基于基因表达数据库的鼠ZFP580基因功能分析

基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)是美国国立生物技术信息中心(National Center for biotechnology information,NCBI)在2000年7月首次公布的基因表达相关数据的公共贮存平台。2005年,NCBI等四家科研机构联合统计表明:     

锌指蛋白ZFP580在低剪切应力诱导的动脉粥样硬化斑块中的表达

[目的]通过观察由低血流剪切应力诱导的小鼠颈总动脉粥样硬化斑块中锌指蛋白ZFP580的表达,探讨其在动脉粥样硬化病变中的作用.[方法]建立颈总动脉局部狭窄动物模型,HE染色观察局部狭窄血管远心端的形态学改变,RT-PCR方法检测动脉组织中ZFP580mRNA的表达,免疫组织化学染色观察锌指蛋白ZFP580在病变处的表达.[结果]小鼠左颈总动脉局部狭窄2周后,远心端血管内膜增厚(P＜0.05),且随处理时间的延长内膜增厚愈加明显(P＜0.01),处理3周后,可见明显的动脉粥样硬化斑块.BT-PCR及免疫组织化学染色发现病变动脉中ZFP580的表达较未处理侧明显升高(P＜0.01),且ZFP580阳性细胞多集中在内膜层.[结论]ZFP580可能在低剪切应力诱导的动脉粥样硬化斑块的形成及发展中发挥重要的调控作用.     

大鼠锌指蛋白ZFP580的原核表达与分离纯化

【目的】构建ZFP580基因的原核表达质粒,转化大肠杆菌,诱导表达并分离纯化大鼠锌指蛋白ZFP580。【方法】根据ZFP580 cDNA序列的开放阅读框设计引物,利用PCR技术扩增ZFP580的开放阅读框cDNA序列,将PCR扩增的目的片段与载体pET30a分别双酶切、回收纯化后做定向连接,Nco I、Xho I双酶切电泳筛选、鉴定并测序。将构建的重组质粒pET30a-ZFP580转化大肠杆菌BL21(DE3),由异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化目的蛋白。【结果】成功扩增ZFP580基因并构建了表达质粒pET30a-ZFP580,测序结果表明与GeneBank公布的序列一致。含有该质粒的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达后,产物蛋白分子量约为19 kDa。【结论】成功表达并纯化了大鼠ZFP580蛋白,为进一步研究锌指蛋白ZFP580的功能奠定了基础。     

卡托普利对大鼠心肌缺血损伤的保护作用

目的研究卡托普利对实验性人鼠心肌缺血的保护作用。方法分别采用注射异丙肾上腺素（ISO）和垂体后叶素（PIT）的方法制作大鼠心肌缺血模型，通过观察体表心电图（ECG），测定血清心肌三酶（AST、LDH、CPK）和血清一氧化氮（NO），血清超氧化物歧化酶（SOD）和内二醛（MDA）的含量，探讨卡托普利抗心肌缺血的作用及其机制。结果与模型组比较，卡托普利可明显改善缺血性ECG中ST段偏移的幅度（P〈0．05）;卡托普利高剂量组可显著降低血清心肌三酶（AST、LDH、CPK）和MDA的活性（P〈0．05，P〈0．01），同时可提高血清SOD和NO的活性，使心肌坏死程度减轻。结论卡托普利对实验性心肌缺血具有保护作用。     

