大鼠异位心脏移植模型的建立及应用

大鼠异位心脏移植模型在移植免疫、基因治疗、心肌缺血再灌注等领域得到了广泛的应用。本文就大鼠异位心脏移植模型的实验动物选择、主要术式的改进及应用现状等进行综述。     

应用Cuff技术建立小鼠异位心脏移植模型

目的建立简单易行、稳定可靠的小鼠颈部异位心脏移植模型。方法自制血管套管，运用Cuff技术吻合移植心的动、静脉。结果正式实验25次，成功23例，供心缺血时间均少于30min。结论该方法明显降低了手术难度，具有手术时间短，创伤小，成功率高的优点，是一种简单实用的方法。     

建立小鼠异位心脏移植模型的心得

目的 建立小鼠异位心脏移植模型,为进行移植免疫研究提供动物模型.方法 昆明(KM)小鼠50只,随机分供、受体两组,借鉴大鼠异位心脏移植Ono式模型经验,并加以改良,将供体升主动脉、肺动脉分别与受体的腹主动脉和下腔静脉行端侧连续吻合.结果 成功建立了小鼠腹腔异位心脏移植模型,实验成功率为84％ (21/25).供、受体的手术时间分别为(11.0±l.0)min和(60.0 ±2.0)min.结论 熟练掌握显微外科技术后,可以成功建立小鼠异位心脏移植模型.     

血管化小鼠异位心脏移植模型

啮齿动物心脏移植模型在移植免疫研究中广泛应用。其中，小鼠模型更具优势：近交系小鼠品种丰富；小鼠易于转基因、基因敲除操作；小鼠的分子生物学探针、抗体和工具药品种丰富；小鼠体重轻，对于昂贵、来源稀少的药物，小鼠模型可降低研究成本。但小鼠血管细，凝血机制活跃，容易发生动脉内膜损伤，血栓形成，导致手术失败。本研究旨在探讨小鼠心脏移植成功的影响因素。     

小鼠异位心脏移植方法的改进

小鼠异位心脏移植是研究急性排斥反应的模型,也是研究免疫耐受的良好模型,但是小鼠体积小,重量轻,手术技术及实验条件要求高。2000年1月至4月我们将Ono术式用于小鼠并加以改     

小鼠二次心脏移植的研究

随着器官移植受体数量的累积 ,需要进行再次移植的患者逐渐增加。为在合适的动物模型上进行再次移植的免疫学研究 ,我们探讨建立小鼠心脏首次腹腔异位移植并二次颈部异位移植模型。一、材料与方法1.实验动物 :供受体均为健康ＩＣＲ小鼠 ,体重 2 5～ 30 ｇ ,雌雄不限。2 .手术器械 :ＳＳＷ 3型显微手术器械包 ;ＹＺ2 0Ｔ4型手术显微镜。3.小鼠二次心脏移植手术方法 :首次心脏移植手术采用腹腔异位移植 ,二次移植于首次移植术后 1周进行 ,采用颈部异位移植。供体手术 :2 0ｇ/Ｌ戊巴比妥钠腹腔注射麻醉。沿腋前线剪开胸廓 ,3号针穿刺下腔静脉 ,…     

小鼠异位心脏移植血液循环重建模型的建立

目的 建立新的一种简单、稳定的小鼠腹腔异位心脏移植模型.方法 将供体心脏肝上下腔静脉与受体下腔静脉端侧吻合,供体升主动脉与受体腹主动脉端侧吻合.用C57BL/6J (H-2b)作供体和受体做同基因心脏移植,用C57BL/6J (H-2b)作供体BALB/C (H-2d)受体做同种异体心脏移植.结果 新方法血管吻合时间(21.3±1.6)min比传统方法吻合时间(28.5±1.4)min明显缩短,心脏复跳时间从(2.3±0.9)min降低到(1.4±0.5)min.同基因和同种异体移植的两种方法比较,1周生存率差异无统计学意义(P>0.05).结论 小鼠心脏移植新模型明显缩短移植物温缺血时间,有利于移植物长期存活.     

改进的大鼠异位心脏移植模型的制作

心脏移植模型常以大鼠建立,移植部位多在腹部。本法是在徐氏［１］模型的基础上加以改进。一、材料与方法以Ｗｉｓｔａｒ大鼠为受者,ＳＤ大鼠为供者。１．供心摘取：大鼠麻醉固定后取正中切口开腹,显露下腔静脉,按５ｍｇ／ｋｇ注入肝素生理盐水２ｍｌ。待全身肝素化后...     

