); MSCs-EGFP-BDNF组迁移至脑出血灶周围组织的MSCs明显多于MSCs组及MSCs-EGFP组(P<0.05),MSCs组与MSCs-EGFP组除7 d外其余比较无明显差异(P>0.05); MSCs-EGFP-BDNF组胶原纤维酸性蛋白阳性率明显高于MSCs组及MSCs-EGFP组(P<0.01),而MSCs组与MSCs-EGFP组比较无明显差异(P>0.05)。结论 BDNF基因重组慢病毒修饰的MSCs体外可诱导其向神经样细胞分化; 移植后迁移至脑出血灶周围组织的细胞数较其它组明显增多; 可促进脑出血大鼠的神经功能修复并检测到其分化为神经细胞标志物的表达。     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血

目的探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗对脑出血患者外周血中内皮祖细胞活化度及神经功能的影响。方法选择2014-06—2016-06南阳南石医院86例脑出血患者,依据治疗方案不同分为2组各43例。对照组仅采取常规微创血肿清除术治疗,观察组在对照组基础上联合自体BMSCs移植治疗,统计对比2组治疗后1周、2周、3周、4周外周血内皮祖细胞活化度与治疗后3周、4周神经功能缺损评分、日常生活能力评分及神经营养因子[神经生长因子(NGF)、脑源性神经生长因子(BDNF)]水平。结果观察组治疗后1周、2周、3周、4周内皮祖细胞活化度较对照组提高,差异具有统计学意义(P0.05);观察组治疗后3周、4周神经功能缺损评分较对照组降低,日常生活能力评分均较对照组提高,差异具有统计学意义(P0.05);观察组治疗后3周、4周NGF、BDNF水平均较对照组提高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论对脑出血患者应用自体骨髓间充质干细胞移植治疗效果显著,可明显减轻患者神经功能损伤,提高内皮祖细胞与神经营养因子水平,促进其神经功能恢复,提升其日常生活能力。     

大鼠GAD65基因慢病毒载体的构建及其在MSCs中的表达

目的构建谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65,GAD65)重组慢病毒表达载体,感染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)并进行鉴定。方法 PCR法扩增GAD65基因,构建LV5-GFP-GAD65慢病毒载体;与包装质粒共转染293T细胞包装病毒;将慢病毒感染大鼠MSCs,荧光显微镜鉴定转染率,Western blot检测GAD65的表达。结果双酶切及测序结果表明LV5-GFP-GAD65慢病毒载体构建成功;包装病毒产生的病毒液滴度为5×107TU/ml;慢病毒感染大鼠MSCs的转染率高于90%,Western blot结果显示GAD65蛋白表达比对照组明显升高。结论 GAD65重组慢病毒载体构建成功,包装得到高浓度病毒液,感染大鼠MSCs能稳定过表达GAD65蛋白,为进一步探索侧脑室注射基因化的MSCs治疗癫痫奠定实验基础。     

Modification of the brain-derived neurotrophic factor gene: a portal to transform mesenchymal stem cells into advantageous engineering cells for neuroregeneration and neuroprotection

Multipotential mesenchymal stem cells (MSCs) are ideal seed cells for recruiting the loss of neural cells due to their strong proliferative capacity, easy acquisition, and considerable tolerance of genetic modifications. After transduction of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) gene via recombinant retroviral vectors into the human MSCs, nearly 100% of cells expressed BDNF (which were therefore transformed into BNDF-MSCs) as detected by immunocytochemistry, and the quantity of BDNF in the culture medium was increased by approximately 20,000-fold. In spite of the genomic integration of an exogenous gene, BDNF-MSCs did not present any structural aberration in the chromosomes. All-trans-retinoic acid (RA) induction caused the BDNF-MSCs to differentiate into neural cells with significantly increased expressions of such neural-specific proteins as nestin, NeuN, O4, and glial fibrillary acidic protein (GFAP). The voltage-dependent K+/Ca2+ currents were recorded from the induced BDNF-MSCs using patch-clamp technique. Compared with the MSCs induced by both RA and BDNF, BDNF-MSCs survived in significantly greater number in the induction medium, and also more cells were induced into neuron-like cells (NeuN, P < 0.01) and oligodendrocyte-like cells (O4, P < 0.05). We suppose that, once engrafted into human central nervous system, the BDNF-MSCs would not only recruit the neuronal losses, but also provide, by way of paracrine, large quantities of BDNF that effectively perform the functions of neuroprotection and neuroregeneration, promoting the activation of endogenous neural stem/progenitor cells and their chemotactic migration. On the other hand, the BDNF-MSCs that can survive in the host environment and differentiate subsequently into functional mature cells may also serve as specifically targeting vectors for ex vivo gene therapy.     