C57BL／6小鼠ZFP580C端编码基因的克隆及序列分析

【目的】克隆C57BL／6小鼠ZFP580C端编码基因cDNA序列，并进行序列测定和分析。【方法】参照GENBANK公布的C57BL／6小鼠ZFP580eDNA序列（注册号为AK005257），根据ZFP580C端编码基因eDNA序列设计1对引物，采用RT-PCR技术，从C57BL／6小鼠的肾脏组织中扩增ZFP580C端编码基因eDNA序列，回收纯化后与T载体连接，构建重组子pMD18-T-ZFP580，转化大肠杆菌DH5a。阳性克隆以限制性酶切分析与PCR法鉴定后，测定序列并分析。【结果】自C57BL／6小鼠肾脏组织获得总RNA，扩增出255bp的基因片段，成功构建阳性克隆重组子pMD-T-ZFP580，经双酶切和PCR鉴定与预期结果一致。所测定的C57BL／6小鼠ZFP580C端基因eDNA序列与13本RIKEN基因组中心于GENBANK注册（注册号为AK005257）的完全一致，与人ZNF580C端编码基因eDNA序列比较，核苷酸序列同源性为90％；该eDNA序列所编码的氨基酸序列与人ZNT580基因C端比较，同源性为100％，均编码有3个串联重复的C2H2型锌指蛋白主构域。其氨基酸序列与大鼠、犬、牛比较，同源性分别为100％、100％、98％。【结论】成功克隆C57BL／6小鼠ZFP580C端编码基因，该基因在不同种属间高度保守。     

核黄素对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌缺血性损伤的影响

目的:观察核黄素对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的大鼠心肌缺血性损伤的影响。方法:健康雄性SD大鼠30只,随机分为3组,即正常对照组(NC),心肌缺血组(MI)和核黄素预处理组(RBF),每组10只。采用大剂量ISO皮下注射复制大鼠心肌缺血损伤模型,测血浆中vWF,P-selection,t-PA的含量和血清中NOS的活性。结果:MI组vWF,t-PA,P-selection含量较NC组均明显升高(P<0.01),tNOS及cNOS活性较NC组均显著下降(P<0.05),iNOS活性较NC组显著升高(P<0.05);RBF组血浆中vWF,t-PA,P-selection含量较MI组显著降低(P<0.01),tNOS及cNOS活性较MI组均显著升高(P<0.05)。结论:ISO引起的心肌缺血性损伤可能与冠脉内皮功能紊乱有关,而核黄素对缺血心肌的保护作用可能是通过其保护冠脉内皮而实现的。     

异丙肾上腺素诱导心肌缺血损伤模型的研究进展

异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌缺血损伤模型已被广泛应用于实验研究。ISO通过干扰线粒体能量代谢、诱导氧化应激和心肌细胞凋亡等对心肌造成损伤,表现为心电图、血流动力学、血清及心肌组织生化指标和组织微观形态结构学改变。现就ISO诱导心肌缺血的病理损伤机制、心肌缺血表现以及在实验研究中的应用前景进行综述。     

西红花酸对异丙肾上腺素致大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用

目的 研究西红花酸对异丙肾上腺素(ISO)致大鼠急性心肌缺血的保护作用及机制。方法 采用大剂量ISOsc诱导产生大鼠急性心肌缺血模型(1SO30mg／kg，每日一次，连续2d)，实验大鼠随机分为正常组、ISO模型组、阳性对照组和3个西红花酸给药组(25，50，100mg／kg)，测定心脏系数和血清中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)和丙二醛(MDA)含量，观察心肌组织谷肮甘肤过氧化物酶(GSH—Px)、Na^ ，K^ —ATP酶和Ca^2 ，Mg^2 —ATP酶活性及心脏病理改变，观察西红花酸的保护作用。结果 西红花酸能显著降低血清中CK和LDH的释放；也能显著降低血清和心脏匀浆中MDA水平，心脏重量参数显示对心肌水肿有明显的抑制作用；保护心肌GSH—Px；Na^ ，K^ —ATP酶和Ca^2 ，M8^2 -ATP酶活性，心脏病理切片表明西红花酿对心肌坏死有显著的保护作用。结论 西红花酸对ISO所致急性心肌缺血有显著的保护作用。     