大鼠腹腔同种异体异位心脏移植模型的建立与改进

目的建立并改进大鼠腹腔同种异体异位心脏移植模型,探讨其可行性及安全性。方法对100只Wistar大鼠腹腔同种异体异位心脏移植模型的麻醉方法、供心灌注切取、受体血管准备、吻合方法等进行了改良,术后统计手术时间及手术成功率。结果供体准备、供心摘取时间共（13±3）min,受体血管准备时间（8±2）min,受体腹主动脉吻合时间（10±2）min,受体下腔静脉吻合时间（7±3）min,供心冷缺血时间（30±6）min。手术成功大鼠恢复血供到开始心室纤颤时间（5±2）s,心室纤颤期为（10±3）s。100只中,成功94只,成功率为94%,死亡6只,包括术中麻醉意外死亡3只,术中误伤心耳出血死亡2只,肺血管结扎处出血死亡1只。结论大鼠腹腔同种异体异位心脏移植模型的操作方法经过改进后,降低了手术难度,手术成功率较高。     

小鼠腹部异位心脏移植模型制作的改良（附视频）

小鼠遗传背景清晰，转基因品系多。小鼠腹部异位心脏移植模型已经广泛应用于血管化的实体器官移植免疫的研究。由于小鼠个体小、血管细、     

小鼠原位左肺移植模型的建立

目的 建立稳定的小鼠左肺移植模型.方法 取近交系雄性Balb/c小鼠40只作为肺移植的供、受者,每对供、受者间大小和体重基本匹配,采用三套管法进行原位左肺移植.术后1个月,取受鼠进行胸部CT检查,取阻断右肺门前、后的移植左肺静脉血进行血液气体分析,取移植肺组织进行病理学检查.结果 实验共行肺移植20例,除1例因肺静脉撕裂导致手术失败外,其余19例均成功进行手术,手术成功率为95％(19/20).成功模型的套管吻合均一次成功,术后1例受鼠因发生感染而死亡,死亡率为5.2％(1/19).套管准备时间为(2.0±0.5)min,供肺切取时间为(5.0±1.3) min,供肺冷缺血时间为(35.6±5.9)min,热缺血时间为(25.3±7.2)min,供、受者血管套管耗时(21.0±5.6)min,受者手术耗时(30.0±4.2)min,建立模型总耗时(85±15) min.术后1个月,显微CT检查结果显示,受鼠移植肺野清晰,支气管套管通畅;血液气体分析结果显示,阻断前、后的氧气分压分别为(106.9±5.8) mm Hg(1mm Hg=0.133 kPa)和(105.0±8.7) mm Hg,二者比较,差异无统计学意义(P＞0.05);移植肺组织的病理学检查显示,移植肺结构正常,肺间隔正常,肺泡通气良好.结论 采用三套管法建立的小鼠肺移植模型具有操作简便易行,支气管吻合口径更大,手术成功率高,以及模型稳定等特点,这对于推动肺移植的基础实验研究有重要意义.     

建立小鼠腹部心脏移植模型的体会

目的:探讨小鼠腹部异位心脏移植手术的技术方法及其改进，为进行移植免疫学研究提供动物模型。方法:采用供心主动脉与受体腹主动脉、供心肺动脉与受体下腔静脉端侧吻合方法对100例小鼠进行腹部心脏移植术，同时测量相关移植部位的重要解剖结构。结果:供心主动脉直径为（1.0±0.1）mm，供心肺动脉直径为（1.3±0.2）mm;受体下腔静脉直径为（1.9±0.2）mm，腹主动脉直径为（0.9±0.1）mm，腹腔大血管平均可利用长度为（6.0±1.0）mm。建模成功率为92%。供、受体手术时间分别为（8.0±1.0）min和（40.2±3.0）min;其中动脉吻合为（9.3±1.2）min，静脉吻合为（7.8±1.7）min。结论:所建立的小鼠心脏移植模型稳定可靠，适用于移植免疫学方面的研究。     

大鼠异位心脏移植模型的术式探讨

目的探讨大鼠异位心脏移植模型的手术操作方法,并对大鼠颈部和腹部异位心脏移植的术式进行了比较。方法施行颈部异位心脏移植60次和腹部异位心脏移植90次,均采用显微外科缝合法进行动静脉吻合。结果颈部和腹部异位心脏移植供心获取时间分别为(10.0±2.2)min和(7.2±0.8)min。受体血管吻合时间分别为(28.2±5.6)min和(20.6±3.8)min。无干预同系移植组中,颈部和腹部异位心脏移植手术成功率分别为83.2%和92.6%,两种术式的手术成功率差异无统计学意义(P>0.05)。结论两种异位心脏移植术式均可作为移植免疫及药物实验研究的可靠动物模型,两种术式分别有其各自的优缺点,术式选择主要根据实验者的设计进行。     