bFGF基因修饰的间充质干细胞对大鼠脑缺血模型的保护作用

目的 观察碱性成纤维生长因子(bFGF)基因修饰的间充质干细胞(MSCs-bFGF)对大鼠脑缺血的保护作用.方法 将间充质干细胞(MSCs)或MSCs-bFGF通过静脉移植至实验性脑缺血大鼠体内,比较两者对大鼠脑缺血后神经功能及脑梗死体积的影响,并应用双重荧光标记方法观察移植细胞在脑内的存活和分化情况.结果 静脉移植MSCs和MSCs-bFGF均能改善脑缺血后大鼠的神经功能、减少脑梗死体积,且MSCs-bFGF的作用明显优于MSCs,MSCs-bFGF移植7 d后大鼠脑内BrdU阳性细胞数、BrdU-NeuN双标阳性细胞数分别为127.40±7.43、11.20±3.09,明显多于MSCs治疗组大鼠,而BrdU-GFAP双标阳性细胞数两组间差异无统计学意义.结论 MSCs移植对脑缺血具有保护作用,bFGF基因修饰可提高MSCs移植对大鼠脑缺血后损伤的保护和神经功能恢复作用.     

脑出血患者血清脑源性神经营养因子与痴呆的相关性分析

目的 探讨脑出血患者血清脑源性神经营养因子(BDNF)与痴呆的相关性.方法 选取180例脑出血患者,出院后6个月根据认知功能评分分为血管性认知功能障碍组(VCI)60例,其中血管性痴呆组(VD)22例,非痴呆型血管性认知功能障碍组(VCIND)38例;对照组为无认知障碍者120例.入院后及出院后6个月采用酶联免疫吸附法...     

静脉注射人脐血间充质干细胞对脑损伤神经生长因子的影响

目的 观察TBI后静脉注射人脐血间充质干细胞(CB-MSCs)对NGF、BDNF表达的影响,探讨其脑保护的作用机制.方法 清洁级健康雄性SD大鼠90只采用完全随机数字表法分为假手术组、损伤组和治疗组,每组30只.损伤组和治疗组采用改进的Feeney自由落体法制作大鼠TBI模型,假手术组只开骨窗,不撞击硬脑膜.治疗组尾静脉注入3×106个Brdu标记的CB-MSCs,损伤组及假手术组注入等体积的PBS液.在移植后3、7、14、21、28 d,采用HE染色、免疫组化染色、原位杂交法对TBI大鼠脑组织形态学变化、Brdu标记情况、NGF和BDNF表达情况进行检测.结果 假手术组仅有极少量的NGF、BDNF阳性表达细胞.损伤组表达明显增加,以损伤周边区最为明显,注射后14d达到高峰(NGFA值为8.35±1.07,BDNFA值为9.01±1.74),之后逐渐下降,但仍高于假手术组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组表达趋势与损伤组相同,14d达高峰后,21 d、28 d阳性表达明显下降;各时间点均高于损伤组与假手术组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在TBI中,静脉注射CB-MSCs可以增加损伤局部NGF、BDNF的分泌,改善局部微环境,促进神经元的修复.     

睫状神经营养因子对脑出血大鼠的神经保护作用

目的观察睫状神经营养因子(CNTF)对脑出血大鼠的神经保护作用及可能机制。方法实验大鼠随机分为对照组、模型组和睫状神经营养因子治疗组,每组24只,对照组仅给予生理盐水尾壳核注射,后2组采用自体股动脉血注入大鼠尾壳核建立脑出血模型,CNTF治疗组于术后经侧脑室注射CNTF。分别于术后12 h、1d、3d、5d处死取脑,TUNEL法检测神经元凋亡。结果术后各组神经元的凋亡均在3 d时达高峰,CNTF治疗组大鼠脑血肿周围组织神经元凋亡的数量明显低于模型组。结论CNTF对脑出血后损伤神经细胞具有保护作用,可能机制为减少脑出血灶周细胞的凋亡。     

大鼠骨髓间充质干细胞转染人TH基因的实验研究

目的评价酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)基因修饰骨髓间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)后TH的表达情况及转染TH基因对MSCs的影响.方法构建含人TH基因的pCMV/hTH质粒,用脂质体转染原代培养的大鼠MSCs;Western blot及免疫细胞化学染色鉴定TH基因的表达及MSCs的分化情况;MTT比色法测定转染后的MSCs细胞活性,并与未转染的MSCs进行细胞活性比较.结果构建的pCMV/hTH质粒经ECoRI酶切后产生1.9okb和5.3kb的片段,与回收的目的基因及载体基因片段大小相符;转基因后的MSCs Western blot及免疫细胞化学染色显示TH染色阳性;转染后MSCs未见有NeuN,GFAP的表达;MTT比色法测定细胞活性,未转染与转染者差异无显著性.结论构建的TH基因能在体外培养的鼠MSCs中较好的表达,转染不会诱导MSCs向神经样细胞分化,对MSCs细胞活性无明显影响.