姜黄素对异丙肾上腺素诱发大鼠心肌缺血性损伤的保护作用

目的:观察姜黄素对由大剂量异丙肾上腺素(Iso)诱发大鼠心肌缺血性损伤的保护作用。方法:以大剂量异丙肾上腺素诱发大鼠心肌缺血性损伤为模型,观察iv或ip 10～40mg,kg~(-1)姜黄素的大鼠心肌缺血后体内多项生化指标的变化,这些指标包括ECG中的J点下移mv数,血清中的肌酸磷酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(GOT)活性及游离脂肪酸(FFA)含量,心肌组织中脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量,血清及心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:用药后的大鼠体内由于心肌缺血损伤导致的血清中CPK、LDH、GOT活性和FFA含量及心肌组织中MDA含量的升高幅度均显著下降,ECG中的J点下移也明显减轻。结论:姜黄素可提高大鼠心肌耐缺血能力,对Iso诱发的大鼠心肌缺血性损伤具有一定的保护作用。     

瓜蒌通脉丸对异丙肾上腺素诱导大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用及机制

目的研究瓜蒌通脉丸对异丙肾上腺素（ISO）诱导大鼠急性心肌缺血损伤的影响。方法皮下注射ISO制备大鼠急性心肌缺血损伤模型,观察瓜蒌通脉丸对大鼠心电图ST段、乳酸脱氢酶（LDH）含量、肌酸磷酸激酶（CK）含量、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、一氧化氮（NO）含量、一氧化氮合酶（NOS）活性的影响。结果与正常对照组比,模型对照组心电图ST段位移增加,LDH、CK、MDA含量明显升高,SOD活性、NO含量、NOS活性明显降低;经药物干预后,各治疗组可明显抑制ST段位移,降低LDH、CK和MDA的含量,升高SOD活性、NO含量、NOS活性。结论瓜蒌通脉丸可能是通过改善心电图ST段的变化,调节LDH、CK、MDA、SOD、NO、NOS水平来对抗ISO所致大鼠急性心肌缺血损伤,对缺血心肌起到保护作用。     

ZNF580基因原核表达载体的构建与鉴定

【目的】构建ZNF580基因原核表达载体,为获得大量重组ZNF580蛋白并制备其多克隆抗体奠定基础。【方法】根据ZNF580cDNA序列的开读框架设计上、下游引物,利用PCR技术扩增ZNF580开放阅读框cD-NA序列,将PCR扩增的目的片段与载体pET30a分别双酶切、回收纯化后做定向连接,EcoRI、XhoI双酶切电泳筛选、鉴定并测序。【结果】双酶切pET30a-ZNF580,电泳分析插入片段长度为524 bp,与预期的结果一致,经连接点两端进行测序,测序结果显示接头两端序列连接正确。【结论】成功构建原核表达载体pET30a-ZNF580。     

绿色荧光蛋白报告基因与ZNF580基因重组真核表达载体的构建与鉴定

【目的】构建具有绿色荧光蛋白报告 (GFP)基因的ZNF5 80真核表达载体 ,为转染细胞提供基础。【方法】根据ZNF5 80cDNA序列的开读框架设计上、下游引物 ,利用PCR技术扩增ZNF5 80cDNA开放阅读框序列 ,将PCR目的片段与PGEM T载体连接并克隆 ,酶切含目的片段PGEM T质粒及 pEGFP C1载体 ,回收纯化后做定向克隆连接 ,BglⅡ及HindⅢ双酶切电泳筛选、鉴定并测序。【结果】酶切 pEGFP C1 ZNF5 80 ,电泳分析插入片段长度为 :5 2 4bp ,与预期的结果一致 ,经连接点两端进行测序 ,测序结果显示接头两端序列连接正确。【结论】成功构建真核表达载体pEGFP C1 ZNF5 80。     