大鼠腹腔内异位心脏移植模型的复制及改进

目的：建立一种快速有效的大鼠腹腔异位心脏移植模型。方法：封闭群Wistar及Lewis近交系大鼠各40只,行Wistar大鼠间移植及Lewis大鼠间移植腹腔异位心脏移植。心脏移植在Ono术式的基础上加以改进：将受体鼠的腹主动脉及下腔静脉略作游离后用血管钳阻段,不分离二者,亦不结扎二者的分支;将供心的升主动脉及主肺动脉分别与受体的腹主动脉和下腔静脉做端侧吻合,将供心移植于受体的腹腔内。结果：共建立40只大鼠异位心脏移植模型,手术成功率92.5%。供心总缺血时间（22±3）min,手术总时间（55±8）min。供心平均存活时间：Wistar大鼠为（8.6±1.1）d,Lewis大鼠除1只用于取标本,其余30d时仍然存活。结论：本方法可提高手术成功率,缩短供心缺血时间。     

小鼠异位小肠移植模型的建立

目的 探讨稳定的小鼠异位小肠移植模型制作方法,为小肠移植排斥反应的研究提供良好的实验工具.方法 选用C57BL/6小鼠作供体和BALB/c小鼠作受体进行同种异基因型异位节段性小肠移植.采用小肠供体的门静脉与受体下腔静脉端侧吻合,供体带主动脉片的肠系膜上动脉与受体腹主动脉端侧吻合,供体近端肠管结扎,远端与受体空肠端侧吻合的方式建立异位小肠移植.术后禁食3天,不禁饮,每天分两次经皮下分别给予5%葡萄糖生理盐水2 mL,术后不使用抗生素和免疫抑制剂.小鼠存活超过5 d视为手术成功.结果 共行小肠节段性移植30例,术后5 d存活率达70%(21/30).供体手术时间(41±5.5)min,热缺血时间约0.5 min,供体肠段肠系膜上动脉组织片修整时间约为3 min,供体冷保存时间为(30±7.5)min,受体手术时间(90±7.5)min,其中腹主动脉及下腔静脉阻断时间为(40±3.0)min,静脉吻合时间(10±2.0)min,动脉吻合时间(15±2.5)min,成活小鼠受体手术平均出血量约0.2 mL.手术失败的9例小鼠的死亡原因为动脉吻合口部位狭窄及吻合口处血栓形成(6例),吻合口出血导致出血性休克(2例)和术后腹腔内感染(1例).结论 良好的供体肠段的获取、高质量的血管吻合和肠道吻合及供、受体补液是提高小鼠小肠移植手术成功率的关键.     

小鼠移植心心肌细胞转染白细胞介素10基因减轻术后免疫排斥反应

目的观察应用质粒载体转染白细胞介素10(IL-10)基因至小鼠移植心肌细胞内的转染效率和基因的表达效率,探讨IL-10分子在移植物急性排斥反应中的意义。方法以C57BL／6小鼠为供者,Balb／c小鼠为受者,建立异位心脏移植模型。根据移植前经供心升主动脉冠脉灌注试剂的不同,将受者分为4组,每组20只。A组:灌注30μl的生理盐水;B组:灌注30μl的空白质粒;C组:灌注30μl的IL-10基因;D组:灌注30μl的腺相关病毒(AAV)增强型IL-10。移植后1、3、5和7 d切取移植心脏,进行病理学检查、移植心心肌组织中基因产物的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和IL-10的免疫组织化学检测。并观察各组存活受者的一般情况和移植心存活时间。结果病理学观察显示:A、B组移植心在术后第3 d起出现了明显的排斥反应改变,而C、D组第3、5和7 d移植心排斥反应改变程度均较A、B组明显减轻。移植后第1和3 d,A、B组移植心心肌细胞中可见低水平的IL-10 mRNA基因和IL-10蛋白的表达,而第5和7 d时几乎检测不到;C、D组在各个时间段都可见明显的IL-10 mRNA基因和IL-10蛋白表达。A、B组移植心存活时间分别为(8．125±0．991)d和(7．714±0．756)d;C、D组移植心存活时间分别为(15．714±2．498)d和(17．857±1．864)d。C、D组与A、B组比较,差异有统计学意义(P<0．01)。结论质粒载体能有效地将IL-10基因转染入小鼠心肌细胞并进行表达,而采用AAV的末端反向重复序列(ITRs)可以提高质粒转染效率和IL-10表达水平。局部高表达的IL-10能减轻移植心的排斥反应,延长其存活时间。     