ZNF580与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在HEK293细胞的表达和定位

[目的]构建人ZNF580与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白真核表达载体,转染细胞进行瞬时表达,分析ZNF580-EGFP融合蛋白在人胚肾HEK293细胞中的表达和亚细胞定位。[方法]利用PCR技术扩增ZNF580基因cDNA开放阅读框架全编码区（编码1-172位氨基酸）、N端编码区（编码1-93位氨基酸）、C端编码区（编码94-172位氨基酸）,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1,BglΠ及HindШ双酶切筛选鉴定并测序。荧光显微镜下观察ZNF580-EGFP在HEK293细胞中的表达及亚细胞定位。[结果]pEGFP-ZNF580（1-172）、pEGFP-ZNF580（94-172）表达的ZNF580-EGFP融合蛋白聚集于HEK293细胞核。[结论]ZNF580蛋白的核定位信号位于其C端C2H2型锌指主构域（94-172位氨基酸区间）。     

CCCH型锌指蛋白在白血病中的研究进展

CCCH型锌指蛋白包含1到6个拷贝的CCCH类型的锌指基序,折叠成特殊的指状结构,通过与富含腺嘌呤和尿苷(AU)的mRNA 3'端结合,参与调节mRNA代谢.作为转录因子,免疫调节因子和肿瘤抑制蛋白,临床上与多种疾病密切相关.研究证实,CCCH型锌指蛋白可通过调节血细胞的增殖、分化、凋亡参与白血病发生发展的进程.靶向干预CCCH型锌指蛋白或基因可能是一种治疗白血病的有效方法,可为白血病的防治提供新的策略.     

ZNF580过表达对内皮细胞血管内皮生长因子的表达及增殖能力的影响

【目的】研究人锌指蛋白新基因ZNF580过表达对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达及增殖能力的变化,为探讨ZNF580基因功能提供科学依据。【方法】重组质粒pEGFP-ZNF580经LipofectamineTM2000脂质体转染法转染EA.hy926细胞,48h后荧光显微镜下观察ZNF580-EGFP在内皮细胞中的表达情况;应用半定量RT-PCR、Western blotting及ELISE法检测转染前后内皮细胞ZNF580和VEGFmRNA、蛋白表达的变化;运用MTT实验检测转染前后内皮细胞增殖能力的改变。【结果】荧光显微镜下示融合蛋白ZNF580-EGFP在EA.hy926细胞核中表达;ZNF580基因过表达后,内皮细胞VEGFmRNA及蛋白的表达均上调(P<0.05),且其增殖能力显著升高(P<0.01)。【结论】ZNF580可以调控EA.hy926细胞VEGF的表达,且ZNF580在内皮细胞增殖过程中具有重要的调节作用。     

阿魏酸钠对大鼠缺血心肌tTG表达的影响

目的：探讨组织型转谷氨酰胺酶（tTG）在大鼠缺血心肌的表达及阿魏酸钠（SF）对其表达治疗的影响。方法：60只大鼠随机分为12 组,每组5只：正常对照组;模型组包括注射盐酸异丙肾上腺素（Iso）2 h、4 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、1周及3周组;贝那普利（Bena）阳性对照组;SF治疗组。除正常对照组外,其他各组大鼠均皮下注射 Iso (15 mg·kg^-1);阳性对照组同步注射贝那普利;SF治疗组同步注射SF。并于给药后对应时间取大鼠心脏,采用免疫组织化学法及RT-PCR方法检测各组大鼠心肌组织中tTG的表达。结果：注射Iso 2 h后,大鼠心肌组织中tTG表达较正常对照组增加,但差异无显著性（P>0.05）;随着注射Iso时间的延长,3周达到高峰,与正常对照组比较差异有显著性（P<0.01）。tTG mRNA表达量在24 h达到高峰,与正常对照组比较差异有显著性（P<0.01）;自48 h后其表达逐渐下降,但与正常对照组比较差异仍有显著性（P<0.05）。SF治疗组tTG的表达量降低,其基因表达亦明显减少,与Iso组比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。结论：在大鼠心肌缺血模型中,心肌组织tTG表达增加,加速了心肌缺血的进程;SF抑制tTG的表达,可降低心肌缺血的进程。