CXC趋化因子受体6在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义

目的 研究CXC趋化因子受体6(CXCR6)在同种异体小鼠心脏移植中的表达及CXC趋化因子配体16(CXCL16)与CXCR6相互作用对移植物存活时间的影响.方法 以野生型Balb/c小鼠(H-2d)为供者(同种移植组),或以野生型C57BL/6小鼠(H-2b)为供者(同系移植组),以野生型C57BL/6小鼠为受者分别行小鼠腹腔异位心脏移植.测定同系和同种移植组小鼠移植心脏CXCR6mRNA的表达,并测定受者脾脏CD8+T淋巴细胞CXCR6的表达.另制作小鼠同种异位心脏移植模型(Balb/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者),将其分为实验组和对照组,实验组受者移植当天至发生排斥反应时腹腔注射抗CXCL16抗体,对照组受者同期注射对照抗体.记录两组移植心脏存活时间.进行CD8+T淋巴细胞的细胞毒试验,即用Balb/c小鼠脾细胞免疫C57BL/6小鼠后,获取C57BL/6小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞,将Balb/c小鼠脾细胞与C57BL/6小鼠CD8+T淋巴细胞混合培养,分别加入抗CXCL16抗体、小鼠IgG(对照抗体)和抗CD40L抗体.结果 同种移植组移植心脏中CXCR6 mRNA的表达以及脾脏CD8+T淋巴细胞上CXCR6的表达均高于同系移植组和正常对照组.抗CXCL16抗体对CD8+T淋巴细胞的细胞毒活性无影响.与对照组相比较,实验组小鼠移植心脏存活时间并未明显延长.结论 小鼠心脏移植排斥反应中CD8+T淋巴细胞CXCR6的表达上升,阻断CXCL16/CXCR6相互作用并不能延长移植心脏的存活时间.

Abstract：

Objective To investigate the expression of CXCR6 in allograft rejection and effect of CXCL16/CXCR6 interaction on allograft survival Methods Intra-abdominal heterotopic heart transplantation was performed using wild type (WT) Balb/c mice (H-2d) (allogeneic) as donors or WT C57BL/6 mice (B6, H-2b) (syngeneic) as donors, and using WT B6 mice as recipients. The intragraft expression of CXCR6 and expression of CXCR6 in CD8+ T cells of the spleens from syngeneic and allogeneic recipients were examined. The allogeneic recipients were further divided into the experimental group (n = 5) and control group (n = 6) randomly. The experiment group and control group were injected with anti-CXCL16 mAb or control mAb respectively until rejection occurred. The cardiac allograft survival in experimental group and control group was evaluated. Results Rejected allografts showed higher expression of CXCR6 than syngeneic cardiac grafts. More importantly,expression of CXCR6 in CD8+ T cells was also up-regulated by allograft rejection. However, injection of anti-CXCL16 mAb could not inhibit cytotoxic activity of CD8+ T cells. Moreover, experimental group could not prolong the cardiac graft survival time as compared with control group. Conclusion Expression of CXCR6 in CD8+ T cells is up-regulated in allograft rejection.     

小鼠心脏移植模型手术过程改进与经验总结

目的探讨小鼠心脏移植模型手术过程改进方法并总结相关经验,为器官移植基础和临床研究提供更加稳定、可靠的动物模型。 方法约8周龄、雄性无特定病原体级近交系BALB/C和近交系C57BL/6小鼠各选取40只,分别作为供、受体,随机分为传统手术组和改进手术组(每组20对小鼠)。受体小鼠术前禁食12 h(不禁饮)。传统手术组采用腹腔注射药物麻醉,在肺动脉分叉处离断肺动脉,血管吻合采用半外翻、半内翻的缝合方式,供心在血管吻合时以浸润4 ℃等渗氯化钠溶液的纱布包裹移植心脏。改进手术组方案：采用吸入性麻醉,延长并修整供心肺动脉,自制心脏保存袋持续保存供心,采用降落伞式缝合法吻合血管,术后置于恒温箱中复苏,关腹后皮下注射5%葡萄糖等渗氯化钠溶液补液,术后予头孢唑啉抗感染及丁丙诺啡镇痛等。采用t检验比较传统手术组和改进手术组血管吻合时间、移植心脏复跳时间、移植手术总时间和受体麻醉恢复时间。采用卡方检验比较两组移植成功率。P<0.05为差异有统计学意义。 结果传统手术组建模成功15例,5例失败。改进手术组建模成功17例,3例失败。传统手术组与改进手术组心脏移植成功率分别为75%和85%,差异无统计学意义(χ²＝0.625,P>0.05)。传统手术组和改进手术组移植心脏复跳时间和受体小鼠麻醉复苏时间分别为(2.9±0.4)和(1.4±0.3)min、(43.8±6.4)和(3.2±0.7)min,差异均有统计学意义(t＝12.96、27.19,P均<0.05)。 结论改进后的小鼠心脏移植模型手术方法稳定可靠,整体手术时间和移植心脏复跳时间均缩短,值得推广。